实验十 PEG法诱导鸡血细胞融合
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peg诱导原生质体融合的原理1. PEG是什么?首先,我们得聊聊PEG,没错,就是“聚乙二醇”这个小家伙。
听上去可能有点拗口,但它其实是个超级好帮手,特别是在生物技术领域。
你想象一下,PEG就像是个热情洋溢的调解人,它能让两个本来不太搭的原生质体(就像两个陌生人)心甘情愿地走到一起,融合成一个和谐的小团队。
说白了,PEG就是帮助原生质体搞“联谊”的桥梁,帮它们建立联系,让它们的“感情”升温。
2. 原生质体的融合2.1 原生质体是什么?那么,原生质体到底是什么呢?简单来说,原生质体就是植物细胞去掉细胞壁后的样子。
你可以把它想象成一颗颗小水珠,里面充满了各种细胞成分。
在没有细胞壁的束缚下,这些原生质体可以自由移动,仿佛是在水中畅游的小鱼儿。
嘿,听上去是不是挺美的?2.2 融合的意义好,既然有了原生质体,我们就要说说它们融合的意义。
融合就像是一场细胞界的大party,两个不同的原生质体互相拥抱,形成一个新的细胞。
这样一来,它们可以共享彼此的优点,产生新的性状,甚至还能提高抗病性和产量,真是一举多得!想想看,如果你能和朋友一起合作做一件事情,效果肯定事半功倍,原生质体也是这个道理。
3. PEG诱导融合的原理3.1 PEG的工作机制那么,PEG究竟是怎么做到这一点的呢?其实,PEG的主要工作就是改变原生质体的表面性质。
它能让细胞膜的流动性增强,像是给细胞“打了鸡血”。
这样一来,原生质体之间的距离就变得更近,最终就会自然而然地融合在一起。
这种神奇的化学作用,让细胞膜变得像水一样柔软,使得原生质体之间的结合更加顺畅。
就好比一群人围在一起,随着音乐的节奏翩翩起舞,最终组成了一支默契的舞蹈团队。
3.2 注意事项不过,话说回来,虽然PEG很神奇,但也不是万无一失的哦。
在使用PEG的时候,要控制好浓度和时间,不能太多也不能太少,就像做菜时盐的量,得掌握得当。
要是PEG用得过量,可能会导致细胞损伤,甚至让细胞“拒绝”融合,搞得最后连个毛都没得。
人工介导或培养条件下,使两个或两个以上的离体细胞合并成为一个双核或多核细胞的过程[1,2]称之为细胞融合技术,该技术作为细胞工程的核心技术,在农、牧、医、药、食品等领域具有广泛的应用价聚乙二醇诱导鸡红细胞融合实验方案的优化李玲刘欢贺亚玲崔林唐慧张君张亮(石河子大学医学院,新疆石河子,832002)【摘要】目的:聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合法是最为经济、简单的细胞融合技术,但受多种因素影响,实际实验效果并不理想,为获得高效稳定的细胞融合效率,本研究拟对PEG诱导的鸡红细胞的融合实验进行优化。
方法:调整鸡红细胞的采集与保存方式、细胞浓度、缓冲系统(GKN与1640)、pH、诱导与孵育时间,以及染液的选择等。
结果:弱碱PEG环境(pH≈7.8)下诱导与孵育时间均采用5min时,细胞融合率最高(17.87%),显著高于未调节pH组及诱导与孵育时间20min组(<0.01);pH>8时,细胞聚集但胞膜皱缩破裂,计算融合率困难;亚甲基蓝、中性红染色时间>20min时,细胞膜亦皱缩破裂。
结论:宜选择肝素类抗凝管采集及保存鸡血,在GKN或1640缓冲系统中,以全血与试剂1:9比例洗涤及孵育,弱碱PEG环境(pH≈7.8)分别诱导、孵育5min,并在20min内观察亚甲基蓝或中性红染色结果,该方案适宜应用于PEG诱导的鸡红细胞融合实验教学。
【关键词】聚乙二醇;细胞融合;鸡红细胞;缓冲体系;pH;时间;染色剂中图分类号:G642.423;R394-33文献标识码:AOptimization of the Experimental Scheme for Chicken Red Blood Cell FusionInduced by PEGLI Ling,LIU Huan,HE Ya-ling,CUI Lin,TANG Hui,ZHANG Jun,ZHANG Liang(Shihezi University Medical College,Shihezi,Xinjiang832002)【Abstract】Objective:PEG-mediated cell fusion is the most economical and simple cell fusion technique.However the experimental results are not ideal due to various factors.In order to obtain efficient and stable cell fusion efficiency,we optimized the experiment.Methods:Methods of the chicken red blood cell collection and preservation,cell concentration,buffer system(GKN and1640),pH,induction time and incubation time were adjusted,as well as other methods such as selected different dyes.Results:In the weak alkali environment(PEG pH≈7.8),the cell fusion rate was the highest(17.87%)when both the induction and incubation time were5min,which was significantly higher than that of the group without adjusted pH and the group with induction and incubation time of 20min(<0.01).At pH>8,cells gathered trend obvious,but it was difficult to calculate the fusion rate due to the cell membrane shrinkage and rupture.The cell membranes were also crumpled when the staining time was more than 20min with methylene blue or neutral red dye.Conclusion:It is recommended to collect and store chicken blood with heparin anticoagulant tubes,whole blood was washed and incubated with GKN or1640buffer at a ratio of1:9 and then weakly basic PEG was used to induce and incubate the cells for5min respectively,and the cell staining results within20min were observed with methylene blue or neutral red dye,this scheme is suitable for practical experiment teaching.【Key words】Polyethylene glycol(peg);Cell fusion;Chicken red blood cell;Cell Buffer system;pH;Time;Dye solution基金项目:石河子大学教育教学改革项目(SJ-2018-15);国家自然基金项目(81600325)。
PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较PEG(聚乙二醇)介导的鸡血细胞融合实验是一种常用的细胞学实验方法,用于研究细胞融合、基因转移、病毒感染等现象。
在这个实验中,PEG起到促进融合的作用。
本文将对常用的PEG诱导鸡血细胞融合实验方法进行比较。
1.直接混合法:直接混合法是最简单直接的方法,将两种不同细胞类型的细胞直接混合,加入PEG处理后,通过细胞的融合产生融合细胞。
实验步骤:a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。
b.将细胞收集、洗涤后,按照一定比例混合在一起。
c.在混合细胞悬液中加入PEG,进行处理。
d.处理后的细胞悬液进行培养。
优点:简单快捷,操作方便。
缺点:融合效率低,融合细胞的纯度较低,难以鉴定融合细胞。
2.等渗处理法:等渗处理法使用PEG使两个细胞类型的渗透压基本相等,减小由于渗透压差带来的融合细胞死亡的可能性。
实验步骤类似于直接混合法,不同之处在于在混合前要将细胞分别处理加入等量的PEG。
优点:可以减少融合细胞死亡的可能性。
缺点:融合效率仍然较低,难以确保融合细胞的纯度。
3.高瓶底法:高瓶底法是一种间接融合法,将两种细胞性的细胞分别培养到八倍增生指数时接种于两个高菌瓶内,将角质层去除,用高菌瓶口与高速离心的纺棉花轻摩转盘瓶底,离心至指定g数。
因离心后双方菌瓶接触,菌体外膜断裂,细胞在瓶壁内微小空间聚集,有利于融合。
实验步骤:a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至八倍增生指数。
b.将细胞收集后接种于两个高菌瓶内。
c.去除角质层,将高菌瓶口与高速离心的纺毛轻摩转盘瓶底。
d.将菌瓶离心至指定g数。
优点:融合效率较高,融合细胞纯度较高。
缺点:操作复杂,需要使用专用设备。
4.电熔法:电熔法是利用电场将两种细胞融合的方法。
通过电熔法可以达到融合效率较高的效果。
实验步骤:a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。
b.将细胞收集后接种于电熔腔中。
c.设置一定的电场参数,通过电场产生的作用使细胞融合。
peg诱导细胞融合原理PEG诱导细胞融合原理。
细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象,它在生物学研究中具有重要的意义。
PEG(聚乙二醇)是一种常用的细胞融合剂,通过PEG诱导细胞融合可以实现不同细胞的融合,从而产生新的细胞群体。
本文将介绍PEG诱导细胞融合的原理及其在细胞生物学研究中的应用。
首先,PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG的高渗透性和毒性,使细胞膜受到破坏,从而促使细胞融合。
在实验中,将两种不同类型的细胞分别与PEG混合,PEG能够破坏细胞膜,使得两种细胞的质膜融合在一起,形成一个新的细胞。
这种方法可以用于融合不同细胞系,或者将外源基因导入目的细胞中。
其次,PEG诱导细胞融合在细胞生物学研究中有着广泛的应用。
通过细胞融合技术,可以将两种不同类型的细胞融合在一起,从而研究它们的互补性和相互作用。
例如,将癌细胞与正常细胞融合,可以研究癌细胞的恶性特性和调控机制;将干细胞与成熟细胞融合,可以研究干细胞的分化能力和再生潜力。
此外,PEG诱导细胞融合还可以用于细胞杂交技术,将两种不同细胞的染色体融合在一起,研究染色体的配对和重组。
此外,PEG诱导细胞融合还可以用于细胞治疗和再生医学研究。
通过将患者的细胞与健康捐赠者的细胞融合,可以修复患者受损的组织和器官。
例如,将患者的干细胞与健康捐赠者的成熟细胞融合,可以使干细胞具有更强的分化能力,从而用于治疗各种疾病和损伤。
此外,PEG诱导细胞融合还可以用于再生医学研究,研究干细胞的再生潜力和分化机制,为再生医学的发展提供重要的实验基础。
综上所述,PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞生物学技术,通过破坏细胞膜促使细胞融合,具有广泛的应用价值。
在细胞生物学研究中,PEG诱导细胞融合可以用于研究细胞互补性和相互作用,染色体配对和重组,以及细胞治疗和再生医学研究。
相信随着科学技术的不断发展,PEG诱导细胞融合技术将会在细胞生物学和医学领域发挥越来越重要的作用。
文章编号:2096-0387 (2018) 02-0112-03第4卷第2期 生物化工Vol.4 No.22018 年 4 月Biological Chemical EngineeringApr. 2018PEG 诱导鸡血细胞融合实验方法比较黄伟伟,颜华,高梅,李绍军(西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨陵712100)摘要:细胞融合技术是细胞生物学的一项核心技术,在科学研究、医药开发、农业育种等方面有着广泛应用。
PEG 法诱导鸡血细胞融合实验也被作为细胞生物学本科实验的一项重要内容,但在实验课程中的融合效果不佳。
笔者查阅相关细胞生物学 实验指导教材和文献,发现存在两种截然不同的PEG 法诱导鸡血细胞融合操作方法。
因此,本文对两种方法进行了比较,并进一 步讨论了影响PEG 法诱导鸡血细胞融合效率的重要因素和改进方法。
