中药肉苁蓉多糖和总苷的提取分离及质量控制方法研究

摘要肉苁蓉为多年生草本植物，分布于新疆、内蒙古、陕西、甘肃、宁夏等地，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能。

本论文研究内容主要包括以下4个方面:1、肉苁蓉多糖的研究肉苁蓉多糖是肉苁蓉的有效成分之一，本文采用水提醇沉法对多糖进行提取分离，通过紫外分光光度法测定粗多糖和可溶性多糖的含量。

结果表明，粗多糖和可溶性多糖的含量分别为4.56%和17.41%；在肉苁蓉多糖提取研究的基础上对肉苁蓉多糖部位进行了研究，通过调节醇沉阶段的含醇量进行分段，用蒽酮-硫酸法对各部分多糖部位进行了含量测定。

结果显示，用20%乙醇沉淀所得多糖的含量最高，达到样品量的9.71%，占总多糖的44.0%。

2、肉苁蓉中毛蕊花糖苷的研究采用超声辅助提取法对肉苁蓉有效成分进行提取，用高效毛细管电泳法对肉苁蓉中毛蕊花糖苷进行含量测定。

详细考察了分离电压在8～25 kV范围和硼酸-硼砂缓冲溶液的pH在8.0～10.0之间对毛蕊花糖苷的分离影响，得到最佳分离条件为：电压8kV，运行缓冲溶液为30mmol/L的硼酸-硼砂（pH=9.0），室温，检测波长为334nm。

毛蕊花糖苷的浓度在0.015～0.375mg/mL 范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程y=13946x+560.32,(R2=0.9983) ，样品回收率为99.26%，RSD=1.16%，精密度RSD=0.96%。

通过上述研究，建立了毛蕊花苷的高效毛细管电泳含量测定方法，并用此方法测得肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量为样品的1.02～1.04%。

3、肉苁蓉中红景天苷的测定方法研究采用HPLC和HPCE两种方法对肉苁蓉中红景天苷的测定方法进行了研究。

用HPLC法对肉苁蓉中红景天苷的测定研究，采用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为乙腈∶水(1∶9)，流速为1.0mL/min，室温，红景天苷的检测波长为278nm。

红景天苷在0.055～0.44µg范围呈良好的线性关系，其线性回归方程y=91207x－1097, (R2=0.9953) ，样品的回收率为94.8%，RSD= 1.50%，精密度RSD=0.39%。

肉苁蓉中有效成分肉苁蓉甙的提取工艺的综述肉苁蓉原植物为列当科植物肉苁蓉属的寄生植物，全世界约有20种，我国有6种及l 变种：肉苁蓉Cistanche deserticoIaMa ．、盐生肉苁蓉Cistanchesalsa(C ．A ．Mey)G ．Beck 、管花肉苁蓉Cistanchetubulo ·s 口(Schenk)R ．Wight 、沙苁蓉Cistanchesinensis G ．Beck 、兰州肉苁蓉CistanchelanzhouensisZ ．Y ．Zhang 、迷肉苁蓉Cistanche ambigua(Bge ．)G ．Beck6个种及l 变种白花盐苁蓉Cistanchesalsa var ．albi-．肪厂P ．F ．Tuet.Z ．C ．Lou 。

肉苁蓉主要生于盐碱地、干河沟、沙地、戈壁、沙漠环境中，气候极端干旱，日照强烈，年降水量少于250 mm ，冷热变化剧烈，风大沙多，土壤发育不良，土层薄、质地粗而缺乏有机质。

具有一定的抗寒和抗旱性。

其寄生于红沙、盐爪爪、着叶盐爪、珍珠、西伯利亚等植物的根上，在我国主要分布于北纬36。

～370，东西横跨内蒙古、陕西、甘肃、宁夏及新疆等5个省区。

此外，青海亦有少量分布。

其中，内蒙为肉苁蓉的地道产区之首，20世纪90年代以前产量为10×104 kg ，新疆为20世纪90年代肉苁蓉最大产区，年产春大芸(北疆大芸、梭梭大芸、柴大芸)20×104kg ，秋大芸(南疆大芸、红柳大芸、管花大芸)5×104 kg 。

新疆4种肉苁蓉(肉苁蓉、迷肉苁蓉、管花肉苁蓉、盐生肉苁蓉)中，管花肉苁蓉是新疆的标志肉苁蓉。

宁夏为肉苁蓉传统产区之一，主产于中卫、灵武、盐池各县。

原植物有肉苁蓉，荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉和沙苁蓉以及白花盐苁蓉睁。

肉苁蓉中的化学成分很复杂，从20世纪80年代开始，国内外对肉苁蓉的化学成分进行了大量研究，其中日本起步较早，随着分离提取和检测技术的飞速发展，已分离出多种类型的物质，主要可分为苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木脂素类、多糖、生物碱等。

肉苁蓉多糖的研究
对肉苁蓉多糖的研究采用95％乙醇浸提脱脂，沸水提取，乙醇沉淀，三氯乙酸脱蛋白，透析除小分子化合物，最后冷冻干燥得到肉苁蓉粗多糖。

肉苁蓉粗多糖经DEAESepharoseFastFlow凝胶柱层析分成六个具有不同电荷性质的多糖部位，用HPLC法测定其分子量分布后选用合适的分子筛凝胶柱层析并结合醇沉分级，最后分离得到四个均一多糖RCR-Ⅰ-3、RCR-Ⅳ-1、RCR-Ⅴ-2和RCR-Ⅵ-C。

HPLC法测定了四个均一多糖的分子量，RCR-Ⅰ-3分子量为8200，其余三个的分子量均大于1.5×106。

RCR-Ⅰ-3为一淀粉类多糖。

RCR-Ⅳ-1由阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成。

RCR-Ⅴ-2由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成，其中中性单糖的组成比为4.9：9.2：9.5：3.5：1.0，咔唑硫酸法测得糖醛酸含量为39.2％。

