0000双缩脲光度法快速测定乳品中的蛋白质

乳与乳制品中的蛋白质含量快速检测方法摘要】目的建立一种快速测定乳与乳制品中蛋白质含量的办法。

方法用双缩脲反应测定蛋白质含量。

结果工作曲线在（０—0.20）g/100ml蛋白质浓度范围内遵守朗伯比尔定律，线性关系良好。

曲线的回归方程为：Y＝0.004868+3.018Ｘ，相关系数r=0.9993，加标回收率（95.00－104.00）%。

方法的检出限0.02g/100ml。

结论该方法操作简便、快捷、准确，灵敏度和精密度高，适用于乳与乳制品中蛋白质含量的快速测定。

【关键词】乳与乳制品；双缩脲－分光光度法；蛋白质测定。

【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2018）09-0283-01乳与乳制品是人体所需蛋白质的重要来源，近年来因乳与乳制品频频出现问题，蛋白质含量测定的国标方法是将样品消化后测定总氮量，再由总氮量计算蛋白质的含量，测定的结果不完全是蛋白质，还包括一些非蛋白质类的含氮物质；并且这些检测方法检测时间长，用酸量大，能源消耗大，不适合批量样品测定。

本文基于蛋白质的分子结构，拟定出双缩脲分光光度法快速测定乳与乳制品中蛋白质含量的新方法，并探讨了样品的预处理方法。

１、材料与方法１.１原理双缩脲在碱性条件下，能与硫酸铜结合生成红紫色的络合物。

具有两个以上肽链的化合物与双缩脲结构相似，也有此反应。

其色泽深度与蛋白质含量成正比，可以比色定量[1]。

１.2试剂与仪器１.2.1仪器７２２分光光度计，ＦＡ2104型1/万电子天平。

1.2.2试剂[2](１）双缩脲试剂称取①硫酸铜（CuSO4H2O）3.0g；②酒石酸钾钠（NaKCH4O 64H2O）9.0g;③碘化钾（KI）5.0g，各溶于25ml水中,将②③倾入1000ml容量瓶中，加入100ml240g/L的NaOH溶液，混匀。

加①液最后加水至1000ml。

(2)氨水、乙醇、乙醚、石油醚（沸程300C－600C）。

1.2.3 标准品制备[3] 取纯正乳粉（未添加非蛋白质类的含氮物质）适量于1000C±50C干燥2 h，至前后两次相差不超过2mg。

蛋白质的快速检测法蛋白质的迅速测定法有双缩脲分光光度比色法、染料结合分光光度比色法、水杨酸比色法、折光法、旋光法及近红外光谱法等。

新一代微电脑的智能化分光光度计具有浓度直读功能及数据处理能力，能自动地将检测样品与标准举行比较，并挺直给出样品的浓度。

下面介绍双缩脲分光光度比色法。

1.原理当脲被当心地加热至150～160℃时，可由两个分子间脱去一个氨分子而生成二缩脲(也称双缩脲)，双缩脲与碱及少量溶液作用生成紫红色的协作物，此反应称为双缩豚反应。

因为蛋白质分子中含有版键(—CO—NH—)，与双缩脲结构相像，故也能展现此反应而生成紫红色协作物，在一定条件下其色彩深浅与含量成正比，据此可用汲取光度法来测定蛋白质含量，该协作物的最大汲取波长为560mm。

2.试剂 (1)碱性硫酸铜溶液①以为稳定剂：将10mL 10mol/L KOH和3mL甘油加到937mL蒸馏水中，强烈搅拌，同时渐渐加入50mL 40g/L 硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶液。

②以作稳定剂：将10mL 10mol/L KOH和20mL 250g/L溶液加到930mL蒸馏水中，强烈搅拌，同时渐渐加入40mL 40g/L溶液。

配制试剂加入溶液时，必需强烈搅拌，否则将生成沉淀。

(2)(CCl4)。

3.仪器 (1)分光光度计。

(2)离心机(4000r/min)。

4.操作步骤 (1)标准曲线的绘制以采纳凯氏定氮法测出蛋白质含量的样品作为标准蛋白质样。

按蛋白质含量40，50，60，70，80，90，100，110mg分离称取混合匀称的标准蛋白质样于8支50mL纳氏比色管中，然后各加入1mL，再用碱性硫酸铜溶液(①或②)精确稀释50mL，振摇10min，静置1h，取上层清液离心5min。

