(参考课件)呼吸道标本采集
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呼吸道抗原六项标本采集方法呼吸道抗原六项标本采集是临床诊断呼吸道感染性疾病的重要环节。
本文将详细介绍呼吸道抗原六项标本的采集方法,以确保检测结果的准确性和有效性。
一、概述呼吸道抗原六项检测主要包括流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒和冠状病毒的检测。
正确的标本采集方法对提高检测灵敏度和特异性至关重要。
二、采集前的准备1.了解患者的病情、病史和用药情况,以便选择合适的采集时间和方法。
2.准备一次性无菌采集器材,如鼻咽拭子、咽拭子、无菌生理盐水等。
3.操作人员需穿戴防护用品,如口罩、手套、防护服等,确保采集过程的安全。
三、采集方法1.鼻咽拭子采集(1)指导患者头部向后仰,尽量使鼻咽部暴露。
(2)将鼻咽拭子插入患者鼻孔,沿鼻咽壁轻轻旋转,采集鼻咽分泌物。
(3)将拭子放入含有无菌生理盐水的试管中,密封保存。
2.咽拭子采集(1)指导患者张口,发“啊”声,充分暴露咽部。
(2)将咽拭子轻轻插入患者咽部,旋转采集咽拭子。
(3)将拭子放入含有无菌生理盐水的试管中,密封保存。
3.呼吸道分泌物采集(1)对于不能配合的患者,如儿童或意识不清的患者,可采用无菌吸痰管采集呼吸道分泌物。
(2)将吸痰管插入患者气管,轻轻吸取分泌物。
(3)将分泌物放入含有无菌生理盐水的试管中,密封保存。
四、注意事项1.采集过程中,确保无菌操作,避免交叉污染。
2.标本采集后,尽快送检,避免长时间放置影响检测结果。
3.咽拭子和鼻咽拭子采集时,避免用力过猛,以免损伤黏膜。
4.呼吸道分泌物采集时,注意观察患者的反应,避免引发呼吸困难。
五、总结呼吸道抗原六项标本采集是临床诊断呼吸道感染性疾病的关键环节。
掌握正确的采集方法,确保标本质量,有助于提高检测灵敏度和特异性,为临床诊断和治疗提供有力支持。
呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择:常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集,不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间:最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集,对于特定病原体如流感病毒等,应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法:采用无菌的采集器具,如棉签、拭子等。
采集咽拭子时,应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置,不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内,盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导:采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润,确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输:采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中,封口完好。
若运输时间不长,可将标本放入4℃冰箱保存,不得冷冻。
如果运输时间较长,应采用冷冻方式运输(-20℃)。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理:采集得到标本后,应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本,需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测:送往实验室后,应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测(如PCR)、真菌培养等。
根据病情需要,还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告:实验室所得结果需要专业人员进行解读,并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果,并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时,需要确保采集者具备必要的知识与技能,并严格按照采集与送检要求进行操作,以保证最终的结果准确可靠,为诊治提供有力的支持。