RCR-Ⅵ-C为一结合有色素的杂多糖，由鼠李糖和葡萄糖组成，组成比为 1.00：1.76。

体外活性筛选显示肉苁蓉多糖RCR-Ⅴ有抗前列腺癌活性。

㊀基金项目:国家中医药管理局－重点实验室研究领域的中医临床疗效提升项目(Ｎｏ.２１００２２２１７９)ꎻ国家自然科学基金(Ｎｏ.８１８７４３４５)ꎻ辽宁省自然科学基金－资助面上项目(Ｎｏ.２０２２－ＭＳ－２２３)作者简介:程世赞ꎬ女ꎬ硕士生ꎬ研究方向:中药炮制学ꎬＥ－ｍａｉｌ:１３７６３２４３０４＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:史辑ꎬ女ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向:中药炮制化学ꎬＴｅｌ:０４１１－８５８９０１５７ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｎｓｈｉｊｉ＠１６３.ｃｏｍ肉苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠降血糖作用程世赞１ꎬ廉婧１ꎬ聂紫璇１ꎬ苏国明１ꎬ常源１ꎬ史辑１ꎬ２ꎬ贾天柱１ꎬ２(１.辽宁中医药大学药学院ꎬ辽宁大连１１６６００ꎻ２.辽宁省中药炮制技术产业创新中心ꎬ辽宁大连１１６６００)摘要:目的㊀探讨肉苁蓉和酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠降血糖的作用及机制ꎮ方法㊀富集肉苁蓉和酒苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷部分ꎬ对其含量进行了比较分析ꎮ选用ｄｂ/ｄｂ小黑鼠为实验动物ꎬ给药２８ｄ后ꎬ记录小黑鼠体重㊁进食量㊁饮水量ꎬ检测血糖ꎬ采用ＥＬＩＳＡ检测血清胰岛素(ＩＮＳ)㊁糖化血红蛋白(ＨｂＡ１ｃ)ꎬ肝脏甘油三酯(ＴＧ)㊁总胆固醇(ＴＣ)㊁低密度脂蛋白(ＬＤＬ－Ｃ)㊁高密度脂蛋白(ＨＤＬ－Ｃ)㊁丙二醛(ＭＤＡ)㊁超氧化物歧化酶(ＳＯＤ)ꎬ血浆和尿液中尿酸(ＵＡ)㊁肌酐(Ｃｒ)以及尿微量白蛋白(ｍＡＬＢ)水平ꎻＨＥ染色方法制备胰腺和肾脏组织病理切片ꎻＩＨＣ测定肾脏ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ蛋白表达水平ꎮ结果㊀肉苁蓉多糖部位经过酒蒸后含量下降ꎬ肉苁蓉寡糖部位中的甜菜碱经过酒蒸后含量增加ꎬ总苷类成分酒蒸后松果菊苷的含量稍有下降ꎬ毛蕊花糖苷含量下降ꎬ异类叶升麻苷含量上升ꎮ与模型组相比ꎬ肉苁蓉和酒苁蓉不同提取部位能降低体重㊁空腹血糖(ＦＢＧ)㊁口服葡萄糖耐量(ＯＧＴＴ)㊁ＨｂＡ１ｃ㊁胰岛素抵抗指数(ＨＯＭＡ－ＩＲ)㊁胰岛β细胞分泌指数(ＨＯＭＡ－β)㊁ＭＤＡ㊁ＬＤＬ－Ｃ㊁ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢꎬＩＮＳ和ＨＤＬ－Ｃ有上升趋势(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎬ且能改善胰腺和肾脏的病理损伤以及ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ的表达ꎮ结论㊀肉苁蓉和酒苁蓉总苷组降血糖作用较好ꎬ酒苁蓉多糖和寡糖也有一定的降血糖作用ꎮ关键词:肉苁蓉ꎻ总多糖ꎻ总寡糖ꎻ总苷ꎻｄｂ/ｄｂ小黑鼠ꎻ降血糖中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０１－０００６－００９ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０１.００２ＨｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｏｎｄｂ/ｄｂｍｉｃｅＣＨＥＮＧＳｈｉｚａｎ１ꎬＬＩＡＮＪｉｎｇ１ꎬＮＩＥＺｉｘｕａｎ１ꎬＳＵＧｕｏｍｉｎｇ１ꎬＣＨＡＮＧＹｕａｎ１ꎬＳＨＩＪｉ１ꎬ２ꎬＪＩＡＴｉａｎｚｈｕ１ꎬ２(１.ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＬｉａｏｎｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＤａｌｉａｎ１１６６００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＬｉａｏｎｉｎｇＴＣＭＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒꎬＤａｌｉａｎ１１６６００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｏｎｄｂ/ｄｂｍｉｃｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｔｏｔａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓꎬｔｏｔａｌｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｔｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｏｆＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｗｅｒｅｅｎｒｉｃｈｅｄꎬａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｎｔｅｎｔｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ.Ｓｅｌｅｃｔｄｂ/ｄｂｍｉｃｅａｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｓ.Ａｆｔｅｒ２８ｄａｙｓｏｆａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎꎬｒｅｃｏｒｄｔｈｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔꎬｆｏｏｄｉｎｔａｋｅꎬｗａｔｅｒｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎꎬｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅꎬｓｅｒｕｍｉｎｓｕｌｉｎ(ＩＮＳ)ꎬｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ(ＨｂＡ１ｃ)ꎬｌｉｖｅｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ(ＴＧ)ꎬｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ(ＴＣ)ꎬｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ(ＬＤＬ－Ｃ)ꎬｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ(ＨＤＬ－Ｃ)ꎬｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ(ＭＤＡ)ꎬｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ(ＳＯＤ)ꎬｕｒｉｃａｃｉｄ(ＵＡ)ｉｎｐｌａｓｍａａｎｄｕｒｉｎｅｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ(Ｃｒ)ａｎｄｕｒｉｎａｒｙｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎ(ｍＡＬＢ)ｌｅｖｅｌｓꎻＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｐａｎｃｒｅａｓａｎｄｋｉｄｎｅｙｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙＨＥｓｔａｉｎｉｎｇꎻＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎｉｎｋｉｄｎｅｙｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｉｍｍｕ￣ｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｄｅｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂｅｔａ￣ｉｎｅｉｎｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｌｉｇｈｔｌｙａｆ￣ｔｅｒｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｉｓｏａｃｔｅｏｓｉｄｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ.Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ(ＦＢＧ)ꎬｏｒａｌｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ(ＯＧＴＴ)ꎬＨｂＡ１ｃꎬｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ(ＨＯＭＡ－ＩＲ)ꎬＨＯ￣ＭＡ－βꎬＭＤＡꎬＬＤＬ－ＣꎬＵＡꎬＣｒａｎｄｍＡＬＢｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉ￣ｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬＩＮＳａｎｄＨＤＬ－Ｃｓｈｏｗｅｄａｎｕｐｗａｒｄｔｒｅｎｄ(Ｐ<０.０５ꎬＰ<０.０１)ꎬａｎｄｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｍａｇｅｔｏｔｈｅｐａｎｃｒｅａｓａｎｄｋｉｄｎｅｙｓꎬａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｔｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｏｆＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａｈａｖｅｂｅｔｔｅｒｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｓꎬｗｈｉｌｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｏｆｐｒｏｃｅｓｓｅｄＣ.ｄｅｓｅｒｔｉ￣ｃｏｌａａｌｓｏｈａｖｅｃｅｒｔａｉｎｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ｃ.ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａꎻＴｏｔａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎻＴｏｔａｌｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎻＴｏｔａｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓꎻｄｂ/ｄｂｍｉｃｅꎻＨｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ㊀㊀肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉或管花肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎ꎮ春季苗刚出土时或秋季冻土之前采挖ꎬ除去茎尖ꎬ切段ꎬ晒干[１]ꎮ肉苁蓉具有补肾阳㊁益精血㊁润肠通便的功效ꎬ临床上多用于肾阳不足㊁精血亏虚㊁阳痿不孕㊁腰膝酸软㊁筋骨无力㊁肠燥便秘等ꎮ肉苁蓉的药理作用包括抗衰老㊁抗氧化㊁抗痴呆㊁抗疲劳以及润肠通便等[２－３]ꎮ肉苁蓉主要成分有苯乙醇苷类㊁环烯醚萜苷类㊁多糖等ꎬ其中苯乙醇苷类㊁多糖类成分为主要药效物质[４]ꎮ现代的药理研究表明ꎬ肉苁蓉多糖具有调节免疫活性㊁抗衰老㊁改善学习记忆能力㊁保护神经㊁抗肝损伤㊁抗病毒㊁抗肿瘤㊁影响肠道菌群等诸多药理作用[５]ꎮ肉苁蓉总苷具有滋补肝肾㊁益精血㊁抗氧化㊁抗衰老㊁免疫增强和神经保护作用[６]ꎮ«中国药典»２０２０年版(一部)收载有肉苁蓉片和酒苁蓉两个炮制品种ꎬ课题组前期研究发现ꎬ生品肉苁蓉偏于润肠通便ꎬ酒苁蓉补肾助阳作用明显增强ꎮ肉苁蓉总苷和总多糖为补肾阳的有效部位ꎬ肉苁蓉寡糖类成分为其润肠通便的有效部位[７]ꎮ肉苁蓉酒蒸过程中ꎬ苯乙醇苷类成分发生较大的变化ꎬ毛蕊花糖苷含量下降ꎬ而其同分异构体异毛蕊花糖苷含量明显增加[８]ꎮ２型糖尿病是由胰岛素抵抗ꎬ伴随胰岛β细胞结构和功能性损伤ꎬ继而导致胰岛素分泌不足ꎬ以血糖升高为主要特征的代谢疾病[９]ꎮ中医认为糖尿病往往与肾精有关ꎬ肾藏精ꎬ精亏则可诱发糖尿病ꎬ甚至会导致糖尿病肾病ꎮ２型糖尿病症状多表现为尿多㊁乏力㊁口渴喜饮㊁多食易饥等与肾阳虚类似症状ꎬ故中医临床治疗糖尿病多以补肾固本㊁补益肾阳为主[１０－１１]ꎮ文献报道ꎬ肉苁蓉中的苯乙醇苷类成分ꎬ如松果菊苷和毛蕊花糖苷不仅能够抑制餐后血糖水平的增加ꎬ而且能提高淀粉负荷小鼠的葡萄糖耐量[１２－１５]ꎮ这也提示着肉苁蓉具有降血糖的作用ꎮｄｂ/ｄｂ小黑鼠是由于瘦素(ｌｅｐｔｉｎ)受体基因缺陷导致的先天肥胖性Ｔ２ＤＭ小鼠ꎬ其瘦素受体基因失去功能ꎬ在出生后２周内就发生高胰岛素血症ꎬ３~４周发展为肥胖ꎬ８周后就发展为非常严重的高血糖症ꎬ期间伴有胰岛素抵抗ꎬβ细胞功能衰竭[１６－１７]ꎬ一般在８~１０个月内死亡ꎬ可并发明显的肾脏疾病[１８]ꎮ本研究以ｄｂ/ｄｂ小黑鼠为实验对象ꎬ分别富集肉苁蓉和酒苁蓉的总多糖㊁总寡糖和总苷类成分ꎬ并对不同提取部位的降血糖作用进行了比较研究ꎬ期望为肉苁蓉酒蒸的炮制机理提供科学依据ꎮ１㊀材料与仪器１.