葡聚糖凝胶离子交换剂

离子交换层析技术离子交换层析技术是以离子交换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶为固定相，以蛋白质等样品为移动相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、激素和多糖等的一项技术。

（一）原理在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。

如二乙氨乙基（Dicthylaminoethyl，DEAE）纤维素。

在纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素—O—C6 H14N+H，它的反离子为阴离子（如Cl-等），可与带负电荷的蛋白质阴离子进行交换。

当结合阴离子基团时，可置换阳离子，称为阳离子交换剂，如羧甲基（Carboxymethy，CM）纤维素。

纤维素分子上带有负电荷的阴离子（纤维素－O－CH2－COO一），其反离子为阳离子（如Na+等）,可与带正电荷蛋白质阳离子进行交换。

溶液的pH值与蛋白质等电点相同时，静电荷为0，当溶液pH值大于蛋白质等电点时，则羧基游离，蛋白质带负电荷。

反之，溶液的pH值小于蛋白质等电点时，则氨基电离，蛋白质带正电荷。

溶液的pH值距蛋白质等电点越远，蛋白质的电荷越多。

反之则越少。

血清蛋白质均带负电荷，但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异，以白蛋白为最多，依次为球蛋白，球蛋白和球蛋白。

在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等电点时，蛋白质被阳离子交换剂所吸附。

由于各种蛋白质所带的电荷不同。

它们与交换剂的结合程度也不同，只要溶液pH值发生改变，就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附，从而可能把不同的蛋白质逐个分离开来。

交换剂对胶体离子（如蛋白质）和无机盐离子（如NaCl）都具有交换吸附的能力，当两者同时存在于一个层析过程中，则产生竞争性的交换吸附。

当Cl一的浓度大时，蛋白质不容易被吸附，吸附后也易于被洗脱，当Cl一浓度小时，蛋白质易被吸附，吸附后也不容易被洗脱。

因此，在离子交换层析中，一般采用两种方法达到分离蛋白质的目的。

(2)亲水性离子交换剂亲水性离子交换剂中的基质为一类天然的或人工合成的化合物，与水亲和性较大，常用的有纤维素、交联葡聚糖及交联琼脂糖等。

①纤维素离子交换剂纤维素离子交换剂或称离子交换纤维素，是以微晶纤维素为基质，再引入电荷基团构成的。

根据引入电荷基团的性质，也可分强酸性、弱酸性、强碱性及弱碱性离子交换剂。

纤维素离子交换剂中，最为广泛使用的是二乙胺基乙基(deae一)纤维素和羧甲基(cm一)纤维素。

近年来pharmacia公司用微晶纤维素经交联作用，制成了类似凝胶的珠状弱碱性离子交换剂(deae —sephacel)，结构与deae一纤维素相同，对蛋白质、核酸、激素及其他生物聚合物都有同等的分辨率。

目前常用的纤维素交换剂如表6–1所示。

离子交换纤维素适用于分离大分子多价电解质。

它具有疏松的微结构，对生物高分子物质(如蛋白质和核酸分子)有较大的穿透性；表面积大，因而有较大的吸附容量。

基质是亲水性的，避免了疏水性反应对蛋白质分离的干扰；电荷密度较低，与蛋白质分子结合不牢固，在温和洗脱条件下即可达到分离的目的，不会引起蛋白质的变性。

但纤维素分子中只有一小部分羟基被取代，结合在其分子上的解离基团数量不多，故交换容量小，仅为交换树脂的1／10左右。

表6–1离子交换纤维素交换剂（简写）类型功能基团交换容量（毫克当量 /g ）时宜工作 ph 磷酸纤维素（ p-c ）中强酸型阳离子交换剂— po 3 2- 0.7~7.4 ph<4 磺酸乙级纤维素（ se-c ）强酸型阳离子交换剂— (ch 2 ) 2 so 3 - 0.2~0.3 极低羟甲基纤维素（ cm-c ）弱酸型阳离子交换剂— ch 2 coo - 0.5~1.0 ph>4 三乙基氨基乙基纤维素（ teae-c ）强碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + (c 2 h 5 ) 3 0.5~1.0 ph>8.6 二乙氨基乙基纤维素（ deae-c ）弱碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + h (c 2 h 5 ) 2 0.1~1.0 ph<8.6 氨基乙基纤维素（ ae-c ）中等碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + h 2 0.3~1.0 ecteda 纤维素（ ecte-c ）中等碱型阴离子交换剂— (ch 2 ) 2 n + (c 2 h 4 oh) 3 0.3~0.5 ②交联葡聚糖离子交换剂交联葡聚糖离子交换剂是以交联葡聚糖g–25和g–50为基质，通过化学方法引入电荷基团而制成的。

