实验动物实用手册

概论一：实验动物的定义：指经人工饲育，对其携带微生物实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。

动物的遗传学分类：近交系、封闭群和杂交群3大类群。

动物按基因特点分类：基因突变动物、转基因动物动物按清洁程度分级：所谓清洁程度是指实验动物携带病菌和寄生虫的情况。

普通级动物是指不携带人兽共患病和动物烈性传染病病原的动物；清洁级动物是指除普通级动物应排除的病原外，还应不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的微生物和寄生虫；无特定病原体动物（SPF）指除普通级、清洁级动物应排除的微生物和寄生虫外，还应不携带主要潜在感染或条件性致病和对科学实验感染大的微生物和寄生虫；无菌动物（GF）是指利用现有的检测方法和检查手段，不能在动物体内检出任何细菌、病毒、寄生虫等病原体。

二：常用实验动物的特点小鼠体型小，便于操作和饲养管理，饲料消耗量少，需要的饲养空间也较小，性情温顺，胆小怕惊，容易捕捉，体小娇嫩，对外界环境适应能力较差，不耐饥饿、冷、热。

对温、湿度很敏感，一般以温度18~22℃，相对湿度50%~60%最佳，喜欢光线较暗的安静环境，习惯于昼伏夜动。

三：实验动物的选择原则动物实验中实验动物是主要研究对象。

实验动物的选择是动物实验中首要考虑的问题。

不同实验研究的目的和要求不同，不同种类实验动物也具有各自的生物学特点和解剖生理特征，随意选择动物用于某项实验，可能会得出不可靠的试验结果，甚至导致整个实验徒劳无功，直接关系到科学研究的成败和质量。

为保证动物实验研究中使用最适宜的实验动物，选择实验动物应遵循以下原则：相似性原则：是指利用动物与人类某些功能、代谢、结构及疾病特点的相似性选择实验动物。

适用性原则：不同种系实验动物具有某些特殊的解剖生理特点，用解剖生理特点符合实验目的和要求的实验动物做实验，是保证实验成功的关键问题。

例如：犬的甲状旁腺位于甲状腺的表面，位置固定，多在2个甲状腺相对应的两端上，故选用其做甲状旁腺摘除实验很合适。

实验1 实验动物的捉持法和给药法一、常用实验动物的捉持法1．蛙和蟾蜍通常以左手握持，用食指和中指夹住左前肢，拇指压住右前肢，右手将下肢拉直，左手用无名指及小指夹住（图1）。

图1 蟾蜍捉持法2．小鼠（1）双手法：右手提鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉鼠尾，使小鼠前肢固定在粗糙面上。

迅速用左手拇指和食指捏其双耳间颈背部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤和尾部，便可将小鼠牢固捉持（图2）。

