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生物素标记抗体的原理应用引言生物素标记抗体是一种常用于生物学实验和生物化学研究的工具。
它可以通过结合生物素和抗体来标记目标蛋白，从而实现对目标蛋白的检测和定位。
本文将介绍生物素标记抗体的原理和常见的应用。
生物素标记抗体的原理生物素标记抗体是通过将生物素分子与抗体共价结合来实现标记的。
生物素是一种天然存在于生物体中的小分子，其与生物素受体（如亲和素或亲和力很强的亲和素结合蛋白）之间具有高度的亲和力。
生物素标记抗体的原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力，通过标记抗体即可实现对目标蛋白的检测和定位。
生物素标记抗体的应用生物素标记抗体在生物学实验和生物化学研究中有着广泛的应用。
下面列举了一些常见的应用：1.免疫组化生物素标记抗体可以用于免疫组化实验中的抗原检测和定位。
通过将生物素标记的抗体与目标抗原结合，再将其与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对抗原的检测和可视化。
2.流式细胞术生物素标记抗体可以在流式细胞术中用于细胞表面标记。
通过将生物素标记的抗体与目标细胞结合，再与荧光素-生物素-蛋白（如荧光素结合蛋白）复合物结合，可以实现对目标细胞的检测和定位。
3.免疫沉淀生物素标记抗体在免疫沉淀实验中广泛应用。
通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与琼脂糖颗粒（如琼脂糖颗粒A/G）结合，可以实现对目标蛋白的沉淀和富集。
4.西方印迹生物素标记抗体在西方印迹实验中也起着重要的作用。
通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对目标蛋白的检测和定量。
结论生物素标记抗体是一种常用的生物学实验和生物化学研究工具，其原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力。
通过将生物素标记抗体与目标蛋白结合，可以实现对目标蛋白的检测和定位。
生物素标记抗体在免疫组化、流式细胞术、免疫沉淀和西方印迹等实验中有着广泛的应用。
在将来的研究中，生物素标记抗体将继续发挥重要的作用，并为研究人员提供更多的实验选择和研究手段。
化学发光标记生物素引言：化学发光技术是一种常用的生物分析技术，在生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域发挥着重要作用。
其中，化学发光标记生物素技术是一种常见的应用，通过将生物素与特定的化学发光物质结合，可以实现对生物分子的高灵敏度、高特异性的检测。
本文将介绍化学发光标记生物素的原理、应用和优势。
一、化学发光标记生物素的原理化学发光标记生物素是基于生物素-亲和素系统的原理进行设计与制备的。
生物素是一种维生素B7，具有与亲和素（如蛋白质A、蛋白质G等）结合的特性。
在化学发光标记生物素中，生物素首先与化学发光物质（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）结合，形成生物素-化学发光物质复合物。
然后，生物素-化学发光物质复合物与待检测的目标分子（如蛋白质、核酸等）结合，形成生物素-目标分子-化学发光物质复合物。
最后，在适当的条件下，化学发光物质发生催化反应，产生可见光或荧光信号，从而实现对目标分子的检测。
二、化学发光标记生物素的应用化学发光标记生物素在生物医学研究和临床诊断中得到广泛应用。
以下是几个常见的应用领域：1. 免疫分析：化学发光标记生物素技术可以用于检测抗体和抗原的相互作用，从而实现对疾病标志物的检测。
例如，在HIV感染的诊断中，可以使用化学发光标记生物素技术检测HIV抗体的存在。
2. 基因检测：化学发光标记生物素技术可以用于检测基因的存在和表达水平。
例如，在PCR扩增反应中，可以使用化学发光标记生物素技术检测扩增产物的存在与否，从而实现基因的定性和定量分析。
3. 药物筛选：化学发光标记生物素技术可以用于评估药物与靶标的相互作用强度。
通过将药物与生物素结合，然后与靶标结合，可以利用化学发光技术检测药物-靶标复合物的形成情况，从而评估药物的亲和力和选择性。
三、化学发光标记生物素的优势化学发光标记生物素技术相比传统的染色标记技术具有以下优势：1. 高灵敏度：化学发光标记生物素技术可以实现对目标分子的高灵敏度检测，因为化学发光信号产生的过程具有高放大倍数。
