4.1 光度分析法[5] [6] β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7]，其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β-氨基丙酸。我在实验中发现很多因素如浓度、pH 值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响。如忽视这些因素会使实验产生很大的误差。就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究。 4.1.1试剂的配制： 缓冲液的配制：配制pH= 6.00的NaAc －HAc 缓冲溶液 β-氨基丙酸标准溶液的配制： 用电子天平准确称取1.020 g β-氨基丙酸(生化纯)，溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中，得到C = 4.080 g/L 标准溶液。 茚三酮试剂的配制：称取0.5g 茚三酮溶于100ml 蒸馏水中，得到5g/L 的茚三酮水溶液。 4.1.2标准曲线的确定 分别准确移取0.30ml 、0.40ml 、0.50ml 、0.60ml 、0.70ml 、0.80ml 、0.90ml 、1.00ml 标准液于8个比色管中，用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml 再加入1ml 茚三酮水溶液充分摇匀，将其放在沸水浴中加热10min 。冷却到室温，用7230型分光光度计在569nm 下测其吸光度。以吸光度和浓度作一个标准曲线。 4.1.3样品的测定 稀释待测液于0.24mg/ml —0.73mg/ml,调pH 值到6.00，以相同的反应条件，测其吸光值并与上面的标准曲线对照查出稀释液的浓度，再乘以稀释倍数即为β-氨基丙酸的浓度。 4.1.4 标准曲线的测定结果 β-氨基丙酸浓度在0.24mg/ml —0.73mg/ml 范围内与茚三酮水溶液反应，颜色表现出由浅蓝到深蓝的递增变化。用茚三酮比色法测得的一组数据得到的标准曲线如图1： 0.20.30.40.50.60.70.80.9 1.0 1.1 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 吸光度加入标液体积(ml) B 图 1 标准曲线的测定 Fig 1 Determination of the standard curve 注：在沸水中加热10min ，β-氨基丙酸标准溶液5ml 、茚三酮水溶液1ml 、缓冲溶液pH=6.00 4.1.5样品的测定分析 将待测的一批稀释50倍，母液稀释的程度可以根据以与标准溶液在相同的
氨基酸工业现状及趋势 世界上最大的氨基酸消费市场是饲料添加剂，氨基酸作为饲料添加剂主要有4 个方面的功效：①促进动物生长发育；②改善肉质，提高产量；③节省蛋白饲料，提高饲料转化率； ④降低成本，提高饲料利用率。目前国内用于饲料添加剂的氨基酸主要有赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸。其中赖氨酸和蛋氨酸占饲料工业的95% 以上，而苏氨酸的使用呈增长趋势，需求的增长促进了产量和产能的提高。表1 为近10 年来，世界三种氨基酸产量及主要生产商。 表1 近10年来世界三种氨基酸产量及主要生产商 品名1996年1999年2002年2006年主要生产商 DL-蛋氨酸35 50 55 65 德固萨、住友、诺伟司、安迪苏 L-赖氨酸30 60 65 80 味之素、ADM、巴斯夫、大成、德固萨、协和、希杰L-苏氨酸 2.5 3 4 12 味之素、ADM、德固萨、协和 1、蛋氨酸 近年来，国内外市场对蛋氨酸的需求逐年强劲增长，成为需求增长最快的氨基酸品种之一。1993年，全世界蛋氨酸产量为26万t，1999年达50万t，2002年为55万t。目前，全球的年产能约为100万t，年产量约为70万t。预计全球总产能会达到110万t/年左右，但产量不会超过70万t，市场仍将明显供过于求。蛋氨酸的生产主要集中在安迪苏、德固赛和诺伟司，约占世界产量的90%，其中诺伟司的产能最大。 1.1中国市场概况 在中国市场，每年都要从国外大量进口蛋氨酸，现已成为中国化学原料药进口的大宗产品，2003年进口量高达7万t，进口额过1亿美元。据专家预测，到2010年，全世界蛋氨酸需求将达到90万t，中国的需求量也将超过10万t。近年中国对蛋氨酸的需求量还将持续增长，但一定时期内依靠大量进口来满足。中国是世界第2大饲料生产国，市场需求的年增长率7%-8%，蛋氨酸基本依靠进口。在中国市场，日本公司占据了43%份额、德固赛为21%、诺伟司10%、安迪苏为21%，其他占5%。由于中国蛋氨酸市场快速扩张且竞争日趋激烈，国外蛋氨酸生产厂商均加大了在中国的销售力度。 目前，中国生产蛋氨酸在工艺技术、原料、设备、成本等方面还存在一些有待解决的问题，但火爆的市场已对企业产生了巨大的诱惑，已有企业着手蛋氨酸规模生产的研发、设计和规划。 据了解，德固赛并未忽视蛋氨酸医药保健用途的开发。2004年12月德固赛在广西南宁武鸣投资的安力泰美诗药业公司的L-(左旋)蛋氨酸新生产线正式建成投产。本次新建的这条