１㊀实验动物㊀自发性２型糖尿病小鼠模型的ＢＫＳ.Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７ｍ＋/＋Ｌｅｐｒｄｂ/ＪＮｊｕ(基因型:ｄｂ/ｄｂ糖尿病小黑鼠)雄性７周龄的小黑鼠ꎬ体重３５~４０ｇꎬｄｂ/ｄｂｍ＋(基因型:ｄｂ/ｍ＋小黑鼠)雄性７周小黑鼠ꎬ体重量１８~２０ｇꎬ由南京大学－南京生物医药研究院ꎬ南京大学模式动物研究所提供ꎮ本研究方案通过辽宁中医药大学实验动物伦理委员会审核ꎬ批准编号:２０１８ＹＳＤＷ－０３０－０２ꎮ１.２㊀药物与试剂㊀肉苁蓉药材于２０１９年５月采自内蒙古阿拉善(批号:２０１９０５０８－１)ꎬ经辽宁中医药大学药学院翟延君教授鉴定为列当科植物肉苁蓉(ＣｉｓｔａｎｃｈｅｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａＹ.Ｃ.Ｍａ)的干燥带鳞叶肉质茎ꎬ标本保存于辽宁省中药炮制技术产业创新中心ꎮ松果菊苷(ｅｃｈｉｎａｃｏｓｉｄｅ)对照品(批号:ＭＵＳＴ－１３０８０８０１ꎬ纯度ȡ９８％)㊁毛蕊花糖苷(ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ)对照品(批号:ＭＵＳＴ－１３１２２７１１ꎬ纯度ȡ９８％)㊁异毛蕊花糖苷(ｉｓｏａｃｔｅｏｓｉｄｅ)对照品(批号:ＭＵＳＴ－１５０８１００１ꎬ纯度ȡ９９.７７％)㊁甜菜碱对照品(批号:８９４－２００００１ꎬ纯度ȡ９８％)均购自中国药品生物制品检定所ꎻＤ１０１型大孔树脂由成都曼斯特生物科技有限公司提供ꎮ小鼠抗８－羟基脱氧鸟苷(８－ＯＨｄＧ)单克隆抗体[批号:ａｂ６２６２３ꎬ艾博抗(上海)贸易有限公司]ꎻＰＡＳ(批号:Ｇ１２８１ꎬ北京索莱宝科技有限公司)ꎻ抗荧光淬灭封片液(海碧云天生物技术有限公司)ꎻＳＰ９００１兔ＳＰ检测试剂盒(无锡傲锐东源生物科技有限公司)ꎻＤＡＢ㊁胰岛素(ＩＮＳ)㊁糖化血红蛋白(ＨｂＡ１ｃ)㊁甘油三酯(ＴＧ)㊁小鼠总胆固醇(ＴＣ)㊁低密度脂蛋白(ＬＤＬ－Ｃ)㊁高密度脂蛋白(ＨＤＬ－Ｃ)㊁尿酸(ＵＡ)㊁肌酐(Ｃｒ)㊁丙二醛(ＭＤＡ)㊁超氧化物歧化酶(ＳＯＤ)㊁尿微量白蛋白(ｍＡＬＢ)试剂盒(上海朗顿生物技术有限公司)ꎮ胆固醇㊁二甲苯㊁无水乙醇㊁乙腈㊁甲醇为色谱纯ꎬ水为超纯水ꎬ其他试剂均为分析纯ꎮ１.３㊀主要仪器㊀ＡＣＱＵＩＴＹＨ－ＣｌａｓｓＵＰＬＣ(美国Ｗａｔｅｒｓ公司)ꎻ血糖仪和血糖试纸条(拜耳医药保健有限公司)ꎻＡＥ２４０型１/１０万电子分析天平(瑞士梅特勒－托利多公司)ꎻＦＡ１００４型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)ꎻＢＮ－５１８生物组织自动包埋机(湖北伯纳医疗科技有限公司)ꎻ电热恒温干燥箱(忠伟电子仪表有限公司)ꎻＬｅｉｃａＲＭ２２４５切片机(德国ＬｅｉｃａＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司)ꎻｐＨ酸度计(上海鹏顺科学仪器有限公司)ꎻＭｉｌｌｉ－ＱＩｎｔｅｇｒａｌ３型净水机(法国Ｍｏｌｓｈｅｉｍ公司)ꎮ２㊀实验方法２.１㊀肉苁蓉炮制品制备㊀肉苁蓉:取肉苁蓉药材ꎬ洗净杂质ꎬ上锅常压蒸制２ｈꎬ切成６ｍｍꎬ７０ħ烘干ꎮ酒苁蓉:取肉苁蓉饮片ꎬ加入适量黄酒拌匀ꎬ闷润８ｈ(黄酒ʒ水＝１ʒ１)ꎬ高压蒸制４ｈꎬ７０ħ烘干ꎮ(每１００ｇ肉苁蓉用黄酒３０ｍＬ)ꎮ２.２㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位富集㊀取肉苁蓉/酒苁蓉粗粉３０ｇꎬ加１０倍量水加热回流提取２次ꎬ每次２ｈꎬ合并提取液ꎬ浓缩ꎬ加乙醇至含醇量达６０％ꎬ低温沉淀１２ｈꎬ抽滤ꎬ沉淀即为粗多糖部位ꎮ将上清液浓缩至适当浓度ꎬ上Ｄ１０１大孔吸附树脂ꎬ依次用水和不同浓度的乙醇洗脱ꎬ收集水洗脱液ꎬ减压浓缩至稠膏ꎬ即为总寡糖部位ꎻ４０％乙醇洗脱液ꎬ减压浓缩干燥ꎬ即为肉苁蓉总苷部位ꎮ２.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位含量测定２.３.１㊀肉苁蓉/酒苁蓉总多糖的含量测定㊀称取葡萄糖样品２０.００ｍｇ于５０ｍＬ容量瓶中ꎬ制成０.４ｍｇ ｍＬ－１的葡萄糖标准溶液ꎬ分别吸取３㊁４㊁５㊁６㊁７ｍＬ置于５０ｍＬ容量瓶ꎬ用水定容至刻度ꎬ分别吸取各个浓度梯度的葡萄糖溶液２.０ｍＬ于试管中ꎬ另取等量蒸馏水作空白对照ꎬ在各管加入１ｍＬ５％苯酚ꎬ摇匀ꎬ迅速加入５ｍＬ浓硫酸ꎬ放置１０ｍｉｎꎬ置４０ħ水浴中保持１５ｍｉｎꎬ取出ꎬ迅速冷却至室温ꎬ在４９０ｎｍ处测其吸光度值ꎬ以吸光度(Ａ)为纵坐标ꎬ葡萄糖浓度(Ｃ)为横坐标ꎬ绘制标准曲线ꎬ得回归方程Ｙ＝８.３７Ｘ－０.１６２８(Ｒ２＝０.９９４６)ꎮ精密称取生㊁制品总多糖部分的粉末１.０ｇꎬ分别置于５０ｍＬ容量瓶中ꎬ加水溶解并定容至刻度ꎬ精密吸取２.０ｍＬ于试管中ꎬ同标准曲线制备方法ꎬ测定ꎬ即得ꎮ２.３.２㊀肉苁蓉/酒苁蓉中甜菜碱的含量测定２.３.２.１㊀对照品溶液制备㊀精密称定甜菜碱对照品１.１７ｍｇꎬ放入５ｍＬ量瓶中ꎬ加入５０％甲醇溶解并定容ꎬ即得ꎮ２.３.２.２㊀色谱条件㊀色谱柱为Ｅｃｏｓｉｌ１２０－５－ＡＭＩＮＯ色谱柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ流动相:乙腈－水(９９.５ʒ０.５)ꎬ柱温:３０ħꎬ检测波长:１９４ｎｍꎬ流速:０.６ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ进样量１０μＬꎬ色谱图见图１ꎮＡ.甜菜碱对照品ꎻＢ.肉苁蓉总寡糖部位ꎻＣ.酒苁蓉总寡糖部位图１㊀肉苁蓉/酒苁蓉总寡糖部位的高效液相色谱图２.３.２.３㊀供试品溶液的制备㊀精密称取生㊁制品总寡糖部位的粉末１.０ｇꎬ分别置于５ｍＬ容量瓶中ꎬ加蒸馏水溶解并定容至刻度ꎬ摇匀ꎬ过０.４５μＬ微孔滤膜ꎬ即得ꎮ２.３.２.４㊀样品含量测定㊀精密吸取生㊁制肉苁蓉中总寡糖供试品溶液ꎬ按 ２.３.２.２ 项下条件测定ꎬ计算样品中甜菜碱含量ꎮ２.３.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉中松果菊苷㊁毛蕊花糖苷和异类叶升麻苷含量测定２.３.３.１㊀对照品溶液的制备㊀精密称定松果菊苷４.５０ｍｇ㊁毛蕊花糖苷４.８０ｍｇ㊁异类叶升麻苷５.０５ｍｇ分别放入５ｍＬ容量瓶内ꎬ加５０％甲醇溶解并定容至刻度ꎬ分别取各对照品溶液２００μＬꎬ置于进样小瓶内ꎬ加４００μＬ５０％甲醇ꎬ混匀ꎬ制成混合对照品溶液ꎬ摇匀ꎬ即得ꎮ２.３.３.２㊀色谱条件㊀色谱柱为ＥｃｏｓｉｌＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ甲醇为流动相Ａꎬ０.１％甲酸为流动相Ｂꎬ梯度洗脱ꎬ０~４５ｍｉｎꎬ３０％Ａң７０％Ａꎬ流速１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ柱温３０ħꎬ检测波长３３０ｎｍꎬ进样量１０μＬꎬ色谱图见图２ꎮＡ.混合对照品ꎻＢ.肉苁蓉总苷部位ꎻＣ.酒苁蓉总苷部位㊀１.松果菊苷ꎻ２.毛蕊花糖苷ꎻ３.异类叶升麻苷图２㊀肉苁蓉/酒苁蓉总苷的样品高效液相色谱图２.３.３.３㊀供试品溶液的制备㊀精密称取生㊁制品总苷部分粉末１.０ｇꎬ分别置于１００ｍＬ容量瓶中ꎬ加５０％甲醇溶解并定容至刻度ꎬ摇匀ꎮ各精密吸取５ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶中ꎬ加入５０％甲醇定容ꎬ摇匀ꎬ过０.４５μｍ微孔滤膜ꎬ即得ꎮ２.３.３.４㊀样品含量测定㊀精密吸取肉苁蓉总苷样品ꎬ按 ２.３.３.２ 项下条件测定ꎮ计算样品中松果菊苷㊁毛蕊花糖苷以及异类叶升麻苷的含量ꎮ２.４㊀动物分组㊁造模及给药㊀动物房为１２ｈ光照㊁１２ｈ黑暗ꎬ相对湿度为５０％~７０％ꎬ室温为１８~２２ħꎮｄｂ/ｄｂ小黑鼠和ｄｂ/ｍ小黑鼠(正常对照组)以普通饲料正常喂养ꎬ至９周龄开始实验ꎬ除去正常对照组外ꎬ其余ｄｂ/ｄｂ小黑鼠根据血糖值及体重随机分为８组ꎬ分别是模型组㊁阳性对照组㊁肉苁蓉总多糖组㊁肉苁蓉总寡糖组㊁肉苁蓉总苷组㊁酒苁蓉总多糖组㊁酒苁蓉总寡糖组㊁酒苁蓉总苷组ꎮ除正常对照组和模型组外ꎬ其余各组大鼠按２ｍＬ/１００ｇ的剂量连续４周灌胃给药ꎬ药液浓度均为４.１ｇ ｋｇ－１ꎬ正常对照组和模型组同法同量灌胃生理盐水ꎮ２.５㊀肉苁蓉不同炮制品提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血糖水平的影响２.５.１㊀口服葡萄糖耐量(ＯＧＴＴ)检测㊀给药２６ｄ后ꎬ禁食１２ｈꎬ次日给药６０ｍｉｎ后ꎬ各组小黑鼠分别给予２.０ｇ ｋｇ－１的葡萄糖ꎬ分别于０㊁０.５㊁１.０㊁２.０ｈ尾静脉取血测定血糖值ꎬ以血糖值为纵坐标ꎬ时间为横坐标ꎬ制作血糖变化图ꎬ并按公式计算各实验组血糖曲线的线下面积(ＡＵＣꎬｈｍｍｏＬ Ｌ－１)[１９]ꎮＡＵＣ＝Ａˑ０.２５＋Ｂˑ０.５０＋Ｃˑ０.７５＋Ｄ式中:Ａ㊁Ｂ㊁Ｃ㊁Ｄ分别为０㊁０.５㊁１.０㊁２.０ｈ的血糖值ꎮ２.５.２㊀胰岛素抵抗指数及动脉硬化指数计算㊀根据文献方法计算胰岛素抵抗指数[２０]:ＨＯＭＡ－ＩＲ＝ＧｌｕｃｏｓｅˑＩｎｓｕｌｉｎ/２２.５ꎬＨＯＭＡ－β＝２０ˑＩｎｓｕｌｉｎ/(Ｇｌｕｃｏｓｅ－３.５)ˑ１００％ꎮＩＲ是胰岛素抵抗ꎬβ(％)是β细胞功能ꎮ葡萄糖的摩尔单位ｍｍｏＬ Ｌ－１ꎮ胰岛素以ｍＵ Ｌ－１给出ꎮ葡萄糖和胰岛素数字都是在禁食期间检测ꎮ根据Ｚｈｅｎｇ等[２１]描述的方法计算动脉硬化指数(Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃｉｎｄｅｘ)ꎬ计算方法:Ａｔｈｅｒｏ￣ｇｅｎｉｃｉｎｄｅｘ＝(ＴＣ－ＨＤＬ－Ｃ)/ＨＤＬ－Ｃꎮ２.５.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血清ＩＮＳ㊁ＨｂＡ１ｃ的影响㊀取冻存血清样品放至室温后ꎬ用于ＩＮＳ㊁ＨｂＡ１ｃ酶联免疫试剂盒的测试ꎬ严格按照试剂盒说明书的方法及步骤进行操作ꎮ２.６㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏氧化应激水平影响㊀取冻存血清样品放至室温后ꎬ用于ＭＤＡ㊁ＳＯＤ酶联免疫试剂盒的测试ꎬ严格按照试剂盒说明书的方法及步骤进行操作ꎮ２.７㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏脂肪代谢的影响㊀大鼠血清ＴＧ㊁ＴＣ㊁ＨＤＬ－Ｃ㊁ＬＤＬ－Ｃ水平测定均采用相关试剂盒测定ꎬ具体测定步骤参考试剂盒说明书ꎮ２.８㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆和尿液中ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ的影响㊀取冻存血浆㊁尿液样品放至室温后ꎬ用于ＵＡ㊁Ｃｒ㊁ｍＡＬＢ酶联免疫试剂盒的测试ꎬ严格按照试剂盒说明书的方法及步骤进行操作ꎮ２.９㊀ＨＥ染色法观察胰腺和肾脏病理切片㊀取出经１０％多聚甲醛固定液浸泡２４ｈ后的胰腺㊁肾脏组织ꎬ蒸馏水清洗组织后保存于７０％乙醇中ꎮ取出组织样品ꎬ经过梯度乙醇脱水㊁透明处理㊁石蜡包埋和切片处理ꎬ然后用苏木精和伊红染色(Ｈ＆Ｅ染色)ꎮ待切片胶干后用高分辨率数码成像系统观察切片并拍照ꎮ２.