㊃COVID-19特稿标准/指南㊃DOI:10.3969/j.issn.1673-5501.2020.01.005呼吸道标本的采集㊁储存和运送规范杨童玲1,3 夏爱梅1,3 胡晓静1 余艮珍2 史 欢2 顾 莺1 张晓波1 王传清1 张崇凡1 黄国英1作者单位 1复旦大学附属儿科医院 上海,201102;2华中科技大学同济医学院附属同济医院 武汉,430030;3共同第一作者通讯作者 张崇凡,E-mail:xt211311@aliyun.com;黄国英,E-mail:gyhuang@shmu.edu.cn流感病毒检测最常见的是采集呼吸道标本,可采用拭子㊁刷子㊁吸出物和灌洗液获取呼吸道标本,可以采集鼻咽㊁口咽㊁鼻孔等㊂曾使用培养法或直接法荧光抗体法进行检测[1,2],现以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法,可以通过样本中少量的病毒核酸扩增而提高检测率[3]㊂急性严重呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染流行期间,RT-PCR是SARS-CoV-2感染确诊的首选方法[4,5]㊂检测准确性最高的标本是下呼吸道标本,但属于有创性操作㊂由于核酸扩增检测可以检测更低浓度的病毒,并且不需要细胞的存在,因此喉部拭子或唾液样本可能是进行分析的合适样本[6],但其检出率低于83%[7]㊂相对无创而准确率高的是鼻咽抽吸物标本,能提供高浓度的感染细胞㊂对于儿童,采集一个口咽拭子和一个鼻部拭子的准确性相当于鼻咽拭子的准确性[8],是检测准确性与无创性采集的理想搭配㊂但临床上为了避免假阴性,通常会同时采集一个口咽拭子和一个鼻咽拭子㊂口咽拭子的采集相对比较简单,鼻咽拭子的采集需要经过培训,而且鼻咽拭子的采集过程可能会引发患者打喷嚏或者咳嗽而导致气溶胶的产生,存在交叉感染的风险[9]㊂本文基于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)作为乙类传染病甲类管理办法,介绍呼吸道标本的采集㊁贮存和运送[10,11]㊂1 采集对象SARS-CoV-2感染的COVID-19疑似病例㊁疑似聚集性病例,其他需要进行SARS-CoV-2感染诊断或鉴别诊断病例,确诊的COVID-19是否康复的鉴别病例,或其他需要进一步SARS-CoV-2感染筛查检测的环境或生物材料㊂2 采集者从事SARS-CoV-2检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训且为合格者和具备相应的实验技能㊂按照‘儿童新型冠状病毒感染/肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南“[12]的要求使用三级防护,最好使用全面型电动送风呼吸器面罩进行有效防护㊂3 采集标本SARS-CoV-2初步诊断测试,中国疾病预防控制中心(CDC)建议收集和检测咳嗽患儿的上呼吸道(鼻咽和口咽拭子)和下呼吸道(痰,如果可能)的样本㊂按照国家卫健委COVID-19诊疗方案(试行第六版)的要求,尽可能留取痰液标本,气管插管患者采集下呼吸道分泌物标本㊂4 采集标本时机临床怀疑SARS-CoV-2感染应立即向当地卫生部门报告,当地公共卫生工作人员将确定患者是否符合SARS-CoV-2感染调查对象的标准㊂临床标本应在临床或公共卫生实验室采集,用于常规呼吸道病原体检测㊂临床实验室不应从SARS-CoV-2感染者采集的样本中分离病毒㊂一旦确定了符合SARS-CoV-2感染对象,应尽快采集样本㊂5 采样管及其保存液上㊁下呼吸道标本采集后均置于含3mL病毒保存液的采样管中,推荐以Eagle's基础培养液为基础的保存液㊂保存液中也应添加胎牛血清或牛血清白蛋白等稳定病毒的蛋白质外壳的添加液㊂除此之外,还应添加青霉素㊁链霉素㊁庆大霉素及多黏菌素B等抑制细菌生长,保存液提供的样本基本是活病毒,可以最大程度保持样本的原始性,后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测,还可用于病毒的培养和分离㊂6 采样拭子应选用合成纤维或人造纤维,不推荐海绵或棉花拭子,棉花的纤维对蛋白质吸附较强,导致病毒不易洗脱到保存液中,也不推荐尼龙类的纤维,其吸水性不佳,导致采样量不足,影响检出效率㊂7 样本的储存和拒收原则上样本应立即送检㊂以下是各种储存必需的条件:①采集后,应贴上相应的标签,样本可在4ħ以下保存㊃91㊃中国循证儿科杂志 2020年2月第15卷第1期72h,②如果预计提取检验会延迟,则将样本储存在-70ħ或更低的温度,③提取的核酸应储存于-70ħ或更低的温度㊂拒收的样本包括:①没有保存在2 8ħ或-70ħ或以下的样本;②样本标签或资料不完整;③样本类型不合适;④样本量不足㊂8 样本的运送①运送人员防护要求:需对运送人员进行专业培训,做好二级防护,目前中国的标本运送由CDC的专业人员来取,工作人员通道进入,污染通道离开㊂②样本需要双层密封袋密封,每袋装1份标本,将样本储存在4ħ,并使用密封的标本转运箱(内附有冰袋)立即运送㊂在每个样本容器上贴上患者的具体信息㊁样本的具体信息㊂为每个提交的样本填写卫生行政部门要求的表格㊂③如果样本在-70ħ下冷冻,运输时则将其放在密封的标本转运箱(内附有干冰)连夜运送,如无-70ħ保存条件,则于-20ħ冰箱暂存㊂9 