Procedure for Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA)This kit has been optimized for use with polyacrylamide mini (8 × 8 × 0.1cm) gels. For larger gels, adjust electrophoresisconditions and detection reagent volumes accordingly.A. Plan Binding Reactions•Understanding the Control EBNA SystemInclude a complete set of three reactions each time an EMSA is performed. These reactions and expected results for the Control Epstein-Barr nuclear antigen (EBNA) System, which is included with the kit, are described in Table 1.andbyDemonstrates that the signal shift observed in #2 can beprevented by competition from excess non-labeled DNA,specificaccording to Table 2. Each 20 µl binding reaction contains 20 fmol of Biotin-EBNA Control DNA. Reactions were electrophoresed, transferred and detected according to the steps in Sections B-G of this protocol. If the kit is being used for the first time, perform the Control EBNA System reactions to verify that the kit components and overall procedure are working properly.B．准备与预电泳1.用0.5XTBE准备非变性的聚丙烯酰胺凝胶或预制的DNA阻滞凝胶。
Vol．31高等学校化学学报No．112010年11月CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 2184 2189生物素修饰纳米银探针的制备及在蛋白芯片可视化检测中的应用李慧1，钟文英1，许丹科2（1．中国药科大学基础部分析化学教研室，南京210009；2．南京大学化学化工学院，南京210093）摘要采用寡核苷酸为连接分子成功制备了生物素修饰的纳米银探针，并建立了纳米银催化同种金属离子的特异性还原显色反应．实验采用蛋白质芯片为分析工具，以微量人IgG 为蛋白分析模式研究了纳米银探针/氢醌/硝酸银体系的显色分析性能．实验结果表明，上述检测体系可对160fg 100pg 含量范围内的微量蛋白显示可视化结果，蛋白点的灰度值与其浓度具有良好的相关性，最小蛋白检测量可达160fg．同时还开展了与商品化链亲和素纳米金/银增强试剂显色方法的对比实验，结果表明，本法制备的探针对蛋白的检出限降低了约40倍，且具有存储稳定、反应快速等优点．关键词生物素修饰纳米银；氢醌/硝酸银；微量蛋白检测；蛋白芯片中图分类号O657．39文献标识码A 文章编号0251-0790（2010）11-2184-06收稿日期：2010-03-12．基金项目：国家“九七三”计划项目（批准号：2006CB910803）和蛋白质组学国家重点实验室开放课题资助．联系人简介：钟文英，女，博士，副教授，主要从事量子点的合成及分析应用和蛋白芯片检测新技术研究．E-mail ：wyzhong@cpu．edu．cn许丹科，男，博士，教授，主要从事生物阵列传感器件及蛋白质芯片领域的研究．E-mail ：xudanke@nju．edu．cn 随着纳米材料科学的发展，研究具有检测生物分子独特功能的纳米试剂已成为纳米材料研究的前沿．其中纳米金已经被广泛应用于免疫分析［1］、免疫层析［2］及显色反应等领域．此外，纳米金也被进一步用于催化银增强显色反应研究［3 7］．近年来，具有优良光学特性的纳米银正被越来越多地应用于蛋白质［8］和DNA ［9 11］等生物分子的检测分析［12，13］．纳米银具有摩尔消光系数高、表面增强拉曼散色效应强和催化活性好等独特的物理化学性能［8］，但其良好的催化显色特性并未见应用于微量蛋白的检测．文献［14］报道，在金属纳米颗粒上催化还原同种金属离子具有较好的灵敏度，如在纳米金上采用金增强试剂比采用银增强试剂检测蛋白质的灵敏度更高．基于此，本文开展了纳米银表面催化还原银离子的蛋白显色检测方法的研究．