１０㊀免疫组化法测定肾脏组织ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ的表达㊀取肾脏切片脱蜡至水后进行抗原修复ꎬ１０％山羊血清封闭ꎬ一抗４ħ孵育过夜ꎬ洗涤后孵育二抗ꎬ现配溶液ＤＡＢ显色ꎬ洗涤㊁脱水㊁封片ꎬ于光学显微镜下观察肾脏组织ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ蛋白表达ꎮ２.１１㊀统计学方法㊀运用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍＶｅｒｓｉｏｎ５.０１(２００７ꎬＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅｉｎｃ)软件分析数据ꎬ结果以ｍｅａｎʃＳ.Ｅ.Ｍ.表示ꎬ两组间差异进行Ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡ(ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉᶄｓｃｏｍｐａｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｐａｉｒｓｏｆｃｏｌｕｍｎｔｅｓｔ)方法ꎬＰ<０.０５为差异显著ꎬ具有统计学意义ꎮ３㊀实验结果３.１㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位含量测定结果㊀按 ２.３ 项下条件测定ꎬ肉苁蓉及酒苁蓉不同提取部位含量测定结果见表１ꎮ表１㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位含量测定结果成分总多糖(％)甜菜碱/ｍｇ ｇ－１松果菊苷/ｍｇ ｇ－１毛蕊花糖苷/ｍｇ ｇ－１异类叶升麻苷/ｍｇ ｇ－１肉苁蓉１.３８０.９８７５２.０１０２０.９５８２０.５８２０酒苁蓉１.１９１.０４４１１.８２６７０.７１４７０.６７０５３.２㊀药理学指标测定结果３.２.１㊀一般情况观察㊀动物实验周期为４周ꎬ每周测定小黑鼠的空腹体重ꎬ结果见表２ꎮ灌胃实验开始至结束ꎬ模型组小黑鼠的体重出现持续上升ꎬ符合２型糖尿病模型体重增加的特征ꎮ正常对照组大鼠的体重基本不变ꎮ不同给药组对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠灌胃１周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组大鼠体重增加的状态均有不同程度改善ꎬ其中以酒苁蓉总苷的改善作用最为明显(Ｐ<０.０５)ꎻ不同给药组对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠灌胃２周和４周后ꎬ酒苁蓉寡糖体重改善明显(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎮ以上结果表明ꎬ肉苁蓉及酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠有降低体重的作用ꎬ结果见表２ꎮ表２㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠体重的影响(ｇ)组别０ｄ７ｄ１４ｄ２１ｄ２８ｄ正常对照组２０.００ʃ０.３９２０.４７ʃ０.６７１８.０７ʃ１.００１９.５７ʃ１.３３１９.９７ʃ１.４７模型组３８.７８ʃ０.５０＃４０.７５ʃ１.６８＃＃３７.９３ʃ１.２０＃＃４１.３０ʃ０.８０＃＃４６.５５ʃ１.１９＃＃阳性对照组３７.９０ʃ１.８０３９.８８ʃ１.７４３６.９５ʃ１.９４３８.６０ʃ１.５６４３.４７ʃ１.９６肉苁蓉多糖组３９.９７ʃ１.０３３９.６０ʃ０.７６３７.９２ʃ１.４４４２.１７ʃ１.４８４４.８３ʃ１.４０肉苁蓉寡糖组３９.３３ʃ１.７１４０.４２ʃ２.０２３９.４７ʃ１.３８４１.０３ʃ２.１６４３.９２ʃ２.１４肉苁蓉总苷组３９.５３ʃ１.２４４０.４７ʃ１.１６３９.５５ʃ１.０９４２.６３ʃ１.２４４６.２２ʃ１.１８酒苁蓉多糖组３９.２０ʃ１.１６３９.４５ʃ１.２８３８.１７ʃ０.８１４２.４５ʃ０.９３４４.７０ʃ１.０５酒苁蓉寡糖组３６.８８ʃ０.６２３８.５８ʃ１.１７３４.１０ʃ０.５５∗３８.０３ʃ０.７１４０.６８ʃ０.６１∗∗酒苁蓉总苷组３７.２５ʃ０.６５３６.１０ʃ０.９７∗３６.１０ʃ０.４３３９.５８ʃ１.０３４３.４２ʃ１.０３㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ３.２.２㊀肉苁蓉不同炮制品提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血糖水平的影响㊀正常对照组ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血糖均维持在一个正常水平(４.３~５.７ｍｍｏＬ Ｌ－１)ꎬ而模型组小黑鼠血糖持续升高(Ｐ<０.０１)ꎮ与模型组相比ꎬ给药１周后ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖㊁总苷组及酒苁蓉总多糖㊁总寡糖㊁总苷ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０１)ꎻ给药２周后ꎬ酒苁蓉总苷ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０５)ꎻ给药３周后ꎬ肉苁蓉总多糖和酒苁蓉总寡糖ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎻ给药４周后ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖及酒苁蓉总多糖㊁总寡糖㊁总苷ＦＢＧ降低(Ｐ<０.０５)ꎬ结果见表３ꎮ㊀㊀在口服葡萄糖耐量实验(见表４)中ꎬ正常对照组小黑鼠的平均血糖水平在３０ｍｉｎ时达到峰值ꎬ然后快速下降到正常水平ꎮ而模型组小黑鼠的平均血糖水平在３０ｍｉｎ达到峰值后ꎬ继续保持在较高的水平ꎮ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠血糖达到最高值后呈不同程度的下降趋势ꎬ其中酒苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组下降速度较快ꎮ此外ꎬ根据计算得各组ＡＵＣꎬ结果显示各给药组小黑鼠ＡＵＣ均低于模型组ꎬ肉苁蓉总多糖和酒苁蓉总苷降低了给予葡萄糖后２个时间点(９０㊁１２０ｍｉｎ)的血糖值(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ肉苁蓉总寡糖和酒苁蓉总多糖降低了给予葡萄糖１２０ｍｉｎ后的血糖值(Ｐ<０.０５)ꎬ酒苁蓉总寡糖降低了给予葡萄糖后３个时间点(０㊁９０㊁１２０ｍｉｎ)及曲线下面积(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎮ结果表明ꎬ肉苁蓉和酒苁蓉可改善ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的ＯＧＴＴ能力ꎮ表３㊀肉苁蓉不同炮制品及提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠ＦＢＧ值的影响(ｍｍｏＬ Ｌ－１)组别０ｄ７ｄ１４ｄ２１ｄ２８ｄ正常对照组５.３３ʃ０.２８４.９７ʃ０.５２４.３３ʃ０.２２５.６７ʃ０.５３５.１０ʃ０.３３模型组１６.９２ʃ１.８８＃＃１９.５５ʃ３.３１＃＃１４.９０ʃ１.４０＃＃１２.４０ʃ０.７８＃＃１２.８２ʃ０.７７＃＃阳性对照组１６.９２ʃ１.０６１４.２０ʃ１.９１∗８.６０ʃ０.８９∗∗１０.２０ʃ１.４８１０.３５ʃ２.０８肉苁蓉多糖组１５.４７ʃ０.８６１１.３２ʃ１.０９∗∗１４.０７ʃ１.７７７.７３ʃ０.７７∗９.０５ʃ１.１４∗肉苁蓉寡糖组１７.３５ʃ３.２３１０.００ʃ１.０５∗∗１１.５５ʃ１.０８１１.０２ʃ０.７９９.１８ʃ１.００∗肉苁蓉总苷组１６.６３ʃ１.５８８.３２ʃ１.９５∗∗１２.７７ʃ２.０１１４.８５ʃ３.０７１２.００ʃ１.９３酒苁蓉多糖组１７.１５ʃ１.７６１１.３０ʃ１.４９∗∗１４.６８ʃ１.２５１２.５５ʃ１.００８.８２ʃ０.９１∗酒苁蓉寡糖组１３.００ʃ１.３１９.４３ʃ１.６９∗∗６.４３ʃ１.５６.５５ʃ０.５８∗∗８.９０ʃ１.０３∗酒苁蓉总苷组１４.６３ʃ０.５７１２.７５ʃ０.９６∗∗１０.６３ʃ１.４８∗９.８０ʃ１.１０８.２７ʃ０.３４∗㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ㊀㊀与正常对照组相比ꎬ模型组小黑鼠胰岛素抵抗指数(ＨＯＭＡ－ＩＲ)㊁ＨｂＡ１ｃ水平升高(Ｐ<０.０５)ꎬ胰岛β细胞分泌指数(ＨＯＭＡ－β)水平降低ꎮ与模型组相比ꎬ肉苁蓉寡糖组㊁肉苁蓉多糖组㊁酒苁蓉寡糖组与酒苁蓉总苷组血清ＨｂＡ１ｃ含量明显降低(Ｐ<０.０５)ꎻ肉苁蓉多糖组㊁酒苁蓉多糖组㊁酒苁蓉寡糖组与酒苁蓉总苷组ＨＯＭＡ－ＩＲ指数明显降低(Ｐ<０.０５)ꎻ经过给药组干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠胰岛β细胞分泌指数水平均有不同程度的升高ꎬ结果见表５ꎮ胰岛素属于一种蛋白质激素ꎬ主要由胰腺组织中的胰岛β细胞合成与分泌ꎬ参与机体的糖代谢ꎬ维持机体血糖平衡ꎬ血清ＩＮＳ水平可反映糖尿病治疗的效果ꎮ从表５可知ꎬ与正常组相比ꎬ模型组小黑鼠的ＩＮＳ水平显著降低(Ｐ<０.０１)ꎮ经过给药组干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠空腹血清胰岛素水平均有不同程度的升高ꎬ其中以肉苁蓉和酒苁蓉的总苷组升高最为明显ꎮ结果表明ꎬ各给药组可提高ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的血清胰岛素水平ꎬ促进胰岛β－细胞分泌胰岛素ꎮ表４㊀肉苁蓉不同炮制品及提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠ＯＧＴＴ的影响组别ＡＵＣ/ｈ ｍｍｏＬ Ｌ－１０ｍｉｎ３０ｍｉｎ６０ｍｉｎ９０ｍｉｎ１２０ｍｉｎ正常对照组１４.９８ʃ２.９４４.６５ʃ０.３０９.００ʃ３.５７６.６５ʃ１.３２４.６８ʃ０.３３４.３２ʃ０.５７模型组３６.９１ʃ１.２２＃＃１２.２３ʃ１.１８＃＃２３.０２ʃ２.４２＃＃１３.３８ʃ０.８５＃＃１２.４ʃ０.２３＃＃１２.１３ʃ０.３６＃＃阳性对照组３０.９６ʃ２.６２１０.５０ʃ０.８７２０.６３ʃ２.７３１３.４０ʃ１.６６８.４３ʃ１.０２∗∗７.９７ʃ０.５４∗∗肉苁蓉多糖组３３.９０ʃ０.９０１４.７０ʃ２.８０２８.４２ʃ２.６９１０.６３ʃ０.４０８.２５ʃ０.２４∗∗８.０５ʃ０.５８∗∗肉苁蓉寡糖组３６.８１ʃ０.３６１３.２０ʃ１.７４２９.７５ʃ０.５６１２.８５ʃ０.９７９.８０ʃ０.９７９.００ʃ０.３２∗肉苁蓉总苷组３５.９７ʃ２.７８１５.０８ʃ３.３３２８.２０ʃ４.７７１３.８８ʃ３.３３１１.７０ʃ１.２４１０.２０ʃ０.６５酒苁蓉多糖组３３.２５ʃ２.７８１１.１０ʃ１.１０２６.４０ʃ２.４７１０.９０ʃ１.０７１０.９８ʃ１.４５９.１０ʃ１.５０∗酒苁蓉寡糖组２６.４２ʃ２.７１∗∗８.００ʃ０.８８∗２１.１５ʃ３.４３９.４３ʃ１.４１８.０５ʃ１.００∗∗６.７８ʃ０.３６∗∗酒苁蓉总苷组３２.９７ʃ２.４７１０.７３ʃ０.３３２６.２２ʃ２.５６１１.２０ʃ１.２０８.８５ʃ０.９５∗８.７７ʃ０.９３∗㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ表５㊀ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的ＨＯＭＡ－ＩＲ㊁ＨＯＭＡ－β和血清ＨｂＡ１ｃ㊁ＩＮＳ水平组别ＨｂＡ１ｃ/ｎｇ ｍＬ－１ＩＮＳ/ｍＵ Ｌ－１ＨＯＭＡ－ＩＲＨＯＭＡ－β正常对照组３９.９１ʃ２.５３６６.３９ʃ６.１６１２.１７ʃ０.５７６３.４８ʃ５.８３模型组５０.６２ʃ４.２０＃４５.９５ʃ１.８１＃＃３１.３４ʃ６.６４＃＃１６.３２ʃ１.１８＃＃阳性对照组４５.８３ʃ３.１８５４.９１ʃ３.３１∗２６.０１ʃ６.４６２１.９０ʃ１.８６肉苁蓉多糖组３８.４３ʃ０.２０∗４８.５０ʃ３.１０１９.６４ʃ２.９９∗１８.２７ʃ１.８９肉苁蓉寡糖组３７.６０ʃ３.６８∗５２.９５ʃ２.８９２１.８９ʃ３.３３２０.９４ʃ２.３６肉苁蓉总苷组４０.３７ʃ３.６７５３.４２ʃ２.３５２７.３５ʃ４.０２１９.７１ʃ１.４５酒苁蓉多糖组４５.１３ʃ３.６７４６.１６ʃ３.１２１８.２４ʃ２.６０∗１７.０９ʃ１.００酒苁蓉寡糖组３７.３０ʃ５.９９∗４７.９５ʃ６.０３１９.３２ʃ３.８０∗２０.２０ʃ３.２７酒苁蓉总苷组４０.