竭诚为您提供优质文档/双击可除氨基酸纸上层析实验报告 篇一：实验六氨基酸的纸层析法 氨基酸的纸层析法 一．目的 了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。 二、原理 以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。 在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、ph 值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=
原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。 本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。 三、实验仪器 1、新华滤纸 2、层析缸 3、细线 4、点样管 5、橡皮筋 6、电吹风 7、喷雾器 四、实验试剂 1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸） 2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml 无水丙酮，贮于棕色瓶中
第4期401～409 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 季刊 2饲料中可利用氨基酸研究进展 刘超，闵育娜，雷海宁，白存江，段建功 （西北农林科技大学畜牧兽医研究院，咸阳窖店 712039） 摘要：综述了可利用氨基酸在饲料中的研究进展，对部分研究成果进行了评述。认为氨基酸可利用率的测定方法应从生产现场进行选择，畜禽可利用氨基酸需要量研究应成为研究重点，并对可利用氨基酸在日粮中的应用前景进行了展望。 关键词：饲料；可利用氨基酸；研究进展 中图分类号：S 816.11 文献标识码：A文章编号：1003-4315(2002)04-0401-09 1 氨基酸营养研究的理论基础 以蛋白质配制日粮并评定营养价值，是由于蛋白质是次于能量的重要营养物质，构成动物体蛋白质必需的氮元素与植物体相差的百分率最大（70.0 %）[1]；部分饲料成本，蛋白质饲料约占四分之一。因此，蛋白质资源利用和低蛋白质日粮的研究，是以提高蛋白质的生物学价值为目的。对氨基酸营养的认识，使人们明白蛋白质营养价值变化的基本原因。蛋白质不是整体消化，而是被分解成小肽或氨基酸吸收利用。使用纯合日粮或低蛋白质平衡氨基酸日粮并不能使动物达到最佳生产性能[2~4]，肽在蛋白质营养中有着特殊的意义[5，6]。蛋白质生物学价值不具备可加性，在实践上难以依次配制日粮[7]。由于不同氨基酸蛋白质配合后的互补作用，以及添加限制性氨基酸可使日粮其它氨基酸平衡性得到改变的事实，说明蛋白质生物学价值不具备理想的重现性，只能在特定的如基础日粮为无氮日粮时才能重现[8]。氨基酸可利用率的可加性、重现性，因能在日粮或非常规饲料评价中成功表达受到学者认同[9]，是蛋白质营养走向氨基酸营养的重要原因。 氨基酸从19世纪末Magendie发现到结构测定（Fischer）及willcock等人的添加试验，已认识到蛋白质营养价值受氨基酸组成的影响。Rose通过试验将氨基酸划分为必需和非必需。Block和Bolling注意到营养价值高的蛋白质在氨基酸组成上与采食该种蛋白质动物体蛋白氨基酸构成基本相似，由此提出了生长动物氨基酸需要量大体可由体蛋白氨基酸组成来确定的“理想蛋白质”新理论。Mettchell建议以体组织中赖氨酸与其它氨基酸的比例关系估测其需要量，由此赋予“理想蛋白质”以实质性内容，表示日粮中最佳氨基酸组成模 作者简介：刘超（1963–），男，陕西兴平人，副研究员，从事动物营养研究。 资助基金：陕西省重大产业科技示范资助项目（编号：96ST07） 收稿日期：2002–02–20 修改稿日期：2002–05–20
饲料分析检验与质量控制 在饲料分析检验过程中不可避免产生系统和随机误差，从而影响分析结果的准确度。系统误差是由于检验过程中某些确定的、经常性的原因所造成的误差，它对检验结果的影响比较固定，在重复检验过程中可以重复地表现出来，系统误差产生的原因和来源主要包括仪器误差、试剂误差、测定方法误差、分析人员个人误差等。随机误差是由于一些偶然的外部因素所引起的，产生随机误差的因素不定。 如何最大限度减少饲料分析检验过程中系统误差和随机误差并对其进行有效控制，确保饲料分析检验数据的准确性和可靠性，对原料的采购、生产过程控制和产品出厂提供科学依据具有重要的意义。因此，本文针对饲料分析检验过程中可能产生的系统误差和随机误差的关键环节，结合实际工作经验，系统介绍饲料分析检验过程中应采取有效的质量保证（Quality assurance，QA）和质量控制（Quality control，QC）措施，供饲料企业实验室参考。 1 检验化验人员要求 饲料分析检验是一项重复、枯燥但又需要一定技术水平的工作，因此分析人员必须应有高度的责任心、不断进取的精神和过硬的技术。 在分析检验工作中检验人员由于粗心导致某些操作错误，如试剂溅出或滴出，试剂或溶液加错，看错砝码、读错刻度，记录及结果计算错误等，如果已经出现错误，应立即终止实验或剔除结果，不得用于参加最终结果计算，也不得对数据结果进行主观修正。检测人员要对所获得数据的真实性和可靠性负责，核对人员对检测人员数据结果计算过