通过以蛋白芯片分析为模式进一步研究了纳米银探针高灵敏、快速检测微量蛋白的可能性．微量蛋白通过微阵列点样仪固定于醛基修饰的载玻片表面，依次加入的生物素标记的羊抗人IgG 、亲和素以及生物素修饰纳米银探针/氢醌/硝酸银检测试剂可与微量蛋白发生特异性的显色反应．实验对可能影响可视化检测效果的探针和氢醌/硝酸银浓度以及相关反应条件进行了优化，并将所建立的方法与商品化的纳米金/银增强显色试剂的分析结果进行了系统比较，对此方法的优势进行了探讨．1实验部分1．1材料、试剂与仪器醛基修饰的载玻片（上海百傲科技有限公司），生物素标记的羊抗人IgG （Bio-gahIgG ，美国KPL 公司），亲和素标记的胶体金（SA-AuNPs ）和银增强试剂A ，B （美国Sigma 公司），寡核苷酸PA ［5'SH-（CH ）6-AAAAAAAAAAAAAAA3'-Biotin ］（上海生工生物工程公司）；牛血清白蛋白（BSA ）、人IgG 及1ˑPBS （137mmol /L NaCl +2.7mmol /L KCl +10mmol /L +Na 2HPO 4·12H 2O +2mmol /L KH 2PO 4）均购自南京布克生物有限公司，氢醌（分析纯，南京化学试剂有限公司），硝酸银（分析纯，上海申博化工有限公司），硼氢化钠（分析纯，天津市化学试剂研究所），吐温-20（天津市科密欧化学试剂开发中心）．微阵列点样仪（博奥生物技术有限公司），Scanmaker i900型扫描仪，LuxScan3．0芯片图像分析软件（北京博奥生物技术有限公司），JEM-2100型透射电子显微镜（日本JEOL 公司）．1．2实验步骤1．2．1银纳米粒子的制备参照文献［15］的方法，在冰浴条件下，将40mL 2mmol /L 的硝酸银溶液逐滴加入至80mL 3mmol /L 硼氢化钠溶液中，不断搅拌至反应完全，继续搅拌至室温，得到纳米银溶液，常温保存．1．2．2生物素修饰银纳米粒子探针的制备参照文献［16］的方法，将1mL 纳米银溶液与10μmol /L 寡核苷酸PA 混合放置18h ，加入122μL 1ˑPBS ，静置6h 后，加入2mol /L NaCl 22μL ，然后每隔2h 加入2mol /L NaCl 21μL 至NaCl 的终浓度为0.1mol /L．放置48h 后，取600μL 液体离心3次（15min /次，转速为15000r /min ），沉淀用200μL 0.1mol /L PBS （0.1mol /L NaCl +0.1ˑPBS ）重悬，制得Bio-AgNPs 探针．1．2．3蛋白芯片的制备以牛血清白蛋白作为阴性对照蛋白，生物素标记的羊抗人IgG 为阳性对照蛋白，6个不同浓度的人IgG （抗原）作为样品蛋白，采用微阵列点样仪在醛基修饰的载玻片上点制18个4ˑ4蛋白点的阵列（即18个反应池，每个反应池里是一个4ˑ4的小阵列），点样量约为10nL /点；于37ħ放置2h ，4ħ放置过夜；使用前进行封闭（25μL 10mg /mL BSA ，封闭1h ）和清洗处理［1ˑPBST （1ˑPBS +0.05%Tween ）清洗2次，5min /次，氮气吹干］．1．2．4蛋白芯片的分析检测在制备好的蛋白芯片上加入5μg /mL 生物素标记的羊抗人IgG 25μL ，反应1h ，以1ˑPBST 清洗3次，加入25μL 10μg /mL SA 反应45min ，用1ˑPBST 清洗3次，加入V （Bio-AgNPs ）ʒV （0.1mol /L PBS ）=1ʒ20的25μL 检测探针反应30min ，用1ˑPBST 清洗3次，0.1mol /L PBN （0.1ˑPBS +0.1mol /L NaNO 3）清洗1次除去氯离子，干燥后加显色剂．常温下，氢醌/硝酸银反应5min ，银增强试剂反应10min．采用LuxScan3.0芯片图像分析软件采集扫描数据（文中所有的图像均用此软件处理），数据处理用灰度值进行比较．2结果与讨论与经典的酶联免疫分析反应［17］相比，基于纳米材料的催化显色反应具有试剂相对稳定及易于合成等优点．纳米金的银增强显色反应已被广泛应用于组织化学［18，19］与蛋白芯片［3 6］的图像分析中，但将其用于蛋白质检测时检出限未见明显降低．为了进一步降低检出限，本文自行设计合成了银纳米探针及显色试剂，建立了蛋白芯片上检测微量蛋白的方法，其分析流程如图1所示．Fig．1Schematic illustration of Bio-AgNPs-conjugated antibody recognition and signal amplificationwith hydroquinone /Ag +2．1纳米银探针的修饰及TEM 分析文献［9 11］报道的纳米银采用5'端修饰巯基的寡核苷酸作为探针，通过与寡核苷酸的杂交以检测目标寡核苷酸片段．