关键词:细胞融合;PEG ;鸡血细胞;实验优化 中图分类号:Q813文献标志码:AComparison of Two Experimental Methods of PEG Induced Chicken Blood Cell FusionHuang Wei-wei, Yan Hua, Gao Mei, Li Shao-jun(College of Life Sciences, Northwest Agriculture and Forestry University, Shaanxi Yangling 712100)Abstract: Cell fusion is one of core technologies of cell biology, which has been widely applied in scientific research, medicine development, agricultural breeding and so on. Experiment of PEG induced chicken blood cell fusion is an important content of cell biology experimental course for undergraduate students, but the fusion effect in the experimental course is not good. The author consulted the relevant cell biology experimental guide textbooks and literature, and found that there are two different protocols for PEG induced chicken blood cell fusion. So in this paper, we compared these two operation methods, further discussed the important factors related with the cell fusion efficiency and give some advice for the operation method optimization.Key words : Cell fusion; PEG; Chicken blood cells; Experiment optimization细胞融合(Cell fusion )是在自然条件下或人工 诱导条件下使两个或两个以上的细胞合并成为一个 双核或多核细胞的过程。
实验鸡血细胞的体外融合【实验目的】了解乙二醇(PEG)诱导体外细胞融合的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验,初步掌握细胞融合的基本方法。
【实验原理】细胞融合(cell fusion)又称体细胞杂交,是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞,随后,异核体同步进入有丝分裂,核膜崩溃,来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞(hybrid cell)。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂不同,细胞融合可分为:①病毒诱导的细胞融合,如仙台病毒(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);②化学因子诱导的细胞融合,如聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG);③电场诱导的细胞融合;④激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物,存在一系列不同分子质量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构,是两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组,引发细胞融合。
该方法应用相对分子质量为400~6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连,产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG的相对分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
【实验仪器、材料和试剂】仪器、用具:注射器、刻度离心管、离心机、血细胞计数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
材料:成年家鸡。
试剂1)0.85%NaCl溶液。
2)GKN液:8.0g NaCl,0.4g KCl,1.77g Na2HPO4·2H2O,0.69g NaH2PO4·H2O,2.0g葡萄糖,0.01g 酚红,溶于1000ml重蒸水中。
3)50%(m/V)PEG溶液:①取50g PEG(相对分子质量=4000)放入100ml瓶中,高压灭菌20min。
②让PEG冷却至50~60℃,勿让其凝固。
PEG诱导鸡红细胞融合影响因素探讨马云;何昆;王晓玉;李芬【期刊名称】《德州学院学报》【年(卷),期】2011(27)2【摘要】细胞融合技术是近年来迅速发展起来的一项新兴细胞工程技术,本研究以鸡红细胞为材料,以PEG(Mw=4000)为诱导剂,研究不同的PEG体积分数(0%、25%、50%、75%、100%),不同的融合时间(5min、10 min、15 min、20 min、25 min),不同的融合温度(20℃、30℃、35℃、38℃、40℃)对鸡红细胞融合率的影响.结果显示:PEG的体积分数为50%,融合时间为15 min,温度为38℃时融合的效果最好.【总页数】5页(P54-58)【作者】马云;何昆;王晓玉;李芬【作者单位】信阳师范学院生命科学学院,河南信阳,464000;信阳师范学院生命科学学院,河南信阳,464000;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华,321004;信阳师范学院生命科学学院,河南信阳,464000;西华师范大学生命科学学院,四川南充,637002;信阳师范学院生命科学学院,河南信阳,464000【正文语种】中文【中图分类】Q272;Q781【相关文献】1.PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较 [J], 黄伟伟;颜华;高梅;李绍军2.PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较 [J], 黄伟伟;颜华;高梅;李绍军;3.聚乙二醇诱导鸡红细胞融合实验方案的优化 [J], 李玲;刘欢;贺亚玲;崔林;唐慧;张君;张亮4.细胞生物学基础实验科学探究属性的深度挖掘——以"PEG介导鸡红细胞融合"实验为例 [J], 巴雪青;李晓雪;曾宪录;魏民5.提高PEG诱导鸡血细胞融合率的方法研究 [J], 刘瑞芳;陈嘉轩;李艾欣;孙喜;吕立因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。