核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择_张富军

几种抗原修复方法研究
王晋芬;田相义;丛娟;殷卫东;张景文;龚方纯
【期刊名称】《诊断病理学杂志》
【年(卷),期】1997(4)1
【摘要】由于常规福尔马林固定和石蜡包理过程造成的抗原封闭与结构改变，限制了一些抗体在免疫组织化学中的应用。

为了恢复组织的抗原性，提高免疫组织化学的检测阳性率，我们应用高压锅，微波炉和胰蛋白酶分别对石蜡切片进行处理。

结果显示，一些抗体过去只能用于冰冻切片，经前处理后可用于石蜡切片，一些抗体的敏感性增强，经高压锅处理的免疫染色重复性较微波炉处理得好，个别抗体适用于酶消化。

总之，在免疫组织化学染色过程中应根据抗原抗体的特性选用适当的前处理方法。

【总页数】2页(P34-35)
【关键词】抗原修复;抗体;免疫组化
【作者】王晋芬;田相义;丛娟;殷卫东;张景文;龚方纯
【作者单位】山西省肿瘤医院;山西省卫生厅
【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.免疫组织化学染色中抗原修复方法的比较研究 [J], 杜宇;赵莹;李寒松
2.鼻咽癌组织潜伏膜蛋白1不同抗原修复方法的比较研究 [J], 权莉;张锦波;李华仁
3.几种修复P53蛋白抗原免疫组化方法的比较 [J], 高亚兵
4.不同热修复抗原方法与胰腺导管腺癌分子标记物CD105免疫组化方法的研究[J], 廖德贵;周春辉;缪秋玲
5.真空负压、微波辐射和电炉三种不同处理方法对抗原修复的比较研究 [J], 蔡俊杰;邱红明
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免疫组化中抗原修复方法及修复液的比较邹亮【摘要】目的本实验通过比较几种常用的抗原修复技术在免疫组化中的效果,寻求一种简洁、方便、实用的抗原修复方法.方法分别选取10种细胞核及细胞浆或膜标记的抗体,对理论上阳性的组织进行标记,对每种抗体均分别采用不修复,PH6.0柠檬酸煮沸,PH6.0柠檬酸高温高压修复,PH9.0EDTA煮沸,PH9.0EDTA高温高压修复.结果本实验的20种抗体均标记理论上为阳性的组织,不修复的有16种抗体阴性,水煮热修复与高压热修复的修复效果并无明显差别.抗原修复液中高PH值(9.0)时的染色结果明显好于相同修复方式的低PH值(6.0).结论免疫组化质量与是否进行抗原有关,但与抗原修复方法无关;抗原修复液PH值影响免疫组化质量,掌握抗体最佳的修复液能提高免疫组化结果的阳性率、染色强度,稳定性及准确性.【期刊名称】《健康研究》【年(卷),期】2013(033)003【总页数】3页(P176-178)【关键词】免疫组化;抗原修复;PH【作者】邹亮【作者单位】浙江大学医学院附属第一医院,病理科,浙江,杭州,310003【正文语种】中文【中图分类】R365免疫组织化学技术具有特异性、灵敏性、简洁性等优点,还能够将形态和功能结合,定性、定位和定量相结合,因此,在半个多世纪以来免疫组织化学技术广泛应用于病理诊断,尤其是在肿瘤诊断中不可缺少。

其原理是用已知抗体去检测未知抗原,而抗原在组织固定过程中因蛋白质的氨基与醛基交联成羧基,使部分蛋白抗原决定族被封闭,因此,在免疫组化染色前,必须进行抗原修复,打开其封闭状态使其充分暴露,才能与抗体充分结合,故在免疫组织化学技术中抗原的暴露修复是至关重要的[1]。

自1991年加热抗原修复报道后,免疫组化工作者对抗原修复方法及修复液进行了不断的探索,并对其效果进行比较研究,归纳起来影响抗原修复的因素主要有两种,一是抗原修复的温度,二是抗原修复的PH值。