程准确性进行监督。 为了确保检、化验结果的质量，从事饲料分析检验化验的工作人员上岗前必须经过岗位技术培训和职业技能鉴定，获得职业资格证书，持证上岗。即使已经取得相关专业毕业文凭的本、专科学生也要通过岗前培训，毕业文凭只能表明已经通过了相关知识的系统教育，并不代表已经具备了一定的操作技能。 一名优秀的饲料化验员还应对各种饲料原料和产品的特点、相关标准，甚至加工工艺等有充分了解，在实际工作中要不断学习和丰富经验，提高技术水平。这对应对饲料原料的复杂性，确保检验结果的可靠准确性非常重要。 2 仪器设备和其他计量器具要求 2.1 仪器设备的检定/校准 分析检验仪器、器皿是饲料检验分析过程的主要工具，其性能的可靠性和稳定性直接影响着测定结果的可靠性和重现性，必须对其进行检定/校准，并做相应的标识。仪器的检定/校准需要委托当地质量技术监督部门或其他单位，依据相应的检定或校准技术规程进行，其中检定为强制性。 各种仪器的检定/校准周期都有具体要求，所谓检定周期即检定/校准结果的有效周期。常规仪器如分光光度计、分析天平、酸度计等都需要进行检定，检定周期一般为1年，大型仪器设备如高效液相色谱仪等检定周期为2～3年。仪器出现故障大修后要重新检定。大型仪器还应进行两次检定周期之间的期间核查。 2.2 仪器使用 使用仪器时，要严格按照仪器操作规程进行操作，确保在仪器性能状态稳定后
纸层析法分离氨基酸 一、前言 纸层析法 纸层析法又称纸色谱法，是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。它是一种以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。 纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。 做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液(石油醚)混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。 纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢;含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。 氨基酸 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨，而需求总量是800万吨。我国自20世纪60年代起，氨基酸的应用在食品工业占61,，在饮料工业占30,，医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。 氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用: （1）在食品行业的应用 （2）在医药工业的应用
饲料中的氨基酸分析 一. 仪器及试剂 仪器： 1). 天平一台（精度0.1mg）； 2). 恒温水浴锅一台； 3). 容量瓶； 4). 试管（1.5×15cm或1.5×10cm）； 5). 微量进样器（5μL或10μL）一支； 6). 微量可调移液枪（1000uμL，200μL）一支、吸头多个； 7). 旋涡混匀器一台； 8). HPLC系统及氨基酸分析专用柱（4.6×250mm 5μm）； 试剂： 1). 超纯水（≥18MΩ?cm）； 2). 乙腈（HPLC级）； 3). 三水合醋酸钠（分析纯）； 4). 冰醋酸（分析纯）； 5). 衍生试剂A和衍生试剂B溶液，至于冰箱保存（衍生试剂包对身体有害，用 时请做好防护措施）； 6). 正己烷（HPLC级）。 7). 0.1mol/L盐酸溶液：精密量取9.0mL浓盐酸，加去离子水稀释至1000mL。 8）6mol/L盐酸溶液:精密量取浓盐酸溶液，加到去离子纯化水以等比例混合，（再加入0.1%的苯酚试剂作为保护剂）。 二. 流动相的配制 流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0 配制方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液 930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜；
流动相B：水：乙腈＝20.0：80.0 配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22μm滤膜； 三. 衍生化反应 1. 2. 供试品溶液制备 精密称取饲料粉末样品100mg，置于50ml的圆底烧瓶中，加入10ml的6mol/L盐酸溶液，溶解，并在110度条件下加热回流反应24小时，反应完成后，放置冷却；冷却完后转移至100ml的量瓶中，加水分别3次润洗反应瓶，收集到量瓶中定容至100ml；充分混匀，再量取50ml的溶液蒸干，并用2ml水润洗定容，待衍生用。 3. 衍生步骤 1）分别将A、B两种衍生试剂用稀释剂稀释至原来浓度的1/5倍； 2）精密量取上述对照品溶液200μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B 溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5~10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL 水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析； 3）供试品的衍生：供试品溶液200μL，置于试管中，加入稀释后的A溶液100μL和稀释后的B溶液100μL，摇匀，室温反应60min；然后加入正己烷溶液400μL旋紧盖子后振摇5~10s，室温静置分层，取下层200μL溶液，加入800μL水混合均匀，再取200μL加入800μL水混合均匀，用孔径为0.22μm有机膜过滤，待分析；
