细胞融合实验报告

第1篇实验名称：植物细胞原生质体融合实验实验目的：1. 了解植物细胞原生质体融合的基本原理和实验方法。

2. 掌握植物原生质体融合实验的操作步骤。

3. 学习观察和分析原生质体融合实验的结果。

实验时间：2023年3月15日实验地点：生物实验室实验材料：1. 植物细胞：番茄、胡萝卜2. 生理盐水3. 2.5%的纤维素酶和果胶酶混合液4. 融合诱导剂：聚乙二醇（PEG）5. 生理盐水6. 酶母菌培养基7. 显微镜8. 其他实验器材实验步骤：1. 细胞分离：取新鲜的番茄和胡萝卜组织，用生理盐水冲洗干净，切成小块，放入含有纤维素酶和果胶酶的混合液中，在37℃的水浴中酶解2小时，使细胞壁被分解，得到原生质体。

2. 原生质体洗涤：将酶解后的细胞混合液用离心机离心，弃去上清液，然后用生理盐水洗涤两次，去除未分解的细胞壁和杂质。

3. 原生质体融合：将洗涤后的原生质体用聚乙二醇（PEG）诱导融合，具体操作为：将原生质体悬浮于含有PEG的溶液中，混合均匀，室温下静置30分钟，然后用生理盐水洗涤两次，去除未融合的原生质体。

4. 再生培养：将融合后的原生质体接种于酶母菌培养基上，在适宜的条件下培养，使其再生出新的细胞壁。

5. 观察与鉴定：用显微镜观察再生细胞的形态和结构，鉴定融合是否成功。

实验结果：经过实验操作，成功得到了再生细胞，并在显微镜下观察到融合细胞的形态和结构。

实验结果显示，番茄和胡萝卜的原生质体成功融合，形成了新的细胞。

实验分析：1. 本实验采用植物细胞原生质体融合技术，成功实现了番茄和胡萝卜细胞的融合。

2. 在原生质体融合过程中，聚乙二醇（PEG）起到了诱导融合的作用。

3. 通过再生培养，融合细胞成功再生出新的细胞壁，表明融合过程是成功的。

实验结论：1. 植物细胞原生质体融合实验是一种有效的细胞工程技术，可以用于植物遗传育种和基因工程等领域。

2. 本实验成功实现了番茄和胡萝卜细胞的融合，为后续的研究和应用奠定了基础。

一、实验目的1. 了解动物细胞融合的常用方法。

2. 学习化学融合和电融合的基本操作过程。

3. 观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。

二、实验原理细胞融合是指两个或两个以上细胞在自发或诱导条件下，合并成为双核或多核细胞的过程。

动物细胞融合在生物科学研究中具有重要意义，如基因工程、细胞治疗等领域。

目前，诱导动物细胞融合的方法主要有病毒诱导融合、化学融合和电融合等。

三、实验材料与用品1. 细胞：小鼠成纤维细胞、鸡红细胞。

2. 试剂：聚乙二醇（PEG）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胎牛血清（FBS）、台盼蓝染色液等。

3. 仪器：细胞培养箱、显微镜、离心机、移液器、吸管等。

四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞和鸡红细胞分别接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。

2. 细胞传代：待细胞生长至约80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，传代培养。

3. 细胞融合：（1）化学融合：将小鼠成纤维细胞和鸡红细胞分别消化、离心，重悬于PBS中，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。

取等量的小鼠成纤维细胞和鸡红细胞混合，加入1% PEG，室温下孵育5分钟。

将混合细胞用PBS洗涤两次，重悬于含10% FBS的PBS中，置于细胞培养箱中培养。

（2）电融合：将小鼠成纤维细胞和鸡红细胞分别消化、离心，重悬于PBS中，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。

取等量的小鼠成纤维细胞和鸡红细胞混合，均匀铺于细胞培养皿中。

使用电融合仪进行电融合，设置参数：电脉冲宽度200μs，脉冲间隔100μs，电场强度20kV/cm。

将电融合后的细胞用PBS洗涤两次，重悬于含10% FBS的PBS中，置于细胞培养箱中培养。

4. 细胞观察：（1）显微镜观察：使用显微镜观察融合细胞的形态、大小和颜色变化。

（2）台盼蓝染色：将融合细胞用台盼蓝染色，观察细胞核的染色情况。

五、实验结果与分析1. 化学融合：显微镜下观察，融合细胞呈现蓝绿色，细胞核染色质均匀分布。

一、实验目的1. 掌握细胞工程的基本原理和实验技术。

2. 学习细胞培养、细胞融合、基因工程等细胞工程技术的操作方法。

3. 培养学生的实验操作能力和科学思维。

二、实验原理细胞工程是利用现代生物技术手段，对细胞进行改造、培养和应用的一门新兴学科。

本实验主要涉及以下原理：1. 细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞在体外生长、繁殖，为后续实验提供细胞材料。

