检验室洁净区沉降菌测试记录表

洁净室沉降菌的测试方法洁净室是用来生产和制造高品质产品的特殊环境，需要控制空气中的微生物污染。

沉降菌测试是衡量洁净室内微生物污染水平的重要方法之一、本文将介绍洁净室沉降菌的测试方法。

1.选择合适的培养基：根据待测试的微生物类型选择适当的培养基，如悬浮菌落培养基或接触菌落培养基等。

培养基的选择要根据标准要求和实际情况来确定。

2.准备培养皿：使用无菌的培养皿，通过高温高压或紫外线照射来消毒。

将培养基倒入培养皿，接种前将培养皿密封。

3.放置培养皿：将密封好的培养皿放置在洁净室内，放置时间通常为1小时或更长，以充分收集空气中的沉降菌。

4.培养：根据培养基的要求，在适当的温度和湿度条件下进行培养。

通常在30-37摄氏度下培养24-48小时。

5.计数和鉴定：观察培养皿中的菌落数量和形态，根据标准要求进行计数和鉴定。

沉降菌的计数应该进行按规则的网格方式或无规则的计数方式。

同时，需要鉴定潜在的病原微生物，并进行鉴定和分类。

6.数据分析：根据测试结果进行数据分析，比较测试结果与洁净室微生物污染的标准。

分析结果应该包括沉降菌数量、种类和类别等。

7.制定控制措施：根据测试结果和分析，在必要时制定相应的控制措施，如增加过滤器或消毒措施等，以减少洁净室内微生物的污染。

需要注意的是，洁净室沉降菌测试是一种单点测试，只能反映特定时间段和特定位置的微生物污染水平。

因此，对于一个洁净室来说，需要多次进行沉降菌测试，并在不同时间段和位置进行测试，以全面了解洁净室内的微生物污染情况。

此外，洁净室沉降菌测试还应注意以下几点：1.操作人员应具备微生物测试和洁净室操作的专业知识和技能，遵守操作规程和标准。

2.培养基的制备和培养条件的控制应严格按照标准要求进行。

3.培养皿的密封和消毒要做到无菌操作。

4.样品收集和出租的时间要有一定的规律和标准，以保证测试结果的准确性和可比性。

总之，洁净室沉降菌测试是评估洁净室内微生物污染水平的重要测试方法。

1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。

2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。

3 责任QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。

4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。

中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。

4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。

4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制备过程如下：◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。

4.2.3 采样点和监测频次4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。

4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。

并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。

4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。

4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

4.2.4.4 测试时间：◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。

江苏舜宇医疗器械有限公司文件号：SY/ZT7.1-08 页码：1/4版本号：A.2 受控状态：受控文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部1.0 目的验证洁净区沉降菌测试效果。

2.0 范围洁净区、菌检室、超净工作台。

3.0 职责质量管理部检验人员负责相关操作。

4.0 工作程序4.1要求：4.1.1 我公司洁净区洁净度按10万级（洁净车间）、1万级（菌检室）、100级（超净工作台），故在测定沉降菌时按相应级别进行监测。

4.1.2 洁净区沉降菌测试标准按《洁净室（区）环境评定标准》执行。

4.2测试所用仪器设备高压灭菌器、恒温培养箱、培养皿(采用直径90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿)、培养基（普通营养琼脂培养基或药典许可的其他培养基）4.3测试方法4.3.1 准备工作4.3.1.1 将直径90mm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min。

4.3.1.2 将灭菌好的培养基 ( 如已冷凝则加热熔化 ), 冷至45℃左右时, 在无菌操作条件下将培养基注入培养皿, 每皿约20 ml。

4.3.1.3 待琼脂凝固后, 将培养基平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长, 即可供采样用。

4.3.2 采样将已制备好的培养皿按3.6.4.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30min，再将培养皿盖盖上后倒置。