饲料分析检验学 《饲料分析检验学》学习方法 掌握饲料理化检验的基本概念（名词解释） 饲料分析检验的基本程序 感官检验的基本方法 饲料分析主要检验方法种类及其优缺点 主要检验方法的适用范围、原理、基本操作过程及特别需注意的问题 各类饲料品质检验指标有哪些 饲料：能够提供动物所需养分、保证健康、促进生产，并在合理使用下不发生有害作用的可饲物质。（国家标准定义） 在一定的时间、一定的技术条件下，为满足某动物营养需要，通过有目的的劳动而创造出来的物化成果。包括能直接饲喂的全价饲料和各种半成品（浓缩饲料、添加剂预混料、精料补充料）。（饲料行业协会定义） 饲料质量：饲料原料和饲料加工后的优劣程度。 饲料变异：饲料因饲料原料、饲料加工技术的差异，在饲料加工过程使用不良原料掺假以及由于储存运输不当而损坏和变质造成的质量变化。 饲料分析及质量检测 运用实验手段，分析、测定饲料原料及产品的质量特性，然后把测定的结果与规定的质量标准相比较，以判断饲料的营养价值或对产品质量做出合格或不合格的判断。 总体―――具有完全一致的属性的待测样品的总数 检样――由分析的整批物料的各个部分采集的少量物料。 原始样品――从生产现场等总体分析检样采取许多份检样综合在一起的样品。 平均样品――原始样品经过技术处理以后，再抽取其中一部分供分析检验用的样品。 随机采样____按照随机抽取的原则，从分析的整批物料中抽取一部分样品的方法。“五分法” 代表性采样____按照样品随空间(位置)和时间变化的规律（系统抽样法），采集样品，使采集到的样品能代表其相应部分的组成和质量。 样品的制备——指对样品的粉碎、混匀、缩分等过程。 新鲜样本：含有70％－90％的水分的饲料样本（大量游离水和少量吸附水） 半干样本：除去初水分的样本 风干样本：饲料样本中不含游离水，仅含有15％以下的吸附水的饲料样本。 绝干样品（absolute-dried sample）：在100~105℃烘至恒重的饲料样品。 系统误差——是由固定的原因造成的，在测定过程中按一定的规律反复出现，有一定的方向性。 这种误差大小可测，又称“可测误差”。方法误差、仪器误差、试剂误差、操作误差 偶然误差——由一些偶然的外因引起，原因往往不固定、未知、且大小不一，不可测，这类误差往往一时难于觉察 饲料的化学性污染（chemical pollution）是指各种化学物质如有害金属、化学农药、药物、化肥、合成洗涤剂、饲料添加剂、饲料添加剂及其它有毒有害的化合物对饲料的污染。 饲料养分 存在于任何饲料中能够维持动物生命和生产产品的化学成分。饲料养分可概括水分、蛋白质、
中国饲料成分及营养价值表（第24版） TABLES OF FEED COMPOSITION AND NUTRITIVE VALUES IN CHINA 表3. 饲料中氨基酸含量 Amino Acids 序号 中国饲料号CFN 饲料名称 Feed Name 干物质DM% 粗蛋白质 CP% 精氨酸Arg% 组氨酸His% 异亮氨酸Ile% 亮氨酸 Leu% 赖氨酸Lys% 蛋氨酸Met% 胱氨酸Cys% 苯丙氨酸Phe% 酪氨酸Tyr% 苏氨酸Thr% 色氨酸 Trp% 缬氨酸 Val% 1 4-07-0278 玉米corn grain 86.09.40.380.230.26 1.03 0.260.190.220.430.340.310.08 0.40 2 4-07-0288 玉米corn grain 86.08.50.500.290.270.74 0.360.150.180.370.280.300.08 0.46 3 4-07-0279 玉米corn grain 86.08.70.390.210.250.93 0.240.180.200.410.330.300.07 0.38 4 4-07-0280 玉米corn grain 86.0 7.8 0.370.20 0.24 0.93 0.230.150.150.380.310.290.06 0.35 5 4-07-0272 高粱sorghum grain 86.0 9.0 0.33 0.18 0.35 1.08 0.180.170.120.450.320.260.08 0.44 6 4-07-0270 小麦wheat grain 88.0 13.4 0.62 0.300.46 0.89 0.35 0.21 0.30 0.61 0.370.38 0.15 0.56 7 4-07-0274 大麦（裸）naked barley grain 87.0 13.0 0.64 0.16 0.43 0.87 0.440.14 0.25 0.68 0.40 0.43 0.16 0.63 8 4-07-0277 大麦（皮）barley grain 87.0 11.0 0.65 0.24 0.52 0.91 0.42 0.18 0.18 0.59 0.350.41 0.12 0.64 9 4-07-0281 黑麦rye 88.0 9.500.48 0.22 0.30 0.58 0.350.150.21 0.42 0.26 0.31 0.10 0.43 10 4-07-0273 稻谷paddy 86.07.8 0.57 0.15 0.32 0.58 0.290.190.160.40 0.37 0.25 0.10 0.47 11 4-07-0276 糙米rough rice 87.0 8.8 