本法以寡核苷酸PA 为连接分子，在寡核苷酸的5'端与3'端分别修饰巯基与生，5'端的巯基与纳米银形成稳定的配位结合，3'端的生物素特异性结合链亲和素．同时，在纳5812No．11李慧等：生物素修饰纳米银探针的制备及在蛋白芯片可视化检测中的应用Fig．2TEM image of Bio-AgNPs米银催化氢醌/硝酸银时还要利用寡核甘酸磷酸基团的负电性及其具有一定长度的特性．纳米银寡核苷酸在0.1mol /L PBS （pH =7）缓冲液中能稳定存在．图2为生物素修饰纳米银的TEM 图．从图2可见，所制备的生物素修饰的银纳米粒子的平均粒径为（17.5ʃ3.3）nm ，粒径分布为14.220.8nm．2．2氢醌和硝酸银显色剂浓度的选择氢醌和硝酸银反应的原理如下［20］：2AgNO 3+C 6H 4（OH ）→ 2CO （CHCH ）2CO +2HNO 3+2Ag ↓氢醌是常用显影剂，其浓度为1.82mmol /L．氢醌、银离子及缓冲液作为显色剂常被用于组织免疫化学［18，19，21］和蛋白芯片［3 6］研究，可被纳米金标记物特异性催化而显色．此显色剂的缺点在于，在缓冲溶液的作用下，氢醌和银离子的自身氧化还原反应会导致样品点周围的背景升高，因此选择氢醌和银离子在水溶液（pH =7）的环境下反应以减少背景信号．为考察此反应中硝酸银的合适浓度，将1mg /mL BSA 和不同浓度的链亲和素固定在醛基修饰的载玻片上，将氢醌与不同浓度的硝酸银（182，18.2和1.82mmol /L ）等体积混合后加到蛋白芯片反应池中反应．扫描检测结果显示，浓度为18.2mmol /L 的硝酸银与等体积氢醌混合后得到的信噪比最大，因此选择硝酸银浓度为18.2mmol /L ，氢醌浓度为1.82mmol /L．2．3蛋白芯片反应条件的优化2．3．1链亲和素（SA ）浓度与生物素修饰纳米银（Bio-AgNPs ）浓度的优化固定1mg /mL BSA 和不同浓度的生物素标记的羊抗人IgG ，固定抗体的浓度分别为32，160和800ng /mL 以及4，20，100和500μg /mL ，依次加入10μg /mL SA 和Bio-AgNPs 探针［V （Bio-AgNPs ）ʒV （0.1mol /L PBS ）=1ʒ20］，其余反应条件参照芯片分析过程．扫描结果显示，固定抗体浓度低于800ng /mL 的抗体点没有信号，随着抗体浓度的增加，其灰度值随之增加（芯片扫描图见图3）．Fig．3Schematic illustration （A ）and actual images （B ）of selecting concentration of SA and Bio-AgNPs10μg /mL SA ，V （Bio-AgNPs ）ʒV （PBS ）=1ʒ20．a ．1mg /mL BSA ；b ．32ng /mL Bio-gah-IgG ；c ．160ng /mL Bio-gah-IgG ；d ．800ng /mLBio-gah-IgG ；e ．4μg /mL Bio-gah-IgG ；f ．20μg /mL Bio-gah-IgG ；g ．100μg /mL Bio-gah-IgG ；h ．500μg /mL Bio-gah-IgG．选择灰度值中等强度的抗体固定量（20μg /mL ）来优化SA 和Bio-AgNPs 的浓度，图4（图4的偏差来源于2次测量结果的平均值）说明了当抗体固定浓度为20μg /mL 时，不同SA 浓度（100，10和1μg /mL ）与不同稀释倍数的Bio-AgNPs ［V （Bio-AgNPs ）ʒV （0.1mol /L PBS ）分别为1ʒ10，1ʒ20和1ʒ40］的芯片信号变化（样品点信号值/背景值）关系．当SA 浓度为100μg /mL 时，1：10的探针产生的背景高，信噪比低，1ʒ20和1ʒ40的探针产生的信噪比高，但1ʒ20探针的偏差大；当SA 浓度为10μg /mL 时，1ʒ10，1ʒ20和1ʒ40的探针浓度产生的信噪比差别不大，其中1ʒ20信号产生的偏差最小；当SA 浓度为1μg /mL 时，信噪比降低．综合上述结果，选择10μg /mL SA 和1ʒ20（体积比）Bio-AgNPs 作为以6812高等学校化学学报Vol．31下实验的分析条件．Fig．4Selecting concentration of SA andBio-AgNPs a ．100μg /mL SA ；b ．10μg /mL SA ；c ．1μg /mL SA．V （Bio-AgNPs ）ʒV （PBS ）：Ⅰ．1ʒ10；Ⅱ．1ʒ20；Ⅲ．1ʒ40．Fig．5Selecting concentration of Bio-goat anti human IgGa ．Signal intensity ；b ．backgroud intensity．