4.3.3 培养4.3.3.1 采样结束后, 将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

4.3.3.2 在37℃培养箱中培养，时间不少于48小时。

4.3.3.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

每批选定3只培养皿作对照培养。

拟制：审核：批准：制订记事：2013 年5月制订文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部4.3.4菌落计数4.3.4.1 用肉眼直接计数，标记点数，然后用5～10倍放大镜检查, 有否遗漏。

4.3.4.2 若培养皿上有2个或以上的菌落重叠, 可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

微生物检测一、沉降菌：用标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

二、测试方法：采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿（一般多采用90mm直径硼硅酸玻璃培养皿，俗称沉降碟），经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。

三、采集的沉降菌为静态检测。

四、所需物料：（1）90mm培养皿：72个；（2）棉拭子：10个；五、沉降菌检测步骤：1、检测布点：生物安全柜（6个）；水平层流台（6个）；调配间（8个）；一更（3个）；二更（3个）；清洗间（3个）；2、通常的检测应在风机开启至少30min以上，紫外线照射30min，关闭紫外灯后开始采样。

3、将培养皿按采样点布置逐个放置，从内向外放置，摆放距离地面不低于60cm，培养皿暴露时间不得少于30min，不得大于4h。

操作台调配间一更/二更/清洗4、全部采样结束后，将二批杨敏倒置放置，随后送至检验科进行培养（2小时内送检）；每批均应有培养基对照实验，检验培养基本身是否污染，可每批做对照实验，与采样皿同法操作但不需暴露采样。

5、注意事项：（1）布置采样点时，至少应尽量避免尘粒较集中的回风口，采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量减少走动；（2）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除；（3）采样时摆放顺序为从里向外，净化台-调配间-二更-清洗间-一更。

回收培养皿时顺序相反。

（4）从检验科取来的培养皿不用时应在冷藏柜（2-8℃）保存。

（5）净化台沉降菌检测可轮流做，不必每个净化台都做检测；（6）二更和调配间均为万级，可轮流做检测；一更和清洗间为十万级，也可轮流做检测。

6、结果测定：（1）每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准的界限；（2）在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次结果均为合格才能判为符合；（3）洁净室沉降技术要求：洁净室沉降菌技术要求六、物体表面检测项目：1、物体表面检测：对静配中心洁净区内的各物体表面（操作台面、门把手、传递窗、大小推车、洁净服等）存在的病原微生物进行监控，达到规定标准，以保证所调配的输液质量。

RSB60-00 微生物检验室沉降菌测试原始记录测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB64-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（2）测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB63-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（1）测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB61-00 原料车间沉降菌测试原始记录测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB62-00 原料车间沉降菌测试原始记录测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C 相对湿度%培养基批号培养温度°C静压差检测日期报告日期评定标准：十万级≤10CFU/皿；万级≤3CFU/皿；百级≤1CFU/皿结论检验者复核者RSB61-01原料车间沉降菌测试原始记录编 号 测试单位 测试依据 SPG108-01 测试状态 环境温度 °C 相对湿度% 培养基批号 培养温度 °C静 压 差 检测日期 报告日期评定标准： 十万级≤10CFU/皿； 万级≤3CFU/皿； 百级≤1CFU/皿 结 论 检 验 者 复核者。

洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。

沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。

以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。

按照培养基说明制备培养基。

2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。

3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。

4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。

可以采用定期采样或连续采样的方式。

5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。

通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。

6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。

可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。

7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。

需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。

在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。

文件制修订记录1.1质量检验人员按规定对车间洁净区沉降菌定期进行检验，按下表1确定好采样点数，每个采样点需做2个培养皿。

表1 采样点数洁净室是指房间面积。

1.2每点培养皿数见下表(2)1.4沉降菌测试规程1.4.1测试人员:测试人员必须穿戴符含该环境级别的工作服，静态测试时，室内人员不得多于3人。

1.4.2测试方法1.4.2.1所用的主要仪器和设备高压消毒锅、恒温培养箱、培养皿1.4.2.2培养基普通肉汤琼脂培养基。

1.4.3采样方法-将己制备好的培养皿按规定的采样点的要求放置，打开培养皿，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置。