２０ʃ１.０１∗５１.９４ʃ３.０７１９.０４ʃ１.０８∗２０.５４ʃ１.８６㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ３.２.３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏氧化应激水平影响㊀模型组小黑鼠肝脏ＭＤＡ水平显著高于正常组(Ｐ<０.０５)ꎮ经过给药组干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组的ＭＤＡ水平均出现不同程度下降(Ｐ<０.０５)ꎬ其中肉苁蓉总多糖㊁肉苁蓉总寡糖㊁肉苁蓉总苷㊁酒苁蓉总苷和酒苁蓉总寡糖的小黑鼠肝脏组织ＭＤＡ水平减少最明显(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎮ结果表明ꎬ肉苁蓉对降低ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏组织ＭＤＡ水平具有一定的效果ꎬ改善效果好于酒苁蓉给药组ꎮ模型组小黑鼠肝组织中ＳＯＤ活力低于正常对照组(Ｐ<０.０５)ꎮ当给予肉苁蓉和酒苁蓉不同提取部位灌胃后ꎬ可提高ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏组织中ＳＯＤ活力ꎬ与模型组相比ꎬ各给药组均可恢复ＳＯＤ活力ꎬ其中肉苁蓉总苷组差异有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎬ结果见表６ꎮ３.２.４㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肝脏脂肪代谢的影响㊀为评价肉苁蓉/酒苁蓉对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的血清血脂代谢水平影响ꎬ实验检测了糖尿病脂质代谢相关标志物ꎮ从表７可知ꎬ与正常对照组相比ꎬ模型组小黑鼠血清ＬＤＬ－Ｃ水平显著升高(Ｐ<０.０５)ꎬＨＤＬ－Ｃ水平降低ꎮ经过给药干预４周后ꎬ与模型组相比ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组以及酒苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组的血清ＴＧ㊁ＴＣ和ＬＤＬ－Ｃ水平均出现不同程度降低ꎬＨＤＬ－Ｃ水平升高ꎬ其中肉苁蓉总苷组有改善ＴＣ水平作用(Ｐ<０.０５)ꎮ结果表明ꎬ肉苁蓉和酒苁蓉在一定程度上可改善ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的脂代谢紊乱ꎮ表６㊀ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的肝脏重量㊁相对肝脏重量和肝脏ＳＯＤ㊁ＭＤＡ水平组别肝脏重量/ｇ相对肝脏重量(％)ＳＯＤ/ｎｍｏＬ ｍＬ－１ＭＤＡ/ｎｇ ｍＬ－１正常对照组０.８６ʃ０.０３４.３３ʃ０.２０１９.８９ʃ０.５４３３.９４ʃ１.０５模型组２.３９ʃ０.０９＃＃５.１２ʃ０.１１＃１７.３６ʃ０.９８＃３８.３２ʃ０.９４＃阳性对照组２.１３ʃ０.２０４.８７ʃ０.２８１６.９２ʃ０.１９３０.５３ʃ０.８６∗∗肉苁蓉多糖组２.１３ʃ０.０６４.７５ʃ０.１７１８.５３ʃ０.５６３１.３１ʃ０.４１∗∗肉苁蓉寡糖组２.１８ʃ１.１３４.８５ʃ０.３９１８.９５ʃ０.８７３１.８１ʃ０.４２∗∗肉苁蓉总苷组２.３５ʃ０.２１５.０８ʃ０.４２１９.８２ʃ０.５０∗３０.５１ʃ１.３８∗∗酒苁蓉多糖组２.３３ʃ０.０５５.２３ʃ０.２０１８.０３ʃ０.４０３６.４６ʃ１.２５酒苁蓉寡糖组１.７７ʃ０.１２∗∗４.３５ʃ０.２４∗１９.１７ʃ０.８６３４.０６ʃ０.８７∗酒苁蓉总苷组２.２２ʃ０.０５５.１３ʃ０.２０１８.６１ʃ１.４７３３.１９ʃ３.１５∗㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ３.２.５㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆和尿液中ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ的影响㊀给药４周后ꎬ与模型组相比ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖以及酒苁蓉总苷组的ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平均出现不同程度的降低ꎬ其中肉苁蓉总苷组对血浆中的Ｃｒ以及尿液中的Ｃｒ㊁ＵＡ和ｍＡＬＢ有降低作用(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ酒苁蓉多糖组对尿液中的ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平改善作用(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ酒苁蓉对血浆中ＵＡ水平有改善作用(Ｐ<０.０５)ꎬ肉苁蓉总苷一定程度上可降低ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平ꎮ３.２.６㊀肉苁蓉不同炮制品及提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠胰腺㊁肾脏组织病理学影响㊀正常对照组小黑鼠胰腺组织无病理学损伤ꎬ胰岛可见清晰边缘ꎬ胰岛细胞呈椭圆形且有序排列在胞浆中ꎬ细胞核呈圆形ꎬ胰岛数量较多且体积较大ꎮ模型组小黑鼠胰腺组织无完整胰岛ꎬ胰岛边缘不清晰且形状不完整ꎬ胰岛β细胞排列杂乱无章ꎬ数量较少ꎬ并出现萎缩现象ꎬ胰腺出现严重损伤ꎮ与模型组大鼠相比ꎬ经过肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位灌胃４周后ꎬ各提取部位给药组的胰岛组织部分恢复ꎬ胰岛细胞体积出现不同程度变大ꎬ胰岛细胞可见清晰的边界ꎬ排列无序的状况得到改善ꎮ其中ꎬ以肉苁蓉和酒苁蓉总苷组恢复的最好ꎮ表７㊀ｄｂ/ｄｂ小黑鼠的肝脏ＴＣ㊁ＬＤＬ－Ｃ㊁ＨＤＬ－Ｃ和ＴＧ水平组别ＴＧ/μｍｏＬ Ｌ－１ＬＤＬ－Ｃ/ｍｍｏＬ Ｌ－１ＴＣ/ｍｍｏＬ Ｌ－１ＨＤＬ－Ｃ/μｍｏＬ ｍＬ－１ＨＤＬ－Ｃ/ＴＣ动脉硬化指数正常对照组１.１２ʃ０.０４１.５８ʃ０.３０３.５６ʃ０.０９２.２８ʃ０.０２０.６４ʃ０.０２０.５６ʃ０.０４模型组１.１９ʃ０.０６２.２６ʃ０.１１＃＃３.６８ʃ０.１３＃＃２.２６ʃ０.０２０.６２ʃ０.０２０.６３ʃ０.０６阳性对照组１.０９ʃ０.０４２.１５ʃ０.０９３.２０ʃ０.１２２.１０ʃ０.０５０.６６ʃ０.０３０.５３ʃ０.０７肉苁蓉多糖组１.２３ʃ０.０５２.１１ʃ０.０８３.９７ʃ０.３３２.１８ʃ０.０４０.５６ʃ０.０４０.８２ʃ０.１４肉苁蓉寡糖组１.２８ʃ０.０９２.０３ʃ０.０９３.４６ʃ０.１８２.２７ʃ０.０５０.６６ʃ０.０４０.５３ʃ０.０９肉苁蓉总苷组１.１８ʃ０.０３１.９６ʃ０.０６３.０７ʃ０.２２∗２.１１ʃ０.０７０.７０ʃ０.０６０.４６ʃ０.１２酒苁蓉多糖组１.２６ʃ０.０３２.１９ʃ０.０４３.５９ʃ０.０７２.１４ʃ０.０５０.６０ʃ０.０２０.６８ʃ０.０７酒苁蓉寡糖组１.３７ʃ０.０３２.２７ʃ０.０９３.６３ʃ０.０８２.２７ʃ０.０６０.６３ʃ０.０２０.６０ʃ０.０６酒苁蓉总苷组１.２６ʃ０.０６２.２２ʃ０.０８３.６９ʃ０.２４２.２４ʃ０.０７０.６１ʃ０.０４０.６５ʃ０.０９㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ表８㊀治疗第２８天ｄｂ/ｄｂ小黑鼠血浆和尿液中ＵＡ㊁Ｃｒ以及ｍＡＬＢ水平组别Ｃｒ/ｍｇ ｄＬ－１ＵＡ/ｍｇ ｄＬ－１血浆尿液血浆尿液ｍＡＬＢ/μｇ ｄＬ－１正常对照组１.３５ʃ０.０２０.０４１ʃ０.００１１.５６ʃ０.０１９.８０ʃ０.０９８.８５ʃ０.１７模型组１.６２ʃ０.０８＃０.０４４ʃ０.００４１.６７ʃ０.０６＃＃１０.４０ʃ０.７６１１.１１ʃ０.１２阳性对照组１.４１ʃ０.０２０.０４７ʃ０.００１１.８２ʃ０.０７９.５７ʃ０.４８１０.６４ʃ０.７１肉苁蓉多糖组１.４７ʃ０.０８０.０４４ʃ０.００３１.６０ʃ０.０６９.４２ʃ１.０５９.２６ʃ１.４８肉苁蓉寡糖组１.４２ʃ０.０７０.０４０ʃ０.００２１.６３ʃ０.０５８.９４ʃ０.６４１１.０２ʃ０.８１肉苁蓉总苷组１.３３ʃ０.０８∗０.０３４ʃ０.００３∗１.７７ʃ０.１３７.７５ʃ０.５２∗∗９.１５ʃ０.４７∗酒苁蓉多糖组１.５８ʃ０.１１０.０３６ʃ０.００１∗１.６９ʃ０.０７８.０５ʃ０.０６∗∗７.８５ʃ０.６５∗酒苁蓉寡糖组１.４３ʃ０.９９∗０.０５２ʃ０.００４１.６６ʃ０.０７９.８６ʃ０.０６８.００ʃ１.２４酒苁蓉总苷组１.５３ʃ０.０９０.０４３ʃ０.００４１.８３ʃ０.０４９.２１ʃ０.３６１０.５９ʃ１.１９㊀注:与正常对照组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５ꎬ＃＃Ｐ<０.０１ꎻ与模型组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎮ图３㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠胰腺病理学的影响(Ｈ＆Ｅꎬ２００ˑ)㊀㊀正常对照组小黑鼠的肾脏组织无明显损伤ꎬ肾小球结构㊁形态以及与肾小球囊腔的比例正常ꎬ近端小管与远端小管的管壁薄厚㊁管腔大小正常ꎮ模型组小黑鼠肾小球结构㊁形态㊁大小不规则ꎬ血管球萎缩㊁肾球囊腔消失ꎬ近端小管与远端小管的管壁薄厚不匀㊁管腔大小不一㊁界限不清模糊ꎬ肿胀坏死ꎬ有大量的炎性细胞浸润ꎮ与模型组大鼠相比ꎬ经过肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位灌胃４周后ꎬ各提取部位给药组的肾脏组织有所改善ꎬ肾小球结构㊁形态㊁大小接近正常ꎬ近端小管与远端小管的管壁薄㊁管腔大小得到改善ꎬ肿胀减轻ꎬ有的部位仍可见少量的炎性细胞浸润ꎮ其中以肉苁蓉多糖组和酒苁蓉多糖组恢复最好ꎮ３.２.７㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肾脏组织中ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ表达㊀与正常组相图４㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肾脏病理学的影响(Ｈ＆Ｅꎬ２００ˑ)比ꎬ模型组小黑鼠肾脏ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ蛋白表达发生了明显变化(Ｐ<０.０５)ꎮ与模型组相比ꎬ各给药组小黑鼠的平均肾膜基质面积增加ꎬ其中肉苁蓉多糖组㊁酒苁蓉寡糖组㊁酒苁蓉总苷组中ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ的表达改善ꎬ而肾基膜中的ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ表达差异无统计学意义ꎮ图５㊀肉苁蓉/酒苁蓉不同提取部位对ｄｂ/ｄｂ小黑鼠肾脏ｔｙｐｅ－ＩＶｃｏｌｌａｇｅｎ表达型胶原的表达结果４㊀讨论与结论本文研究表明肉苁蓉多糖部位经过酒蒸后含量下降ꎬ推测多糖在酒蒸过程中发生水解ꎻ肉苁蓉寡糖部位中的甜菜碱经过酒蒸后含量增加ꎬ炮制过程中可能生成了甜菜碱类成分ꎬ而使甜菜碱含量增加ꎻ总苷类成分ꎬ松果菊苷的含量稍有下降ꎬ毛蕊花糖苷含量下降ꎬ异类叶升麻苷含量上升ꎮ２型糖尿病(Ｔ２ＤＭ)的病因众多ꎬ其病机是由于β细胞功能障碍和胰岛素抵抗而引起糖㊁脂肪㊁蛋白质的代谢紊乱ꎮ其中基因㊁肥胖和体力活动显然是２型糖尿病最重要的风险因素[２２]ꎮ从中医学角度分析ꎬ２型糖尿病属于 消渴 范畴ꎬ而脾肾阳虚证是因为阳气耗损ꎬ在脾阳虚的状态下无法发挥滋补脾肾的作用ꎬ从而导致阳气损伤的发生[２３]ꎮＨｂＡ１ｃ是评价糖尿病血糖控制的 金标准 ꎮ英国前瞻性糖尿病研究发现ＨｂＡ１ｃ水平越高ꎬ糖尿病慢性并发症发生风险越大ꎮ本实验表明ꎬ肉苁蓉多糖和寡糖及酒苁蓉寡糖和总苷显著降低ＨｂＡ１ｃ水平ꎮＩＮＳ分泌相对不足是２型糖尿病的发病机制之一[２４]ꎮ本研究证明ꎬ肉苁蓉及酒苁蓉各部位均能提高胰岛素水平ꎬ说明生制肉苁蓉不同提取部位可增加胰岛素分泌ꎮｍＡＬＢ对于早期肾损害具有重要参考意义ꎬ而尿Ｃｒ能准确反映肾功能状态[２５]ꎮ肉苁蓉总苷和酒苁蓉总多糖显著降低了ｍＡＬＢ水平ꎬ肉苁蓉总苷㊁酒苁蓉多糖和寡糖显著降低了Ｃｒ水平ꎬ降低了肾功能损害ꎮＵＡ通过参与氧化应激ꎬ导致内皮功能障碍ꎬ加重胰岛素抵抗[２６]ꎮ肉苁蓉总苷和酒苁蓉总多糖显著降低ＵＡ水平ꎬ使尿酸分泌减少ꎬ降低胰岛素抵抗ꎮ２型糖尿病血脂异常的主要表现为ＨＤＬ－Ｃ㊁ＬＤＬ－Ｃ㊁ＴＧ水平升高等ꎬ这些因素同样是诱发动脉粥样硬化的因素[２７]ꎮ本实验中ꎬ肉苁蓉总多糖㊁总寡糖和总苷组以及酒苁蓉总多糖和总苷组的血清ＨＤＬ－Ｃ㊁ＬＤＬ－Ｃ以及ＴＧ水平均出现不同程度降低ꎬ一定程度上可降低血脂从而促进降血糖作用ꎮ肉苁蓉不同提取部位可显著提高ＨＤＬ－Ｃ/ＴＣ水平ꎬ降低动脉粥样硬化指数ꎮ提示肉苁蓉不同提取部位对糖尿病和心血管疾病的治疗均有益处ꎮ研究发现ꎬＭＤＡ在糖尿病患者体内的表达水平比正常人高ꎻ超氧化物歧化酶ＳＯＤ在糖尿病患者的活性比正常人低ꎬ提示氧化应激可能在糖尿病肾病的发生发展中起重要作用[２８]ꎮ本实验各给药组的ＭＤＡ水平均出现不同程度下降ꎬＳＯＤ活力均有提高ꎬ提示在肉苁蓉及酒苁蓉各提取部位有抑制氧化应激的作用ꎮ本文深入研究了肉苁蓉不同提取部位的降血糖作用ꎬ发现肉苁蓉和酒苁蓉总苷具有较好的降血糖作用ꎬ酒苁蓉多糖和寡糖也有一定的降血糖作用ꎬ为临床合理应用肉苁蓉及其炮制品提供可靠实验依据ꎮ肉苁蓉是我国著名的补益中药ꎬ其药理作用广泛ꎬ在临床疾病的预防和治疗中发挥巨大的作用ꎬ其有很好的应用前景ꎮ然而ꎬ肉苁蓉具有抗高血糖和降血脂作用的生物活性成分和机制有待进一步研究ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０:１４０. 