葡聚糖凝胶LH-20使用说明书货号：S8111规格：25g/50g/100g保存：室温存储产品简介：适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化。

可以非常经济的大规模制备各种天然产物，尤其在中药有效成分提取中作为大孔吸附树脂解析物的纯化。

结合凝胶过滤﹑分配色谱及吸附层析于一身，能分离结构相近的分子，因此使用中要考略几种色谱的作用机制。

最高载量可达250mg样品/ml凝胶﹑极少需要再生﹑使用得当，重复使用分离效果可保持不变。

上样量视被分离物的结构性能的差异而定：差异大，则大；差异小，则小。

凝胶过滤的上样量一般为5-7％的床体积，我们建议初次上样量控制在1-2％的床体积，视分离情况可以逐步增加；柱高的选择也与分离要求相关——难分物质要有一定柱高和流速控制；流动相可参考TLC的条件，正确的流动相可以提高分离度并缩短分离时间。

流动相的常用溶剂为：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。

这些溶剂的极性依次降低，对极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。

溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的，二氯甲烷通常在被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。

甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离适用，葡聚糖凝胶对环状物质有强烈吸附。

LH-20同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。

使用说明：1葡聚糖凝胶LH-20的原理葡聚糖凝胶LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。

因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。

如果使用反相溶剂洗脱，葡聚糖凝胶LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。

如果使用正相溶剂洗脱，主要靠凝胶过滤作用来分离。

生化实验总结报告实验名称：SDS - PAGE法测定蛋白质的相对分子量作者：田景辉（201306230114）专业：生物工程指导教师：许培雅日期：2015.12.30组员：杨瑞徐巧妹尹彪程健刘嘉南目录一、实验介绍 (3)二、实验原理 (3)三、实验材料、试剂、器皿 (4)四、操作步骤 (5)五、注意事项 (7)六、实验数据记录与处理 (7)七、总结与建议 (8)八、术语表 (9)九、参考文献 (9)十、附录 (9)一、实验介绍1.实验目的掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和测定蛋白质分子量的技术。

2.实验背景在实验一中，用100g新鲜酵母用甲苯自溶法、研磨法、SDS（十二烷基苯磺酸钠）法进行了蔗糖酶的提取以及粗提取，得到初提取液A、热提取液B、乙醇提取液C。

最终得到9.0ml蔗糖酶初提取液。

实验二采用QAE-葡聚糖凝胶离子交换柱层析法进行蔗糖酶的纯化，得到经线性阶梯洗脱的分离液D1和经阶梯梯度洗脱的分离液D2。

实验三采用苯基琼脂糖凝胶柱层析法进行进一步纯化，得到经2mol/L(NH4)2SO4的0.05mol/L Tris-HCl ph7.3 缓冲液洗脱的分离液E1和经2mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl ph7.3 缓冲液洗脱的分离液E2。