图2 小鼠双手捉持法（2）单手法：小鼠置于笼盖上，先用左手食指和拇指抓住鼠尾，后手掌尺侧和小指夹住鼠尾，然后左手拇指与食指捏住颈部皮肤（图3）。

图3 小鼠单手捉持法3. 大鼠大鼠容易激怒咬人，捉持时应戴防护手套。

先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与掌部握住背部和腹部。

注意不要捏其颈部，以防用力过大、过久，窒息死亡。

4．家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势（图4）。

切不可用手握持双耳提起兔子。

图4 家兔捉持法5．豚鼠豚鼠性情温和，不咬人，用手轻轻握住身体即可抓起。

6. 猫应戴好防护手套。

轻声呼唤，慢慢将手伸入猫笼，轻抚猫头、颈和背部，一只手抓住颈背部皮肤，另一只手抓住腰背部。

性情凶暴的猫可用布袋或网套捉持，操作中应防其利爪和牙齿伤人。

7. 狗驯服的狗可戴上特制嘴套，用绳带固定于耳后颈部；凶暴的狗可用长柄捕狗夹钳住狗的颈部，然后套上嘴套。

狗嘴也可用绳带固定，操作时先将绳带绕过狗嘴的下颌打结，再绕到颈后部打结，以防绳带滑落。

狗麻醉后四肢固定于手术台上，取下嘴套或绳带，将一金属棒经两侧嘴角，穿过口腔压于舌上，再用绳带绕过金属棒绑缚狗嘴，并固定于手术台上。

应将狗舌拉出口腔，以防窒息。

二、常用实验动物给药法1. 经口给药法此法有口服与灌胃两种方法。

适用于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬等动物。

口服法可将药物放入饲料或溶于饮水中令动物自由摄取。

若为保证剂量准确，可应用灌胃法。

动物实验的基本操作技术实验动物实验动物(experimental animals)是指经过人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，应用于科研、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。

这些个体具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验再现性。

一、常用实验动物的种类和特点（一）狗(dog)属于哺乳纲、食肉目、犬科动物。

其嗅觉、视和听觉均很灵敏，对外界环境的适应能力强。

消化、循环和神经系统均发达，且与人类很相似。

适用于各类实验外科手术学的教学和临床科研工作，是复制休克、DIC、动脉粥样硬化等动物模型首选的动物之一，由于其价格较昂贵，教学实验中不如某些中小动物常用。

（二）家兔(rabbit) 属于哺乳纲、啮齿目、兔科、草食类动物。

品种有：青紫蓝兔（livor blue rabbit）、中国白兔（china white rabbit）、新西兰白兔和大耳白兔（maximus ear white rabbit）等。

具有性情温顺，对温度适应敏锐和便于静脉注射等特点，是教学实验中最常用的动物之一。

可用于血压、呼吸、泌尿等多种实验，还可用于体温实验和热原的研究与鉴定。

（三）大白鼠(rat) 属哺乳纲、啮齿目、鼠科类动物。

其性情凶猛、喜欢啃咬、繁殖周期短、抗病能力较强、心血管反应敏锐。

用于水肿、休克、炎症、心功能不全、肾功能不全和应激反应等实验。

大鼠不能呕吐，故不能做催吐实验。

（四）小白鼠(mouse) 属哺乳纲、啮齿目、鼠科类动物。

具有繁殖周期短、产仔多、生长快、体型小、温顺易捉、易于饲养等特点。

广泛应用于各种药物的毒理实验、药物筛选实验、生物药效学实验，以及癌症研究、营养学、遗传学、免疫性疾病研究等项实验。

（五）豚鼠(cavy) 属哺乳纲、啮齿目、豚鼠科类动物。

又名天丝鼠、荷兰猪。

其性情温顺，嗅觉和听觉较发达。

对某些病毒反应敏锐，易引起变态反应。

适用于药理学、营养学、各种传染病的实验研究。

实验项目一：常用实验动物的基本操作（一）实验动物的抓握、固定和处死方法1、小鼠抓取固定方法小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。

有经验者直接用左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤亦可。

这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。

如进行解剖、手术、心脏采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。

2、小鼠的处死方法可采用颈椎脱臼法。

此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。

操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。

（二）动物血细胞计数方法材料和用品（1）器材：细胞计数板、细口滴管、绸布。

（2）试剂：0.4％台盼蓝。

（3）材料：血细胞悬液。

实验原理细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数。

细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。

根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。

实验步骤：图5－1 血细胞计数板1．采血及稀释用1ml移液管吸取0.38ml白细胞稀释液放入小试管内备用，另用5ml移液管吸取3.98ml红细胞稀释液放入小试管内备用。

用酒精棉球消毒兔的耳缘静脉采血部位，用刺血针刺破血管，让血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血时，用一次性毛细血管分2次准确吸取20ul、和20ul，将血液分别吹入盛有白、红细胞稀释液的小试管内，用滴管放在试管底部轻轻吹出血液，用上清液冲洗毛细取血管2～3次，轻轻摇动，使液体充分混匀。

动物实验技术第六章动物实验基本操作技术第一节、实验动物的抓取与固定一、小鼠的抓取与固定•抓取方法：用右手拇指和食指捏住尾部中段提起，如果只想移动小鼠，就用两手把它捧起来。

