Agilent 1290 超高效液相色谱仪标准操作规程

简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。

其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。

2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。

3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。

4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。

5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。

6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。

7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。

8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。

注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。

- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。

- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。

- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。

- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。

- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作安捷伦高效液相色谱仪 (Agilent High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC) 是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于化学、生物、药学等领域中的分析和研究工作。

为了确保正确、可靠地操作 HPLC 仪器，以下是一些规范操作的步骤和注意事项。

1.仪器准备-开启仪器电源，并等待仪器自检完成。

-检查仪器的梯度系统、进样系统、柱温控制系统、检测系统等是否正常。

-检查注射器、柱、检测器等是否清洁干净，并按需更换柱筒。

2.试剂准备-准备所需的溶剂、标准品和样品，并确保其纯度和浓度符合实验要求。

-制备规范的稀释液或内标溶液，以便进行质量控制和校准。

3.方法设置-设置流速、梯度、柱温、检测器波长等实验参数。

-设定样品进样量、进样方式和柱温控制方式。

-根据实验要求选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）。

4.柱的装置和平衡-根据实验需求选取合适的柱，并将柱安装在柱底座上。

-将导线连接到柱温控制系统，并设置柱温。

-选择适当的流动相溶剂，用它们预平衡柱，以确保柱达到稳定状态。

5.校正与质控-使用标准品进行系统灵敏度和线性范围的校正。

-定期进行质控分析，以检验仪器的准确性和精确性。

-根据需要，进行合适的质量控制和校正操作。

6.样品进样-根据实验要求选择合适的进样方式（如自动进样器、手动进样器等）。

-通过进样器吸取样品，并确保进样量准确无误。

-进行一定的进样准备，如过滤、稀释等。

7.开始分析-确保所有仪器参数正确设置，样品进样准备完毕，并进行柱的平衡。

-点击“开始”按钮，启动分析程序。

-监测分离曲线或结果，确保分析结果的准确性与可靠性。

8.数据分析与存储-持续监测和记录实时分析结果。

-对结果进行后处理和数据分析，如绘制色谱图、峰面积计算等。

-存储数据，以备后续分析和查阅。

9.仪器维护与清洁-使用完毕后，关闭仪器并断开电源。

-清洗注射器和柱等关键部位，以防止残留的样品引起交叉污染。

Agilent高效液相色谱仪标准操作程序1.目的：建立一个高效液相色谱的标准操作程序。

2.范围：适用于Agilent高效液相的使用。

3.责任：使用Agilent高效液相的化验员。

4.程序4.1工作环境实验室温度为20～27℃，温度变化<3℃/hr，相对湿度<80%，液相色谱仪工作台，长2米、宽0.8米、承重大于80公斤，离墙距离0.3米以上。

单相交流220V，（+5%～10%），50～60Hz，有单独的良好接地。

配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。

4.2使用前的准备4.2.1二次蒸馏水，（建议用0.45微米水相滤膜过滤）；甲醇或乙晴（色谱纯），（建议用0.45微米有机相滤膜过滤）；其他样品所需流动相，（都需经过0.45微米滤膜过滤）。

将上述溶剂放入超声波池，除去气泡，方可使用。

4.2.2把流动相放入溶剂瓶中，打开purge阀，单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：5ml/min，单击OK；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击pump control选项，选中ON，单击OK，则系统开始purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续purge，直到所有要用通道无气泡为止；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：1.0ml/min，关闭purge valve。

单击pump下的的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的体积，单击OK。

4.2.3进行样品前处理（稀释或溶解至所需浓度）。

4.3实验步骤4.3.1准备4.3.1.1开启Agilent 1100LC各模块电源。

4.3.1.2打开计算机，双击online图标。

4.3.1.3从"view"菜单中选择"method and run control"画面，单击"view"菜单中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"标志。

Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）操作规程1.目的建立高效液相色谱仪（四原泵）使用维护保养标准操作规程，确保测量结果准确、可靠。

2.适用范围本SOP适用于Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）的使用。

3.责任者化验员应严格遵照该操作规程，管理方负责监督本规程的实施。

4.定义无5.规程5.1准备在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相、供试品及对照品。

流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下，供试品溶液和对照品溶液均用0.45μm的膜过滤。

5.2开机5.2.1打开电脑；5.2.2打开1200各模块电源；5.2.3等待各模块就绪后，双击桌面上的工作站图标，进入化学工作站；5.2.4旋开泵上的purge阀（逆时针转动，旋松即可，不要转动太多。

），将流速设置为5.0ml/min，将准备排气的管道的流量设置为100%（如：流路A比例则是100%-B-C-D），在工作站中打开泵，则开始排除管路中的气泡（时间约为5min）；其他通道同理操作。