1.4.4培养1.4.4.1全部采样结束后，将培养皿倒置与恒温培养箱中培养。

1.4.4.2在37℃培养箱中培养，时间不少于48h。

1.4.4.3每批培养基应有对照试验，检验培养基基本身量分否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。

1.4.5菌落计数1.4.5.1用肉眼直接计数，标一记或在菌落器上点计，然后用5}-10倍放大镜检查，是否遗漏。

1.4.5.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

1.4.6结果计算1.4.6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

1.4.6.2平均菌落数的计算平均菌落数M= (M1+M2十M3+Mn) /nM:平均菌落数M1: 1号培养皿菌落数M2: 2号培养皿菌落数Mn: n号培养皿菌落数n:培养皿总数1.4.7结果评定:用平菌落数判定。

1.4.7.1洁净室(区)内的平菌落数必须低于所选定的评定标准。

1.4.7.2若某洁净室(区)内的平菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

洁净室(区)空气洁净度级别表。

洁净区微生物检测操作规程名称：洁净区微生物检测操作规程关键词：洁净区、微生物检测目的：规范洁净区微生物检测背景知识：略原理：略适用范围：100级、1万、10万、30万级洁净区环境。

1.沉降菌检测1)在万级洁净区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次沉降菌和浮游菌；在10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。

30万级每季度检测一次沉降菌。

2)由微生物检测员按《养基的配制操作规程的要求配制肉汤琼脂培养基，培养皿使用Φ90mm×15mm，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。

3)做好洁净区消毒工作，开启洁净区净化空调系统，正常运行不少于30分钟；对单向流如100级的净化工作台和层流罩要在净化系统运行10min后开始。

4)静态测试在除测试人员外，室内无生产人员的情况下进行，动态测试在已处于正常生产状态下进行。

5)采样点布置选用对角线法，要求布置地面四个方向，工作线上左右，关键设备顶上放置一个。

6)万级、10万级、30万级的最少采样点数可按下表确定。

在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表7)百级区只有净化工作台下的局部范围，其面积小于10m2，因此百级区取样点至少为3个。

8)测试人员按洁净室级别规定的程序更换洁净服进入洁净区；静态测试时，室内人员不得多于2人。

9)将制备好的肉汤琼脂培养基按采样点布点位置离地0.8～1.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。

10)盖好皿盖，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时，并用3只培养皿作对照。

11)用透射光于培养皿背面或正面仔细观察平皿上所有菌落数，要注意菌落与培养基沉淀物的区别，然后用5～10倍放大镜检查有否遗漏。

12)计算平均菌落数=（M1＋M2……＋Mn）／n，式中M1：1号培养皿菌落数，M2：2号培养皿菌落数，n：培养皿数。

13)用平均菌落数判断洁净室空气中的微生物，洁净区的平均菌落数（静态测试）：100级≤1个/皿，万级≤3个／皿，10万级≤10个／皿，30万级≤15个／皿。

沉降菌：用标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

测试方法：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿（一般多采用90mm直径硼硅酸玻璃培养皿，俗称沉降碟），经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

人员职责：洁净室的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000以上的区域。

测试步骤：1、测试前培养皿表面必须严格消毒。

2、将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿，使培养基表面暴露在空气中。

3、静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间不大于4h。

4、全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

5、采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配置的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d。

6、每批培养基应有对照试验，试验培养基本身是否污染。

可每批选定三只培养皿作对照培养。

注意事项：1、测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

2、采取一切措施防止人为对样本的污染。

3、对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4、由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并注意细菌菌落和培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5、采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

测试条件：测试之前，要对洁净室相关参数进行预先测试，参数包括：1、温度和相对湿度的测试。

2、室内送风量或风速的测试或压差的测试。

3、高效过滤器的泄露测试。

测试状态：静态和动态均可进行测试。

静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

沉降菌测试前，被测洁净室由使用者决定是否需要预先消毒。