•手固定法：将右手捏起的小鼠放在笼盖上，用右手捏其尾部中段，在小鼠向前爬的一瞬间，用左手的拇指和食指捏住颈背部皮肤，再翻转左手，将小鼠置于左手掌心中，右手拉住小鼠尾部，再用左手小指和无名指压住小鼠尾根部使小鼠整个呈一条直线。

固定时注意，过分用力会使小鼠颈椎脱臼，若用力过轻头部能反转过来咬伤实验者的手。

这种固定方法是灌胃给药和腹腔注射给药常用的方法。

•手术固定法：用乙醚等麻醉药品麻醉后，用长20~30cm的线绳分别系在四肢上，再把四肢的线绳分别系在固定板四角的钉子上，并且在头部上颚切齿的地方牵一根线绳达到完全固定。

•在静脉给药时，先根据小鼠的大小选择合适的固定器，打开鼠筒盖，把小鼠放在里面，只露出尾巴；或者用倒放的烧杯将鼠扣住，只露出尾巴并压住。

二、大鼠的抓取与固定•抓取方法：4~5周龄以内的大鼠同小鼠；周龄较大的大鼠其尾部皮肤容易被剥脱，所以用左手从背部中央到胸部捏起来抓住。

抓取时最好带防护手套，但手套不宜过厚。

•手固定法：同小鼠。

•手术固定法：同小鼠。

•静脉给药或采血时同小鼠。

三、豚鼠的抓取与固定•抓取方法：抓取幼小豚鼠时，用手捧起来；成熟的大豚鼠，用手大把抓起胸肋部即可。

注意不能粗野，更不能抓取腰腹部，这样容易造成肝破裂而死亡。

•手固定法：⑴将左手的食指和中指放在豚鼠颈背部两侧，拇指和无名指放在肋部，分别用手指夹住左右前肢抓起来。

⑵反转左手，用右手的拇指和食指夹住右后肢，用中指和无名指夹住左后肢是豚鼠整体伸直成一条直线。

⑶一个人固定操作时，坐在椅子上，用右手拿着豚鼠的后肢夹在两腿之间，用大腿代替右手夹住。

•手术固定法：同大、小鼠。

四、家兔的抓取与固定•抓取方法：用一只手大把抓住颈背部皮肤提起来，另一只手托住其臀部，让其重心落在托其臀部的手上，运送时，还要抓住颈肩部皮肤抱着兔子运送。

实验动物实用手册常用实验动物名词一、实验动物(LaboratoryAnimal)基本概念及分类方法(一)实验动物的定义：遗传背景明确、来源清楚、对其携带的微生物、寄生虫实行控制，经科学方法人工培育用于科学实验的动物。

(二)实验动物的分类方法1、按遗传学控制分类*近交系(1nbredStrain)(1)定义：杂种动物经过相当于20代全同胞兄弟单纯连续繁殖，各条染色体上的基因趋于纯合，品系内个体差异趋于零。

(2)近交动物的特征a、纯合性和一致性纯合性指的所有动物的基因位点都应是纯合的。

一致性指的是任何可遗传的体征都完全一致。

例如：血型和组织型，体重、毛色。

b、遗传稳定性c、特异性就整个近交系小鼠而言，每个晶系在遗传上都是独特的，几乎每个近交系都建立了各自的遗传概况。

有些品系可能自发某些疾病，成为研究人类疾病的动物模型。

d、分布于各地，引一对即可繁殖。

e、背景资料和数据较完整。

*封闭群(Closedcolony)(1)定义：以非近亲配种方式进行繁殖生产的一个种群，在不从外部引入新血缘条件下，至少连续繁殖四代以上称封闭群。

(2)封闭群的特点：a、由于非近交，具有杂合性，从而避免近交衰退的出现。

b、由于没有引进新的血缘，种群间遗传特性能保持相对稳定。

c、群内个体间，因其具有杂合性，所以个体间的反应性具有差异，重复性和一致性不如近交系。

1、按微生物学分类*普通级动物Convention（CV）alAnimal不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性传染病的病原。