本文对常用的两种修复液及最常用的两种修复方式进行比较分析。

第31卷第2期2010年3月西安交通大学学报(医学版)J our nal of Xi πan J iaot ong U niversity (Medical Scie nces )V ol.31No.2Mar.2010◇技术方法◇核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择张富军,任　娟,王飞苗,吕社民,李冬民(西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,陕西西安　710061)摘要:目的　探讨不同抗原修复法对DA.1U 大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。

方法　应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U 大鼠肝组织切片进行修复,然后进行免疫组化染色。

结果　DA.1U 大鼠肝组织内核受体L XR 2α、L XR 2β、PPAR 2γ和FXR 经高压抗原修复后,染色阳性强度较其他修复方法明显增强,而且定位较佳。

结论　在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。

关键词:核受体;免疫组织化学;抗原修复中图分类号:R329233 文献标志码:A 文章编号:167128259(2010)022*******Selection of antigen retrieval methods in immunohistochemicalstaining of nuclear receptorsZHAN G Fu 2jun ,REN J uan ,WAN G Fei 2miao ,L ΒShe 2min ,L I Dong 2min(Depart ment of Genetics and Molecular Biology ,Medical School ofXi πan Jiaotong University ,Xi πan 710061,China )ABSTRACT :Objective To explore t he eff ects of diff ere nt met hods of antige n ret rieval on t he results ofimmunohist ochemical staining of nuclear recep t ors.Methods A ntige ns were ret rieved by using microwave oven ,aut oclave ,e nzyme and aut oclave plus e nzyme ,respectively ,in liver sections f rom DA.1U rats ,f ollowed by immunohist ochemical staining.Results Af ter a ntige n ret rieval wit h aut oclave ,t he p ositive staining inte nsity ofnuclear recep t ors L XR 2α,L XR 2β,PPAR 2γa nd F XR in t he liver sections f rom DA.1U rats was enhanced obviously ,a nd t he location of nuclear recep t ors was better by using t his met hod t han t he ot hers.Conclusion In t heimmunohist ochemical staining of nuclear recep t ors ,using aut oclave t o ret rieve a ntige ns is t he best met hod.KE Y WOR DS :nuclear recep t or ;immunohist oche mical staining ;a ntige n ret rieval收稿日期:2009202224 修回日期:2009203229基金项目:国家自然科学基金(No.30400249,30571725,30630058);陕西省国际合作项目(No.20072kw 206);陕西省自然科学基金项目(No.2004C256)Supported by t he National Natural Science Foundation of China (No.30400249,30571725,and 30630058),Interna 2tional Cooperation Foundation of Shaanxi Province (No.20072kw 206)and t he Natural Science Foundation of Shaanxi Province (No.2004C256).通讯作者:李冬民.E 2mail :lidongm @ 作者简介:张富军(19632),男(汉族),实验师.E 2mail :zfj @ 核受体在生物体内广泛分布,与配体结合后活化,调控基因的表达,在机体生长发育、新陈代谢等生理过程中发挥重要作用。

柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。

3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.14.操作步骤：(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。

(2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。

盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。

(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。

5.注意事项：(1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。

(2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。

(3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。

(4)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine((5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。

EDTA 抗原热修复法1. 适用范围：适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复。

2. 仪器设备：电磁炉、不锈钢锅和耐高温塑料染色架。

3. 所需试剂：EDTA抗原修复液，pH9 .04. 操作步骤：(1)抗原修复液的配制：根据所需工作液的量，取迈新公司产品MVS-0098适量，按1:50 的比例稀释。

一种新的抗原修复方法的应用张富军;侯卫坤;韩燕;宁启兰;王淑红;吕社民【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2010(026)003【摘要】@@ 在用多聚甲醛固定组织时,常在组织中的氨基酸残基的分子间或分子内形成醛键,从而使得一些抗原决定簇封闭起来,在免疫组织化学过程中需要进行抗原修复,使被封闭的抗原决定簇重新暴露而容易被检测到[1-3].因此,抗原修复是免疫组化中非常重要的步骤.常用的抗原修复方法有高压修复、微波修复、胰酶修复、胃蛋白酶修复、透明质酸酶修复、蛋白酶K修复以及复合酶修复等.一般认为修复能力由强到弱依次是:高温高压法>高温煮沸法>微波法>超声法>酶消化法[4].对于某些特定的抗原,加热修复法并不是最理想的修复方法[5].尿素作为一种蛋白质的变性剂,可以打断分子间的化学键,从而暴露抗原决定簇.【总页数】2页(P375-376)【作者】张富军;侯卫坤;韩燕;宁启兰;王淑红;吕社民【作者单位】西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061;西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R36-33【相关文献】1.在OpenGL中一种新的拾取方法及其应用--基于对象缓冲区的选择拾取方法 [J], 王亚平;余柯;罗堃2.一种新的油层定量分析方法——贴近度分析方法——及其应用探讨 [J], 鲍云杰;刘方;陈玉斌3.一种新的决策分析方法——VFT的原理、方法与应用 [J], 程静;于越华;张合勇4.一种新的剩余油研究方法在南泥湾油田新窑区的应用 [J], 李新5.一种新的应用方法──可拓方法 [J], 陈薇;苏时光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