0.65 0.170.30 0.61 0.320.20 0.14 0.35 0.31 0.28 0.12 0.49 12 4-07-0275 碎米broken rice 88.010.4 0.78 0.27 0.39 0.74 0.42 0.22 0.17 0.49 0.390.38 0.12 0.57 13 4-07-0479 粟（谷子）millet grain 86.5 9.7 0.30 0.20 0.36 1.15 0.15 0.25 0.20 0.49 0.26 0.35 0.17 0.42 14 4-04-0067 木薯干cassava tuber flake 87.0 2.5 0.40 0.05 0.11 0.15 0.13 0.05 0.04 0.10 0.04 0.10 0.03 0.13 15 4-04-0068 甘薯干sweet potato tuber flake 87.0 4.0 0.16 0.08 0.17 0.26 0.160.06 0.08 0.19 0.130.180.05 0.27 16 4-08-0104 次粉wheat middling and reddog 88.0 15.4 0.86 0.41 0.55 1.06 0.59 0.23 0.37 0.66 0.46 0.50 0.21 0.72 17 4-08-0105 次粉wheat middling and reddog 87.013.60.850.330.480.98 0.520.160.330.630.450.500.18 0.68 18 4-08-0069 小麦麸wheat bran 87.015.7 1.000.410.510.96 0.630.230.320.620.430.500.25 0.71 19 4-08-0070 小麦麸wheat bran 87.014.30.880.370.460.88 0.560.220.310.570.340.450.18 0.65 20 4-08-0041 米糠rice bran 87.012.8 1.060.390.63 1.00 0.740.250.190.630.500.480.14 0.81 21 4-10-0025 米糠饼rice bran meal(exp.) 88.014.7 1.190.430.72 1.06 0.660.260.300.760.510.530.15 0.99 22 4-10-0018 米糠粕rice bran meal(sol.) 87.015.1 1.280.460.78 1.30 0.720.280.320.820.550.570.17 1.07 23 5-09-0127 大豆soybeans 87.0 35.5 2.57 0.59 1.28 2.72 2.20 0.56 0.70 1.42 0.64 1.41 0.45 1.50 CFIC 2013 24 动物科学数据分中心 CFIC 2013 24 动物科学数据分中心
食物中氨基酸的测定方法 测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。 一、氨基酸自动分析仪法 1.原理 食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。 2.适用范围 GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。 本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol。本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定 3.仪器和设备 3.1真空泵 3.2恒温干燥箱 3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。用去离子水冲洗干净并烘干。 3.4真空干燥器（温度可调节） 3.5氨基酸自动分析仪。 4.试剂 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。 4.1浓盐酸：优级纯 4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。 4.3苯酚：需重蒸馏。 4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L 4.5缓冲液： 4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2
4.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。 4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 4.6茚三酮溶液 4.6.1 pH 5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。 4.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g 水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解。 4.7高纯氮气：纯度99.99%。 4.8 冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合 5.