*清洁动物Clean（CL）Animal除普通级动物应排除的病原体外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体。

饲养在屏障系统中。

空气要经过滤净化，饲养室要保持正压，进入室内的—切物品要经过消毒灭菌，工作人员进入要洗澡和穿灭菌工：作服，动物饮水要经灭菌。

*无特定病原体动物SpecificPathogen-free（SPF）Animal除清洁动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病菌和对科研干扰大的病原。

实验动物血液生理生化参考手册一、介绍实验动物血液生理生化是研究实验动物体内血液成分和功能的一门学科。

血液是人和动物体内非常重要的液体之一，它不仅运输氧气、营养物质和代谢废物，还参与免疫反应和维持体内酸碱平衡。

本参考手册将深入探讨实验动物血液的生理功能和生化指标，以便研究者更好地了解和利用实验动物进行科学研究。

二、实验动物常用的血液指标2.1 血红蛋白血红蛋白是血液中的一种蛋白质，它携带氧气向全身组织供应能量。

测定血红蛋白水平可以了解实验动物的氧气运输能力和贫血情况。

2.2 红细胞计数红细胞计数是测量实验动物血液中红细胞数量的指标，可以反映出实验动物的造血能力和贫血程度。

2.3 血小板计数血小板计数可以反映出实验动物的止血功能和血小板生成能力，对于评估凝血功能和判断出血风险非常重要。

2.4 白细胞计数白细胞计数是测量实验动物血液中白细胞数量的指标，可以反映出实验动物的免疫功能、感染状况和炎症反应。

三、实验动物血液生化指标3.1 血糖血糖是血液中的一种重要生化指标，它可以反映出实验动物的糖代谢状态和胰岛素分泌情况。

血糖水平的异常波动可能与糖尿病等疾病相关。

3.2 血脂血脂包括胆固醇、甘油三酯等指标，它们可以反映出实验动物的脂代谢状态和心血管健康情况。

高血脂与心脑血管疾病的发生风险密切相关。

3.3 肝功能指标肝功能指标包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶等，它们可以反映出实验动物肝脏的功能状态和肝细胞损伤程度。

3.4 肾功能指标肾功能指标包括尿素氮、肌酐等，可以反映出实验动物肾脏的滤过功能和排泄能力。

肾功能异常可能与肾病等情况有关。

四、实验动物血液采集方法4.1 静脉采血静脉采血是常用的实验动物血液采集方法，可以通过尾静脉、颈静脉等位置进行。

在采血前应充分消毒，避免感染和出血。

4.2 尾刺采血尾刺采血是小鼠等小型动物常用的血液采集方法，可以通过尾部的微小针刺进行。

注意刺激要轻柔，避免造成动物不适和伤害。

4.3 口腔黏膜采血口腔黏膜采血是领口鼠等动物血液采集的方法之一，可以通过舌下脉搏或颊黏膜进行。

实验动物实用手册实验动物中心二○○五年2月目录政策法规实验动物名词及常用实验动物介绍实验动物的常规操作常见实验动物的生理生化指标实验动物管理有关文件摘编一、国家七部局(科学技术部、卫生部、教育部、农业部、国家质量监督检验检疫总局、国家中医药管理局、中国人民解放军总后勤部卫生部)《关于发布实验动物许可证管理办法(试行)的通知》文件精神(国科发财字[2001]545号)第一章第三条实验动物许可证包括实验动物生产许可证和实验动物使用许可证。