免疫组化抗原修复方法嘿，咱今儿就来聊聊免疫组化抗原修复方法。

这可真是个相当重要的事儿呢！你想想看啊，免疫组化就像是一场探寻细胞秘密的奇妙之旅。

而抗原修复呢，那就是打开这神秘大门的关键钥匙呀！就好比你要进一个宝库，得先找到那把对的钥匙才行。

目前常见的抗原修复方法有热修复和酶修复。

先说热修复吧，这就像是给细胞来了一场“热浴”。

通过加热，让那些隐藏起来的抗原能重新现身，是不是很神奇？就好像原本躲起来的小精灵，被这股热气给召唤出来了。

热修复又分高压热修复和微波热修复呢。

高压热修复就像是给抗原来了个强力冲击，一下子把它们给震出来了；微波热修复呢，则像是温柔地烘烤，慢慢地让抗原现身。

酶修复呢，就像是请了一群小助手来帮忙。

这些酶会去找到那些被藏起来的抗原，然后把它们解放出来。

不同的酶有着不同的本领，就跟我们人一样，各有所长嘛。

那在实际操作中该怎么选呢？这可得好好琢磨琢磨。

要是你的样本比较特殊，那可得小心选择，不然选错了方法，那不就像走岔了路一样，找不到正确的方向啦？而且在进行抗原修复的时候，可得注意各种细节哦。

温度啦、时间啦，都得把握好，不然就可能达不到最好的效果。

这就跟做饭似的，火候和时间掌握不好，做出来的菜味道可就差远啦。

还有啊，在做抗原修复之前，一定要把样本处理好呀。

这就像是给房子打地基，地基不牢，房子可就不稳啦。

处理样本的时候要细心再细心，可别马马虎虎的。

你说，这免疫组化抗原修复方法是不是很有意思？它就像是一个魔法，能让我们看到细胞里那些隐藏的秘密。

咱可得好好研究研究，把这个魔法运用得炉火纯青呀！这样才能在免疫组化的世界里畅游无阻，发现更多的奥秘呢！所以啊，一定要重视抗原修复方法，可别小瞧了它哟！这可是关乎我们能不能顺利探索细胞世界的重要一步呢！。

免疫组织化学及HE染色实验步骤免疫组织化学（immunohistochemistry，简称IHC）是一种用于检测组织切片中特定蛋白质的方法，其原理是通过特异性抗体识别目标蛋白质并将其可视化。