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武汉植物学研究!""#$!%&’()*!’+*#", ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, -./0123.45/6217.8219:23;<=<20:6肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究欧阳杰$赵兵$王晓东$王玉春&中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室$北京%""">"(摘要)研究了肉苁蓉&?@A B C D E F G H G A G I B@E J K CL M N M OP(中有效成分苯乙醇糖甙类化合物Q甜菜碱和肉苁蓉多糖提取的集成方法R肉苁蓉先后用甲醇和水超声破碎提取$然后经大孔吸附树脂S T U>柱和强酸型阳离子交换树脂""%V W柱洗脱以及X Y Z[P\Y]^U W*凝胶柱层析$可以分别得到苯乙醇糖甙类化合物*!_#‘a Q甜菜碱%!*_’‘a和肉苁蓉多糖!b_*‘a$其回收率分别为’b_b cQ d!_d c和*#_*cR该法的优点是将肉苁蓉中#种有效成分的提取方法集成起来$具有经济Q高效的特点R关键词)肉苁蓉e苯乙醇糖甙类化合物e甜菜碱e肉苁蓉多糖e提取中图分类号)f g b’e g!>b M!文献标识码)S文章编号)%"""U b W"h&!""#("’U"*!’U"*i jk j l m n o p l m qrm l s t qu t o l s m v w l o p x l y t jt u v u u m x l y z m{|}~l p j x m~u o t!"9=821:6<#<=<089:.32$%L S&^’(Y$)*S$T(+a$,S&^h(P-U.-+a$,S&^L/U N[/+&0B C B G1G23C4J I C B J I2J56@J E F G7@E C K8D9@D G G I@D9$:D A B@B;B G J5<I J E G A A8D9@D G G I@D9$=F G?F@D G A G>E C H G72J50E@G D E G A$T Y(?(+a%""">"$N[(+P(i}~l o p x l)S+(+@Y a A P@Y\‘Y@[-\B-A@[YY]@A P C@(-+-B Z[Y+D E Y@[P+-(\a E D C-F(\Y F&G Y^($H Y@P(+Y P+\Z-E D F P C C[P A(\Y B A-‘?@A B C D E F G H G A G I B@E J K C I P F(+J Y F@(a P@Y\M^A P+/E P A?M H G A G I B@E J K C I P F@A Y P U @Y\I(@[‘Y@[P+-E P+\I P@Y A/+\Y A/E@A P F-+(CI P J Y$P+\@[Y+@[Y B(E@A P@Y I P F Z P F F Y\@[A-/a[‘P C A-A Y@(C/E P A A Y F(+&S T U>(C-E/‘+$F@A-+a U P C(\(C C P@(-+Y]C[P+a Y A Y F(+&""%V W(C-E/‘+P+\ X Y Z[P\Y]^U W*C-E/‘+F/C C Y F F(J Y E D M K A-‘I[(C[*!_#‘a G Y^$%!*_’‘a H Y@P(+Y P+\!b_*‘a ?M H G A G I B@E J K CZ-E D F P C C[P A(\Y I Y A Y-H@P(+Y\$P+\@[Y A Y C-J Y A DI Y A Y’b_b c$d!_d c P+\*#_*cA Y F Z Y C@(J Y E D ML m M N t o q~)?@A B C D E F G H G A G I B@E J K C e G[Y+D E Y@[P+-(\a E D C-F(\Y F e T Y@P(+Y e G-E D F P C C[P A(\Y e O]@A P C@(-+肉苁蓉&?@A B C D E F G H G A G I B@E J K CL M N M OP(为列当科肉苁蓉属多年生高等寄生植物$其味甘咸微辛酸Q微温$在P神农百草经Q中列为上品$具有补肾益精Q润肠通便和延缓衰老等功效$被誉为R沙漠人参S R 肉苁蓉中主要的活性成分是苯乙醇糖甙类化合物&G[Y+D E Y@[P+-(\a E D C-F(\Y F$G Y^(Q肉苁蓉多糖和甜菜碱R其中G Y^主要包括海胆甙Q麦角甾甙Q!T U乙酰麦角甾甙和肉苁蓉甙S R这几种有效成分的药理作用各不相同$G Y^的主要作用是调节内分泌$促进代谢和强壮作用以及清除自由基和抗衰老作用e肉苁蓉多糖可以增强机体的免疫功能e甜菜碱具有抗脂肪肝和抗肿瘤以及扩张外周血管和降压作用U%$!V R 目前在中药有效成分的提取中$一般都是单独研究一种主要有效成分的提取方法$而将多种有效成分综合考虑$进行集成化提取的研究较少R笔者研究肉苁蓉中#种有效成分苯乙醇糖甙类化合物Q肉苁蓉多糖和甜菜碱提取的集成方法$以达到经济Q高效的目的R收稿日期)!""#U"b U%"$修回日期)!""#U"*U!#R作者简介)欧阳杰&%d W%W($男$湖南安仁人$博士研究生$主要从事植物细胞培养和天然产物提取研究R 万方数据!材料与方法!"!材料!"!"!植物材料将肉苁蓉肉质茎于烘箱中#$%烘&’()用粉碎机粉碎)过’$目筛)干燥处储存备用*!"!"+化学试剂和仪器苯乙醇糖甙标准品由本实验室按堵年生,-.的方法自制*化学试剂/012(34156789:;(3<=3>?3公司@A大孔吸附树脂B C7D A强酸型阳离子交换树脂$$E F8:南开大学树脂厂@)其它化学试剂均为分析纯*实验仪器/超声波细胞粉碎机:G H I I7&J)宁波新芝科器研究所@A89&分光光度计:上海精密科学仪器厂@)&9=K层析柱规格为E>=F’9>=*!"+方法!"+"!苯乙醇糖甙类化合物的含量测定;16在--&L=处有强吸收峰,’.)由此可绘制标准曲线)标准曲线方程为/M J--&L=N$O$$D9P$O$E&&D Q E:Q E/苯乙醇糖甙的浓度)R S T=K@*将肉苁蓉提取液浓缩至膏状)加适量水溶解)经乙酸乙酯脱脂后)用正丁醇萃取*浓缩萃取液)稠膏再用水混悬)通过大孔吸附树脂B C7D*先后用水和甲醇洗脱)收集甲醇部分)然后稀释适当倍数)测定其在--&L=下的M J值)即可计算出肉苁蓉中;16的提取量*!"+"+肉苁蓉多糖的含量测定苯酚7硫酸法)以无水葡萄糖为对照品,9.*标准曲线方程为/M J’I$L=N U$O$E-’I P E&O9E-8E Q&:Q&/多糖的浓度) R S T=K@*!"+"V甜菜碱的含量测定按比色法测定,#.*分别吸取浓度为&=S T=K的标准甜菜碱溶液E A&A-A ’A9=K于&9=K带塞试管中)不足9=K的用蒸馏水补足至9=K*滴加E$=K雷氏盐:W1?L1>X1Y3Z[@饱和溶液)将混合液在冰水中冷却E()然后在真空下用玻璃砂芯漏斗过滤*用无水乙醚洗:-F&=K@试管和沉淀*沉淀中的乙醚挥发干后)用8$\丙酮溶解并移至&9=K容量瓶中)并用其定容至&9=K)摇匀)在9&9L=处以8$\丙酮为空白测定吸光度)绘制标准曲线*标准曲线方程为/M J9&9L=N$O$$#8#P $O$’9E E Q-:Q-/甜菜碱的浓度)=S T=K@*测定提取液中的甜菜碱时)取9=K提取液到&9=K三角瓶中)加蒸馏水E$=K)调2]E O$)定容至&9=K容量瓶中*取9=K上述溶液)按标准曲线操作* !"+"^苯乙醇糖甙和甜菜碱提取溶剂的选择准确称取肉苁蓉粉末各E O$S)分别加入#$=K甲醇A #$=K乙醇和#$=K水)室温下浸提)分别于&A’A D AE#A&’A-&(时测;16和甜菜碱的提取量* !"+"_肉苁蓉有效成分提取的集成方法将E S肉苁蓉粉末加#$=K甲醇进行超声波破碎浸提:#$$‘破碎&$=?L@)浸提液过滤后得滤液和滤渣)滤液减压浓缩至膏状)用E$=K水混悬后过大孔吸附树脂:B C7D@柱)先用水洗脱)然后再用甲醇洗脱*将含有;16的甲醇洗脱液集中)减压浓缩后即得苯乙醇糖总甙*将水洗脱液:&$=K@和滤渣合并在一起)再加’$=K蒸馏水)再次进行超声波破碎浸提:#$$‘破碎&$=?L@)过滤*滤液:共#$=K@过强酸型阳离子交换树脂:$$E F8@柱)先用’$=K蒸馏水洗脱)再用#$=K的&=a Z T K]Q Z洗脱*将含有甜菜碱的]Q Z洗脱液集中)再减压浓缩干燥可得到甜菜碱盐酸盐*水洗脱液经01b3S法除蛋白)活性炭脱色后加乙醇沉淀)沉淀物即为肉苁蓉粗多糖*粗多糖用E$=K水溶解后)过012(34156789凝胶柱层析)用蒸馏水洗脱)收集含多糖的洗脱液)即为肉苁蓉多糖*+结果与讨论+"!不同溶剂对苯乙醇糖甙和甜菜碱提取的影响不同溶剂对苯乙醇糖甙和甜菜碱提取的影响结果如图E和图&所示*甲醇对肉苁蓉中;16的提取率远高于乙醇和水*甲醇在室温下浸提D(后)肉苁蓉中的;16的提取量为#8O9=S T S c水对甜菜碱的提取效果明显好于甲醇)D(后测得甜菜碱的提取量E-$O D=S)而甲醇浸提甜菜碱的提取量为I I O D=S)甲醇的提取量为水提取的8#O-\*因此在提取肉苁蓉中;16时以甲醇作提取溶剂)而提取肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究万方数据图强酸性阳离子交换树脂对甜菜碱的洗脱曲线卷万方数据后过滤!在滤液中加入"#$%&的’()乙醇*+,下静置-+.*/$$$01%23离心"(%23*收集沉淀*烘干后得肉苁蓉粗多糖//4#%5!67876肉苁蓉多糖的精制将64849得到的粗多糖溶液用"$%&水溶解*过:;<.=>;?@A B(凝胶柱层析*以C$%&蒸馏水洗脱*流速为$4(%&1%23*每管(%&*洗脱曲线如图(所示!将肉苁蓉多糖洗脱峰/DC管集中*减压浓缩干燥后可得肉苁蓉多糖-+4(%5!由索氏抽提法E"$$,*#.F测得肉苁蓉多糖的含量为+(4#%515*因此多糖的回收率为(/4()!肉苁蓉中有效成分苯乙醇糖甙G甜菜碱和肉苁蓉多糖的集成提取方法如图C所示!经过集成提取*可图H I J K L M N J OP Q R H 凝胶柱层析洗脱曲线肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究万方数据以从!"肉苁蓉中分离到#$%&’"苯乙醇糖甙类化合物(!$#%)’"甜菜碱和$*%#’"肉苁蓉多糖+其回收率分别为)*%*,(-$%-,和#&%#,.参考文献/0!1李琳琳+王晓雯+王雪飞+等2肉苁蓉总苷的抗脂质过氧化作用及抗辐射作用0312中国中药杂志+!--4+556)7/&)*&)420$1薛德钧+章明+吴小红+等2肉苁蓉抗衰老活性成分的研究0312中国中药杂志+!--#+586!!7/)94)9-20&1堵年生+王泓+易杨华2肉苁蓉中苯乙醇甙类化合物的分离和鉴定0312天然产物研究与开发+!--&+:6*7/#920*1堵年生+刘峻岭2大孔吸附树脂;;紫外分光光度法测定肉苁蓉苯乙醇糖甙类的含量0312天然产物研究与开发+!--&+:6&7/&<&&20#1张惟杰2复合多糖生化研究技术0=12上海/上海科技出版社+!--#2)420)1李优琴+高家骅+周维仁+等2比色法测定合成甜菜碱的含量0312江苏农业学报+!---+>:6$7/!$4!$92<&#武汉植物学研究第$!卷万方数据。