操作步骤 5.1样品处理：样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。 5.2称样：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品防于水解管中。 5.3水解：在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。 打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml 容量瓶内，用去离子水定容。吸取滤液1ml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。 5.4测定：准确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标
鱼类氨基酸类营养物质的新进展：功能性和环境适应性水饲料 近来的一些证据表明一些氨基酸以及它们的代谢物是对鱼类的维护，生长，食物摄入量，营养物质的利用，免疫，行为，幼虫的变形，繁殖以及抵抗环境压力和各类鱼中出现的微生物病毒。因此，关于必须和非必须氨基酸的常规定义受到很多关于牛磺酸，谷氨酰胺，甘氨酸，脯氨酸以及羟脯氨酸可以促进生长发育和水产动物的健康的发现的挑战。考虑到以上物质在细胞新陈代谢和生理机能方面的重要性，我们预计饮食方面在氨基酸上明确的增补规定可能对鱼类以下几个方面有益： （1）以少量鱼粉来增加水饲料化疗亲和力的性能以及营养价值 （2）优化幼鱼和成鱼新陈代谢转化的效率 （3）抑制过激行为和自残现象 （4）提高幼鱼的品质和存活率 （5）调节鱼类产卵的时效性和效率 （6）改善鱼片的风味和肉质 （7）增强免疫能力以及对环境压力的适应性 功能性氨基酸给增加全球水产品的效率和利益率的平衡性水饲料的发展带来了新契机。 关键词：氨基酸，鱼类，健康，生长，水饲料，水产养殖业 缩略词 AA：氨基酸 GABA：β-氨基丁酸 BCAA：支链氨基酸 HMB：羟基—β-甲基丁酸 NAC：N-乙酰半胱氨酸 NO：含氮氧化物 NOS：含氮氧化物合酶 P5C： T3：三碘甲状腺原氨酸 T4：四碘甲状腺氨酸 介绍：氨基酸是蛋白质的基本单位。从鱼类生长所需饮食的必要性来说，氨基酸来说可以 传统地分为必须氨基酸（不可或缺的）和非必须氨基酸（不可或缺的）（表1）。条件性必需氨基酸在利用速率低于合成速率的条件下必需从饮食中得到供给。根据定义，所有非必须氨基酸都能由水产动物自身合成。 膳食蛋白质是标准水饲料中主要的和最昂贵的组分。鱼粉被公认为最理想的蛋白质添加
【实验报告第一部分（预习报告内容） ：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：】 一、预习报告 实验原理：
根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。薄层层析是在玻 璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。 薄层层析（ ，）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行，而将样品各组份分离出来。 本次实验： ● 具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不 一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。 ● 吸附剂（固定相）：硅胶（.）。为使制成的薄层板不易松散，加入5%羟甲基纤维 素钠（）作黏合剂。 ● 展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10）。 ● 展层-显色剂：按照10:1比例（）混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。 ● 活化（）：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。可使硅胶的活性提高， 吸附能力加强。 ● 氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原， 此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。 ● 值： 点的距离 对应溶剂前沿到样品原距离 斑点中心到样品原点的 Rf 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（值）也是恒定的，因
氨基酸概况主要供应商文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]