2. 细胞融合：将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程，可用于基因转移、细胞治疗等。

3. 基因工程：通过分子生物学技术对基因进行改造，实现特定性状的表达。

三、实验材料、试剂和仪器设备1. 实验材料：人胚胎肾细胞（HEK293）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、小鼠血清、胰蛋白酶、DMSO等。

2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、Hoechst 33342染料等。

3. 仪器设备：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、PCR仪、凝胶成像系统等。

四、实验步骤1. 细胞培养（1）将HEK293和NIH3T3细胞分别接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。

（2）待细胞长满瓶底后，用胰蛋白酶消化细胞，按1:1的比例将两种细胞混合。

（3）将混合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。

2. 细胞融合（1）将混合细胞培养至对数生长期，加入适量的聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合。

（2）将融合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。

（3）用Hoechst 33342染料检测融合细胞。

3. 基因工程（1）设计并合成目的基因的引物，进行PCR扩增。

（2）将扩增的目的基因克隆到载体上。

（3）将重组质粒转化到HEK293细胞中。

（4）用荧光素酶报告基因检测目的基因的表达。

五、实验结果与分析1. 细胞培养HEK293和NIH3T3细胞在培养过程中生长良好，细胞形态规则，细胞活力较高。

2. 细胞融合Hoechst 33342染料检测结果显示，部分细胞核融合，表明细胞融合实验成功。

3. 基因工程荧光素酶报告基因检测结果显示，目的基因在HEK293细胞中成功表达。

1. 掌握动物细胞融合的基本原理和方法。

2. 了解细胞融合技术在生物科学领域的应用。

3. 通过实验观察细胞融合现象，验证细胞融合技术的可行性。

二、实验原理动物细胞融合是指两个或多个动物细胞在特定条件下，通过细胞膜的相互接触、融合，形成一个新的细胞。

细胞融合技术广泛应用于基因工程、细胞工程、生物制药等领域。

本实验采用电穿孔法诱导动物细胞融合。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠成纤维细胞（小鼠胚胎成纤维细胞或小鼠胚胎成纤维细胞系）。

2. 试剂与仪器：胰蛋白酶、DMEM培养液、Hanks平衡盐溶液、FCS（胎牛血清）、Hepes缓冲液、电穿孔仪、显微镜、细胞培养皿、移液枪、超净工作台等。

四、实验方法1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养至对数生长期。

2. 细胞收集：用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞悬液。

3. 细胞洗涤：用Hanks平衡盐溶液洗涤细胞两次，去除未贴壁细胞。

4. 电穿孔：将细胞悬液加入电穿孔仪的电极室中，调整电穿孔参数，进行电穿孔处理。

5. 融合细胞培养：将电穿孔后的细胞悬液加入含FCS的DMEM培养液中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养。

6. 观察融合细胞：在显微镜下观察融合细胞的形态变化，记录融合细胞的数量和形态。

五、实验结果1. 细胞融合现象：电穿孔处理后，部分细胞膜发生融合，形成融合细胞。

2. 融合细胞形态：融合细胞呈多核、多倍体状态，细胞质丰富，核膜模糊。

1. 电穿孔法诱导细胞融合的原理：电穿孔法是通过高电压脉冲在细胞膜上形成瞬时孔道，使细胞膜发生融合。

实验结果表明，电穿孔法能够有效诱导动物细胞融合。

2. 细胞融合技术的应用：细胞融合技术在生物科学领域具有广泛的应用，如制备杂交瘤细胞、生产单克隆抗体、基因工程等。

3. 影响细胞融合的因素：电穿孔参数、细胞浓度、培养条件等都会影响细胞融合效果。

本实验中，通过调整电穿孔参数和细胞浓度，获得了较好的融合效果。

聚乙二醇介导的细胞融合2012年2月19星期一陈倩倩（118627140313）同作者：郑梦璐谢雨后赵松1、文摘细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。

它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。

但融合后获得的杂种细胞具有染色体异倍性,致使细胞株的遗传性不稳定、植株不育性、畸形、生育迟缓等不符合育种要求的性状出现,直接利用杂种细胞作育种材料目前还有许多障碍。