加强沟通临床和实验室工作人员之间的及时沟通很重要,这样才能在处理可能SARS-CoV-2感染病例的标本时将感染的风险降到最低㊂10 上呼吸道标本采集10.1 口咽拭子 ①视野要求:口咽拭子取样时,应该在良好的照明条件下,使用一次性压舌板来确保咽喉部有足够的视野,压舌板将舌压到一边,避开舌头,拭子擦拭扁桃体(图1A㊁B)㊂②口咽拭子材质的要求:只能使用带塑料柄的合成纤维棉签,不能使用海藻酸钙拭子或带木柄的拭子,因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制PCR检测的物质㊂③患儿体位和口腔防护要求:患儿取坐位或卧位,采集者坐在患儿对面,以能够看清患儿口咽部扁桃体为准,采集的时候要让患儿头部上抬30度,采集时患儿应该用口罩罩住鼻部,减少喷嚏或咳嗽飞沫飞溅(图1C)㊂④取材要求:将口咽拭子深入口咽部,在原位最好保持10s以吸收分泌物,用拭子棉签同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,轻度用力拭抹咽后壁部位,应避免触及舌部㊂将口咽拭子棉签头浸入采样管中,尾部弃去,旋紧管盖㊂10.2 鼻咽拭子采集(图1D㊁E) ①鼻咽拭子材质要求同口咽拭子㊂②准备含3mL病毒保存液的采样管备用㊂③患儿体位和口腔防护要求:患儿头部后仰70度,采集时患儿应该用口罩罩住下颌,减少咳嗽飞沫飞溅,取材人站在患儿侧方,防止飞沫飞溅㊂④鼻咽拭子棒长度要求:可以用鼻咽拭子棒测量一下,量出耳根到鼻孔的距离,并用手指做标记㊂⑤体验要求:将采样拭子以垂直鼻子(面部)方向插入鼻腔,与上颚平行,拭子伸入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半,如果能够达到先前估计的深度最好,可有阻挡感㊂⑥取材要求:深入鼻咽部,使拭子在鼻内停留15 30s,轻轻旋转3 5次,以吸收分泌物,然后抽出拭子㊂⑦取材后要求:将鼻咽拭子棉签头浸入采样管中,尾部弃去,旋紧管盖㊂图1 上呼吸道标本采集注 A:扁桃体;B:鼻咽11 下呼吸道标本11.1 支气管灌洗液 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管,见患儿有咳嗽反射后再稍微深入1cm后,注入5mL温生理盐水,开放负压,旋转收集器头部并缓慢退出,收集抽取的黏液于病毒采样管中㊂11.2 肺泡灌洗 该方法适合危重患儿,患儿往往因为呼吸衰竭或肺不张需要行气管插管或纤维支气管镜灌洗,便于获取肺泡灌洗液标本,需要在支气管镜室局麻下行电子支气管镜术㊂支气管镜由左鼻孔进入气管㊁支气管后,镜端固定于右/左肺中叶开口,经气管活检孔缓缓加入灭菌温生理盐水,每次8mL灌洗2 3次,灌洗后吸出[13],收集至采样管中㊂11.3 鼻咽和气管抽吸 婴幼儿多需要采用该途径采集标本,使用痰液收集器连接负压吸引器,痰液收集器前端的吸痰管深入到患儿气道内,见患儿有咳嗽反射后再稍微深入1cm后开放负压,吸出2 3mL呼吸道分泌物至采样管中㊂参考文献[1]LoensK,VanHeirstraetenL,Malhotra-KumarS,etal.Optimalsamplingsitesandmethodsfordetectionofpathogenspossiblycausingcommunity-acquiredlowerrespiratorytractinfections.JClinMicrobiol,47(1):21-31[2]RobinsonJL,LeeBE,KothapalliS,etal.Useofthroatswab㊃02㊃ChinJEvidBasedPediatr Feburary2020,Vol15,No1orsalivaspecimensfordetectionofrespiratoryvirusesinchildren.ClinInfectDis,46(7):e61-64[3]CentersforDiseaseControlandPrevention(CDC).EvaluationofrapidinfluenzadiagnostictestsfordetectionofnovelinfluenzaA(H1N1)Virus-UnitedStates,2009.MMWRMorbMortalWklyRep,58(30):826-829[4]国家卫生健康委.