专利名称：一种肉苁蓉多糖的提取方法及其应用专利类型：发明专利
发明人：刘小花,陈新平,程世红,辛振辉
申请号：CN202011059609.8
申请日：20200930
公开号：CN112142867A
公开日：
20201229
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供肉苁蓉多糖的提取方法，包括以下步骤：(1)将肉苁蓉药材粗粉依次用乙酸乙酯和乙醇提取，收集药渣得到脱脂后的肉苁蓉粉末；(2)在脱脂后的肉苁蓉粉末中加入木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶，加水使料液比为1：20‑1:25倍，进行酶解，然后超声提取，超声时间为0.5‑0.75小时，提取次数为1‑3次，合并滤液，离心取上清液并浓缩，然后向浓缩液中加入乙醇至乙醇总浓度为80％，静置，离心得到沉淀，将沉淀冷冻干燥。

本发明还提供肉苁蓉多糖在制备预防或治疗急性酒精性胰腺炎的药物中的应用；所述肉苁蓉多糖是应用上述的方法提取得到的。

申请人：兰州大学
地址：730000 甘肃省兰州市城关区天水南路222号
国籍：CN
代理机构：北京中誉威圣知识产权代理有限公司
代理人：王芊雨
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・有效成分・肉苁蓉多糖的分离、纯化和鉴定曾群力1,霍亚楠1,毛俊浩2,郑一凡1Ξ(11浙江大学医学院公共卫生系,浙江杭州　310006;　21浙江大学生命科学院,浙江杭州　310027)摘　要:目的　分离、纯化和鉴定壮阳中药肉苁蓉C istanche d eserticola中的多糖成分。

方法　经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白得到的粗多糖,再经D EA E2Sephadex A250离子交换层析和Sephacryl S2200凝胶柱层析得到纯净的肉苁蓉多糖(CD PS),用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖。

结果　红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰,紫外光谱分析未见核酸和蛋白质的特征吸收峰。

结论　本实验所提取的肉苁蓉多糖为单一、纯净的多糖。

关键词:肉苁蓉多糖;柱层析;光谱分析中图分类号:R28411 文献标识码:A 文章编号:02532670(2002)12105703Isola tion,pur if ica tion and iden tif ica tion of polysacchar ide of C is tanche deserticolaZEN G Q un2li1,HU O Ya2nan1,M AO Jun2hao2,ZH EN G Y i2fan1(11D epartm en t of Pub lic H ealth,Schoo l of M edicine,Zhejiang U n iversity,H angzhou310006,Ch ina;21Co llege of L ife Science,Zhejiang U n iversity,H angzhou310027,Ch ina) Abstract:Object　T he po lysaccharide(CD PS)w as iso lated,p u rified and iden tified from C istanche d eserticola Y.C.M a,a Ch inese m ateria m edica1M ethods　T he po lysaccharide w as ex tracted w ith ho t w ater and p reci p itated by alcoho l1P ro tein in the p reci p itates w as rem oved by Sevag m ethod1T he p roducts w ere fu rther p u rified w ith co lum n ch rom atograp hy on D EA E2Sep hadex A250and Sep hacryl S22001T he CD PS w as idendified by I R sp ectrum and U V(2002400nm)scann ing sp ectrum1Results　I R sp ectrum in2 dicates that there are typ ical characteristic ab so rp ti on p eak s of po lysaccharides1U V scann ing sp ectrum show s that there are no ab so rp ti on p eak s of p ro tein and nucleic acid at po in t280nm and260nm1Conclu-sion　T he CD PS w as iden tified as hom ogeneou s one1Key words:po lysaccharide of C istanche d eserticola Y.C.M a(CD PS);co lum n ch rom atograp hy;sp ec2 trum analysis 肉苁蓉别名大云、寸云,为列当科多年寄生草本植物苁蓉的干燥肉质茎[1],是我国稀有的名贵中药材,具有益精血,补肾助阳,润肠通便,延缓衰老之功能。