取离心分别后的透亮液于比色皿中，在560nm波长下以蒸馏水作参比液调整仪器零点并测定各溶液的吸光度A，以蛋白质的含量为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。

双缩脲光度法快速测定乳品中的蛋白质
杨柳桦;孙成均
【期刊名称】《现代预防医学》
【年(卷),期】2005(32)8
【摘要】目的:探讨乳品中蛋白质含量的快速测定方法。

方法:取适量样液加水至5.00ml,再加双缩脲试剂,混匀,室温静置显色15min后,经微孔滤膜过滤后于
576nm比色测定。

结果:本法线性范围为1.6~2000mg/L,最低检出浓度为
0.008%。

测定相对误差为-0.57%^-2.4%。

本法日内精密度为2.04%,日间精密度为1.0%~1.8%。

用本法和凯氏定氮法同时对奶样和血清样品进行了测定,经统计学检验两法测定结果之间差异无统计学意义;结论:本法操作简便快速,成本低廉,准确度和精密度均能满足乳品中蛋白质快速测定的要求。

【总页数】2页(P984-985)
【关键词】双缩脲法;分光光度法;蛋白质;乳品;血清
【作者】杨柳桦;孙成均
【作者单位】四川大学华西公共卫生学院
【正文语种】中文
【中图分类】R155.5
【相关文献】
1.利用双缩脲特性反应快速测定蛋白质 [J], 郭东方;彭秀红
2.双缩脲法快速测定蛋白质含量 [J], 钱锋;张晓非;郝艳茹
3.双缩脲反应快速测定蛋白质的方法学研究 [J], 陶建
4.双缩脲-分光光度法测定乳与乳制品中蛋白质含量 [J], 吴文卫;雷金宝;张光明;王青霞;朱建英
5.双缩脲比色法快速测定鱼粉中蛋白质 [J], 郭颖燕
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实验三双缩脲法测定蛋白质含量目的1．掌握双缩脲法测定蛋白质的具体操作和原理；2．了解蛋白质测定在生命科学中的应用。

原理双缩脲反应是指双缩脲在硷性溶液中能与Cu2+络合生成紫红色物质。

双缩脲可由脲缩合而成。

蛋白质分子的肽链结构在硷性中也能与Cu2+络合生成紫红色络合物，因其反应机制相似，就把蛋白质的这一反应称为蛋白质的双缩脲反应。

由于参与反应的是蛋白质的肽链结构，与组成蛋白质分于肽链氨基酸残基的侧链功能基关系较小。

因此，不同蛋白质的双缩脲反应基本相似。

利用双缩脲反应生成的有色物质作蛋白质的比色测定受蛋白质种类的影响较小。

这是本法的优点之一。

此外试剂和操作的简单也是其优点。

缺点是灵敏度较低，能测出的蛋白质浓度约须在0.5mg／ml。

本实验用双缩脲法测定血清的总蛋白质浓度。

如结合盐析法(饱和硫酸钠)分离白蛋白和球蛋白还可用于血清白蛋白和球蛋白浓度及其比值(A／G)的测定。

器材1．试管及试智架2．0.2m1微量吸管(或200ul微量加液器)3．1ml、2ml、5ml刻度吸管4．721型分光光度计试剂1．0.9％NaCl2．双缩脲试剂称取CuSO45H2O结晶(AR级试剂)1.5g,酒石酸钾钠(AR级试剂)6.0g溶于500ml水中，添加10％NaOH 300ml及KI1.0g．混匀后加水稀释至1000ml。

本试剂可长期保存。

3．牛血清白蛋白标准液此溶液可用于替代标准血清。

称取试剂级冻干牛血清白蛋白300mg置lOOml容量瓶中，用0.9％NaCl溶解后稀释至刻度，避免振摇起泡，置4℃冰箱保存。

此标准液浓度为300mg／m1。

4．被检血清样本操怍1. 取试管1支，以0.2m1微量吸管(或200ul微量加液器)吸取被检血清0.200ml(吸管外壁须用滤纸片拭净)。

慢慢放入试管底部。

最后一点液体应吹出，靠落在试管壁上。

2．加入0.9%NaCl 3.80ml,充分混匀但不要振摇起泡。

3．另取试管二支，标上号码，其一用吸管加入操作2所准备的血清样本稀释液1.00ml 另一管加入牛血清白蛋白标准液1.00ml。

双缩脲法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的1、掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。