关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)的通知(2020-02-18).http://www.nhc.gov.cn/,2020.02.18[5]CormanVM,LandtO,KaiserM,etal.Detectionof2019novelcoronavirus(2019-nCoV)byreal-timeRT-PCR.EuroSurveill,2020,25(3).doi:10.2807/1560-7917[6]WangWK,ChenSY,LiuIJ,etal.DetectionofSARS-associatedcoronavirusinthroatwashandsalivainearlydiagnosis.EmergInfectDis,2004,10(7):1213-1219[7]RobinsonJL,LeeBE,KothapalliS,etal.Useofthroatswaborsalivaspecimensfor181detectionofrespiratoryvirusesinchildren.ClinInfectDis,46(7):e61-64[8]SpencerS,ThompsonMG,FlanneryB,etal.ComparisonofRespiratorySpecimenCollectionMethodsforDetectionofInfluenzaVirusInfectionbyRT-PCR:ALiteratureReview.JClinMicrobiol,57(9),pii:e00027-19[9]TellierR.ReviewofaerosoltransmissionofinfluenzaAvirus.EmergInfectDis,2006,12(11):1657-1662[10]国家卫生健康委.新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版).2020.01.28[11]InformationforLaboratoriesCOVID-19RequestsforDiagnosticPanelsandVirus.https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/tool-virus-requests.html[12]复旦大学附属儿科医院.儿童新型冠状病毒感染/肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南.中国循证儿科杂志,15(1):1-4[13]黄宝兴,邓继岿,王红梅.1693例难治性肺炎患儿支气管肺泡灌洗液病原体培养分析.中国感染控制杂志,14(6):379-382.(收稿日期:2020-01-31 修回日期:2020-02-11)(本文编辑:张萍)㊃12㊃中国循证儿科杂志2020年2月第15卷第1期。
标准操作规程(SOP)——一、目的本SOP是为了保证呼吸道标本采集的操作的规范性以及确保采集标本的质量而制定。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行呼吸道标本的采集。
三、程序(一)生物安全要求采集疑似人高致病性禽流感病例和不明原因肺炎病人呼吸道标本时,采集人员需以BSL-3级防护;一般流感样病例,呼吸道标本的采集以BSL-2级防护。
具体参见“生物安全个人防护SOP”。
(二)材料1.无菌拭子:聚丙烯纤维头的拭子2.15-mL离心管3.常用的采样液配制:常用的上呼吸道采样液有:pH7.4~7.6的Hank's或MEM液400mL。
加入庆大霉素(50 mg/mL)0.8mL,多粘菌素B(250μg/mL)3.2mL。
加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4,配制好以后,分装每个采样管2~3mL,-20℃冻存。
4.压舌板(三)实验步骤1.采集呼吸道标本呼吸道标本:包括鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液。
最佳采集时间为发病后的前3天,不超过7天。
(1)鼻拭子:采集者左手扶住患者的下颌部,右手持无菌拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。
以另一拭子擦拭另侧鼻孔。
将拭子头浸入采样液中,在采样液中挤压拭子头部数次,用力折断拭子的尾部,将拭子的尾部弃去。
(2)咽拭子:左手用压舌板压住患者的舌头。
右手持无菌拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将拭子头浸入采样液中,在采样液中挤压拭子头部数次,用力折断拭子的尾部,将拭子的尾部弃去。
亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中。
(3)漱口液:用10mL生理盐水漱喉。
漱时让患者头部微后仰,发“噢”声,让生理盐水在咽部转动。
然后,用平皿或烧杯收集洗液。
(4)鼻洗液:让患者取坐姿,头微后仰,用移液管将5 mL生理盐水注入一侧鼻孔,嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使生理盐水流出,用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
(5)鼻咽抽取物:常用于采集气管和支气管分泌物。
