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鸭肠炎病毒的提纯和间接ELISA诊断方法的建立及
应用的开题报告
介绍：
鸭肠炎是由鸭肠炎病毒感染引起的一种急性、高度传染性的疾病，
常发生于家禽养殖中，给养殖业造成了巨大的经济损失。
因此，建立快速、准确的诊断方法和有效的疫苗是十分必要的。
本文旨在研究鸭肠炎
病毒的提纯方法及间接ELISA诊断方法的建立和应用。
一、鸭肠炎病毒的提纯方法
使用鸭肠炎病毒株进行感染和复制，采用低速离心、高速离心、HOME、GE等多种方法逐步去除细胞碎片、蛋白质、核酸等杂质，最终
得到较为纯净的病毒颗粒。
采用SDS-PAGE等方法检测病毒纯度，为后
续的诊断方法提供基础。
二、间接ELISA诊断方法的建立
1.制备抗体：使用提纯的鸭肠炎病毒制备兔抗血清，检测抗体效价。
2.制备抗原：将提纯的鸭肠炎病毒加入固相板，通过化学交联将病
毒固定在板上，用PBS等缓冲液冲洗去其他杂质，得到抗原。
3.检测抗体：将样本加入含有抗原的固相板孔中，待抗体反应，加
入检测二抗，通过酶作用反应终止后测量OD值，根据OD值判断是否感染鸭肠炎病毒。
三、间接ELISA诊断方法的应用
1.检测感染率：采集禽类粪便或血清样本，通过间接ELISA方法检
测其是否感染了鸭肠炎病毒。
2.监测疫苗效果：采集接种过疫苗后的禽类粪便或血清样本，通过
间接ELISA方法检测其是否产生了抗体，评价疫苗的效果。
综上所述，鸭肠炎病毒的提纯和间接ELISA诊断方法的建立及应用是一项重要的研究工作，该方法的建立将为鸭肠炎的防治提供重要的技术支持。
一种新冠胶体金抗体检测试纸条及其制备
方法
以下是一种新冠胶体金抗体检测试纸条及其制备方法的简要介绍：
该测试纸条主要包括纸基、检测线和负对照线，检测线和负对照线上分别固定有新冠病毒抗原和兔抗IgG抗体。
制备方法包括以下步骤：
1.准备纸基，将其涂上样品吸附剂。
2.在纸基上涂布含有新冠病毒抗原的检测线和含有兔抗IgG抗体
的负对照线。
3.干燥并切割纸条，制成测试纸条。
4.将制成的测试纸条包装好，存放于密封袋中。
使用时，将待检测样品滴到样品吸附剂处，样品会被纸基吸附并沿着纸条流动，如果样品中存在新冠病毒抗体，则会与检测线上的新冠病毒抗原结合，形成红色线条，从而显示检测结果为阳性；如果样品中不存在新冠病毒抗体，则只会显示负对照线，检测结果为阴性。
需要注意的是，该测试纸条仅供参考，具体操作时需要根据实际情况进行调整和验证。
单抗制备的详细步骤单抗（monoclonal antibody）是由单一细胞母克隆细胞系产生的抗体，具有高度特异性和一致性。
单抗制备的过程通常包括免疫原的选择、动物免疫、细胞融合、克隆筛选和克隆扩增等步骤。
下面将详细介绍这些步骤。
第一步，免疫原的选择。
免疫原是制备单抗必不可少的关键组成部分。
免疫原的选择应基于目标抗体的特异性和重要性。
常用的免疫原包括蛋白质、多肽、多糖、细胞表面分子等。
为了提高免疫原的免疫原性，可以将免疫原与佐剂混合，以增强其免疫原性。
第二步，动物免疫。
将选择的免疫原注射到合适的动物体内。
常用的免疫动物包括小鼠、大鼠、兔子等。
在免疫过程中，通常需要多次免疫，在每次免疫之间有一定的间隔时间，以增强免疫效果。
在免疫的过程中，可以通过采血检测免疫反应的进展，并决定最佳的免疫时间点。
第三步，细胞融合。
在免疫过程中，免疫细胞会产生针对免疫原的抗体。
为了制备单抗，需要将这些抗体产生的免疫细胞与癌细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
常用的癌细胞包括骨髓瘤细胞、葡萄膜炎细胞等。
第四步，克隆筛选。
将细胞融合密度适宜的细胞悬浮液均匀分配到培养皿中，使单个杂交瘤细胞分布在不同的培养皿中。
培养皿中含有特定选择性培养基，使只有杂交瘤细胞能够存活和生长。
在适当的条件下，杂交瘤细胞会形成一个细胞克隆。
然后，可以通过ELISA、细胞培养和动物注射等方法对克隆的细胞上清液进行筛选，以检测是否含有特定的抗体。
第五步，克隆扩增。
通过继续培养和传代，可以扩增含有特定抗体的细胞克隆。
克隆扩增的时间可能需要数周或数月，具体取决于细胞系的生长速度和特性。
最后，可以将克隆扩增的细胞培养液进行纯化和浓缩，以获得高纯度的单抗。
通常使用亲和层析、离心、电泳等技术进行单抗的纯化。
单抗制备的最终产品可以用于医学研究、诊断和治疗等领域。
尽管以上步骤可以概括标准的单抗制备过程，但实际制备中可能因为不同的实验目的和具体需求而存在一些变化。
制备单抗是一个复杂而耗时的过程，需要专业的实验技术和丰富的经验。
鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备赵丹丹;刁有祥;杨国平;陈浩;提金凤;张璐【摘要】[目的]制备鸭瘟病毒(DPV)gB蛋白单克隆抗体,为建立DPV快速诊断方法及进一步鉴定DPV的抗原表位奠定基础.[方法]克隆DPV gB基因,构建其表达载体并进行原核表达,纯化DPV gB蛋白,以其作为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,进行间接ELISA及亚克隆筛选,并对单抗亚类及抗原性进行鉴定.