2、熟悉分光光度计的使用。

3、学会绘制标准曲线，并通过标准曲线计算未知样品中蛋白质的含量。

二、实验原理双缩脲（NH₂CONHCONH₂）在碱性溶液中能与铜离子（Cu²⁺）作用，形成紫红色的络合物。

由于蛋白质分子中含有多个与双缩脲结构相似的肽键，因此也能发生类似的反应。

而且，反应所产生的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，在 540nm 波长处有最大吸收峰。

据此，可以通过比色法测定蛋白质的含量。

三、实验材料与仪器1、材料标准蛋白质溶液：浓度为 10mg/mL 的牛血清白蛋白溶液。

未知蛋白质样品溶液。

双缩脲试剂：由硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、酒石酸钾钠（NaKC₄H₄O₆·4H₂O）和氢氧化钠（NaOH）配制而成。

2、仪器分光光度计。

移液管（1mL、5mL、10mL）。

容量瓶（100mL）。

试管及试管架。

四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干净的试管，编号为 1 6 号。

按照下表在各试管中分别加入试剂：｜试管编号|1|2|3|4|5|6|｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白质溶液（mL）｜0|02|04|06|08|10|｜蒸馏水（mL）｜10|08|06|04|02|0|｜蛋白质含量（mg）｜0|2|4|6|8|10|向各试管中加入 4mL 双缩脲试剂，摇匀后，在室温下放置 30 分钟。

以 1 号试管为空白对照，在 540nm 波长处，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值（A）。

以蛋白质含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品蛋白质含量的测定取 2 支干净的试管，编号为 7 号和 8 号。

在 7 号试管中加入 1mL 未知蛋白质样品溶液，8 号试管中加入1mL 蒸馏水作为空白对照。

向 7 号和 8 号试管中分别加入 4mL 双缩脲试剂，摇匀后，在室温下放置 30 分钟。

以 8 号试管为空白对照，在 540nm 波长处，用分光光度计测定 7 号试管中溶液的吸光度值。

双缩脲法测定奶粉中的蛋白质含量【摘要】目的尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。

方法使用双缩脲法测定蛋白质的含量，在540 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白质的含量。

【关键词】奶粉；蛋白质；双缩脲法；标准曲线1【前言】蛋白质是人类最重要的营养物质之一。

因此，奶粉中蛋白质含量一直是食品检测中的重要指标。

目前蛋白质定量方法较多, 如凯氏定氮法、紫外分光光度法和Lowry 法等。

虽然凯氏定氮法目前是测定蛋白质含量的国家标准方法，但其操作繁琐费时，且蛋白质含量是通过测定氮的含量推算得来的，容易被其他含氮物质干扰（如2008年9月“问题奶粉”的出现源于有人利用凯氏定氮法的缺陷，向牛奶中添加三聚氰胺造成蛋白质含量虚高）；Lowry法和紫外分光光度法存在显色所需时间长，灵敏度低，稳定性差等缺点［1］。

为弥补这些不足，本实验利用双缩脲法快速测定奶粉中的蛋白质含量。

2 实验目的（1）学习从奶粉中提取酪蛋白的原理和方法；（2）掌握利用双缩脲法对蛋白质含量的测定的原理和方法；（3）掌握利用分光光度法对物质的定性和定量测定的原理和方法；3实验原理3.1奶粉中提取蛋白质的原理奶粉中主要蛋白质是酪蛋白，每100克婴幼儿奶粉中含12克～25克。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

利用等电点时溶解度最低的原理，将奶粉用蒸馏水溶解，然后将其PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯酪蛋白。

3.2双缩脲测定蛋白质的原理当脲加热至180oC时，两分子脲缩合，放出一分子氨而形成双缩脲。

双缩脲在碱性条件下能与硫酸铜生成紫红色络合物，即发生双缩脲反应。

蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲结构相似，故蛋白质与碱性硫酸铜也能形成紫红色络合物,在一定条件下其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可用来进行蛋白质定量。