实验动物生产许可证，适用于从事实验动物及相关产品保种、繁育、生产、供应、运输及有关商业性经营的组织和个人。

实验动物使用许可证适用于使用实验动物及相关产品进行科学研究和实验的组织和个人。

许可证由各省、自治区、直辖市科技厅(科委)印制、发放和管理。

同一许可证分正本和副本，正本和副本具有同等法律效力。

第二章第六条申请实验动物使用许可证的组织和个人，必须具备下列条件：(1) 使用的实验动物及相关产品必须来自有实验动物生产许可证的单位，质量合格。

(2) 实验动物饲育环境及设施符合国家标准。

(3) 使用的实验动物饲料符合国家标准。

(4) 有经过专业培训的实验动物饲养和动物实验人员。

(5) 具有健全有效的管理制度。

法律、法规规定的其他条件。

第三章第八条省、自治区、直辖市科技厅(科委)负责受理许可证申请，并进行考核和审批。

各省、自治区、直辖市科技厅(科委)受理申请后，应组织专家组对申请单位的申请材料及实际情况进行审查和现场验收，出具专家组验收报告。

对申请生产许可证的单位，其生产用的实验动物种子须按照《关于当前许可证发放过程中有关实验动物种子问题的处理意见》进行确认。

省、自治区、直辖市科技厅(科委)受理申请后的三个月内给出相应的评审结果。

合格者由省、自治区、直辖市科技厅(科委)签发批准实验动物生产或使用许可证的文件，发放许可证。

第四章第十三条具有实验动物使用许可证的单位在接受外单位委托的动物实验时，双方应签署协议书，使用许可证复印件必须与协议书一并使用，方可作为实验结论合法性的有效文件。

