临床基因扩增检验实验的设置、质量管理的体系的建立及技术验收.ppt

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临床基因扩增检验实验设置与质量管
理
21、没有人陪你走一辈子，所以你要 适应孤 独，没 有人会 帮你一 辈子， 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候，留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运，首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃

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13
试剂管理制度
• 实验室应根据工作需要定期提交试剂申请单，做
到及时盘存清点。
• 所有试剂做到来源渠道正规，质量保证。 • 实验室应对试剂库存定期检查，不得用过期变质
的试剂。
• 试剂保存应严格按照规定存放，确保有效期内能
有效地使用，杜绝浪费。
• 试剂外借一律须经实验室负责人同意，剧毒试剂
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16
第三节：临床基因扩增实验室 操作指导书（SOP）
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• 各种仪器设备的标准操作维护程序
（PCR扩增仪、离心机、干式恒温器、生物安全柜、移液器、 冰箱、可移动紫外线消毒车等。）
• 各种仪器设备标准校准程序 • （温度计、移液器、PCR扩增仪等） • PCR标本唯一标识编号规则（120525B05） • 临床标本的采集及处理的标准操作程序 • 各种病原体扩增荧光检测标准操作程序 • 室内质量控制、室间质评标准操作程序
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空白管对照的种类
• 反应液空白管对照 • 试剂空白管（在整个实验过程中开口放置
于核酸提取的操作台面区域内30—60分钟， 然后进行扩增在反应液空白管为阴性的情 况下如果出现阳性提示可能出现实验室污 染。）
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25
扩增产物分析
• 通过标准曲线对未知模板进行定量分析 • 1。根据试剂盒的要求先确定基本的基线和域值。 • 2.初步分析未知模板的定量结果，根据当时曲线
• 人员的培训 • 规范操作
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21
分析中的质量控制
• 核酸提取 • 1.标本制备最好在生物安全柜内进行，可防止标本气溶胶
的扩散。
• 2.在实验操作过程中要经常更换手套，因为手套的污染很

•35
扩增仪孔间温度的重复性和均一性 的检测方法
一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示 记录仪组成扩增加热模块孔内温度监测记录系统， 当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。
具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反 应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反 应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的 PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔 不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动 热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内 温度监测至少要有一个扩增周期。
一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释 出的原理
核酸的分离纯化 靶核酸提取的质量 临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和
干扰物质 核酸样本制备及扩增检测的质控 产物检测的质控
•45
一般核酸提取试剂促使靶核酸 从细胞内释出的原理
靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离 及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测 定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌 、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述 细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。
□有 □有 □有 □有 □有
□使用后用10%次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁 □紫外照射
□使用后用10%次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁
□遵循单一工作流向
•38 □紫外照射
理想的试剂和操作方法
试剂盒的质检 定量测定的精密度是测定组成步骤的
变异和的平方根(SD)= 上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b、c 等（例如试剂准备、标本采集、核酸 提取、扩增和产物检测等）的标准差 ；
临床基因扩增检验的质 量保证PPT97
2020年5月24日星期日
定义
质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或 服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有

• 由县级卫生行政部门责令其限期改正.并可 处以5000元以下罚款.情节严重的,吊销其<医疗 机构执业许可证>.并予以公告.
•
• 十八. 违反下列条款也要处理
• 超范围开展项目 试剂不合格
• 无室内质控
无室间质评
• 弄虚作假
科研项目收费
• 无证上岗
仪器无校准
.
16
•
第四章
附则
• 十九. 采供血机构参照本办法执行
必须经国家药品监督管理局批准的临床检 验试剂
• 五.质量监督管理 • 部,省.自治区.直辖市临床检验中心负责
对所辖行政区域内临床基因扩增检验实验 室的质量监督管理工作
.
6
•
第二章 实验室设置和验收
• 六. 设置标准和验收程序 • • 设置标准
• <临床基因扩增检验实验室基本设置 标准>(见附件)
•
.
2
•
第一章
总则
• 一,目的
• 规范临床基因扩增检验实验室管理
• 保证临床基因扩增检验实验室质量
• 保证临床诊断,治疗的科学性,合理性
• 二.临床基因扩增检验的种类
• 基本原理是扩增检测DNA,RNA（cDNA）为 方法的检测技术
• 放大靶核酸
• 聚合酶链反应(PCR)
• 连接酶链反应(LCR)
.
•
临床基因扩增检验实验室必须做室
• 内质控
•
临床基因扩增检验实验室必须参加
• 部中心组织的室间质评
.
13
• 十四. 部中心按照<管理办法>和<工作规
• 范>协调,组织省检验中心监测临床基因 扩增检验实验室的检验质量.结果报省卫 生厅,并抄送被检单位.

