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抗菌药物筛选的实验方法与技术博哥(中山大学化学与化学工程学院，广州510275)摘要为了筛选出活性更好的抗菌药物，本实验采用微量稀释法通过体外实验对44种化合物进行了筛选，测定其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度或IC50来评定药物活性。
结果显示，样品1（环丙沙星）对二者有杀菌作用，最小抗菌浓度都为1.56 μmol·L-1。
样品30仅对大肠杆菌有杀菌作用，最小抗菌浓度为1.56 μmol·L-1。
样品17、19、20、24、26、28，表现出对大肠杆菌较好的抑制作用，其中抑制活性最好的为样品28(2,5-二羟基苯甲基-N-4-羟基苯基亚胺)，IC50值为1.72 μmol·L-1。
样品31、42表现出对金黄色葡萄球菌较好的抑制活性，IC50值分别为11.04 μmol·L-1和24.44 μmol·L-1。
关键词抗菌药物筛选体外实验微量稀释法1 引言一个新的化合物或分离提取的有效成分是否有抗菌作用，需要药理实验来证实。
一般采用体外实验方法，观察试验物对细菌有无杀灭作用或抑制作用。
药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。
因此，体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。
体外实验的重要性在于方法简便，用药量少，短时间内能判断药物抗菌的广度和强度，为深入体外实验和体内药效研究提供数据。
但是，体外实验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内实验的结果不一定完全一致，需两方面综合分析进行评价。
本实验进行微生物培养基的配置、灭菌与接种等操作，以熟悉细菌培养的过程，并采用微量稀释法通过体外实验对44种化合物进行了筛选，测定其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度或IC50来评定药物活性。
2实验部分2.1药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、胰蛋白胨、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl溶液、DMSO以44种化合物(见表1)。
抗菌药物筛选的实验方法与技术教案第一章：抗菌药物筛选概述1.1 抗菌药物的概念与作用1.2 抗菌药物的分类及代表药物1.3 抗菌药物筛选的重要性1.4 抗菌药物筛选的发展历程及趋势第二章：抗菌药物筛选实验方法2.1 纸片扩散法2.1.1 原理及操作步骤2.1.2 结果判定与分析2.2 微量肉汤稀释法2.2.1 原理及操作步骤2.2.2 结果判定与分析2.3 微量棋盘法2.3.1 原理及操作步骤2.3.2 结果判定与分析2.4 时间耐药法2.4.1 原理及操作步骤2.4.2 结果判定与分析第三章：抗菌药物筛选实验技术3.1 菌株的准备与鉴定3.1.1 菌株的来源与保存3.1.2 菌株的纯化与鉴定3.2 抗菌药物的准备与应用3.2.1 抗菌药物的来源与储存3.2.2 抗菌药物的应用方法3.3 实验数据的统计分析3.3.1 实验数据的收集与整理3.3.2 实验数据的统计方法及应用第四章：抗菌药物筛选实验中的常见问题及解决办法4.1 菌株的选择与鉴定问题4.2 抗菌药物的应用与浓度选择问题4.3 实验操作过程中的技术问题4.4 实验结果的判定与分析问题第五章：抗菌药物筛选实验的应用与实践5.1 临床抗菌药物筛选与应用5.1.1 临床抗菌药物筛选的流程与要求5.1.2 临床抗菌药物的应用原则与策略5.2 抗菌药物的研究与开发5.2.1 抗菌药物研究的基本方法与技术5.2.2 抗菌药物研发的趋势与挑战5.3 抗菌药物筛选实验在疫苗研究中的应用5.3.1 疫苗研究中的抗菌药物筛选问题5.3.2 抗菌药物在疫苗研究中的应用实例第六章：抗菌药物筛选实验的案例分析6.1 案例一：医院感染病原菌的抗菌药物筛选6.1.1 案例背景与目的6.1.2 实验方法与步骤6.1.3 结果分析与讨论6.2 案例二：新型抗菌药物的研究与筛选6.2.1 案例背景与目的6.2.2 实验方法与步骤6.2.3 结果分析与讨论第七章：抗菌药物耐药机制7.1 细菌耐药机制概述7.1.1 细菌耐药的定义与分类7.1.2 细菌耐药机制的主要类型7.2 常见的细菌耐药机制7.2.1 酶抑制剂的产生与作用7.2.2 药物靶点的改变与适应7.2.3 药物外排系统的功能与调控7.3 抗菌药物耐药机制的研究方法7.3.1 耐药机制研究的实验方法7.3.2 耐药机制研究的生物信息学方法第八章：抗菌药物筛选实验的优化与改进8.1 抗菌药物筛选实验的优化策略8.1.1 实验条件的优化8.1.2 实验方法的改进与创新8.2 实验技术的更新与发展8.2.1 自动化与智能化技术在抗菌药物筛选中的应用8.2.2 微流控技术在抗菌药物筛选中的优势与挑战8.3 抗菌药物筛选实验的未来发展趋势8.3.1 个性化医疗与精准抗菌治疗8.3.2 