二、实验原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

葡聚糖凝胶葡聚糖是一种天然高分子聚合物，广泛存在于海洋生物中，如海藻、虾壳、蟹壳等。

葡聚糖具有许多优异的特性，如生物相容性好、低毒性等，因此被广泛应用于生物医学领域中。

葡聚糖的特性与结构使其能够被用于制备特殊的材料，如凝胶。

葡聚糖凝胶是一种由葡聚糖组成的交联网络，其结构与物理性质可以通过改变制备条件来调控。

葡聚糖凝胶可以在常温常压下形成，在适当条件下可保持稳定，同时能够吸附大量水分子，形成高度保水的结构。

这些特性使得葡聚糖凝胶在生物医学领域中具有广泛的应用前景。

葡聚糖凝胶具有多种制备方法，其中最常见的是化学交联法和物理交联法。

化学交联法通常涉及到使用交联剂将葡聚糖分子交联在一起形成凝胶网络。

物理交联法通常是将葡聚糖分子通过温度、pH、盐浓度等因素相互作用，在适当条件下形成稳定的凝胶结构。

葡聚糖凝胶具有多种应用前景，其中最具有潜力的是在生物医学领域中。

例如，葡聚糖凝胶可以作为组织修复和再生的载体材料，因为其具有良好的生物相容性和生物可降解性。

葡聚糖凝胶可以作为治疗创伤和烧伤的敷料，因为其可以保持伤口湿润，促进愈合。

葡聚糖凝胶还可以用于制备智能材料，在适当的刺激下，如温度、pH等，可以实现形态转化和释放药物。

此外，葡聚糖凝胶还可以应用于其他领域。

例如，它可以被用作食品和工业加工中的增稠剂和胶凝剂，可以用于制备潜水服和防晒霜等高科技材料。

总的来说，葡聚糖凝胶是一种具有广泛应用前景的材料。

它具有优良的生物相容性和生物可降解性，可以应用于生物医学、食品加工和工业等领域。

不仅如此，葡聚糖凝胶的制备方法也越来越成熟，它的应用前途仍然值得我们进一步探索和研究。

葡聚糖凝胶柱的使用方法一、准备工作：1.准备好葡聚糖凝胶柱和所需的缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）、TBS（三甲基氨基甲烷缓冲液）等。

2.将葡聚糖凝胶柱放入柱层析设备中，并根据设备的要求进行调整和固定。

3.预冲柱层析设备和葡聚糖凝胶柱，以去除可能的污染和杂质。

二、样品处理：1.将待纯化的生物大分子样品先进行预处理，如去除悬浮物、离心沉淀等。

2.将样品溶液以适当的缓冲液进行稀释，以达到最佳的样品浓度和适合葡聚糖凝胶柱操作的样品体积。

三、样品加载：1.将处理好的样品溶液缓慢地倒入柱顶，让样品从柱顶进入柱内。

避免产生气泡。

2.分子在葡聚糖凝胶柱中会根据分子大小和亲疏水性质的不同而发生分离和吸附。

较大分子会在柱上层析，而较小分子会透过凝胶层均匀流出。

因此，样品会在柱内逐渐被分离和纯化。

四、缓冲液流动：1.样品完成加载后，使用适当的缓冲液进行柱洗涤，以洗掉非特异结合的杂质。

2.缓冲液的选择应根据样品的性质而定，具体的选择和流动条件可以参考相关的文献或经验。

五、洗脱纯化：1.在用于洗脱纯化的缓冲液中，调整适当的条件以实现目标分子的洗脱。

如调整pH值、离子浓度、添加洗脱剂等。

2.根据分子的亲疏水性质，选择适当的缓冲液浓度梯度进行洗脱。

一般来说，较强亲疏水性的分子需要更高浓度的洗脱缓冲液。

六、收集洗脱液：1.将洗脱液通过柱底收集，收集不同时间点或不同分析目的的洗脱液。

2.根据实验需要，将洗脱液分为不同部分进行后续的分析或纯化处理。

七、重复使用：1.柱层析后，葡聚糖凝胶柱可以进行再生，以重复使用。

具体的再生方法可以参考柱层析设备和葡聚糖凝胶柱的说明书。

总结：葡聚糖凝胶柱是一种常用的生物大分子纯化方法，通过分子在柱内的分离和纯化来实现样品纯化的目的。

使用葡聚糖凝胶柱时，需要根据样品的特性和需求进行适当的样品处理、缓冲液选择、洗脱纯化条件的优化等。

如操作规范且配合适当的实验条件，葡聚糖凝胶柱可以快速、高效地纯化和富集生物大分子。

葡聚糖凝胶使用说明化学和物理性质葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。

G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。

葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。

超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。

粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。

另外，粗级也可用于批量工艺。

化学稳定性葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。

它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。

长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

物理稳定性葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。

干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。

葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

产品说明：产品名称分离范围应用葡聚糖凝胶 G-10<700缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶 G-15<1500缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶 G-251000-5000工业上脱盐及交换缓冲液葡聚糖凝胶 G-501000-30000多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定葡聚糖凝胶 G-752000-70000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶 G-1002000-120000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶 G-1505000-300000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶 G-2005000-600000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定使用方法：1. 乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;2. 无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；3. 盐酸浸泡：在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；4. 将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；5. 上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)；6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。