双缩脲法测定蛋白质含量一、双缩脲法实验原理双缩脲法测定蛋白质含量实验中，双缩脲是在大约180°C条件下加热两个尿素分子，以达到释放出一个氨分子而获得的产物。

在强碱性溶液中，缩二脲和硫酸铜形成紫色络合物，称为缩二脲反应。

任何包含两个酰胺基或两个直接连接的肽键或可以通过中间碳原子连接的肽键的化合物都将发生缩二脲反应。

紫色复合色的强度与蛋白质浓度成正比，与蛋白质分子量和氨基酸组成无关。

它可以用来确定蛋白质含量。

测量范围是1-10mg蛋白质。

干扰测定的主要物质是：硫酸铵，Tris缓冲液和某些氨基酸。

这种方法的优点是速度快，不同的蛋白质产生相似的颜色，干扰物质少。

主要缺点是灵敏度差。

因此，缩二脲法通常不用于蛋白质的精确测定。

二，双缩脲法所需材料1种试剂：标准蛋白溶液的制备：用标准结晶牛血清白蛋白（bsa）或标准酪蛋白制备10mg/ml标准蛋白溶液。

可以用0.66a280校准纯度，bsa浓度为1mg/ml。

如有必要，可以使用标准蛋白质预先通过微凯氏定氮法测定蛋白质氮含量，计算其纯度，然后称重，并根据其纯度制备标准蛋白质溶液。

用H2O或0.9％NaCl制备牛血清白蛋白，用0.05NaOH制备酪蛋白。

双缩脲试剂制备：称取1.50g硫酸铜（CuSO4•5H2O），6.0g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），溶于500ml水，在搅拌下加入300ml10％NaOH溶液，用水稀释至1升，储存在塑料瓶（或内壁涂有石蜡的瓶子）。

该试剂可以长期保存。

如果在储存瓶中出现黑色沉淀物，则需要对其进行重新配制。

2台设备：可见光分光光度计，15个大试管，涡旋混合器等三，双缩脲法的实验步骤1标准曲线的确定：将12个试管分为两组，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml蛋白质标准溶液，用水补足1ml，再加入4ml缩二脲试剂。

摇匀后，在室温（20-25℃）下放置30分钟，并在540nm下测量颜色。

第一个不含蛋白质溶液的试管是空白对照溶液。

双缩脲法测定蛋白质含量实验二十蛋白质含量测定——双缩脲法测定蛋白质含量一、实验目的学习和掌握用双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。

二、实验原理在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。

凡分子中含二个或二个以上酰胺基(—CO-NH2)，或与此相似的基团[如—CH2-NH2，—CS-NH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。

蛋白质分子含有众多肽键(—CO-NH—)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。

测定范围为1～10mg蛋白质。

干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。

主要的缺点是灵敏度差。

因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

三、实验试剂和器材[试剂]1．双缩脲试剂：取CuSO4·5H20(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水溶解，再加2.5mol／L NaOH溶液300ml，KI 1.0g，然后加水至1000ml。

棕色瓶中避光保存。

长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。

2．标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10g/L的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1g/L的A280为0.66来校正其纯度。

如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。

牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05mol/L NaOH配制。

[器材]1．试管：15×150mm 试管7只；2．1ml，5ml移液管；3．坐标纸；4．721分光光度计。

四、实验操作取试管7支，编号，按下表操作：混匀，37℃水浴20分钟，冷却至室温，在分光光度计波长540nm处，用空白管调零，读取各管吸光度值。

实验八双缩脲法测定面粉中蛋白质的含量双缩脲法测定小麦面粉中蛋白质的含量实验八双缩脲法测定面粉中蛋白质的含量一、目的要求1(学习双缩脲法的基本原理及操作。

2(通过实验学会制作标准曲线。

二、实验原理:双缩脲(NHCONHCONH)是两个分子脲经180?左右加热，放出一个33分子氨后得到的产物。

在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO形成紫色络合物，称4 为双缩脲反应。

凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

在一定的浓度范围内，紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系(即:颜色的深浅与蛋白质浓度成正比)而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可在540nm处比色用来测定蛋白质含量。

测定范围为1,10mg蛋白质/ml。

干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。

主要的缺点是灵敏度差。

因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

三、操作方法:1(标准曲线的制作。

酪蛋白:10mg/ml(如果用干酪素来配制则需用0.05M NaOH 做溶剂，也可以用酪蛋白酸水解物直接配制。

)管号 1 2 3 4 5 6 酪蛋白(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2 蒸馏水(ml) 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0 双缩脲试剂(ml) 3 3 3 3 3 3混匀，放置30分钟A0 540计算出各管浓度(计算出各管浓度，再做标准曲线，那么最后计算的公式中就不用除以6了，这么做好理解些。

)混匀，放置30分钟后，在540nm处以1号管调0点，测定各管吸光度，以吸光度(OD值)为纵坐标，蛋白质浓度(酪蛋白的毫克数)为横坐标绘制双缩脲法测定小麦面粉中蛋白质的含量标准曲线。