抗菌药物筛选与合成生物学的结合第九章：抗菌药物筛选实验在疫苗研究中的应用9.1 疫苗研究中的抗菌药物筛选问题9.1.1 疫苗与抗菌药物筛选的关系9.1.2 疫苗研究中的抗菌药物筛选挑战9.2 抗菌药物在疫苗研究中的应用实例9.2.1 抗菌药物在疫苗保护效果评估中的应用9.2.2 抗菌药物在疫苗载体研究中的应用第十章：总结与展望10.1 抗菌药物筛选实验方法的优缺点分析10.1.1 各种实验方法的优缺点对比10.1.2 实验方法选择与应用的建议10.2 抗菌药物筛选实验技术的发展趋势10.2.1 实验技术的创新与改进10.2.2 抗菌药物筛选实验在多领域的应用扩展10.3 对抗菌药物筛选实验的展望10.3.1 提高抗菌药物筛选的准确性与效率10.3.2 为抗菌药物的研究与临床应用提供有力支持重点和难点解析重点环节一：抗菌药物筛选的实验方法与技术补充和说明：在这一部分，学生需要理解并掌握各种抗菌药物筛选实验方法的原理、操作步骤和结果判定与分析。
实验六、抗菌药物的体外药效试验(药敏试验）各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。
此外,通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。
药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验(Kirby —Baueer Dice Diffusion）;最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）和最低杀菌浓度试验(Minimum Bactericidal Concentration, MBC）.［目的要求］1、熟悉体外抗菌试验操作技术。
2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途.［实验原理］常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法.琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面,然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。
根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。
经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力.浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内,加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）.1、细菌:所用细菌应包括主要致病菌。
革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。
革兰氏阴性球菌如淋球菌等。
革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等.对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。
其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200—500株。
试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。
初中生物：一次查找病菌，防止疾病传播的教案防止疾病传播的教案随着人类文明的进步，科学技术日新月异。
面对疾病的威胁，我们需要时刻保持警惕并采取有效的措施防止疾病的传播。
这里，我们将介绍一次生物实验——查找病菌，并通过教案的形式帮助初中生了解防疫知识，有效防止疾病的传播。
一、实验目的：了解病菌的基本知识，了解细菌、病毒等微生物在人体内的生存情况，通过实验方法查找与确认病菌的形态和特征，掌握疾病传播的途径和预防措施。
二、实验器材和试剂：微孢子杆菌、啤酒酵母菌、香菇、细菌培养基、医用酒精、染色液、显微镜、培养皿、注射器等。
三、实验过程：1.观察样本中的微生物我们收集不同样本中的微生物，如香菇表面、啤酒、人手等。
接着，在细菌培养基上培养0.5ml以上的样品，通过显微镜观察样品中的微生物。
如果发现疑似病菌，应先用医用酒精消毒培养皿中的已培养样品，然后在样品表面注射一定量的试液，等待相应时间后进行观察并记下观察结果。
2.病菌形态的测定观察样品中的病菌形态，如菌落大小、颜色、质感、光滑度等，并进行注射染色液的实验，观察细菌在病理标本中的染色方式。
通过这些方法可以更精准地确定病菌的类型和形态信息。
3.病菌感染途径的确定确定病菌感染的途径有助于我们更好地防范疫情的发生。
在实验过程中，我们可以通过注入病菌样品，确定其在人体内的传播途径，如是否会通过呼吸道、皮肤黏膜等途径进行感染，以便我们采取相应的预防措施。
4.疾病预防的措施确认病菌信息后，我们可以在对应场合中采取相应的预防措施，如提高卫生意识、加强个人卫生、增强体质、及时就医、及时隔离等。
