下载文档原格式
凝胶过滤层析进行蛋白纯化的原理一、凝胶过滤层析的概念和原理凝胶过滤层析是一种常用的生物化学分离技术，主要用于蛋白质的精细纯化和分离。
其原理是利用凝胶颗粒的孔隙结构，根据蛋白质的大小和形状差异，使不同分子量和形状的蛋白质在凝胶颗粒的孔隙中发生不同程度的阻滞和流动，从而实现蛋白质的分离和纯化。
二、凝胶过滤层析的操作步骤1. 样品加载：将待纯化的蛋白样品均匀地加载到预先平衡的凝胶柱或凝胶板上。
2. 洗脱：用缓冲液通过凝胶柱，洗去未结合的蛋白和其他杂质。
3. 洗脱物收集：收集洗脱液中的目标蛋白。
4. 分析和检测：对收集的蛋白样品进行分析和检测。
三、凝胶过滤层析的优点和适用范围1. 分辨率高：凝胶过滤层析能够分离不同分子量的蛋白，分辨率较高。
2. 操作简单：操作过程不需要高昂的设备和特殊技能，相对容易进行。
3. 适用范围广：适用于各种不同分子量和性质的蛋白质的纯化和分离。
四、对凝胶过滤层析的个人理解和观点凝胶过滤层析作为一种生物化学分离技术，在蛋白质纯化领域有着广泛的应用。
它的原理简单易懂，操作相对容易，且适用范围广，因此备受科研人员的青睐。
在生物制药和基因工程等领域，凝胶过滤层析也发挥着重要的作用，为蛋白质的纯化和分离提供了有效的技术手段。
总结：凝胶过滤层析作为一种重要的蛋白质纯化技术，具有分辨率高、操作简单、适用范围广等优点。
通过对凝胶过滤层析的深入理解和掌握，能够为生物化学研究和生物制药领域的发展提供有力支持。
通过本文的深度探讨，相信您对凝胶过滤层析进行蛋白纯化的原理有了更深入的了解。
希望本文能够帮助您更全面、深刻和灵活地理解这一主题。
凝胶过滤层析属于分子量分馏技术，是一种物理性质分离方法。
它基于蛋白质在凝胶柱内孔隙中的迁移速度的差异，可以将混合物中的不同分子量的蛋白质分离开来。
对于高分子量的蛋白质来说，凝胶柱内的孔隙会成为一个障碍，从而使它们在柱内停留的时间更长，而低分子量的蛋白质会更容易通过孔隙，因此在经过相同时间的洗脱后，不同分子量的蛋白质就可以被有效地分离开来。
ARRAY360全自动特种蛋白分析仪原理来源:时间:2007-10-06 字体:[大中小] 收藏我要投稿文章出处：朱敏转载请注明出处韦哲陈澎随着医学科学的发展，现在已知的血浆蛋白质约1013多种，这些蛋白质来源于组织细胞，执行着许多功能，其中有载体蛋白、抗体、酶抑制剂和凝血因子等。
很多疾病的发生可引起血浆蛋白质的改变，因此测定这些变化在临床上有重要的价值。
传统的比色法、电泳法和免疫扩散法等血浆蛋白质测定方法均存在灵敏度低、特异性差、样品温育时间长等缺点，已不能满足临床上对多类特种蛋白质的快速检测的要求。
ARRAY360全自动特种蛋白分析仪是美国Beckmltrl-Coulter公司近年推出的用速度散射比浊法测定血浆蛋白质的免疫化学分析系统，使得血浆蛋白质项目的检查变得敏感、简便、准确、快速。
2 检测原理及系统结构2.1 检测原理ARRAY360系统的测定原理是通过检测悬浮于缓冲液中的抗原与相应抗体发生反应，在抗体过量的前提下，形成免疫复合物颗粒。
光源采用双光源碘化硅晶灯泡(400-620mm)。
有光束通过时，悬浮颗粒所产生的散射光速率变化强弱与抗原浓度成正比，在反应达到最高峰时测定产物形成的量，速率峰值的高低与抗原含量成比例。
此测定法称为速率散射比浊法。
然后速率峰值经微机处理转换成被测抗原浓度。
因此获取正确的速率信号是系统测定技术的关键。
在检测标本时，散射光信号的变化分3个阶段：第一阶段的散射光信号是由缓冲液产生的。
第二阶段的散射光信号是由加入稀释的抗原后出现略微增强的信号。
最后加人抗体，形成免疫复合物颗粒，出现第三阶段明显逐渐增强的信号变化，直到反应达到终点。
仪器将反应初期之前的本底信号调成速率值等于0，然后随着抗原--抗体结合反应的进行，速率信号的增强逐渐加快，最后达到峰值。
一旦所需的速率峰值测到以后，仪器还通过峰值鉴定程序再对峰值进行确证，以排除因污染颗粒、气泡及非特异性沉淀物引起的于扰性散射光信号。