阴离子交换填料使用说明凝胶型号QAE葡聚糖凝胶A-25DEAE葡聚糖凝胶A-25DEAE葡聚糖凝胶A-50基团－N＋(CH2CH3)3Cl-－N(CH2CH3)2－N(CH2CH3)2载量 2.6-3.2mmol/g3-4mmol/g3-4mmol/g相应产品QAE Sephadex-A25DEAE Sephadex A-25DEAE Sephadex A-50颗粒大小（μm）干粉40-120干粉40-120干粉40-120应用离子交换层析介质，纯化蛋白及巨大分子等离子交换层析介质，纯化蛋白及巨大分子等离子交换层析介质，纯化蛋白及巨大分子等pH稳定性2-132-132-121使用方法将干粉浸泡于60-70％乙醇中过夜（充分搅拌），去离子水洗净乙醇。

取适量凝胶湿态装柱，绝对不能出现凝胶断层，依次分别用五倍柱体积的0.15M氢氧化钠、水、0.15M盐酸、水、0.15M氢氧化钠、水上柱至中性。

然后用上样的平衡液平衡柱后即可上样。

2上样量上样的多少取决于分离的要求及漏出的控制，当作饱和吸附时可以多上样，富集时为70-80％的柱体积，需要分离不同组分时应减少上样量，上样量控制在柱体积的25%以内。

柱高严格控制在25cm以内（A-50），因为这是软胶。

3洗脱方法：上样后用平衡液淋洗三个柱体积，然后在平衡液中加入一定浓度的氯化钠（或其它无机盐）进行洗脱（改变平衡液PH值也是洗脱的方法）。

4在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。

方法是以0.15M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

请避免使用磷酸，醋酸缓冲液.而可以采用Tris-HCl作为使用Buffer。

5保存第1页，共2页用过的产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。

不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。

上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

第八章离子交换法一、填空题1、离子交换剂由、与组成。

平衡离子带为阳离子交换树脂，平衡离子带称阴离子交换树脂。

2、常见的离子交换剂有，，等。

3、离子交换树脂的根本要求有、、、与。

4、影响离子交换选择性的因素主要有、、、、等。

5、请写出以下离子交换剂的名称与类型：CM-C的名称是，属于交换纤维素; DEAE-C的名称是，属于交换纤维素;。

6、色谱聚焦〔chromatofocusing〕是一种高分辨的新型的蛋白质纯化技术。

它是根据，结合，能别离几百毫克蛋白质样品，洗脱峰被聚焦效应浓缩，分辨率很高，操作简单。

7、写出以下离子交换剂类型：732 ，724 ，717 ，CM-C ,DEAE-C ，PBE94 。

8、在采用多缓冲阴离子交换剂作固定相的离子交换聚焦色谱过程中，当柱中某位点之pH值下降到蛋白质组分值以下时，它因带电荷而，如果柱中有两种蛋白组分，pI值较者会超过另一组分，移动至柱下部pH较的位点进展。

9、影响离子交换选择性的因素有、、、二、选择题1、用钠型阳离子交换树脂处理氨基酸时，吸附量很低，这是因为〔〕A. 偶极排斥B.离子竞争C. 解离低D. 其它2、在酸性条件下用以下哪种树脂吸附氨基酸有较大的交换容量〔〕3、在尼柯尔斯基方程式中，K值为离子交换常数， K＞1说明树A. 小于平衡离子B.大于平衡离子C. 等于平衡离子D. 其它三、名词解释1、蛇笼树脂：2、尼柯尔斯基方程式：3、偶极离子排斥作用：四、问答题1、简述离子交换纤维素的特点有哪些？2、请以CM-C为例说明离子交换纤维素别离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。

3、请以DEAE-C为例说明离子交换纤维素别离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。

4、由以下图，利用给出的两种离子交换剂〔E1，E2〕别离3种蛋白质〔P1、P2、P3〕，用箭头流程图表示(并指出E1，E2的类型)。

5、以下图为离子交换法应用实例，请填写生产工艺流程中的空格〔可选因素：阴离子交换树脂，阳离子交换树脂， 0.05mol/L 氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水〕。

(1)预处理称取葡聚糖凝胶（有不同型号）若干克，加入洗脱剂（通常为甲醇或者水，这里以甲醇为例）约20倍凝胶量，置室温下3h进行溶胀，溶胀必须彻底，否则会使上柱后流速变慢，凝胶断裂等。

(2) 装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。

柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。

然后将柱垂直安装好，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边缓缓连续装入，色谱柱的出口流速m维持在5~10ml/min。