本文将介绍IHC实验的基本步骤和HE染色实验的步骤。

IHC实验步骤：1.组织切片制备：从取材到固定、包埋和切片，保证组织样本的质量和完整性。

2.抗原修复：将组织切片放入含有钠胼胝土缓冲液或其它抗原修复液中进行抗原修复。

可以选择使用高温或酶解等方法。

3.阻断非特异性结合：将组织切片浸泡在阻断液中，如BSA、牛血清蛋白等，以防止抗体与非特异性的蛋白质结合。

4.一抗孵育：将含有一抗的抗体溶液滴在组织切片上，孵育一段时间，使一抗与目标蛋白质发生特异性结合。

5.二抗孵育：选择与一抗宿主不同的二抗标记物，如荧光素、过氧化物酶等，将含有二抗的溶液滴在组织切片上进行孵育。

6.吸附剂清洗：将组织切片用洗涤缓冲液洗去未与标记物结合的二抗。

7.标记物检测：根据所选择的标记物，可以进行荧光显微镜观察、酶反应等，将目标蛋白质可视化。

8.盖片封装：将组织切片用适当的缓冲液封装至玻璃盖片上。

HE染色实验步骤：1.组织切片制备：从取材到固定、包埋和切片，保证组织样本的质量和完整性。

2.脱蜡：将组织切片放入甲醇中脱去石蜡包埋。

3. 染剂处理：将组织切片依次浸泡在嗜铬酸钾溶液中，漂洗后浸泡在碱性染剂中，如伊红（Eosin）染料。

4. 酸性染剂处理：将组织切片浸泡在酸性染剂中，如苏木红（Hematoxylin）染料。

5.脱染：将组织切片用酒精和醋酸溶液进行脱染。

6.脱水：将组织切片依次浸泡在酒精梯度中，脱去水分。

7.透明化：将组织切片逐渐浸泡在透明剂中，如苯酚乙醇、二甲苯等，使组织切片透明。

8.盖片封装：将组织切片用适当的透明剂封装至玻璃盖片上。

以上是免疫组织化学和HE染色实验的基本步骤。

通过这些步骤，可以标记和可视化组织切片中的特定蛋白质，进而获得研究和诊断所需的信息。

免疫组化中抗原修复的方法(一)免疫组化中抗原修复1. 引言在免疫组化实验中，抗原修复是一项重要的步骤。

由于组织样本中的抗原可能会被固定、石化或脱变，导致免疫染色的效果不佳。

因此，进行抗原修复可以提高抗体与抗原的结合率，增强信号的强度和特异性。

2. 抗原修复的方法热原修复法热原修复法是最常用的抗原修复方法之一。

具体步骤如下：•将切片置于含有缓冲液的载玻片上；•将载玻片放置在加热板上，设定适当的温度和时间，通常为95°C，15-20分钟；•等待切片冷却至室温，继续下一步的处理。

酶解原修复法酶解原修复法适用于某些情况下，特别是当形状石化的抗原需要修复时。

具体步骤如下：•将切片置于含有酶解液的载玻片上；•将载玻片放置在适当的温度和湿度条件下进行酶解，通常为37°C，30分钟；•冷却切片至室温，然后进行下一步处理。

酸性原修复法酸性原修复法主要用于修复石蜡包埋组织标本中的抗原。

具体步骤如下：•将切片浸泡在含有酸性溶液的容器中，通常使用的酸性溶液；•在合适的温度条件下进行酸解，通常为95°C，30分钟；•将切片冷却至室温，并进行下一步处理。