A Alligators.......................................................80,219,225, 226,229,230,243,247–262 Amphibians..............................................v,1,3,4,17–30, 163,222,295,303,393,394,420,423,424 Animal welfareanesthesia (351)animal facilities.....................407,408,413,415,416 ethics.....................................407,409,410,412,421 guidelines...........................................6,272,407–429 organizations.................................407,411,412,414 protocols......................408,412,415,422–424,426 regulatory compliance..................409,412,416,426 Antibodiesalpha-tubulin................................................20,25,28 bromodeoxyuridine.......................227,231,237,238flag.....................................................................64,109 gamma-tubulin....................................................20,28 IgM...................................................................69,324 MAPK (64)monoclonal antibodies..................20,64,69,72,184 phosphotyrosine..................................................64,68 PLCgamma. (64)pMAPK (64)proliferating cell nuclear antigen(PCNA) (236)Src1/2 (64)SSEA-1...................................................319,321,323 tyrosine phosphorylation (68)uroplakin III (68)vimentin (236)Antisensemorpholino.............................2,8,77,328,339,347 oligonucleotide.......................2,6,77,328,339,347 Avian.............................................99–109,248,317–325BBalbiani body(Bb)manual isolation....................................267,269,271 percoll gradient purification..................266,268–271 proteomics......................................................295–302 visualization.........................................................v,278C Calcium.....................................................41–56,85,101, 220,222,228,239,241,242,272Capillary tubes,see Micro-tubes Chick......................v,75–80,88,99,100,102,106,184 Chromatin immunoprecipitation(ChIP)............99–102, 105,109Cloning,see Somatic cell nuclear transfer(SCNT)Co-immunoprecipitation(Co-IP).......................99–101, 106,107Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR-Cas9)CHOPCHOP................................380,382,383,388 designing guide RNA...........................378,379,386 propagation of INDELS.. (388)screening insertions/deletions(INDELS).................................................377–391 synthesis of guide RNA.........................379–381,384 Cultured cells.................................64,70,217,296,365DDNApreparation.......................................................36,150 plasmid cloning (34)template preparation...............................36,151,157, 186,194,195vector construction.............................78,82,88,150EEggactivation.................................................3,41–43,61, 63,68,71,360,367,368,370,372,373 animal-vegetal polarity........................................69,70 chorion removal............................331,332,339,362 defolliculation.................................................6,47,48 dejellying.................................21,307,308,311,312 enucleation....................................................353,362, 363,366,367,370extrusion............................................9,119,125,304 laying........................................6,9,11,78,119–121, 123,125,249,306–308,310–312,314,325Francisco J.Pelegri(ed.),Vertebrate Embryogenesis:Embryological,Cellular,and Genetic Methods,Methods in Molecular Biology, vol.1920,https:///10.1007/978-1-4939-9009-2,©Springer Science+Business Media,LLC,part of Springer Nature2019431Embryosasters...........................................................18,22,394 bead implantation.. (77)blastomeres............................................266,393,394 bleaching embryos..............................................22,24 cell-free extracts..................................................37,47, 48,50,52,67,69,270,271cell implantation (167)cell shape.................................................393–395,404 chromatin fragmentation. (103)clearing............................................................213,225 crosslinking.....................................................102,104 cytoplasmic collection......................................49,164 dechorionation.....................121,332,334,337,365 dissociation...........................102,104,334,339,365 electroporation............................................77,78,80, 83,90,91,95,106,248,252,254,256 ex ovo culture..............................................77,79,83, 84,90,96,248,250,252,255,261explant culture....................................................77,79, 82–86,96,100,102,166,248,255explant processing............................................78,251 ex utero culture..............................................163–179 incubation....................................................77,78,86, 207,211,324in ovo culture................................77–79,82,83,248 live imaging.....................................................18,112, 169,170,172–175,179,296,393lysis..............................................................35,37,103 membrane microdomains(MD)........................67–70 microtubules........................................................17–30 mitotic spindle...................................17,28,126,394 mounting...................................................26,27,148, 149,153,156,165nucleic acid electroporation.............................78,165 RNA extraction (34)spindle positioning.........................................394,398 tissue sectioning....................................133,140,216 Expression systemsß-galactosidase (205)fluorescent protein............................33,78,165,183 luciferase.. (33)nanoLuc (34)reporter constructs.............................................33,82, 183,205,217,261,286,344tomo-seq (130)FFertilizationin vitro fertilization.......................................6,11,18, 63,67,68,112,114,119,125,353–355,360,361,363–365,368–370,372,374,419 mating systems...............................................354,363 strain selection.........................................................353GGeckoanesthesia...............................................222,234,242 biopsy.....................................................222,225,234 husbandry.............................221–224,228,232,233 perfusion................................................222,233,242 sex determination...........................................221,223 Gene expression librariesamplified RNA (136)cDNA synthesis.............................130,131,134–137 gene library preparation........................131,137,138 Gene functiongain of function............................................78,82,88 genetic screen. (123)knockdown......................................77,78,82,87,88 Genome editing,see CRISPR-Cas9Germ cellsblastomere transplant (329)germ cell transplant.......................................317–325, 331,334,335germ line chimera..........................................327–329 host embryo sterilization.......................328–330,332 