高效液相色谱法同时检测蔬菜中7种农药残留的方法
- 格式：docx
- 大小：11.26 KB
- 文档页数：3
高效液相色谱法同时检测蔬菜中7种农药残留的方法
作者：李彩均
来源：《现代食品》 2017年第7期
摘 要：目的：分析高效液相色谱法对蔬菜中7 种农药残留同时检测的效果。方法：在当地农贸市场随机购买几种蔬菜，利用高效液相色谱法对蔬菜中7 种农药残留测定，分析结果。结果：7 种农药出峰顺序为涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、3- 羟基克百威、涕灭威、克百威和甲萘威；7 种农药回收率最低在74.6%，最高在107.6%，精密度均低于10%。结论：高效液相色谱法对白菜、黄瓜、番茄、辣椒和芹菜等蔬菜的农药残留检测明显，值得广泛应用。
关键词：高效液相色谱法；蔬菜；农药残留；检测
笔者具体分析高效液相色谱法对蔬菜中7 种农药残留的同时检测效果。按照我国农业行业标准NY/T761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》相关标准，通过柱后衍生系统- 荧光检测器的高效液相色谱仪对不同蔬菜中7 种农药的残留量测定，提供农药残留检测分析的方法。
1 材料、方法
1.1 材料
1.1.1 仪器和试剂
工作站、自动进样器、数据处理软件、分析系统1100 液相色谱仪（美国Agilent 科技有限公司）；HH-8 型数显恒温水浴锅（杰瑞尔电器有限公司）；匀浆机（德国IKA-WERKE 公司）；EVAPll2 型旋转氮吹仪（美国Organomation Associates，Jnc. 公司）；Dispensette瓶口移液器、Transferpette 移液枪（ 德国BRAND 公司）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国TE-DIA 试剂公司）；WH300 旋涡混合器、TGL-20B 高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；氯化钠（优级纯，辽宁沈阳新西试剂厂）；二氯甲烷（色谱纯，美国J．T Baker 试剂公司）；0.22
μm 滤膜以及Cleanert NH2SPE 柱（美国Agela 公司）；K600 型食物调理机（ 德国BRAUN
公司）；PCX 柱后衍生系统（美国Pickering Laboratories 公司）。
1.1.2 标准物质
农药标准品共7 种：3-OH 克百威、灭威、克百威、涕灭威砜、甲萘威、灭多威、涕灭威亚砜。
1.1.3 柱后衍生试剂
巯基乙醇、CBl30 水解试剂、OPA 邻苯二申醛、CB910 OPA 稀释剂（美国Pickering
I．aborato．ties 公司）。先称取邻苯二甲醛0.1 g 与甲醇10 mL 相溶合，继续称取巯基乙醇2.0 g 和OPA 稀释液950 mL 相溶合，摇匀混合2 种液体，溶液都是现配现用。
1.2 方法
1.2.1 收集样本
在本地区不同地方收集各类各个季节生产的蔬菜，酶类蔬菜选择2 kg，把蔬菜切块，接着用食物调理机搅拌成碎末，选择搅拌好的样品共200 g，通过高速组织匀浆机将样本匀浆成糊状，在聚乙烯瓶中装好糊状样本，贴好样本名称标签，低温冷冻保存。
1.2.2 提取样本
取氯化钠1.0 g 加入聚苯乙烯离心管内，将20 g 糊状样本溶合乙腈40 mL，通过匀浆机处理1 min，在离心机中以5 000 r/min 的速度下离心处理2 min，完成后将样本静置。
1.2.3 净化样本
在烧杯中放入离心后的上清液10 mL，将恒温水浴锅与氮气连通，在上面放置烧杯，调节水浴锅温度到70 ℃，在烧杯中的液体全干之后将烧杯拿下来。在干净试管上固定SPE 装置，选择1 ∶ 99 浓度的甲醇-二氯甲烷混合液对SPE 2 次洗脱，2 mL/ 次。用混合液冲洗烧杯3