第2 3卷第1期 2021年1月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 23 No. 1J a n., 2021I)()I： 10.13194/j.issn.1673-842x.2021.01.044肉苁蓉化学成分、药理作用研究进展及其质量标志物预测分析随家宁1,李芳婵1,郭勇秀1,蒋林1’2』(1.广西中医药大学，广西南宁《0200; 2.广西壮瑶药工程技术研究中心，广西南宁530200;3.广西高校中药制剂共性技术研发重点实验室，广西南宁530200)摘要：肉苁蓉为沙生名贵的滋补中药材，具药用和食用价值主要化学成分有笨乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、多糖等，其中苯乙醇苷类为主要药效物质该文对肉苁蓉化学成分进行总结，阐述肉苁蓉的药理作用，从亲缘性及特有性、传统药效、新的药效、传统药性、代谢转化、可测性，分析可作为其质量标志物的成分，为肉 苁蓉的临床用药提供更精准明确的依据，制定更加科学的质量标准关键词：肉苁蓉；化学成分；药理作用；质量标志物中图分类号：R284; R285 文献标志码：A文章编号：1673-842X(202I)01-019卜05R e v ie w o f C h e m i c a l C o n s t i t u e n t s,P h a r m a c o l o g i c a l E ffe c ts a n d C li n ic a l A p p l i c a t i o n s o f R o u c o n g r o n g( C i s t a n c h e s H e r b a)a n d P r e d i c t i o n a n d A n a ly s i s o f Its Q—m a r k e r sS U I J i a n i n g1,L I F a n g r h a n1, G U O Y o n g x i u1, J I A N(^L i n1'2 '(1. G u a n g x i U n i v e r s i t y o f C h i n e s e M e d i c i n e, N a n n i n g 530200, G u a n g x i, (^h i n a; 2. P h a r m a c e u t i c a lE n g i n e e r i n g T e c h n o l o g y R e s e a r c h(C e n t e r o f (n i a n g x i Z h n a n g a n d Y a o,N a n n i n g 530200,G u a n g x i, C h i n a; 3. G u a n g x i L'n i v e r s i l y K e y L a h o m t o r v o f (G e n e r i c r e c h n o l o g)7R e s e a r c h a n dD e v e l o p m e n t o f T r a d i t i o n a l (C h i n e s e M e d i c i n e P r e j)a m l i〇n,N a n n i n g 530200,C y i i a n g x i, C h i n a)A b s t r a c t:R o u c o n g r o n g( C i s t a n c h e s H e r b a) is i\r a r e(C h i n e s e m e d i c i n a l m a t e r i a l w i t h m e d i c i n a la n d e d i l)l e v a l u e.T h e m a i n c h e m i r a l ci o n s l i t u e n t s a r e|)h e n y l e l h a n o s i d e s, c y r l o e n e e l l i e r t e r p e n e s a n dt h e i r g l y c o s i d e s,l i g n a n s a n d t h e i r g l y c o s i f l e s ,p o l y s a c c h a r i d e s,e t c.P h e n y l e t h a n o s i r l e s a r e t h e m a i n p h a r m a c o d y n a m i c s u b s t a n c e s.T h i s p a p e r s u n i n i a r i z e s o f l^o u c o n g r o n g( (^s t a n c h e s H e r b a) c h e m i c a lc o m p o s i t i o n,a nde x j i o u nf l s R o u c o ng r o n g( (C i s t a n ch e s H e r b a) p h a r m a r o l o gi c a l e f f e c t s,f r o m a f f i n i t y a n du n i q u e,t r a d i t i o n a l e f f i c a c y,t h e n e w d r u g,t r a d i t i o n a l m e f l i c i n a l p r o p e r t i e s,m e t a h o l i c t r a n s f o r m a t i o n, m e a s u r a b i l i t y,q u a l i t y o f a n a l y s i s r a n h e u s e d a s t h e Q—m a r k e r,d e s i g n e d s p e c i f i c a l l y f o r t h e c l i n i r a la p p l i c a t i o n t o p r o v i d e m o r e a c c u r a t e o f H o u c*o n g r o n g( ('.i s l i m c h e s H e rb a) b a s i s,e s t a b l i s h a m o r e sc i e n t i f i cq u a l i t y s t a n d a r d s.K e y w o r d s：R o u r o n g r o n g( C i s t a n c h e s H e r b a); e h e m i c c i l r o n i p o s i l i o n; p h a r m a c o l o g i c a l a c t i o n; q u a l i t y m a r k e r肉苁蓉为列当科多年生草本寄生杭物荒漠肉从蓉（C fsfan r/ie r/eserticoia Y.C.M a)和管花肉灰蓉fu/)u]osa(S c h en k ) W ight]干燥带鱗叶的肉质垄，肉 苁蓉人药始载于《神农本草经》，南北朝时期，肉苁蓉被用于食疗以补虚，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效111肉苁蓉主要化学成分有苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、多糖等，现代药理学研究表明，其具有抗衰老、保肝、缓解体力疲劳、抗骨质疏松、润肠通便等多种生物活性121本文总结归纳肉苁蓉化学成分和药理作用，基于质fi•标志物（Q-m a rk e r)概念，从亲缘性及特有性、传统药效、新的药效、传统药性、代谢转化、可测性，M测分析肉苁蓉质量标志物评价指标，为准确控制肉苁蓉内在质量提供科学依据。

管花肉苁蓉多糖水提物的分离及免疫活性研究作者：艾拉旦·麦麦提艾力李洋姚军袁洁来源：《中国药房》2021年第12期摘要目的：分離管花肉苁蓉多糖水提物，考察分离物的体外免疫活性。

方法：采用AB-8大孔吸附树脂法对管花肉苁蓉多糖进行脱色，以多糖保留率和多糖脱色率为指标进行综合评分，以吸附速率、脱色时间、上样质量浓度为因素，采用正交实验优化脱色工艺并验证。

采用DEAE-650M离子交换柱层析柱对脱色后的管花肉苁蓉多糖水提物进行分离。

采用CCK-8法检测不用质量浓度（6.25～100 μg/mL）分离前、后各种多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率的影响，采用Griess法和酶联免疫吸附测定法检测低、中、高质量浓度（12.5、25、50μg/mL）分离前、后各种多糖对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞一氧化氮（NO）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放量的影响。

结果：AB-8大孔吸附树脂的最优脱色工艺为吸附流速1.2 BV/h，脱色时间9 h，上样质量浓度25 mg/mL;3次验证实验的综合评分分别为63.43%、63.29%、63.34%，平均值为63.35%（RSD=0.11%，n=3）。

从管花肉苁蓉多糖水提物中分离出1种中性多糖（CTZ）和5种酸性多糖（CT1、CT2、CT3、CT4、CT5），含量分别为299.2、168.0、123.2、121.6、54.4、11.2 mg/g。

与对照组比较，6.25～100 μg/mL的CTZ（6.25 μg/mL除外）、CT2、CT4、CT5和6.25 μg/mL的CTC（即分离前的多糖）均可显著增加RAW264.7细胞的增殖率（P关键词管花肉苁蓉多糖;脱色;分离;免疫活性ABSTRACT OBJECTIVE： To isolate the water extract of polysaccharide from Cistanche tubulosa，and to investigate their immunocompetence in vitro. METHODS： AB-8 macroporous adsorption resin was used to decolorize C. tubulosa polysaccharide. The decolorization process was optimized by orthogonal test with retention rate and decolorization rate of polysaccharide as comprehensive score， and using adsorption rate， decolorization time， sample concentration as factors. The verification tests were conducted. DEAE-650M ion exchange column was used to separate the water extract of decolorized C. tubulosa polysaccharide. CCK-8 assay was used to detect the effects of different concentration of polysaccharide （6.25-100 μg/mL） before and after isolation on the proliferation rate of mice macrophage RAW264.7. Griess method and ELISA assay were adopted to detect the effects of low， medium and high concentration of polysaccharide （12.5，25，50 μg/mL） on the release of NO， IL-6 and TNF-α in LPS-induced RAW264.7 cells. RESULTS： In the optimal decolorization process of AB-8 macroporous adsorption resin， the adsorption flow rate was 1.2 BV/h， the decolorization time was 9 h， and sample concentration was 25 mg/mL. The comprehensive scores of 3 times of verification tests were 63.43%， 63.29% and 63.34%， respectively， with an average of 63.35% （RSD=0.11%， n=3）. One neutral polysaccharide （CTZ） and 5 acid polysaccharides （CT1， CT2， CT3， CT4， CT5） were isolated from the polysaccharide of C. cistanche， the contents were 299.2， 168.0， 123.2，121.6， 54.4， 11.2 mg/g. Compared with control group， 6.25-100 μg/mL CTZ （except for 6.25 μg/mL）， CT2， CT4，CT5 and 6.25 μg/mL CTC （the polysaccharide before seperation） could significantly increase the proliferation rate of RAW264.7 cells （PKEYWORDS Cistanche tubulosa polysaccharide; Decolorization; Separation; Immunocompetence管花肉苁蓉为列当科管花肉苁蓉Cistanche tubulosa（Schenk）Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。

肉苁蓉多糖的碱提取及其化学分析高明;田子玉;蔡红梅;高峰【期刊名称】《农产食品科技》【年(卷),期】2008(002)003【摘要】用4％NaOH提肉苁蓉多糖，并对其进行分析。

粗提肉苁蓉多糖蛋白含量为7．55％，其中97．12％为游离态，其余部分为结合态；总糖含量为63．84％；大体含有4个分子量级别的组分，平均分子量在67．18万以上，其中分子量在128．29万左右的占48．64％。

肉苁蓉多糖的糖基组成为D-葡萄糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-半乳糖醛酸和D-木糖，它们的摩尔比约为22．77：12．40：8．67：6．56：3．15：2．52：1．00。

此结果显示，碱提取的肉苁蓉多糖是糖基组成比较简单但构型和碳原子数多样的大分子酸性杂多糖。

【总页数】4页(P32-34,37)【作者】高明;田子玉;蔡红梅;高峰【作者单位】吉林省农业科学院,长春130124【正文语种】中文【中图分类】TS245【相关文献】1.肉苁蓉多糖对东莨菪碱所致学习记忆障碍模型小鼠在突触可塑性方面的保护作用[J], 尹若熙;李刚;俞腾飞;马慧;马天宇;郭敏2.肉苁蓉多糖闪式提取工艺及其抗糖基化分析 [J], 张喜峰;邓猛猛;罗光宏;杨生辉;王丹霞3.肉苁蓉多糖超声波提取工艺条件的优化 [J], 连乐;高明波;尹新颖;赵晓倩;胡晓红;张钡4.管花肉苁蓉药渣中多糖提取工艺及体外抗氧化活性研究 [J], 艾拉旦·麦麦提艾力; 杨婷; 袁洁; 艾拉旦·艾力; 姚军; 游林5.循环超声强化提取肉苁蓉中多糖和甜菜碱 [J], 欧阳杰;赵兵;王晓东;韩江勇;王玉春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。