四、样品处理1(0.25g小麦面粉，0.5ml四氯化碳，25ml双缩脲试剂(四氯化碳为有机溶剂，在这里作为分散剂，使面粉不成团。

双缩脲法测定奶粉中蛋白质的含量摘要测定奶粉中蛋白质含量可用双缩脲法，蛋白质含有两个以上的肽键，在强碱条件下，肽键（—CO—NH—）的质子被解离，二价的铜离子和失去质子的多肽链的氮原子相结合产生稳定的紫色络合物，在540~560nm处测定其光吸收值，此值与蛋白质的含量在一定范围内呈线性关系。

可用来定量测定蛋白质含量，测定范围1~10mg蛋白质。

二价的铜离子与除精氨酸以外的所有氨基酸和二肽均不发生反应，仅和1-亚氨基缩脲、2—亚氨基缩脲、丙二酰胺等少数几种物质有颜色反应，所以基本上可以认为这是蛋白质的特有反应。

②双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。

关键词：双缩脲蛋白质含量奶粉1.前言近年来奶粉质量问题在社会上掀起了很大的风浪，作为一名普通的消费者，我们可学习一些实用的方法去了解判断奶粉的质量问题，所以本实验会详细介绍了一种简单快速的测定奶粉中蛋白质含量的方法。

蛋白质的含量测定是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。

测定蛋白质总量的常用方法有4种：凯氏定氮法、双缩脲法、folin-酚试剂法（lowry）、紫外吸收法。

双缩脲法是最简单快速的方法，且不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。

主要的缺点是灵敏度差。

因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定，该方法在一定程度上还是具有很大的实用意义的。

本实验用分光光度计能测定范围内减少样品中蛋白质含量的梯度，增加实验组以提高实验的灵敏度差，同时也用离心机和半透膜等技术减少在操作过程中蛋白质的损失和金属离子的影响。

2.实验目的学习和掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法，熟悉分光光度计和离心机的使用和操作。

3.实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3)是个两分子脲径180（左右加热），放出一个分子氨后得到产物。

在强碱性溶液中双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。

凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键或能过一个中间碳原子相连的肽键这类化合物都有双缩脲反应。

实验一双缩脲法测定蛋白质含量实验一:双缩脲法测定蛋白质含量一目的掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理及方法。

二原理双缩脲( )是两分子尿素经180?左右加热,放出一分子氨( NH)后得到的产物。

在强碱溶液中，双缩脲与CUSO形成紫色络合物，称为双缩脲反应。

34 其原因是含有两个及以上肽键或类似肽键有化合物都具有类似双缩脲反应。

蛋白质含有多个2+肽键，在碱性溶液中能与CU络合成紫红色的络合物。

其颜色的深浅与被测样品中蛋白质浓度呈正比，而与蛋白质分子量和氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。

该法对样品中蛋白质含量要求相对较高，一般在1—10mg/L蛋白质。

tris(三甲羟基氨基甲烷)、一些氨基酸、EDTA(乙二胺四乙酸)、草二酰胺、多肽等会于扰该测定。

在一定浓度范围内，反应后颜色与被测样品蛋白质含量呈线性关系，即蛋白质浓度越高，体系的颜色越深。

反应产物在540nm处有最大吸收峰(吸光度)。

将未知浓度的样品溶液与一系列已知浓度的标准蛋白质溶液同时与双缩脲试剂反应，并在540nm处比色，可通过标准浓度蛋白质绘制的标准曲线，求得未知样品中的蛋白质含量(浓度)。

由于本法操作简便、迅速、蛋白质浓度与光密度的线性关系好，故对蛋白质快速而不需要十分精确的测定可用此法。

三仪器与器材可见光分光光度计、水浴锅、分析天平、振荡机(器)、漏斗、试管架、具塞三角瓶(100ml) 容量瓶(250 ml、500 ml、1000 ml)、刻度吸管(1.0 ml 2.0 ml 5.0 ml)试管(1.5cmX15cm)。

四试剂1、双缩脲试剂称取硫酸铜(CUSO?5HO)1.5g，酒石酸钾钠( )426.0g，分别用250 ml蒸馏水溶解后，一并转入1000 m l容量瓶中，在搅拌下(可用旋涡混合器或摇动)加入30 ml10%(质量分数)NaOH溶液，然后用蒸馏水稀释至刻度(1000ml)。

将该试剂贮存于塑料瓶或内壁涂以石蜡的瓶内。

此试剂可长期保存(须无红色或黑色沉淀出现)，长期使用。