感染性标本的采样、储存、运输的具体操作方法所有的采样工作都必须根据疾病的特点,在严格做好防护的基础上进行。
常见传染病需采集的标本见表1(一)呼吸道标本的采集(如不明原因肺炎)1.采样器材拭子、压舌板、塑料瓶、采样杯或器皿、15ml 的离心管、移液管、注射器、10ml真空取血管、冰壶、采样运输管、有生物安全标志或标有“感染性物质”的外包装容器(见图1);其他:酒精灯、剪刀、纸漏斗、酒精、碘酒、吸耳球、塑料袋、记号笔、标签、登记表等。
2.采集方法(1)鼻拭子(上呼吸道):将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。
以同一拭子拭两侧鼻孔。
将棉签浸入4-5 ml采样液的管中,尾部弃去。
然后,塞紧或盖好管盖。
(2)咽拭子(上呼吸道):用棉签用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁(见图2),同样将棉签头浸入4-5 ml采样液的管中,尾部弃去,塞紧或盖好管盖。
注:亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中,以便提高分离率,减少工作量。
(3)鼻洗液(上呼吸道):患者取坐姿,头稍后仰,用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔,嘱患者同时发K音以关闭鼻腔。
然后让患者低头使生理盐水流出,用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
(4)鼻咽抽取物或抽取气管和支气管分泌物(下呼吸道):用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取气管和支气管分泌物。
先将收集器头部插入鼻腔或气管,接通负压,旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液,并用采样液涮洗收集器3次。
近来国内有用小孩导尿管接在50 ml注射器上来替代收集器。
(5)漱口液:用10 ml采样液漱口。
漱时让患者头部微后仰,发噢声,让洗液在咽部转动。
然后,用平皿或烧杯收集漱液。
注:取漱口液时,需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史,如有,含漱液中不应含抗菌素。
(6)肺活检材料:肺活检组织在无菌条件下,用灭菌过的乳钵磨碎,用生理盐水配成20%悬液,2000rpm离心10min,取上清加入上述提到的抗菌素。
自行咳痰采集法 取患者晨痰
留置于无菌容器
用冷开水漱口
深呼吸后用力咳出
呼吸道深部痰液
立即送检 立即送检 吸取痰液采集法 气管镜采集法 咽拭子采集法 24h 痰标本采集法 标本量不少于1ml
清水漱口 取出无菌拭子 用压舌板轻压舌部 蘸取少量生理盐水 迅速擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体分泌物 迅速把咽拭子插入无菌试管内塞紧 立即送检 叩击患者背部 患者取适当卧位 将集痰器与吸引器连接 抽吸痰液2~5ml 于集痰器内 记录痰标本总
量外观和性状 广口集痰瓶内 加少量清水 患者晨起进食前漱口后第一口痰开始留取,至次日晨起进食漱口后最后一口痰结束 全部痰液留入集痰瓶内 立即送检 采集标本 气管镜引导下 置于无菌容器。
呼吸道标本采集
【一】评估和观察要点
1.评估患者年龄、病情、治疗、排痰情况及配合程度。
2.评估患者口腔黏膜有无异常。
3.观察痰液的颜色、性质、量、分层、气味、黏稠度和有无肉眼可见的异常物质等。
【二】操作要点
1.自行咳痰采集法晨痰为佳,用冷开水漱口,深吸气后用力咳出呼吸道深部痰液,标本量不少于1ml,痰量少或无痰患者可采用10%盐水加至45度左右雾化吸入后,将痰液咳出。
2.难于自然咳痰、不合作或人工辅助呼吸患者的痰液采集法患者取适当卧位,先叩击患者背部,然后将集痰器与吸引器连接,抽吸痰液2~5ml于集痰器内。
3.气管镜采集法协助医生在气管镜引导下,直接采集标本。
4.咽拭子采集法患者用清水漱口,取出无菌拭子蘸取少量无菌生理盐水;用压舌板轻压舌部,迅速擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物,避免咽拭子触及其他部位;迅速把咽拭子插入无菌试管内塞紧。
5.24h痰标本采集法在广口集痰瓶内加少量清水。
患者起床后进食前漱口后第一口痰开始留取,至次日晨进食前漱口后最后一口痰结束,全部痰液留入集瓶内,记录痰标本总量、外观和性状。
【三】指导要点
1.告知患者正确留取标本对检验结果的重要性
2.告知患者痰标本留取的方法及注意事项
3.告知患者避免将唾液、漱口水鼻涕等混入痰中。
【四】注意事项
1.除24h痰标本外,痰液收集时间宜选择在清晨。
2.查痰培养及肿瘤细胞的标本应立即送检。
3.避免在进食后2h内留取咽拭子标本,以防呕吐,棉签不要触及其他部位以免影响检验
结果。