氨基酸工业现状及趋势 世界上最大的氨基酸消费市场是饲料添加剂，氨基酸作为饲料添加剂主要有4 个方面的功效：①促进动物生长发育；②改善肉质，提高产量；③节省蛋白饲料，提高饲料转化率；④降低成本，提高饲料利用率。目前国内用于饲料添加剂的氨基酸主要有赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸。其中赖氨酸和蛋氨酸占饲料工业的95% 以上，而苏氨酸的使用呈增长趋势，需求的增长促进了产量和产能的提高。表1 为近10 年来，世界三种氨基酸产量及主要生产商。 表1 近10年来世界三种氨基酸产量及主要生产商 品名1996年1999年2002年2006年主要生产商DL-蛋氨酸35 50 55 65 德固萨、住友、诺伟司、安迪苏 L-赖氨酸30 60 65 80 味之素、ADM、巴斯夫、大成、德固萨、协和、希 杰 1、蛋氨酸 近年来，国内外市场对蛋氨酸的需求逐年强劲增长，成为需求增长最快的氨基酸品种之一。1993年，全世界蛋氨酸产量为26万t，1999年达50万t，2002年为55万t。目前，全球的年产能约为100万t，年产量约为70万t。预计全球总产能会达到110万t/年左右，但产量不会超过70万t，市场仍将明显供过于求。蛋氨酸的生产主要集中在安迪苏、德固赛和诺伟司，约占世界产量的90%，其中诺伟司的产能最大。 中国市场概况 在中国市场，每年都要从国外大量进口蛋氨酸，现已成为中国化学原料药进口的大宗产品，2003年进口量高达7万t，进口额过1亿美元。据专家预测，到2010年，全世界蛋氨酸需求将达到90万t，中国的需求量也将超过10万t。近年中国对蛋氨酸的需求量还将持续增长，但一定时期内依靠大量进口来满足。中国是世界第2大饲料生产国，市场需求的年增长率7%-8%，蛋氨酸基本依靠进口。在中国市场，日本公司占据了
18种天然氨基酸分析 迪马科技摘要 氨基酸组成测定是蛋白质组学、食品质量检测以及药品质量检测中的重要分析项目。本文分别以异硫氰酸苯酯、2,4-二硝基氟苯作为衍生剂对蛋白质水解液和游离氨基酸注射液进行衍生，使用Diamonsil AAA柱250×4.6 mm，5 μm，梯度洗脱进行分离，能够满足19种天然氨基酸的分析，各组分分离度较高、定量结果准确而稳定。 Abstract The amino acid determination is an important analysis project in proteomics, food and drug quality testing.The method determination of 19 nature amino acid in protein hydrolyzed solution and free amino acid injection, the derived reagent is phenyl isothiocyanate (PITC) and 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene. The column is Diamonsil AAA (250 × 4.6 mm, 5 μm), gradient elution, the results are accurate and stable. 引言 从化学角度讲，同时含有一个或多个氨基和羧基的脂肪酸均可称为氨基酸。自然界存在300多种氨基酸，但构成天然蛋白质的氨基酸只有20种，这20种氨基酸又称为天然氨基酸。天然氨基酸分析是食品、饲料和药品分析的重要项目。目前氨基酸分析常常采用这样两种方式：离子交换色谱分离-柱后衍生和柱前衍生-反相色谱法分离。后者以操作灵活、费用低廉而被广泛应用。在柱前衍生-反相色谱法分离中，异硫氰酸苯酯(PITC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)均可与一级胺、二级胺反应，是理想的柱前衍生剂。尽管天然氨基酸多达20种，但由于蛋白质水解过程中天冬酰胺和谷氨酰胺分别转化为天冬氨酸和谷氨酸，半胱氨酸则以胱氨酸形式存在，因而对于含蛋白食品、饲料等样品的氨基酸分析时，只需分析Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(甲硫氨酸)、Cys-Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种氨基酸，PITC和DNFB均能与这些氨基酸生成稳定的衍生物。此外，DNFB还能对半胱氨酸进行衍生，对PITC衍生法是一个重要的补充，能够满足氨基酸注射液中涉及的19种氨基酸分析。 1 分析原理 对于含蛋白样品(饲料、动物组织等)，先对样品进行酸水解或碱水解处理，得到游离氨基酸
氨基酸分析仪实验 测试中心吕雪娟 一、实验目的 了解氨基酸分析仪的主要结构及工作原理，掌握氨基酸分析的过程，前处理方法。 二、原理 氨基酸分析仪的分析原理是基于各种a一氨基酸的酸碱性、极性及分子大小的差异，用阳离子交换树脂在柱上进行层析分离，用几种不同pH值和离子强度的缓冲溶液依次将它们洗脱，从柱子上分离和洗脱下来的各种氨基酸在反应柱中与茚三酮进行加热反应，反应产物用可见光分光光度计进行检测，根据检测信号的大小计算出各种氨基酸的含量。 氨基酸和茚三酮反应
氨基酸分析仪结构示意图 二、操作步骤 1.准备工作 1.1缓冲液和茚三酮溶液的配制及正确放置 1.2氮气压力调整 1.2.1打开氮气钢瓶阀，调节其压力至50－100KPa（0．5－1.0Kgf／cm2）。 1.2.2顺时针轻轻旋转氮气调节器，使压力读数为34-40KPa（0.35－0.4Kgf ／cm2）。 1.2.3脱气瓶中液体的更换 1.3放置自动进样器清洗瓶，向清洗瓶（C-1，1L）中盛上蒸馏水，放置于指定的位置并拧上盖子。 2.开稳压器 3.启动L－8800ASM应用程序 3.1系统初始化，OK 3.2打开Module Operation界面