功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其 加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的 操作，应符合生物安全二级实验室防护设 备、个人防护和操作规范的要求。
24
标本制备区
标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜 、加样器、 高速台式冷冻离心机、水浴箱和/或加热模块、混匀器、 冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤 芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。加样 器应定期校准。如需处理大分子DNA，应当具有超声波 水浴仪。
加热模块和水浴应使用已经校准的温度计定期对所设置 的温度进行校准。
25
1.6 扩增区 (a) 核酸扩增仪;
(b)微量加样器；
(c)可移动紫外灯；
(d)专用工作服和工作鞋；
(e)消耗品（带滤心吸头、 一次性手套等）； (f)专用实验记录本、记 号笔等。
扩增区
功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。 扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环
序号
验收内容
1
实验室设置和设备
验收意见
符 基但 不 缺 暂
合 本有 符 此 不
符缺 合 项 需
合陷
考
核
评论与说明
1.1 实验室的规范化分区:原则上 应分为四个区,但如使用全自 动扩增检测仪,区域可适当合 并
1.2 各工作区的明确标记
1.3 实验室应配备开展临床基因 扩增检测所需的所有仪器设 备（包括质控物）。保证 《临床基因扩增检验实验室 管理办法》和《临床基因扩 增检验实验室工作导则》的 有关要求得到满足。
28
核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板 或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标 记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、 Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主 要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品 及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩 增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1 mol/L HCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验 室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1 mol/L HCl中浸泡 后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。

对临床标本中可能存在的 抑制/干扰物的质控措施
质控措施： 采用内质控 （internal control, IC）（通 常称为内标）的方法
内标有两种,即竞争性的和非竞 争性的内标。
内标设置的必要性？
标本收集
标本采集时间对扩增检测结果的影响 标本采集部位的准备 标本的类型和采集量 采样质量的评价 采样及运输容器 标本采集中的防污染
标本采集时间对扩增检测结果 的影响
在疾病发展过程中，标本采集过早或 过晚都可能会给出假阴性结果。
标本采集部位的准备
标本采集部位的清洁消毒可去掉 污染的微生物或其它杂物,但应适 度,过度清洁消毒有可能会去掉或 破坏靶微生物,故标本采集部位的 准备应由训练有素的人员进行。
扩增仪孔间温度的重复性和均一性 的检测方法
第二种方法并非直接测定孔内温度，而是 通过扩增功能来间接获知孔间的均一性， 即将加有一已知的含一定浓度的阳性质控 样本的扩增反应管置于扩增仪各孔中按常 规进行扩增检测，观察结果的一致性程度， 如果有某一个或几个孔结果有问题，则应 确定这一个或几个孔是否会重复性地得到 假阴性结果，如果是，则表明相应孔的热 传导有损坏。
定义
室 间 质 量 评 价 （ External Quality Assessment, EQA） 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异， 由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价 实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之 间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法 的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的 可接受性。当EQA用来为执业许可或实验室认证的目 的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力比对检 验（Proficiency testing, PT）。在以前的文献中， EQA常描述室间质量控制。

理想的设置
产物分析区 扩增区 样本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
磁性连锁装置
现实的问题是：

建筑结构

通道、门 水电供应 采光、通风
基本的要求:


四个区域必须是相互独立的 各区的仪器设备及各种物品必须是专用的 各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作 服及鞋子用 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。
实验室的设置

管理要求：设置标准和工作规范 具体落实：实事求是、因地制宜
设置标准和工作规范
“原则上分为四个分隔的工作区；…… 各区必 须有明确的标记……” “每一区域都须有专用的仪器……；不同的工作 区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服……； 离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出……” “……，可在开展临床标本检测前对提取方法进 行评价” “……，本区如采用副压条件或减压情况下可减 少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。
管理要求：
3 人员 3.1 实验室应配备足够数量的人员； 这些人 员必须经过培训，并取得上岗证； 3.2 实验室应有培训计划和措施，保证其技术 人员得到及时培训。 3.3 实验室应保存其技术人员有关资格证书 （如上岗证）、培训、技能和经历等技术档案。
管理要求：
4 设备管理 4.1 主要设备应有维护程序文件及维护记录； 4.2 (a)有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可 能应将其贮存在规定的地方直至修复；(b)修复的设备必须 经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使 用；(c)实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工 作的影响。 4.3 加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等应有校准程序并进行 校准，扩增仪和酶标仪应有明显的标识表明其校准状态。 4.4 应保存扩增仪、酶标仪、生物安全柜、加样器等设备的档 案

26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网
15、机会是不守纪律的。——雨果
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临床基因扩增检验试验的设置 质量管理体系的建立及技术验
收
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
Байду номын сангаас
谢谢！
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