ρ（Bio-Goat anti Human IgG ）/（ng ·mL －1）：Ⅰ．50000；Ⅱ．5000；Ⅲ．500；Ⅳ．50；Ⅴ．5．2．3．2生物素标记的抗体浓度的筛选按蛋白芯片制备方法，选择人IgG 固定量为2μg /mL ，加入不同浓度的生物素标记的羊抗人IgG （50和5μg /mL 以及500，50和5ng /mL ，空白），其余反应条件参照芯片分析过程．样品点信号强度与生物素标记的羊抗人IgG 浓度的关系如图5所示（图5的偏差来源于6次测量结果的平均值）．扫描结果显示，当生物素标记的羊抗人IgG 浓度为50μg /mL 时，背景较高，图像不清晰；当生物素标记的羊抗人IgG 浓度为5μg /mL 以及500和50ng /mL 时，信号强度高，背景低，且5μg /mL 时信号最强，信号的偏差最小；当浓度为5ng /mL 时，信号明显降低．综合以上结果，选择5μg /mL 作为生物素标记的羊抗人IgG 的最佳浓度．2．4纳米银/氢醌/硝酸银试剂在蛋白芯片上的检测性能将1mg /mL BSA 和浓度为16，80和400ng /mL 以及2，10和50μg /mL 的人IgG ，50μg /mL Bio-Fig．6Detection of IgG using Bio-AgNPs a ．Linear relationship between IgG concentration and relative grayscale using hydroquinone /Ag +as color reagent ；b ．linear re-lationship between IgG concentration and relative Grayscale using silver enhancer as color reagent．gahIgG 制备成蛋白芯片，依照蛋白芯片分析方法检测、扫描，结果如图6所示．氢醌/硝酸银作为显色剂时，人IgG 浓度在16ng /mL 10μg /mL 之间，IgG 浓度与相对灰度值的对数（样品点信号值/阳性点）具有较好的相关性（如图6曲线a 所示，图6偏差均来源于6次测量结果的平均值），检出限为16ng /mL （样品点信号平均值/阳性点信号平均值约等于背景信号平均值/阳性点信号平均值+3SD ，则此样品点浓度为最低检测量），与文献［22］报道的利用芯片技术检测IgG 的方法相比，本文建立的显色法检测IgG 具有方法简单、直接且所需样品少等特点，检测浓度可低至16ng /mL ；银增强试剂作为显色剂时，IgG 浓度在80ng /mL 50μg /mL 之间具有较好的相关性（如图6曲线b 所示）．实验结果表明，氢醌/硝酸银的显色效果要优于银增强试剂，主要表现在两个方面：（1）在常温下（25ħ），前者的显色时间更短，只需5min ，而后者需要10min ，且前者产生的信号比后者强（IgG 浓度在16ng /mL 10μg /mL 范围内）；（2）前者的背景比后者低．这是由于两者反应的原理稍有不同所致，以氢醌/硝酸银为显色剂仅仅是利用纳米粒子的催化特性，当有银纳米粒子存在时，纳米粒子起催化作用可加快氢醌和硝酸银的反应，使银离子在纳米粒子表面迅速被还原而呈现显著的黑色；而没有纳米银粒子存在时，氢醌和硝酸银反应缓慢，被还原的银也较少，信号点周围的背景较低．当采用银，它被纳米粒子催化显色的同时，在缓冲溶液中其自身也较快地发生氧化还原反7812No．11李慧等：生物素修饰纳米银探针的制备及在蛋白芯片可视化检测中的应用应，使信号点周围产生黑色沉淀，即背景高．2．5与商品化链亲和素纳米金试剂的比较链亲和素修饰纳米金与银增强试剂的显色结果显示，当人IgG 浓度在625ng /mL 20μg /mL之间Fig．7Detection of IgG using SA-AuNPs a ．Linear relationship between IgG concentration and relative grayscale using hydroquinone /Ag +as color reagent ；b ．linear re-lationship between IgG concentration and relative grayscale using silver enhancer as color reagent．时，人IgG 浓度与相对灰度值的对数（样品点信号值/阳性点）具有相关性（如图7曲线b 所示，图7偏差均来源于6次测量结果的平均值）；纳米金与氢醌/硝酸银的显色结果显示，当人IgG 浓度在625ng /mL 20μg /mL 之间时与相对灰度值的对数具有相关性（如图7曲线a 所示）．实验结果表明，显色剂对纳米金探针的显色能力较弱．其主要的原因有两方面：（1）两种探针修饰结构不同，导致两种纳米粒子的催化作用不同．