host-transfer..................................................324–325, 334–338,346–349isolation..........................................................296,334 migration........................................................328,329 Germplasm..............................................2,265–274,295 IInterspecies hybrid (vi)In vitro transcription(IVT)...........35,36,131,136,137 LLabelingAlcian blue.............................................225,229,234 Alizarin red............................................225,229,234 alkaline phosphatase (200)bromodeoxyuridine (227)calcium indicators................................................48–52 DAPI.................................................................29,286 DiOC6...........................................281,286,287,292 DNA dyes............................................................20,25 Fixation...............................................21–23,91,191, 196–198,202–204,206–209,234–238,256–259,288–290,323Harris hematoxylin counterstain (236)immunofluorescence............225,230,231,236,237 immunohistochemistry.........................184,278,286 in situ hybridization.............184,186,210,248,286 MitoTracker....................................................286,292 TO-PRO-3...................................................20,25,29 vital dyes...................................9,286,299,324,337 YO-PRO-1..........................................................20,29432V ERTEBRATE E MBRYOGENESIS:E MBRYOLOGICAL,C ELLULAR,AND G ENETIC M ETHODS IndexMMaternal genes....................................1–3,277,343,344 Micro-computed tomography(microCT).................248, 250,252,255,257,261 Microinjection...................................................5,8,9,12, 35–37,49–51,94,145,158,248,297,298,300,319,324,330–333,339,345,347,350,356,366,367,369,370Micro-tubescalibration (152)injection..............................................8,36,152,331, 332,334,337,349–350transplantation in adults..........................10,346–349 transplantation in embryos....................324,332–338 Mount.........................................................19,21,22,26, 27,49,147,159,184,186,187,189,191,193,196–198,200,201,203–209,211,216,217,235–237,324Mousepostimplantation embryo.............................167,168, 170,174–176,178preimplantation embryo...............................166,167, 169,172–174mRNA microinjection (36)mRNA sequencing(RNA-Seq) (129)NNeedles,see Micro-tubesOOocyteculture..........................................................1–13,273, 279,281,284,286,291,292,296,298 dissociation............................................279,285,286 endoplasmic reticulum..........................277,286,295 extract..........................................................18,38,47, 48,52,53,55,281follicle.........................................................7,8,12,46, 54,284–286,347,350histology (286)immunohistochemistry.................................278,282, 286,287,289,292maturation...............................................9,12,42,60, 61,71,72,284,291,351mitochondria.................................................265,267, 270,272,273,277,281,286–288,295 ovary dissection..............................................284,285 sorting....................................................279,281,286 transplantation......................3–5,317,345–347,351 Oogenesis............................................................1,59–72, 265,269,277,344,357Optogenetics........................................................143–161 Ovaries.............................................................5–8,12,28, 46,59,270,278,281,284–287,289,291,292,297,298,300,344–346,348,350,351PPloidygynogenesis (112)gynogenetic diploid.......................................121,122 haploid...................................................112,117,120 heat shocked (123)tetraploid.......................................113,117,120–122 triploid (303)Ploidy analysischromosome spreads.....................113,117,121,122fluorescence-assisted cell sorting(FACS).............113, 118,122,123genetic markers (371)Polymerase chain reaction(PCR).................................88, 117,122,127,130,131,138,140,147,151,156,157,194,195,257,320,323,325,371,379–381,385,387,388,390,420Primordial germ cell,see Germ cellProtein analysisCoomassie Brilliant Blue (68)immunoblotting (69)mass-spectrometry (70)SDS-PAGE..........................................................68–70 silver staining.......................................................68,70 two-dimensional gel electrophoresis (70)Protein-DNA interactions.............................99–109,377 Protein-protein interactions...................................99–109R Rehydration.............................................20,22,213,251 Reptilia (219)RNA(mRNA)concentration..................................................37,136, 137,152,158,386–388microinjection..........................................36,333,347 purification. (66)synthesis.........................................................147,150, 152,157,212,260,379–381,384–386,388,390 S Sectioning.....................................................19,130,131, 133,140,191,203,205,211,216,235–237 Signal transduction (43)Somatic cell nuclear transfer(SCNT)egg enucleation (366)microinjection...............................356,366,367,369V ERTEBRATE E MBRYOGENESIS:E MBRYOLOGICAL,C ELLULAR,AND G ENETIC M ETHODSIndex433Somatic cell nuclear transfer(SCNT)(cont.)preparation of nucleus-donor cells........................355, 356,365,366,369Spermextraction (359)in vitro fertilization............................................63,67, 68,112,369polyspermy (61)UV-inactivation....................120,121,123–125,127 Src............................................................................42,45, 54,63,64,68,71,72Subcellular protein localization...........................143–161 T3D modelinginput imaging stack........................................397–399 Mathworks Matlab.. (394)simulations.............................................394,398,401 surface evolver................................................394–396 Time-lapse...........................................................161,164, 166,169,175 Transfection.............................................................64,66, 78,88,248,254,261Transgenic..................................................118,123,124,127,146,183,205,286,318,348,357,365,369,373,411,419Turtles......................................v,219–221,240,247–262 XXenopus laevis...................................................v,4,17–19, 41,44,59–72,265–274,303Xenopus tropicalis...................................................19,303 Y Yolk.......................................................18,25,37,47,59,67,76–79,82–84,90,93,95,96,102,121,122,126,179,220,249,298,332,333,337,364,386,393,398,400–402,404Yolk clearing (25)ZZebrafish......................................................v,1,111–127,131,133,143,146,152,154,155,158,163,248,277–293,295–302,327–340,343–351,353–374,377–391,411,417,419,420,426434V ERTEBRATE E MBRYOGENESIS:E MBRYOLOGICAL,C ELLULAR,AND G ENETIC M ETHODS Index。