细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作,在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂,投资少,有利于广泛开展研究和推广,有着重大的实践意义,正得到科学界的日益重视。

自从20世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二醇( PEG, polyethyleneglycol) 诱导大麦、大豆等植物原生质体融合后PEG 法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不需要特别的仪器设备、操作简便等优点, 被普遍地应用于生物、遗传、医药等研究领域. 高体积分数、高相对分子质量的PEG会对细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈, 此外,由于该方法涉及的影响因素较多, 进一步加大了获得理想细胞融合率的难度.本实验主要研究PEG的浓度和细胞浓度对细胞融合率的影响。

2、背景介绍细胞融合现象最初是在动物细胞中发现的。

1958年日本学者阅田善雄用紫外光灭活的仙台病毒在体外诱导艾氏腹水红纲胞相互融合。

1965年他和Harris等在此基础上各自分别采用灭活的仙台病毒,诱导产主了第一个种间融合并培养成活。

一年后Yerganzan又进一步使用仙台病毒获得了能够增殖的杂种细胞。

后来Littlefield 用缺陷型细胞HGPRT-XTK-细胞杂交,用HAT 选择培养基选出杂种细胞,开创了细胞工程的新纪元,继而推动了整个生物工程的发展。

1975年英国科学家Milestein 和Kohler在体细胞杂交基础上创立了B淋巴细胞杂交瘤技术,他们将在体外不能长期生存的经绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）与在体外能迅速增殖的小鼠骨髓溜细胞在聚乙二醇（PEG）或汕台病毒的作用下融合而产生杂交瘤细胞,所得杂交瘤细咆承袭了两种亲代细胞的遗传特性,既保存了瘤细胞在体外迅速增殖传代的能力,又继承了免疫细胞合成和分泌的能力,即能分泌抗绵羊红细胞的抗体。

一、实验目的本实验旨在通过动物细胞融合技术，将不同物种的基因整合到同一细胞中，实现基因功能的互补和基因表达的调控。

具体目标包括：1. 掌握动物细胞融合实验的基本原理和操作方法；2. 学习基因整合和表达调控的实验技术；3. 观察和分析实验结果，探讨基因合体在生物学研究中的应用。

二、实验原理动物细胞融合实验是利用细胞膜融合技术将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程。

在融合过程中，细胞膜、细胞质和细胞核发生融合，从而实现基因的整合和表达。

本实验中，我们将通过电穿孔法将外源基因导入细胞，并与宿主细胞进行融合，实现基因的整合和表达。

三、实验材料1. 细胞：小鼠成纤维细胞、大鼠成纤维细胞；2. 基因质粒：pEGFP-C1（绿色荧光蛋白基因）；3. 试剂：电穿孔试剂、DNA提取试剂盒、质粒提取试剂盒、细胞培养试剂等；4. 仪器：电穿孔仪、离心机、荧光显微镜、凝胶成像系统等。

四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞和大鼠成纤维细胞分别培养在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中。

2. 基因质粒提取：按照DNA提取试剂盒说明书提取pEGFP-C1质粒。

3. 电穿孔法转染：将小鼠成纤维细胞和大鼠成纤维细胞分别用DMEM培养基洗涤两次，然后按照电穿孔试剂说明书进行电穿孔，将pEGFP-C1质粒导入细胞。

4. 细胞融合：将电穿孔后的细胞按照1:1的比例混合，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

5. 融合细胞筛选：在荧光显微镜下观察融合细胞，选取绿色荧光蛋白表达的细胞进行培养。

6. 基因表达检测：收集融合细胞，提取总RNA，按照逆转录试剂盒说明书进行逆转录，得到cDNA。

以cDNA为模板，进行PCR扩增，检测绿色荧光蛋白基因的表达。

五、实验结果1. 细胞融合：在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达的融合细胞，证明细胞融合成功。

2. 基因表达：PCR扩增结果显示，融合细胞中绿色荧光蛋白基因表达，证明外源基因成功整合到宿主细胞基因组中。

山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。

实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。

细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。

2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。

1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。

1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。

1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。

化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。

比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。

80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。

电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。

当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。

这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。

图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。

四川大学实验报告题目：PEG促细胞融合一．实验目的:1.掌握细胞融合的方法2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤二．实验原理1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。

由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率?4?6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞10融合。

10大约在 -2.促进细胞融合的方法a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus）b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂质、Ca2+配合物等。

PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。

普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。

在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。

c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是融合率大为提高。

电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。

而相对的脂双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。

由于连接处的细胞膜表面曲率大，处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆形的大球状细胞。

与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。

三．实验材料及设备1.实验材料：a)50%PEG混合液1 / 7四川大学实验报告b)鸡红细胞悬液c)生理盐水d)Hanks溶液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器c)酒精灯、恒温水浴锅d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.制取鸡血红细胞悬液2.取细胞悬液1mL，移入10mL离心管，加入4mL0.85%生理盐水混匀。

细胞生物学实验报告——动物细胞融合实验目的：通过动物细胞融合实验，研究细胞融合对细胞形态和功能的影响。

实验原理：动物细胞融合是将两个或多个不同细胞融合在一起，形成一个新的细胞。

这种细胞融合可以通过化学物质、电融合或病毒介导等方式实现。

在本实验中，我们将使用化学方法进行细胞融合。

实验材料：1.小鼠胚胎纤维化细胞2.小鼠癌细胞3.融合剂（聚乙二醇）4.培养基5.显微镜实验步骤：1.将小鼠胚胎纤维化细胞和小鼠癌细胞分别培养至对数生长期。

2.用PBS洗涤细胞，加入适量的融合剂（聚乙二醇）。

3.用无菌吸管轻轻吹气使细胞悬浮液均匀混合。

4.将细胞悬浮液转移至培养皿中，并继续培养在37°C的培养箱中。

5.观察细胞的变化，使用显微镜观察细胞形态和细胞数量的变化。

实验结果：经过细胞融合，观察到融合细胞表现出不同于原始细胞的形态特征。

例如，融合细胞可能会表现出更大的细胞体积、不规则的形状以及异常的细胞核形态。

此外，融合细胞通常比原始细胞更抵抗外界环境的压力，更能适应培养基中的低营养条件。

讨论与分析：细胞融合是一种重要的实验手段，用于探究细胞形态和功能的变化。

通过将不同类型的细胞融合在一起，可以观察到融合细胞的形态和功能发生的改变。

这些变化可能包括细胞体积的增加、细胞形态的改变以及细胞功能的增强等。

细胞融合实验不仅可以帮助我们了解细胞的组成和特性，还可以为研究癌细胞的形成和功能提供重要的线索。

在本实验中，我们选择了小鼠胚胎纤维化细胞和小鼠癌细胞进行融合实验。

由于癌细胞的特殊性质，融合后的细胞可能会表现出更强的生长能力和侵袭性，这有助于我们研究癌细胞的形成机制。

然而，需要注意的是，细胞融合对于细胞的形态和功能的影响是非特异性的。

这意味着融合细胞的形态和功能不仅取决于融合的细胞类型，还取决于融合过程中的其他因素，如融合剂的用量和融合时间等。

因此，在进行细胞融合实验时，需要进行严密的实验设计和控制，以确保观察到的变化是由细胞融合引起的，而不是其他因素导致的。

实验七 PEG介导的细胞融合一、实验目的1、理解PEG介导细胞融合的原理，掌握实验方法与技能。

2、了解影响细胞PEG介导融合的因素。

二、实验原理2个或以上的细胞合并为1个细胞的现象，称为细胞融合。

细胞融合的主要方法有病毒法、聚乙二醇（PEG）法和电融合方法。

PEG是乙二醇的多聚化合物，一般常用分子质量为MW 4000—6000的50%PEG溶液，首先引起细胞的集聚与粘连，然后改变各类细胞膜的结构，使两细胞接触点处脂分子双层发生疏松和重排，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲合以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合，胞质流通，最后形成融合细胞。

细胞融合频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。

三、实验器材1、材料：新鲜鸡血红细胞2、器具：光学显微镜，离心机，恒温培养箱或恒温水浴锅，电磁炉、离心管、烧杯、容量瓶、木夹子、载玻片，盖玻片等。

3、试剂与配制：1．0.85 % NaCl 溶液2．GKN液：8.0g NaCl，0.4g KCl，3.56 g Na2HPO4·12H2O，0.78 g NaH2PO4·2H2O，2.0g葡萄糖，0.01g酚红，溶于1000ml重蒸水中。