纳米银是由具有一定长度的寡核苷酸修饰的，显色剂可以和纳米粒子的整个表面接触，因而纳米粒子可以充分发挥其催化作用；而纳米金是利用生物大分子链亲和素修饰的，部分表面被占据，无法起到催化作用，因而催化能力较低；（2）寡核苷酸上有很多带负电的磷酸基团，能静电吸附Ag +，使Ag+快速、大量地聚集在纳米银粒子表面被催化还原而迅速显色；且在反应的过程中，1分子链亲和素可以和3分子纳米银探针反应，增加了探针的结合量．所以此种修饰的银纳米粒子的催化特性更优良．为了对纳米金和纳米银探针及其两种显色剂进行比较分析，上述实验可以分为以下4组：（1）生物素修饰纳米银催化氢醌/硝酸银显色（结果如图6曲线a 所示）；（2）生物素修饰纳米银催化银增强显色（结果如图6曲线b 所示），（3）链亲和素纳米金催化氢醌/硝酸银显色（结果如图7曲线a 所示）；（4）链亲和素纳米金催化银增强显色（结果如图7曲线b ）．综合图6和图7的结果可以发现，实验（1）和（2）的检出限低于实验（3）和（4），说明本实验中修饰状态下的纳米银催化特性强于纳米金．此外，实验（1）的最低检测量及图像背景均低于实验（2），且显色时间也比实验（2）短，说明氢醌/硝酸银作为显色剂的效果强于商品化的银增强试剂．综上所述，本实验基于探针修饰方法的创新及显色剂的优化，设计合成了生物素修饰纳米银探针及氢醌/硝酸银显色试剂，并成功地实现了对蛋白芯片上微量蛋白的灵敏、可视化检测．与商品化的链亲和素纳米金检测探针及银增强显色试剂相比，本文报道的检测试剂具有更高的检测灵敏度（检测灵敏度提高了约40倍），显色速度更快，且探针十分稳定，常温保存即可．参考文献［1］Deng X．Y．，Gao D．J．，Tian Y．，Chen Y．H．，Yu A．M．，Zhang H．Q．，Wang X．H．，Chen Y．．Chem．Res．Chinese Universities［J ］，2010，26（1）：23—26［2］Liu B．H．，Tsao Z．J．，Wang J．J．，Yu F．Y．．Anal．Chem．［J ］，2008，80：7029—7035［3］Liang R．Q．，Tan C．Y．，Ruan K．C．．J．Immunol．Methods ［J ］，2004，285：157—163［4］Duan L．L．，Wang Y．F．，Li S．S．C．，Wan Z．X．，Zhai J．X．．BMC Infectious Diseases ［J ］，2005，5：53［5］Guo H．S．，Zhang J．N．，Yang D．，Xiao P．F．，He N．Y．．Colloid．Surf．B ［J ］，2005，40：195—198［6］Gupta S．，Huda S．，Kilpatrick P．K．，Velev O．D．．Anal．Chem．［J ］，2007，79：3810—3820［7］Taton T．A．，MirkinC．A．，Letsinger R．T．．Science ［J ］，2000，289：1757—1760［8］Wei H．，Chen C．G．，Han B．Y．，Wang E．K．．Anal．Chem．［J ］，2008，80：7051—7055［9］Thompson D．G．，Enright 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bio-AgNPs were employed to couple with the protein via stripavaidin labeled anti-human IgG．The results show that the linear relationship of protein concen-tration is between 160fg and 100pg and the limit of detection is 160fg （S /N =3）．Compared with the method using SA-labeled gold nanoparticle or silver enhancement ，the sensitivity of this method is increased about 40fold．The presented method shows its advantages including high sensitivity ，stability and rapidity．KeywordsBiotinylated silver nanoparticle （Bio-AgNP ）；Hydroquinone /AgNO 3；Micro-protein detection ；Protein chip（Ed．：A ，G ）9812No．11李慧等：生物素修饰纳米银探针的制备及在蛋白芯片可视化检测中的应用。