5.2.5排气完成后，关闭purge阀（顺时针旋转，旋紧即可，不必旋的太紧。

）。

5.2.6连接色谱柱，用适宜的流动相冲洗色谱柱。

如果使用有盐的流动相，要先用80%的水过渡。

5.2.7更换方法规定的流动相。

冲洗约30分钟。

5.3设置方法5.3.1设置新方法5.3.1.1（自动进样器参数设定：单击工作站中“进样针”图标，选择“设置进样器”（一般选择洗针进样，清洗瓶位置一般为100位），单击“确定”按钮即可；5.3.1.2泵参数设定（四元泵）：单击工作站中“泵”图标，选择“设置泵”。

①在“流速”处输入流速（如1.0ml/min）；②在“停止时间”处设定所需采集时间；③在时间表中插入时间列表，编辑梯度；④在压力限处可设定最大耐高压，以保护色谱柱，单击“确定”按钮即可；5.3.1.3检测器参数的设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如280nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min（2s）。

Agilent1220 高效液相操作步骤开机步骤1 检查查看电源是否正常；查看废液是否正常；放置流动相。

2 开机打开仪器电器，无先后顺序。

3 开阀打开泵的清洗阀，逆时针为打开。

切记！4 工作站打开电脑，进后操作系统；双击仪器控制面板图标；右键LC图标，点击打开。

5 控制点击[仪器][仪器状态]；进入仪器控制页面。

6 填充瓶右键泵选择填充瓶，按实际流动项的体积输入确定。

7 清洗柱塞杆右键泵的图标选择[控制]，在清洗柱塞杆处选择定期，一般设置为5min，0.2min。

8 清洗右键泵的图标选择打开，等待泵开启；再右键泵的图标选择[方法]，设置数量为5ml/min；A相100%冲洗5min，B相100%冲洗5min，使用哪一项就冲洗哪一项。

9 结束清洗每一项清洗好后将流量和溶剂配比改为清洗前的设置；顺时针关闭清洗阀。

10 清洗色谱柱如果需要冲洗色谱柱，在仪器状态下先关闭灯，用10%的甲醇冲洗30min，再用90%的甲醇冲洗30min，最后更改为方法的溶剂配比后关闭所有模板即可。

分析样品1 打开方法选择文件下的[打开][方法]；弹出文件浏览界面，从上部指定路经，下部双击选择，找到所需方法后双击打开，如果方法打开，窗口最上部显示方法名。

2 下载方法选择[控制][下载方法]；再选择[控制][仪器状态]，依次右键泵，柱温箱和检测器选择[打开]。

3 查看基线如果信号窗口不在，可选择[视图][在线信号]，调出窗口，可先点调整，再点上或下箭头放大缩小范围，一般设为0-500mAu，看基线是否走平。

4 单针进样待基线平稳后选择控制，单次运行，在弹出的窗口内输入样品ID，指定一个数据路经，主要输入样口名称，一般可增加个编号+样品名，编号排在前一次做样的后一位；在[样品瓶]后输入进样位置，点击开始。

5 序列进样点击[文件][新建][序列]；再点击[序列][编辑]在弹出的窗口中一列列选择并输入位置、方法名称、输入样口名称，编辑好列数后点击[文件]，保存序列，并起个数子序列名；可点击[序列][属性]，指定数据文件存入路经；最后点击[控制][运行序列]。

Angilent1290高效夜相色谱仪操作规程一：操作步骤1. 开机1.1 打开计算机，进入Windows XP画面。

1.2 打开Angilent1290高效夜相色谱仪各模块电源。

1.3 待各模块自检完成后，双击“仪器 1 联机”图标，进入工作站画面。

1.4 右键点击“泵”图标，点击“方法”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min，点击“确定”。

1.5 点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“启动”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

1.6 点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。

2. 数据采集方法编辑：2.1 开始编辑完整方法：2.1.2 方法信息：2.1.3 泵参数设定：2.1.4 自动进样器参数设定：2.1.5 柱温箱参数设定:2.1.6 VWD检测器参数设定:2.1.7 点击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入方法名，点击“确定”。

2.2 序列和数据采集2.2.1 在“序列”选项中选择“序列参数”，输入采集后数据的保存路径，点击确定。

3. 数据分析方法编辑:3.1 点击“仪器 1 脱机”图标进入数据分析界面。

3.2点击“调用数据文件的信号和光谱”图标，选出需要积分的文件。

3.3 积分：4. 打印报告:5. 关机:关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。

退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。

关闭Angilent1290高效夜相色谱仪各模块电源开关。

二、注意事项1. 溶剂过滤头每3天应清洗一次，清洗方法：金属溶剂过滤头：将溶剂过滤头放入装有超纯水的烧杯中，置入超声波中超声清洗5分钟；再用装有无水甲醇（AR）的烧杯中，置入超声波中超声清洗5分钟。