3．33%（W/V）PEG溶液1. 取10g PEG（分子质量=4000）放入50ml 瓶中，在电磁炉水浴锅中加热熔化后，再边搅拌继续加热6min。

2. 让PEG冷却至50℃，勿让其凝固。

3. 边搅拌边加入15ml预热至50℃的GKN液，再充分混匀，置37℃水浴锅中待用。

4．肝素钠：100ml 0.85%生理盐水中溶解0.04g肝素钠（125U/mg），加入40ml全血。

可先配100倍母液：用0.85%生理氯化钠盐水配成1%肝素溶液（200mg /10ml）。

再稀释：按1：40，用0.85%氯化钠溶液将母液稀释好，再采鸡血。

四、实验方法1. 鸡血的获得：从在烧杯中事先加入配好的肝素钠（100U 肝素/ 5ml全血），到菜市场采集鸡血，按1：4体积比制成抗凝全血，置于4℃冰箱内可供一周内使用。

第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作流程，包括原代培养和传代培养。

2. 了解细胞培养过程中的无菌操作规范。

3. 观察细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。

二、实验原理细胞培养是从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。

三、实验用品1. 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、移液枪、培养皿、无菌操作台、无菌操作箱、细胞培养箱、CO2培养箱、细胞计数器等。

2. 试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、抗生素、无菌水等。

四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，剪碎后用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液。

（2）将细胞悬液加入培养皿，置于CO2培养箱中培养。

（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。

2. 传代培养（1）当细胞达到一定密度时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液。

（2）将细胞悬液按1：2的比例传代到新的培养皿中。

（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。

3. 细胞计数（1）取适量细胞悬液，加入细胞计数器。

（2）计数细胞数量，计算细胞密度。

4. 细胞形态观察（1）取细胞培养皿，用盖玻片覆盖。

（2）置于显微镜下观察细胞形态、生长情况。

五、实验结果1. 细胞生长情况：原代细胞在培养皿中生长良好，细胞密度逐渐增加。

传代培养后，细胞生长速度略有下降，但总体状况良好。

2. 细胞形态：细胞呈多边形，细胞核清晰可见，细胞间连接紧密。

3. 细胞计数：细胞密度为1×10^6个/mL。

六、实验结论1. 成功进行了原代细胞培养和传代培养。

2. 细胞在体外培养过程中生长良好，细胞形态正常。

3. 细胞培养技术为生物学研究提供了有力工具。

七、实验总结本次实验成功掌握了细胞培养的基本操作流程，了解了无菌操作规范，并观察了细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。

一、实验目的1. 理解动物细胞融合的基本原理和常用方法。

2. 掌握化学融合和电融合的基本操作步骤。

3. 观察动物细胞融合过程中的行为和变化。

4. 通过实验验证细胞融合技术的有效性。

二、实验原理细胞融合是指两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下，合并成为双核或多核细胞的过程。

动物细胞融合技术广泛应用于生物医学、细胞工程等领域。

目前，常见的诱导细胞融合的方法包括病毒诱导融合、化学融合、电融合等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 小鼠脾细胞- 小鼠骨髓瘤细胞- 聚乙二醇（PEG）- 灭活仙台病毒- 电融合仪- 液体培养基- 洗涤缓冲液- 倒置显微镜2. 实验仪器：- 倒置显微镜- 低温冰箱- 恒温培养箱- 超净工作台- 电子天平- 移液器四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞分别培养在含有10%胎牛血清的液体培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。

2. 细胞收获：将培养至对数生长期的细胞用胰酶消化，收集细胞，用洗涤缓冲液洗涤，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。

3. 化学融合：- 将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合，加入适量PEG，充分混合后静置5分钟。

- 加入洗涤缓冲液，终止反应，洗涤细胞。

4. 电融合：- 将混合后的细胞放入电融合仪的电极槽中，设定电压和时间参数。

- 启动电融合仪，进行电融合实验。

5. 细胞培养：将融合后的细胞接种于含有10%胎牛血清的液体培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。

6. 细胞观察：利用倒置显微镜观察融合细胞的形态和细胞核的变化。

五、实验结果与分析1. 在化学融合实验中，观察到部分细胞发生融合，形成双核或多核细胞。

2. 在电融合实验中，观察到部分细胞发生融合，形成双核或多核细胞。

3. 融合细胞的细胞核呈现明显的核仁，且核膜清晰。

六、实验结论本实验成功实现了小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞的融合，验证了细胞融合技术的有效性。