BioLogic LP层析系统简明使用教程BioLogic LP 层析系统一、 仪器名称：BioLogic LP 层析系统 二、 规格型号：BioLogic LP 三、 生产厂家：Bio-Rad Laboratories, Inc 四、 产品简介 随着生命科学研究进入后基因组时代，以蛋白质为主要对象的研究成为各实验室研究的主 题，其中，对单个蛋白质的分离纯化是蛋白质研究的基础工作，也是非常重要的工作。
对纯度均 一蛋白质的研究是揭示生命规律的重要手段，也是新药研发的必要途径，因为只有获得一定量的 蛋白质纯品，才能满足结构和功能的分析、物理化学参数测定、生物活性、毒理和药理实验等等， 乃至大量制备用于诊断和治疗。
蛋白质分离纯化的重要问题是如何在纯化过程中保持温和的条件，从而保证在此过程中蛋白 质的结构和活性不受影响。
层析技术（Chromatography）为蛋白质纯化提供了这样的条件，大都 在室温或低温下操作，所用的流动相可以是与生理液相似的具有一定 pH 值、离子强度的缓冲水 溶液，所用的填料表面修饰各种基团，可与蛋白质分子温和接触，从而保持了蛋白质分子的原有 构象和生物活性。
层析系统以及各种分离纯化所需的填料和层析柱是保证该纯化过程的稳定性、 重现性和自动化进行所必需的设备。
五、 技术原理 将一种混合物分成单个组份是一个熵减的过程，故外界必须要给此过程提供能量。
如下图所 示，完整的层析系统主要包含泵、各种阀门、层析柱、各种在位检测器和收集器。
其主要过程是：由蠕动泵推动溶液；各种阀门控制溶液流向，或者进样，或者洗脱层析柱； 样品经过层析柱并洗脱后，以样品各组分在流动相和固定相（层析介质）中的分配系数不同而 保留不同，从而分开；不同组分经过各种在位检测器，如紫外检测器、电导检测器、pH 检测器 等确定各组分的位置和浓度；最后各组分由收集器自动收集。
其中，泵是层析系统的心脏，用以推动溶液流动，LP 的泵是双通道蠕动泵，可提供精确稳 定，双向变速可调的液流，可配不同直径蠕动管，流速范围为 0.01-40mL/min。
亲和层析谱柱一、定义亲和层析：利用共价连接有特异配体的层析介质，分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白质或其他分子的层析技术二、原理分析将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。
那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。
步骤：1、固定吸附剂放置在层析柱2、与吸附剂具有亲和能力的蛋白质滞留在层析柱3、用洗脱液将结合的蛋白质洗脱下来亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。
所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。
在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与底物的识别结合、受体与配体的识别结合、抗体与抗原的识别结合，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。
生物分子间的这种结合能力称为亲和力。
亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法。
此法具有高效、快速、简便等优点。
种类：（1）抗原和相应的抗体发生特异性结合（2）酶与底物的识别结合（3）受体与配体的识别结合三、载体要求理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非特异性吸附少；③具有相当量的化学基团可供活化；④理化性质稳定；⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过；⑦能抵抗微生物和醇的作用。
可以做为固相载体的有皂土、玻璃微球、石英微球、羟磷酸钙、氧化铝、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素和琼脂糖。
在这些载体中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特异性吸附。