⽣物素标记EMSA探针-AP1⽣物素标记EMSA探针－AP1产品简介：⽣物素标记EMSA探针－AP1是⽤于EMSA(也称gel shift)研究的并经⽣物素(Biotin)标记的AP1 consensus oligonucleotide。
这个⽣物素标记的双链寡核苷酸含有公认的AP1结合位点，可以⽤作EMSA研究时的探针。
AP1 consensus oligo的序列如下：5’-CGC TTG ATG ACT CAG CCG GAA-3’3’-GCG AAC TAC TGA GTC GGC CTT-5’本⽣物素标记EMSA探针已经过纯化，可以直接⽤于EMSA结合反应。
本⽣物素标记EMSA探针可以和碧云天的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)配套使⽤。
⼀个包装的⽣物素标记探针可以进⾏约200-400个样品的EMSA检测。
保存条件：-20℃保存，⼀年有效。
注意事项：避免加热到40℃以上，温度过⾼会导致双链DNA探针解聚成单链。
⽽单链⽆法⽤于EMSA研究。
对于基于⽣物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考碧云天的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)的使⽤说明。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴⼀次性⼿套操作。
使⽤说明：1.本⽣物素标记EMSA探针⽤于EMSA结合反应时，参考如下步骤进⾏：A.如下设置EMSA结合反应：阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7-7.5µl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2µl 细胞核蛋⽩或纯化的转录因⼦ 0µl ⽣物素标记探针 0.5-1µl 总体积 10µl探针冷竞争反应：Nuclease-Free Water 4-4.5µl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2µl 细胞核蛋⽩或纯化的转录因⼦ 2µl 未标记的探针 1µl ⽣物素标记探针 0.5-1µl 总体积 10µlSuper-shift反应：Nuclease-Free Water 4-4.5µl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2µl 细胞核蛋⽩或纯化的转录因⼦ 2µl ⽬的蛋⽩特异抗体 1µl ⽣物素标记探针 0.5-1µl 总体积 10µl 样品反应：Nuclease-Free Water 5-5.5µl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2µl 细胞核蛋⽩或纯化的转录因⼦ 2µl ⽣物素标记探针 0.5-1µl 总体积 10µl突变探针的冷竞争反应：Nuclease-Free Water 4-4.5µl EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X) 2µl 细胞核蛋⽩或纯化的转录因⼦ 2µl 未标记的突变探针 1µl ⽣物素标记探针 0.5-1µl 总体积 10µl注：⽣物素标记EMSA探针的推荐⽤量为每个反应0.5微升，如果检测出来的⽬的蛋⽩的EMSA条带偏弱，可以适当加⼤⽣物素标记EMSA探针的⽤量⾄0.75微升或1微升。
生物素标记核酸方法引言：生物素标记核酸方法是一种常用的实验技术，用于检测、定位和研究核酸的功能和分布情况。
生物素（Biotin）是一种小分子化合物，具有较强的亲和力和特异性，可以与酶和抗体等蛋白质结合，从而实现对核酸的标记和检测。
本文将介绍生物素标记核酸的原理、方法和应用。
一、生物素标记核酸的原理生物素标记核酸的原理基于生物素与亲和剂的结合。
生物素能够与亲和剂如酶、抗体等特异性结合，形成稳定的复合物。
通过将亲和剂标记在生物素上，就可以实现对核酸的标记。
常用的生物素标记方法包括生物素标记末端法、生物素标记引物法和生物素标记缺口法等。
二、生物素标记核酸的方法1. 生物素标记末端法生物素标记末端法是一种将生物素标记在核酸的末端的方法。
首先，将核酸末端修复，以便连接生物素分子。
然后，在核酸末端上引入生物素分子，通过特定的酶或化学试剂进行连接。
最后，通过适当的检测方法，如酶标测定法或荧光探针法，可以检测到生物素标记的核酸。
2. 生物素标记引物法生物素标记引物法是一种将生物素标记在核酸引物上的方法。
在引物的适当位置引入生物素分子，并通过特定的酶或化学试剂进行连接。