一、实验目的1. 了解细胞凝聚的原理和机制。

2. 掌握细胞凝聚实验的操作方法。

3. 通过实验观察细胞凝聚现象，加深对细胞生物学知识的理解。

二、实验原理细胞凝聚是指细胞之间的相互吸引，使细胞相互靠近并聚集在一起。

细胞凝聚现象在生物学研究中具有重要意义，如细胞融合、细胞分化等。

细胞凝聚的原理主要包括以下两个方面：1. 细胞表面的相互作用：细胞表面存在着多种蛋白质和糖类物质，它们之间的相互作用是细胞凝聚的重要机制。

例如，凝集素可以与细胞表面的糖分子结合，使细胞相互吸引并聚集。

2. 细胞内信号转导：细胞内信号转导系统在细胞凝聚过程中也起着重要作用。

当细胞受到外界刺激时，信号转导系统被激活，导致细胞内产生一系列生化反应，从而促进细胞凝聚。

三、实验材料与用品1. 试剂：PBS缓冲溶液、0.9%的氯化钠溶液、凝集素、抗体、荧光素标记的抗体、荧光显微镜、细胞培养箱、离心机等。

2. 仪器：细胞培养瓶、移液器、离心管、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿等。

四、实验步骤1. 细胞培养：将细胞接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养至适宜的密度。

2. 细胞处理：将细胞离心收集，加入适量的PBS缓冲溶液重悬细胞。

3. 凝聚实验：将重悬细胞分为三组，分别加入以下试剂：A组：加入PBS缓冲溶液作为对照组。

B组：加入凝集素作为阳性对照组。

C组：加入抗体作为实验组。

4. 细胞观察：将各组细胞在荧光显微镜下观察，记录细胞凝聚现象。

5. 数据分析：对实验结果进行统计分析，比较各组细胞凝聚程度。

五、实验结果1. 对照组：细胞在PBS缓冲溶液中分布均匀，无明显凝聚现象。

2. 阳性对照组：细胞在凝集素作用下，出现明显的凝聚现象，细胞团块较大。

3. 实验组：细胞在抗体作用下，出现不同程度的凝聚现象，细胞团块大小不一。

六、实验讨论1. 细胞凝聚现象与细胞表面的相互作用密切相关。

凝集素能够识别细胞表面的糖分子，从而促进细胞凝聚。

2. 细胞内信号转导系统在细胞凝聚过程中起着重要作用。

细胞生物学综合性实验课程名称: 细胞生物学实验姓名:班级:学号:时间: 年月日植物原生质体的分离、纯化及融合1 材料、试剂与方法1.1材料菠菜叶片,唐古特白刺愈伤组织,金盏菊花瓣。

1.2 试剂5%次氯酸钠,无菌水,酶液A,0.2mol/L的Cacl2.2H2O溶液,20%蔗糖溶液，0.16 mol/L的Cacl2.2H2O溶液，酶液B,12%蔗糖溶液，PEG溶液，高PH高钙稀释液。

1.3方法1.3.1菠菜叶片和金盏菊花瓣的消毒处理称取金盏菊花瓣1.5g或菠菜叶1g,用自来水冲洗;分别用5%次氯酸钠溶液浸泡10分钟，再用无菌水洗4次。

1.3.2 原生质体的分离1.将消毒后的金盏菊花瓣用镊子撕成细丝。

2.酶解：加5ml酶液A,封口，保持28℃,3-6小时。

3.过滤及离心：600r/min离心5min,弃去上清液保留沉淀。

1.3.3 原生质体的纯化1.将沉淀用2ml 0.2mol/L的Cacl2.2H2O溶液悬浮。

2.用注射器缓缓向离心管底部6ml 20%蔗糖溶液,600r/min离心5min,得到原生质带。

3.用注射器吸出管底杂质和蔗糖及上部Cacl2.2H2O溶液。

4.留下的原生质带用5ml 0.2mol/L的Cacl2.2H2O溶液悬浮, 600r/min离心5min。

5.用3ml 0.16mol/L的Cacl2.2H2O溶液悬浮。

1.3.4 原生质体的融合1.将菠菜叶和金盏菊的原生质体悬液等量混合。

2.用吸管将混合的原生质体混合液滴在培养皿中，7-8滴每皿，静置10min,使其贴壁。

3.用吸管将等量的PEG溶液滴在原生质液滴上，静置10-15min 观察细胞的粘连。

4.用刻度吸管向原生质液滴慢慢加入高PH高钙稀释液。

第一次0.5ml,第二次1ml，第三四次各2ml,每次间隔5min。

5.平皿微倾斜，吸取上清液，缓缓加入4ml高PH高钙稀释液,静置5min后弃去上清液。

6.加入MS培养基4ml, 静置5min后弃去上清液。