凝胶颗粒沉积到柱底后关紧色谱柱，等沉降到1-2cm时再2打开色谱柱。

直至降到满意高度为止，等凝胶柱内的液体留的与凝胶高度差不多时，用较小的滤纸盖住凝胶床表面，再用洗脱剂洗脱过夜。

装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。

否则，必须到出重装。

(3) 加样装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡，待洗脱剂流至与凝胶柱液面相平时（不能流干，否则会带入气泡），用滴管吸取样品溶液，在高于凝胶表面约1cm 处，沿管壁四周缓缓滴加样品液，加完后打开下面的出口，使样品渗入凝胶内。

再关闭出口，用少量洗脱液将管壁残留的样品洗下，再打开出口，至溶液渗入柱内，再关闭出口。

可以考虑再加一层薄薄的脱脂棉以保护柱表面（我一般不加），然后即可进行洗脱。

(4) 洗脱与收集洗脱时，用甲醇作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。

一般酸性洗脱剂中碱性物质容易洗脱，碱性洗脱剂中酸性物质容易洗脱。

多糖类物质等极性大的物质考虑用水洗脱，常用的洗脱剂是水-甲醇，水-乙醇，水-丙酮等，一般根据自己样品的性质选择洗脱液，洗脱液可一直用单一梯度。

凝胶色谱的共性是流速慢，每份一般体积较小。

（内径1.3cm左右，长80cm左右的柱子我一般每份收集液为8ml）(5) 凝胶的再生和回收凝胶柱多次使用后，若污染严重，则考虑用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl 混合液浸泡后，再用水洗净即可。

上课下子棋保证书详细(第一篇)此文档协议是通用版本，可以直接使用，符号*表示空白。

敬重的班主任老师：在此，非常愧疚地向你递交我这份保证，由于一次保证意味着我犯了一次重大过错。

此次，我由于上课玩五子棋、不好好听课，给班级上课秩序造成了比较严峻的影响。

您观看到我的不良行为，准时加以制止，并且没收我的手机作为惩罚。

如今，经过面壁思过与深刻反剩我深深地觉悟到自己所犯错误的严峻性：第一，我身为一名在校同学，学习无疑是自己的本职工作，也是必需履行的义务。

其次，在高校期间的教育对于每个人来说都是非常宝贵的，而我却不思进取，甚至严峻到在上课期间玩手机、不用心听课。

这更是犯了非常严峻的错误，这是对于教育资源的铺张。

第三，身为一名同学，我犯这样的错误，无疑是大大辜负了我父母对我的殷切期望。

这对于我年迈的父母来说，是一个很大的打击。

我的父母辛苦赚钱，送我们进入高校深造，为的就是我们能够努力学习，找到一份好的工作，将来能够生活得更好。

而为的使我们能够在各方面活动好的条件，父母为我们购得手机。

而我却恰恰不用功读书，不能全身心的投入学习，反倒是上课玩五子棋。

如今我做了错事，辜负了我的父母，我觉得很惭愧，想起父母的辛苦，不由地流泪。

再看我的。

错误，我也是很抱歉辛勤教育我的老师的。

老师为我们辛勤工作，为我们努力备课，而我却辜负老师的辛苦，上课不好好听讲是对老师的不敬重。

此次保证过后，我也会跟老师做当面正式赔礼的。

最终我写一下对今后保证：我保证今后上课期间不做任何**行为了，上课期间不再玩五子棋。

今后仔细听每一节课，在校当一名好同学，在家做一个孝顺的儿子，将来为社会做出自己的一份贡献。

此致敬礼！保证人：******日期：*****上课下子棋保证书详细(第二篇)合同范本合同编号：[合同编号]标题：上课下子棋保证书日期：[签署日期]甲方：[甲方机构/个人名称]地址：[甲方地址]电话：[甲方电话]乙方：[乙方机构/个人名称]地址：[乙方地址]电话：[乙方电话]鉴于甲方作为[甲方机构/个人名称]（以下简称“甲方”）提供上课下子棋服务，乙方作为[乙方机构/个人名称]（以下简称“乙方”）接受上述服务，双方达成以下协议，以兹共同遵守：一、合作内容1.1 甲方将为乙方提供专业的上课下子棋服务，包括但不限于教授棋谱、指导棋局策略等。