玻璃溶剂过滤头：将溶剂过滤头放入装有硝酸溶液（10mL水 + 30mL硝酸AR）中，浸泡2～3h，再用超纯水清洗干净。

检验人员能按规程正确使用仪器，确保仪器的准确性、精密度。

防止仪器损坏，延长使用寿命，保证仪器正常运行。

范围：适用于安捷伦1290 Infinity型高效液相色谱仪的使用、维护和保养。

责任：质量管理部。

程序：1.开机1.1 打开计算机，进入 Windows XP 画面。

1.2 打开Agilent 1290 Infinity HPLC 各模块电源。

1.3 待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与 Agilent 1290 Infinity HPLC 通讯。

1.4 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”、“系统视图”、“命令行”，使其命令前有“√”标志来调用所需的界面。

1.5 右键点击泵下面的瓶图标，选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶体积。

也可输入停泵的体积。

点击“确定”。

1.6 从菜单“视图”中，选中“在线信号”，选中“信号窗口1”，然后点击“改变…”钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。

(如同时检测二个信号，则重复，选中“信号窗口2”。

)2.排气2.1 首先在泵模块单击右键，在方法编辑中，泵的参数设置部分，选好需要排空的通道（保证是开的）。

2.2 右键点击仪器状态视图中泵的图标，选择控制。

2.3 勾上清洗，并且输入流量、时间、比例，开启“泵”、“清洗”功能，点击“确定”，就可以排空管道。

排空的时候阀会自动切换，无需人为介入。

2.4 当我们发现泵头里面有气泡出不来的时候，选择开启“注入”，然后点击确定。

此时泵会用很强烈的方式朝外泵液体，并持续 20 次自动停止。

3.编辑数据采集方法3.1 开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法…” 项，在方法编辑选项仅选择“仪器/采集”，点击“确定”，进图下一画面。