次，2 mL/ 次，在SPE 中倒入烧杯中液体。把装好洗脱液的试管放在50 ℃的氮吹仪哄，合理调节气流大小，将液体完全吹干后把试管取出，取水2 mL以及甲醇3 mL，定容到5 mL 后充分摇匀。通过装有0.22 μm 滤膜的注射器把试管中混合液打入上机样品瓶中，等待测定。
1.2.4 测定HPLC
在色谱仪槽内放好上机样品瓶，测定顺序为空白、空白平行、标样、添加标、添加标平行和样品。测定时间隔大约10 个样品打1 针标样，从而能够对机器准确性以及平行性校对。通过保留时间定性，比较标准液峰面积比和样品峰面积定量。条件：柱温42 ℃；C3 分析柱，4.6 cm×25.0 cm，5 μm；C18 预柱，4.6 cm×4.5 cm；荧光检测器波长为330 nm、465 nm；反应溶剂流速和梯度分析见表1。
2 结果分析
2.1 选择分离条件
为保证分离效果，针对水和甲醇的体积开展不同种配比实验，分析流动相是水和甲醇时分离效果。结果发现，甲醇如果有更高的配比，则会更快出峰，同时获得更好峰型，但是分离度不佳。加大水配比，能够获得良好分离度，不过峰型比较宽，分析时间会延长，出峰速度会明显减慢。当选择甲醇- 水配比时，基线基本平直，峰形基本对称，没有重叠其他杂质峰，实现完全分离。所以，流动相选择甲醇- 水配比。
2.2 组分分离分析
在本研究设定的条件下，分离农药共7 种，通过比较单标定性，获取7 种农药的出峰顺序，即涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、3- 羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威。
2.3 选择提取溶剂
在实践中分析农药残留使用较多的提取溶剂有多种，包括石油醚、甲醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯和丙酮等，提取溶剂挑选乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙腈，实验条件设置相同，选择浓度水平0.1 mg/kg，开展西红柿样品加标回收实验，结果显示，甲醇回收率为81.3%，乙腈为94.1%，丙酮为61.8%，乙酸乙醚为67.5%。从实验结果得知，提取溶剂选择乙酸乙酯、丙酮的回收率较乙腈、甲醇更低。同时由于乙腈提取样品基本不存在基质干扰问题，通过对提取效率、选择性、样品的混合性、溶剂化作用和渗透能力等多种因素综合分析，本实验农药残留量的提取剂最终确定选择乙腈。
2.4 添加回收率以及精密度
将3 种不同浓度的农药标本样品7 种到蔬菜样品中，具体为0.05、0.10、0.50 mg/kg。蔬菜中7 种农药添加回收率以及精密度见表2。
从表2 分析结果可知，全部农药回收率最低在74.6%，最高在107.6%，精密度没有超过10%。证实这一方法具有良好精密度，具备比较稳定的前处理以及仪器条件，能够分析农药残留情况。
3 结论
蔬菜中使用较多杀虫农药为氨基甲酸酯类农药，这类农药高效低毒、残留弱，具有良好选择性，当前已经逐渐将有机磷农药替代，成为果蔬以及粮食的主要杀虫剂[1]。广泛使用也导致一些问题，不合理使用情况逐渐增多，蔬菜中农药残留情况越来越严重，使蔬菜生产存在一些新问题，严重影响食品安全以及生态环境[2]。所以，必须做好蔬菜农药残留检测。当前农药残留检测方法包括酶抑制法、液相色谱- 串联质谱法、液相柱后衍生法、高效液相色谱法和气相色谱-质谱法等[3]。其中酶抑制法能有限农药种类测定，有效补充仪器分析方法；另外紫外检测器是高效液相色谱法使用较多的检测器，灵敏度较低。相比之下，荧光分析法存在检出截骨快速、操作简单方便以及较高灵敏度等多重优势。
选择乙腈作为提取溶液，挑选代表性强的蔬菜，通过高速匀浆完成样品提取，选择氨基固相萃取柱完成样品净化，通过高效液相色谱柱后衍生荧光法对蔬菜中7 种农药的残留量同时测定。这一检验方法使样品前处理步骤得到简化，整个实验所需时间明显缩短，同时提升实验分析灵敏度，有良好稳定性。另外该实验表现出实用性强、操作简单方便以及良好重现性，能够实现蔬菜农药多残留的准确、快速、灵敏检测分析。