此外，还可以采用科学精准的预防措施，如接种疫苗、使用防疫药物等。
四、实验结果：通过实验可以确定不同样本中的微生物信息，进一步研究和确认病菌的具体形态、特征和感染途径。
通过分析实验结果，可以制定其他有针对性的预防措施，帮助我们更好地防止疾病的传播。
通过这次查找病菌的实验，我们可以更加了解疾病的传播原理、病菌的类型和具体特征，并参照实验结果制定预防措施，有效减少疾病的发生和传播。
抗菌药物筛选的实验方法与技术一、实验原理体外实验是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。
药物对细菌代谢的影响、可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而出现细菌不生长或部分抑制，可借以判断药物对细菌有无抗菌作用，或抗菌范围。
培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖成积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。
主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。
培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满有微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。
按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂(常加1.5%-2%的琼脂)经融化冷凝而成。
半固体培养这是指在液体培养基中加入0.8％-1％左右的琼脂，经融化冷凝而成。
液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。
正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。
但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及接菌等基本环节大致相同。
微量稀释法常用于测定细菌对药物敏感性或新药对细菌的抗菌活性试验。
一般应用96孔微量稀释板，孔底呈U型，每孔容量为0.20-0.30ml。
本法操作较便，用培养基量少，可作大批量药敏试验。
二、材料与方法1，药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、胰蛋白胨、琼脂等。
1mol/L NaOH、1mol/L HCl溶液。
2，材料与仪器天平、高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、超净工作台、酒精灯、移液器、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗、药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管、报纸、96孔板等。
一、教案概述抗菌药物筛选的实验方法与技术教案教学目标：1. 理解抗菌药物筛选的重要性。
2. 掌握抗菌药物筛选的实验方法与技术。
3. 能够独立进行抗菌药物筛选实验。
教学内容：1. 抗菌药物筛选的意义。
2. 抗菌药物筛选的实验方法。
3. 抗菌药物筛选的技术。
教学时数：2学时教学重点：1. 抗菌药物筛选的意义。
2. 抗菌药物筛选的实验方法。
3. 抗菌药物筛选的技术。
教学难点：1. 抗菌药物筛选的实验方法。
2. 抗菌药物筛选的技术。
教学准备：1. 实验室设备：显微镜、培养皿、试管、移液器等。
2. 实验材料：细菌菌株、抗菌药物、培养基等。
二、教学过程教学环节：1. 导入：介绍抗菌药物筛选的意义和重要性。
2. 讲解：讲解抗菌药物筛选的实验方法和技术。
3. 演示：进行抗菌药物筛选实验的演示。
4. 实践：学生独立进行抗菌药物筛选实验。
5. 总结：总结抗菌药物筛选的实验方法和技术的要点。
教学方法：1. 讲授法：讲解抗菌药物筛选的意义和重要性。
2. 演示法：进行抗菌药物筛选实验的演示。
3. 实践法：学生独立进行抗菌药物筛选实验。
三、教学评价评价方式：1. 实验报告：评价学生的实验操作和结果分析。
2. 小组讨论：评价学生的团队合作和问题解决能力。
3. 口头提问：评价学生的理解和记忆情况。
评价指标：1. 实验操作的正确性。
2. 结果分析的准确性。
3. 团队合作和问题解决的能力。
四、教学内容拓展拓展内容：1. 抗菌药物筛选的临床应用。
2. 抗菌药物耐药性的检测方法。
3. 抗菌药物筛选的新技术。
教学方式：1. 讲座：邀请相关领域的专家进行讲座。
2. 文献阅读：引导学生阅读相关的学术论文。
3. 小组讨论：引导学生进行深入讨论和思考。
五、教学资源教学资源：1. 教材：抗菌药物筛选的实验方法与技术。
2. 课件：抗菌药物筛选的实验方法和技术的PPT。
3. 实验指导：抗菌药物筛选实验的操作指南。
4. 相关文献：抗菌药物筛选的最新研究成果。