高压原修复法高压原修复法是相对较新的抗原修复方法，它利用高压力来提高修复效果。

具体步骤如下：•将切片置于含有修复液的载玻片上；•将载玻片放置在高压原修复设备中，设定适当的压力和时间；•冷却切片至室温，并进行后续处理。

3. 结论抗原修复在免疫组化实验中起到至关重要的作用，可以修复被固定、石化或脱变的抗原，提高抗体与抗原的结合率，增强信号的强度和特异性。

常用的抗原修复方法包括热原修复法、酶解原修复法、酸性原修复法和高压原修复法。

选择合适的方法进行抗原修复，可以提高免疫组化实验的准确性和可靠性。

以上就是本文对免疫组化中抗原修复的相关方法进行的详细介绍。

希望对读者在免疫组化实验中的抗原修复环节有所帮助。

4. 热原修复法的原理和优缺点原理热原修复法是利用高温对抗原进行恢复性变性处理，使其重回天然的结构状态。

免疫组化中抗原修复的方法免疫组化中抗原修复什么是抗原修复抗原修复是一种在免疫组化实验中常用的技术，用于恢复被固定和处理的细胞或组织中的抗原活性。

在某些情况下，固定和处理的过程会导致抗原的失活或变性，因此抗原修复是十分重要的步骤，以确保准确的免疫组化结果。

抗原修复的常用方法1. 热处理法热处理法是一种常用的抗原修复方法，通过高温引起细胞或组织中的抗原变性。

热处理一般在微波炉或水浴中进行，温度和时间要根据具体的样品和实验要求进行调整。

2. 酶切法酶切法是通过使用特定的酶来消化固定和处理过程中引起抗原失活的组织部分。

常用的酶包括蛋白酶K、胰蛋白酶等，酶的选择应该根据具体的抗原性质和实验目的进行。

3. pH诱导法pH诱导法通过调整溶液的pH值来恢复抗原的活性。

一般来说，较高的pH值有利于抗原的恢复，但具体的pH值还需根据具体实验进行调整。

4. 盐溶液法盐溶液法是通过使用高盐浓度的溶液来解离和去除组织中的蛋白质交联，从而恢复抗原的活性。

盐溶液的具体浓度和种类应该根据样品的特性和实验目的进行选择。

5. 高压法高压法是一种通过应用高压力来打破细胞和组织中的蛋白质交联，从而恢复抗原活性的方法。

高压法一般需要在特定的设备中进行，压力和时间需要根据样品和实验要求进行调整。

如何选择合适的抗原修复方法在选择合适的抗原修复方法时，需要考虑以下几个因素：•样品类型：不同类型的样品可能对抗原修复方法的要求不同，例如活体细胞和组织与固定的组织具有不同的特性。

•抗原性质：不同的抗原具有不同的特性，对抗原修复方法的要求也不同，如某些蛋白质抗原可能对热处理敏感，而其他抗原可能对酶切法更为适用。

•实验目的：实验目的也是选择抗原修复方法时需要考虑的因素之一，如是否需要保留细胞或组织的形态结构等。

在实际操作中，为了确保准确的实验结果，一般会进行不同的抗原修复方法的对比实验，以选择最适合的方法。

总结抗原修复是免疫组化实验中不可或缺的一步，通过恢复抗原的活性，可以得到准确可靠的实验结果。

抗原修复方法及注意事项一、抗原修复的概念与原理抗原修复，简单来说，就是通过特定的处理方法，使在组织处理过程中被封闭或破坏的抗原决定簇重新暴露出来，从而提高抗原抗体的结合效率，增强免疫反应的信号强度。

在组织标本的制作过程中，如固定、脱水、包埋等步骤，可能会导致蛋白质发生交联、变性等变化，使得抗原决定簇被掩盖或破坏。

抗原修复的原理就是通过打破这些交联、逆转蛋白质的变性，恢复抗原的天然构象和活性。

二、常见的抗原修复方法（一）热诱导抗原修复（HIER）这是目前应用最为广泛的抗原修复方法之一。

主要包括以下两种方式：1、微波修复将切片放入盛有修复液的容器中，然后置于微波炉内进行加热。

微波修复的优点是加热均匀、速度快，但需要注意控制好加热时间和功率，以免造成组织过度损伤。

2、高压修复将切片和修复液放入高压锅中加热。

这种方法能够更有效地打破蛋白质交联，但操作相对复杂，需要严格控制压力和时间。

（二）酶消化法常用的酶包括蛋白酶 K、胃蛋白酶等。

酶消化法通过酶的作用分解蛋白质交联，暴露抗原决定簇。

但酶的作用具有一定的特异性和局限性，需要根据抗原的性质和组织类型选择合适的酶，并精确控制酶的浓度和作用时间。

（三）非加热抗原修复方法如使用某些化学试剂，如尿素、盐酸胍等，来破坏蛋白质的交联。

但这些方法的应用相对较少，效果也不如热诱导抗原修复方法显著。

三、抗原修复方法的选择选择合适的抗原修复方法需要考虑多个因素，包括抗原的性质、组织类型、抗体的特性等。

一般来说，如果抗体的说明书中推荐了特定的抗原修复方法，应优先遵循。

对于未知的抗原，通常可以先尝试热诱导抗原修复方法，如果效果不佳，再考虑酶消化法或其他方法。

在实际操作中，还可以通过预实验来比较不同抗原修复方法的效果，以确定最佳的修复方案。

预实验可以选择一组已知阳性的组织切片，分别采用不同的抗原修复方法进行处理，然后进行免疫染色，观察染色结果的强度和特异性。

四、抗原修复液的选择常用的抗原修复液包括柠檬酸盐缓冲液（pH 60）、EDTA 缓冲液（pH 80 或 90）等。