[结果]PCR扩增出915 bp的目的基因,成功连接于pET-28a载体,并转化大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,获得4株稳定分泌抗DPV gB蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6,间接ELISA检测其腹水效价分别为1∶103、1∶103、1∶105、1∶103,亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链.Western blot结果显示4株单抗均能与DPV gB蛋白特异性结合,IFA结果表明4株单抗是针对DPV产生的.[结论]成功获得了特异性针对DPV gB蛋白的单克隆抗体.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(044)010【总页数】5页(P7-11)【关键词】鸭瘟病毒;gB蛋白;单克隆抗体【作者】赵丹丹;刁有祥;杨国平;陈浩;提金凤;张璐【作者单位】山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018【正文语种】中文【中图分类】S852.65+7鸭瘟由Baudet于 1923 年首次在荷兰发现，随后陆续在许多养鸭国家暴发和流行，给养鸭业带来严重的经济损失[1]。
鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用阚莹;张淼;卢奇;吕炫;于胜祖;王习强;姜雅倩;王蓓;朱英奇;王晴;王桂军【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2023(40)2【摘要】为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。
采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜(NC膜)检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。
结果显示:制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。
结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了一种实用检测技术。
【总页数】8页(P131-138)【作者】阚莹;张淼;卢奇;吕炫;于胜祖;王习强;姜雅倩;王蓓;朱英奇;王晴;王桂军【作者单位】安徽农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S851.3【相关文献】1.抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定2.胶体金免疫层析试纸条快速检测鸭坦布苏病毒方法的建立3.鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用4.重组鸭瘟病毒载体中筛选高效表达鸭坦布苏病毒E蛋白启动子5.鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鸭瘟病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立于新友;李天芝;王金良;沈志强【期刊名称】《水禽世界》【年(卷),期】2014(0)6【摘要】为建立鸭瘟病毒(DPV)快速、敏感的检测方法,本研究利用PCR技术扩增出DPVUL30基因中510bp的保守序列,并克隆到pMD18-T载体中作为标准品制作标准曲线,建立了DPV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达5×101拷贝,与鸭细小病毒、鸭圆环病毒、小鹅瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭H9亚型流感病毒和鸭副粘病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床DPV的检测.【总页数】4页(P31-34)【作者】于新友;李天芝;王金良;沈志强【作者单位】山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600;山东省滨州畜牧兽医研究院【正文语种】中文【中图分类】S834.2【相关文献】1.多形拟杆菌SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用 [J], 朱亚丽;张广智;赵圣国;梁琳;亓玉卓;王明艳;崔尚金2.F亚群禽白血病病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 严立福;曹伟胜;陈建;郑晓翠;李昱;余蕴;康杨帆;李海霞;张雪婷;程颂3.鸡Caspase-1基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 郭慧芳;李宁;王白玉;乔麒龙;黄庆;李永涛;王增;赵军4.猪急性腹泻综合征冠状病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J], 张记宇;季朝阳;石达;冯力;韩郁茹;时洪艳;陈建飞;张鑫;刘建波;张燎原;冯书风;冯廷帅5.山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 张靖鹏;江锦秀;林裕胜;游伟;刘道泉;毛坤明;江斌;胡奇林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