接下来，使用生物素标记的引物与待检测的核酸进行反应，形成生物素标记的核酸引物-目标核酸复合物。
最后，通过适当的检测方法，如PCR、电泳或原位杂交等，可以检测到生物素标记的核酸。
3. 生物素标记缺口法生物素标记缺口法是一种通过特定酶切割核酸，形成生物素标记的缺口的方法。
首先，在核酸的适当位置引入生物素分子，并通过特定的酶或化学试剂进行连接。
然后，使用特定酶切割核酸，使核酸链断裂形成缺口，并在断裂的位置上引入生物素标记。
最后，通过适当的检测方法，如原位杂交或荧光显微镜观察等，可以检测到生物素标记的核酸。
三、生物素标记核酸的应用1. 分子生物学研究生物素标记核酸方法在分子生物学研究中广泛应用。
例如，通过生物素标记的引物进行PCR扩增，可以检测和定量目标核酸的存在和表达水平。
五大化学发光标记材料原理详解及检测应用发光标记技术是一种重要的生物化学分析方法，广泛应用于生物学、医学、环境科学等领域。
化学发光标记材料是发光标记技术的核心组成部分，它能够通过化学反应产生发光信号，实现目标物的高灵敏度、高选择性检测。
本文将详细介绍五大化学发光标记材料的原理及应用。
1.化学发光酶标记材料化学发光酶标记材料是一种常用的发光标记材料，其原理是利用酶催化底物的氧化还原反应产生激发态的中间体，进而释放出光子能量。
常用的化学发光酶包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
这些酶标记物具有高灵敏度、高选择性、稳定性好等特点，广泛应用于免疫分析、分子生物学等领域。
2.化学发光荧光素标记材料化学发光荧光素标记材料是另一种常见的发光标记材料，其原理是利用荧光素催化底物的化学反应产生发光。
常用的化学发光荧光素包括二甲基二氯化苯醚（DAB）、萤光素（luciferin）等。
这些荧光素标记物具有较高的灵敏度、稳定性强、信号倍增等特点，广泛应用于细胞成像、荧光定量PCR等领域。
3.量子点标记材料量子点是一种具有独特光学和电学性质的纳米结构材料，其原理是在半导体材料中，电子在受到能量激发后，跃迁到能带的价带，产生发光。
量子点标记物具有窄的发射光谱、较长的寿命、高荧光稳定性等特点，可以实现多种目标物的多通道检测，广泛应用于生物分析、单细胞分析等领域。
4.金纳米棒标记材料金纳米棒是一种形状特殊的金纳米颗粒，其原理是金纳米棒除了具有金颗粒的性质外，还具有长轴吸收特征峰，可以实现近红外（NIR）光激发产生短波长光的发射。
金纳米棒标记物具有较高的灵敏度、较长的寿命等特点，广泛应用于组织成像、生物芯片等领域。
5.荧光共振能量转移（FRET）标记材料荧光共振能量转移是一种特殊的能量转移过程，其原理是通过荧光捕捉体与能量给体之间的非辐射能量转移，实现荧光信号的转换。
常用的FRET标记物包括生物素-亲合素、DNA探针等。
生物素标记的应用实验原理1. 引言生物素标记是生命科学研究中常用的一种实验技术，在生物学领域中有着广泛的应用。
本文将介绍生物素标记的原理、实验步骤以及常见应用领域。
2. 生物素标记的原理生物素标记是利用生物素与亲生物素的高亲和力进行标记的一种技术。
生物素是一种小分子，能够与亲生物素结合蛋白质相互作用。
亲生物素是一种对生物素具有高亲和力的结合剂，通过与生物素结合形成稳定的复合物。
3. 生物素标记的实验步骤生物素标记实验通常包括以下步骤：3.1 标记反应首先，需要准备好待标记的分子，可以是蛋白质、核酸或其他小分子。
然后，将生物素和亲生物素标记剂一起与待标记的分子进行反应。
标记反应可以通过化学交联、生物合成或标记基团的化学反应等方式进行。
3.2 纯化和检测完成标记反应后，需要对反应产物进行纯化和检测。
纯化可以使用凝胶过滤、柱层析等方法进行。
检测可以利用电泳、质谱等技术进行，以确保标记的分子具有高纯度和理想的标记效果。
3.3 应用实验标记完成的分子可以用于各种生物学实验中。
常见的应用实验包括免疫组化、荧光染色、原位杂交等，这些实验可以在细胞水平或组织水平上观察到标记分子的位置和定位。
4. 生物素标记的应用领域生物素标记在生命科学研究中有着广泛的应用。
下面将介绍几个常见的应用领域：4.1 蛋白质研究生物素标记可以用于蛋白质的表达和纯化过程中，通过标记蛋白质使其易于检测和纯化。
此外，生物素标记还可以用于蛋白质间相互作用的研究，通过标记不同蛋白质使其易于检测和定位。
4.2 基因组学研究生物素标记可以用于DNA或RNA的标记，用于基因组学研究中的测序、杂交等实验。
标记后的DNA或RNA可以用于检测特定序列、寻找基因突变等。
4.3 细胞信号转导研究生物素标记可以用于研究细胞信号转导通路中的蛋白质相互作用和定位。
通过标记信号蛋白，可以研究其在信号传递过程中的活性、相互作用和定位。
4.4 药物研发生物素标记可以用于药物研发中的药物靶点筛选和药物活性评价。