葡聚糖凝胶柱使用及注意事项葡聚糖凝胶柱是一种常用的色谱柱，其主要由多糖聚合物构成，具有多孔结构以及极高的比表面积。

葡聚糖凝胶柱在生物分离、蛋白质纯化以及分析等方面有重要的应用。

下面将介绍葡聚糖凝胶柱的使用方法以及注意事项，并列举了几种常见溶剂的溶胀系数作为参考。

使用方法：1.预处理：新柱使用前需进行预处理。

首先，在使用前用适当的缓冲液再生柱子，一般推荐使用PBS缓冲液进行再生。

其次，用去离子水进行洗脱，去除缓冲液中的离子。

2.样品准备：准备好带有样品的溶液，可以是蛋白质溶液、核酸溶液或者其他需要分离的溶液。

3.进样：将样品溶液注入到柱子中，可以使用曲线尖管或者注射器进行。

4.溶剂流动：使用适当的流动缓冲液进行柱子的着色，常用的缓冲液有PBS缓冲液、甲醇和乙醇。

5.收集分离的组分：通过收集分离的组分，可以进行后续的实验操作或者分析。

注意事项：1.柱子的平衡：在使用柱子前，将柱子放入合适的缓冲液中，进行平衡处理，通常需要约30分钟。

2.柱子的保管：使用完毕后，需将柱子用适当的缓冲液保存，避免干燥。

3.柱子的温度：柱子的运行温度一般在室温下进行，避免过高温度的使用，以免影响柱子的性能。

4.溶液选择：在选择适当的缓冲液时，应根据样品的性质以及需求进行选择，不同的缓冲液对分离的效果会有影响。

5.柱子的清洗：使用完毕后的柱子需要进行彻底的清洗工作，尤其是对于经常使用的柱子，清洗工作要做得彻底。

下面是几种常见溶剂的溶胀系数参考值：1.水：溶胀系数为1，对于葡聚糖凝胶柱来说，水是适用的溶剂。

2.硫酸：溶胀系数为0.57，硫酸能够完全渗透葡聚糖凝胶柱。

3.乙醇：溶胀系数为0.44，适量的乙醇可以使用，但过高浓度的乙醇可能会影响柱子的性能。

4.甲醇：溶胀系数为0.65，甲醇也可以使用，但同样需要注意控制浓度。

总结：葡聚糖凝胶柱是一种常见的色谱柱，具有广泛的应用。

在使用葡聚糖凝胶柱时，需进行适当的处理以及注意事项，以保证柱子的性能和寿命。

生物分离工程》题库+答案1.生物产品的分离包括去除R不溶物、分离I产物、纯化P产物和精制P产物。

2.发酵液常用的固液分离方法包括过滤和离心等。

3.离心设备的形式包括管式、套筒式和碟片式等。

4.膜分离过程中使用的膜根据其孔径特性不同可分为微滤膜、超滤膜、纳滤膜和反渗透膜。

5.多糖基离子交换剂包括离子交换纤维素和葡聚糖凝胶离子交换剂两大类。

6.工业上常用的超滤装置有板式、管式、螺旋式和中空纤维式。

7.影响吸附的主要因素包括吸附质的性质、温度、溶液pH值、盐的浓度以及吸附物的浓度与吸附剂的用量。

8.离子交换树脂由网络骨架（载体）、联结骨架上的功能基团（活性基）和可交换离子组成。

9.在电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是引发剂，甲叉双丙烯酰胺的作用是交联剂，___的作用是增速剂。

10.影响盐析的因素包括溶质种类、溶质浓度、pH和温度。

11.工业上常用的结晶起晶方法包括自然起晶法、刺激起晶法和晶种起晶法。

12.离子交换过程实际上只包括外部扩散、内部扩散和化学交换反应三步。

13.在生物制品进行吸附或离子交换分离时，通常遵循Langmuir吸附方程，其形式为q=qc/(K+c)。

14.反相高效液相色谱的固定相是疏水性强的，而流动相是极性强的。

常用的固定相有C8辛烷基和十八烷基C18，常用的流动相有乙腈和异丙醇。

15.超临界流体的特点是与气体有相似的粘度和扩散系数，与液体有相似的密度。

16.离子交换树脂的合成方法包括加聚法和逐步共聚法两大类。

17.常用的化学细胞破碎方法包括渗透冲击法、酶消化法、增溶法、脂溶法和碱处理法。

18.等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其等电点的不同。

19.离子交换分离操作中，常用的洗脱方法包括静态洗脱和动态洗脱。

20.晶体质量主要指晶体大小、形状和纯度三个方面。

21.亲和吸附原理包括配基固定化、吸附样品和样品解析三步。

22.根据分离机理的不同，色谱法可分为吸附、离交、亲和、凝胶过滤色谱。