各种葡聚糖凝胶的分离范围及用途

凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。

例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。

交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。

因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。

⑵SephadexLH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。

琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。

一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。

琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。

（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。

交联剂越多，孔隙越小。

聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-GelP），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。

（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。

层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。

【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。

2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。

【实验原理】凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。

层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。

葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。

凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。

可分离的分子量范围从几百到几十万不等。

葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。

分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。

若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。

本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。

蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×106，而溴酚蓝分子量为670，二者分子量相差较大，前者完全排阻，而后者则可完全进入凝胶颗粒网孔内，二者通过层析柱的时间不同而分开。

【实验材料】1.实验器材层析柱(1×20cm)附有一小段乳胶管及螺旋夹；洗脱液瓶(带下口的三角瓶，250m1)；试管及试管架；量筒10m1；721型分光光度计2.实验试剂(1) Tris—醋酸缓冲液(pH7.0):取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900ml，用浓醋酸调pH至7.0，加蒸馏水至1000m1。

凝胶过滤填料的分离范围表SephadexG-10葡聚糖凝胶G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sepharose 6B 琼脂糖凝胶6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000 DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶FF 分离范围：3000-80,000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子做纯化的人可能经常接触到sephadex，BIO-Gel，sephacryl s-,sepharos e BIo-Gel等几种填料，有时会混淆在一起，看到一个贴子较好的介绍了这些填料的区别，希望对大家有用。

凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。

例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。

交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。

因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。

⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。

琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。

一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。

琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。

（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。

交联剂越多，孔隙越小。

聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。

（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。

层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。

凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。

例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。

交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。

因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。

⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。

琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。

一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。

琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。

（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。

交联剂越多，孔隙越小。

聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。

（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。

层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。

凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。

例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水克，同样G-200克每克千胶吸水20克。

交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。

因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。

⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。

琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。

一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。

琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。

（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。

交联剂越多，孔隙越小。

聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。

（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。

层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。

凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。

例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。

交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。

因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。

⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。

琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。

一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。

琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。

（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。

交联剂越多，孔隙越小。

聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。

（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。

层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。

各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途：SephadexG-10葡聚糖凝胶G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sepharose 6B 琼脂糖凝胶6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶FF 分离范围：3000-80,000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子。

葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。

其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。

虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。

此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。

2 Sephadex LH20 的原理。

Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。

因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。

如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。

如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。

3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。

看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。

用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。

正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。

4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。

如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。

如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。

5 Sephadex LH-20的步骤。

(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。

1. 概述Sephadex G-10 是一种常用的葡聚糖凝胶，具有广泛的应用范围。

在生物化学、分子生物学等领域中，它被广泛用于分离和纯化生物大分子，例如蛋白质、核酸等。

而Sepahdex G-10的孔径大小则是影响其分离和纯化效果的重要因素之一。

2. Sephadex G-10的基本介绍2.1 Sephadex G-10是一种由交联葡聚糖制成的凝胶，属于凝胶过滤层析介质的一种。

它以其较大的孔径而闻名，这使得它在许多生物大分子的分离过程中具有重要的应用价值。

2.2 Sephadex G-10的结构具有高度规则的孔隙结构，能够可靠地分离分子，并且不易受到外界因素的影响。

2.3 在分子生物学和生物化学的实验中，Sephadex G-10经常被作为一种理想的分离介质，用于分离蛋白质、核酸等大分子物质。

3. Sephadex G-10的孔径大小3.1 Sephadex G-10的孔径大小通常为10微米左右。

这种中等大小的孔径使得它能够有效地分离分子，但也相对于有一定的分辨能力，不会因为孔径过大而导致分离效果不理想。

3.2 对于一些较大的生物大分子，例如大分子蛋白质、核酸等，Sephadex G-10的孔径大小能够保证其能够顺利地通过凝胶中的孔隙，实现有效的分离和纯化。

4. Sephadex G-10的孔径大小对分离效果的影响4.1 由于Sephadex G-10的孔径大小适中，它能够较好地区分不同大小的分子。

对于较小的分子而言，它们能够更容易地穿过Sephadex G-10的孔隙，实现快速的分离。

4.2 对于较大的生物大分子，Sephadex G-10的孔径大小也能够保证其能够通过凝胶的孔隙，实现高效的分离。

这就体现了SephadexG-10的孔径大小对于分离效果的积极影响。

5. 结语Sephadex G-10作为一种常用的葡聚糖凝胶，在分离和纯化生物大分子的过程中具有重要的应用价值。

其孔径大小的适宜性，使得它能够有效地区分不同大小的分子，实现高效的分离和纯化。

实验五. 葡聚糖凝胶层析【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。

2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。

【实验原理】凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。

层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。

葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。

凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。

可分离的分子量范围从几百到几十万不等。

葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。

分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。

若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。

本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。

蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×106，而溴酚蓝分子量为670，二者分子量相差较大，前者完全排阻，而后者则可完全进入凝胶颗粒网孔内，二者通过层析柱的时间不同而分开。

【实验材料】1.实验器材层析柱(1×20cm)附有一小段乳胶管及螺旋夹；洗脱液瓶(带下口的三角瓶，250m1)；试管及试管架；量筒10m1；721型分光光度计2.实验试剂(1) Tris—醋酸缓冲液(pH7.0):取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900m l，用浓醋酸调pH至7.0，加蒸馏水至1000m1。

葡聚糖凝胶G-50 Medium使用说明书为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或销售人员。

1. 产品介绍葡聚糖凝胶G-50 Medium是一种凝胶过滤层析介质（也叫体积排阻色谱），适用于生物分子的脱盐、缓冲液置换、组群分离、精细纯化。

特点如下：a. 经典的葡聚糖介质，选择性好。

b. 生物大分子（>30kDa）的快速脱盐和缓冲液置换（一步完成）。

c. G-50 Medium，可用于组群分离和杂质的去除（以排阻限30kDa为分界点）。

d. G-50 Fine，可用于小分子蛋白的分离纯化（1.5-30kDa）。

表1：性能参数2.选择2.1 介质级别的选择a. 快速脱盐、缓冲液置换、组群分离和杂质的去除：选择G-50 Medium，粒径大、流速快。

b. 小分子蛋白分离纯化：选择G-50 Fine，粒径小、分辨率高。

2.2 层析柱的选择a. 快速脱盐、缓冲液置换、组群分离和杂质的去除（上样量可达到30%CV）：选择粗短型层析柱（柱床高度低，例如XK 16/20），流速快、周期短。

b. 小分子蛋白分离纯化（上样量为0.5%-4%CV）：选择细长型层析柱（柱床高度高，例如XK 16/70），柱效高、分辨率好。

备注：CV指柱体积。

3. 使用3.1 溶胀取一定量的干粉，加入过量的纯化水（缓冲液：干粉≥20ml：1g），在室温（25℃）溶胀24小时或沸水浴溶胀3小时。

备注：溶胀过程中可进行柔和的搅拌，杜绝使用高速或剧烈的搅拌方式（例如磁力搅拌等）。

3.2 清洗待介质自然沉降后，小心的倒出上清液（包括极少量没有溶胀好的干粉和一些漂浮的小颗粒介质），再加入3-5倍体积的纯化水进行重悬。

重复此步骤5次。

备注：用于清洗产品中残留的微量有机试剂和碱性物质。

3.3 重悬在清洗好的介质中加入一定量的缓冲液（缓冲液:介质=1:3），用玻璃棒或其它搅拌装置柔和搅拌3-5分钟。