3.2 方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!），点击“确定”，进入下一画面。

3.3 进样方式选择根据自动进样器的类型，选择合适的进样方式，本机默认为“HipAls”。

Agilent 1200高效液相色谱仪标准操作程序1.目的使操作人员的操作步骤规范化.2.适用范围适用于仪器安装、调试、校准后正常状态下进行的操作.3.责任者质控科仪器分析员对此规程负责.4.规程4.1清洗液、流动相、封柱液预处理4.1.1所有清洗液、流动相、封柱液在使用前均需过滤、脱气以及混合均匀.4.1.2甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）、超净水、乙腈均需存放在棕色溶剂瓶中.4.1.3含有乙腈的溶液以及不含乙腈但含有较高比例的其他有机溶剂的溶液在过滤时需使用有机相微孔滤膜，其它溶液在过滤时需使用水相微孔滤膜.4.1.4存放清洗液、流动相、封柱液的溶剂瓶在每次装入溶液前需用少量过滤好的该溶液清洗数次.4.2接通电源,开启连机电脑,再接通仪器电源,仪器自检完毕，处于准备进行状态.双击桌面图标“仪器1联机”，打开Agilent 1200化学工作站，在左上角下拉框中选择“方法与运行控制”界面.显示如下图标：注意：一定要先双击“仪器1联机”图标，进入联机状态，方可双击“仪器1脱机”图标，同时进入脱机界面.否则，将无法联机.4.2泵4.2.1 准备清洗液并装入溶剂瓶中，将吸滤器放入瓶内.安装所需用柱子.4.2.3 将吹扫阀（即“Purge”阀）打开，单击泵图标，选择“设置泵”，将“流速”设置为3.00ml/min.选择清洗液所在通道（建议为A通道），单击“确定”，在“系统视图”中单击“启动”运行泵，泵运行10分钟后，观察压力，应小于10bar，若大于此压力，应更换purge阀滤芯，调节流速1.00ml/min.4.2.4关闭purge阀，观察柱压是否正常.4.2.5选择“控制”，在“用于泵密封垫清洗的泵”（Seal Wash）中选择“定期清洗”，“周期”设置为5min，“持续”设置为0.1min，同时观察试剂架中10%异丙醇是否充足，相应的废液瓶是否有充足空间.4.2.6 根据“柱使用记录中所规定的方法”清洗柱子约30分钟后，在“控制”组中的“泵”选项中选择“待机”，待系统压力降到10bar 以下后，更换流动相，在“控制”组中的“泵”选项中选择“启动”改用流动相平衡柱子，约30分钟后柱子处于平衡状态.设定所需流速，在“停止时间”中设定所需运行时间，在“后运行时间”设定所需后运行时间；选择“溶剂”项，设定各通道比例，单击“确定”.4.2.6 如进行梯度分析，在“设置泵”组中选择“时间表”，单击“追加”，根据具体方法进行时间和相应的参数设置.4.3 柱温箱4.3.1在系统视图中，单击柱温箱图标，并从菜单中选择“设置柱温箱”，设置“温度”选项，单击“确定”.4.3.2在实验开始时，用清洗液清洗柱子时，应同时开启柱温箱；在实验结束时，用清洗液清洗柱子时，应关闭柱温箱，让柱子随着清洗过程慢慢冷却.要避免到封柱过程结束后才关闭柱温箱，这会导致柱的寿命减短.4.4自动进样器4.4.1在系统视图中，单击自动进样器图标，从菜单“设置进样器”，在“进样”组中，选择“洗针进样”，清洗瓶通常设为“91”；在最优化中设为“无”.4.4.2 清洗瓶中的清洗剂通常为滤过的超净水，只需盖瓶盖，无需放置垫片.4.5可变波长检测器（VWD）4.5.1在系统视图中，单击检测器图标，并从菜单中选择“设置VWD信号”，在“信号”组中设置波长，在“峰宽（响应时间）”组中，单击下拉列表并选择“>0.1min（2s）”，单击“确定”.4.5.2在“控制”组中，选择关闭或打开氘灯.一般情况下，待到系统走流动相时即打开氘灯预热；分析结束时，用清洗液清洗柱子时，即时关闭氘灯.4.7“自动进样器”、“柱温箱”、“检测器”中的时间表设置均与“泵”一致.4.8 上述“自动进样器”、“泵”、“柱温箱”、“检测器”的相关参数设置完毕后可在主界面选择“方法”，选择“方法另存为”保存方法，以后使用时可选择“调用方法”.4.9 序列4.9.1在“方法和运行控制”视图中，单击主工具栏上的，切换至“序列”面板，点击“仪器控制”.4.9.2单击选择“序列参数”出现如下对话框：“操作者姓名”一般填写姓名的首字母集合；“数据文件”选择“自动”；子目录填写“xxyyzz-aaa”，其中xxyyzz为6位数的年月日组合，aaa为品名的首字母集合；“运行部分方法”选择“依据运行时选项表”；“等待时间”设置为0min；“未就绪超时”设置为0min；如该序列要走过夜，在“关闭”选择“序列运行后命令/宏”，如果所用的仪器为单元泵，选择“LAMPALL OFF”,如果所用的仪器为四元泵，选择“macro SHUTDOWN MAC,go”4.9.3单击“确定”.4.9.4单击“序列“面板，出现如下对话框，设定序列表.在“样品瓶“中输入样品瓶位置“1～99”；在样品样品名称中输入相应样品名称，具体参见附件一；在方法名称中输入相应的方法名称，具体参见附件二；在“进样次数/瓶”输入所需进样的次数；使用“插入”、“追加一行”和“剪切”按钮编辑序列行数，单击“确定”.4.9.5单击主界面上的“序列”，选择“保存序列”，保存所设置的序列.4.10 数据分析4.10.1在“视图”中选择“数据分析”将主界面切换到数据分析.4.10.2单击，切换至积分工作区.4.10.3选择“调用信号”调用所需的信号.4.10.4在“积分/报告”工具栏中，单击切换到积分事件表.其中，基线校正可以设置为“经典”或“高级”，在进行有关物质分析时设置为“高级”；斜率灵敏度在有关物质分析时设置为“0.5”，其他分析时设置为“1”；峰宽设置为“0.04”；“最小峰面积”和“最小峰高”在有关物质分析时均设置为“0”，其他分析时可设置适合的数值；“肩峰”选择“关闭”；“信号指定事件”选择“VWD缺省”.单击保存已修改的积分事件表并关闭积分工作区.4.10.5单击打开“保存方法”对话框保存方法.4.10.6单击放大光标查看积分基线，单击缩小至初始大小.4.11样品分析待基线走平稳后，在序列“仪器控制”主界面点击“开始”进样. 4.12仪器及柱子清洗根据“柱使用记录中所规定的方法”清洗柱子及流路，注意一般甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）不超过60分钟.再用10倍柱体积封柱液清洗柱子及流路.退出工作软件并保存数据，关机.5.维护5.1泵5.1.1主动入口阀滤芯，每6个月清洗一次.5.1.2溶剂过滤器，每3个月清洗一次.5.1.3 泵密封垫、柱塞杆每2年清洗一次.5.2自动进样器5.2.1针头，每6个月清洗一次.5.2.2针座，每6个月清洗一次.5.2.3转子密封垫，每6个月清洗一次.5.2.4 计量泵，通常不进行维护，除非发现进样量精密度降低或计量设备泄漏.5.3柱温箱，进行必要的清洁.5.4 检测器5.4.1 氘灯，当不能点亮或者漂移超过范围是更换.5.4.2 流通池，噪声、渗漏、光强度降低时进行清洗.6附件。