3.3泵1流速设定----缓冲液的清洗，打开泵1的排液阀；清洗完毕，关闭泵1； 3.4泵2流速设定—一缓冲液的清洗，打开泵2的排液阀；清洗完毕关闭泵2； 3.5自动进样器流路和针头清洗,除气泡，重复此过程三次。 3.6泵的压力归零 4.分析程序 4.1选择应用程序 4.2选择分析方法 4.3输入待测样品的信息，编辑样品表，保存； 4.4打开数据采集监控画面 4.5选择样品表 4.6打开泵1和泵2 4.7按样品表顺序放置样品。 4.8单击监控屏幕下方的Start Series按钮，开始样品测试。 4.9开始结束后，关闭采集监控画面 4.10关闭L－8800ASM应用程序 4.11关电源 三、实验报告要求 1.实验原理及分析条件； 2.实验结果。
新增附录 附录XX 氨基酸分析法 氨基酸分析法是指用于测定蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的方法。 根据氨基酸组成分析可以对蛋白质及肽进行鉴别，氨基酸分析法可用于确定蛋白质、肽及氨基酸的含量，及测定可能存在于蛋白质及肽中的非典型氨基酸。进行氨基酸分析前，必须将蛋白质及肽水解成单个氨基酸，具体水解方法由各品种项下规定。蛋白质及肽水解后，其氨基酸分析过程与用于其他药物制剂中游离氨基酸的分析过程相同。 本法包括四种柱前衍生法，分别为异硫氰酸苯酯（PITC）法、6-氨基喹啉－N－羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）法、邻苯二醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）法、2，4-二硝基氟苯（DNFB）法，以及一种茚三酮柱后衍生法。不同的品种应针对自身所含的氨基酸种类及各氨基酸的含量选择适宜的氨基酸分析方法并做相应的方法学验证。 由于本法衍生过程中衍生溶液量较少，且容易挥发，外标法极易出现较大的误差，建议采用内标法进行测定，内标的确定由各品种项下规定。在本法中，由于半胱氨酸或胱氨酸的衍生产物不稳定，因此对于含半胱氨酸或胱氨酸的样品衍生后应尽快测定，或者在衍生前对半胱氨酸或胱氨酸进行适当的处理，使其转化为稳定地产物（如磺基丙氨酸或半胱氨酸-硫代丙酸）后再衍生测定，具体方法由各品种项下规定。在测定过程中，可根据所用的仪器、色谱柱品牌、色谱柱的长度及要分离的氨基酸种类，对流动相的有机溶剂和洗脱梯度作适当调整以获得较好的分离度。 第一法 PITC柱前衍生氨基酸分析法 本法系根据氨基酸与异硫氰酸苯酯（PITC）反应，生成有紫外响应的氨基酸衍生物苯氨基硫甲酰氨基酸（PTC-氨基酸），PTC-氨基酸经反相高效液相色谱分离后用紫外检测，在一定的范围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性浓度范围为0.025～1.25μmol/ml。 试剂（1）流动相A 0.1mol/L醋酸钠溶液(取无水醋酸钠8.2g，加水900ml溶解，用冰醋酸调pH至6.5，然后加水至1000 ml)-乙腈(93:7)。（2）流动相B 乙腈－水（8：2）。 对照品溶液按各品种项下规定的方法制备。 供试品溶液按各品种项下规定的方法制备。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6×250mm，5μm）；流速为每分钟 1.0ml；柱温为40℃；检测波长为254nm。各氨基酸峰间的分离度均应大于1.0。洗脱梯度如下：
氨基酸类饲料添加剂-甘氨酸 一 26一中国饲料添加剂2010年第9期(总第99期) 全国饲料添加剂信息站 氨基酸类饲料添加剂一甘氨酸 【别名】甘氨酸;氨基乙酸;氨基醋酸 【化学名】氨基乙酸;氨基醋酸 【英文名】Glycine 【分子式】C2HNO: 【分子量】75.O7 【结构式】H:N—CH2一COOH 【CAS号】56—40—6 【性状】本品为白色单斜晶系或六方晶系 晶体或白色结晶粉末,无臭,有特殊甜味.溶于 水,不溶于乙醇和乙醚.熔点232～236~C(分 解).相对密度1.1607,能与盐酸作用而成盐酸 盐. 【制法】 化学合成甘氨酸的方法主要有氯乙酸氨解 法,施特雷克法(Strecker)和海因法(Hydantion) 三种.目前国内仍采用在国外已被淘汰的氯乙 酸氨解法技术,而国外则采用改进的施特雷克法 和海因法技术路线.由于原料和工艺的不同,氯 乙酸氨解法具有生产成本高,产品质量差的特 点,所生产的甘氨酸大多为工业级,纯度一般在 95%左右,严重制约了其下游的应用,而国外厂 商大多利用丙烯腈副产氢氰酸和羟基乙腈生产
甘氨酸,该法生产成本低,产品质量好,一般纯度可以达到99%以上. 1.氯乙酸氨解法 该法是以氯乙酸为原料,在催化剂乌洛托品 的存在下与氨水反应而得.反应温度5O～ 60~C,常压,反应后物料在乙醇溶液中进行醇析分离,反应时间14～l5小时.是传统的甘氨酸 的合成工艺,工艺简单,对设备要求不高,环境污染压力不大.但是也存在很多不足,一是氯化铵等副产品难以分离,导致产品质量差,不能满足医药和食品工业的需要,若精制则生产成本较高;二是作为催化剂的乌洛托品无法回收,造成很大的资源浪费;三是反应时间长,不易连续操作.目前该法是我国主要的工业化方法,为了克服缺点,提高甘氨酸的质量和收率,国内外化学工作者对此法合成技术进行了深入研究,研究的热点集中在新型催化剂的选择与使用上,另外在强化工艺过程控制,优化反应条件等方面也做了大量的工作. C1CH2COOH+2NH3—_H2NCH2COOH+ NH4C1 2.Strecke法 传统的Strecke法是以甲醛,氰化钠,氯化铵 一 起反应,再加入乙酸,析出得到亚甲基氨基乙腈,将亚甲基氨基乙腈在硫酸存在下加入乙醇分解,得到氨基乙腈硫酸盐,将此硫酸盐用氢氧化钡分解,得到甘氨酸钡盐,然后加入硫酸使钡沉淀,过滤,滤液浓缩,冷却得到甘氨酸结晶.该法