手、设备表面微生物取样方法

手术部位微生物采样方法①分泌物常规检查＋革兰染色的操作方法：先用无菌生理盐水擦拭切口2遍，再用含生理盐水的无菌棉签取分泌物放入无菌试管中，塞上试管塞，送检。

②细菌培养的操作方法：先用无菌生理盐水擦拭切口2遍，再用含生理盐水的无菌棉签用力擦拭病灶边缘或浓腔囊避后放入无菌试管中，塞上试管塞，送检。

但厌氧培养时应吸取深部标本而不能擦拭表面，同时切记要使用厌氧培养基进行培养。

③采样注意事项：采样时不能用干棉签取样，一定要用无菌盐水蘸湿棉签再取样并及时送检。

送检标本时要注明采集标本的解剖部位，必须区分表浅切口还是深部切口。

如革兰染色出现上皮细胞提示标本已受皮肤正常菌群污染妇产科手术切口感染38例李秀琦王完英为了解妇产科手术切口感染的原因，有效控制切口感染的发生，笔者对3年医院妇产科收治的手术住院病历进行调查。

1. 资料与方法对2001年6月~2004年6月，我院妇产科收治的628例手术患者进行了回顾性调查分析。

参照《医院感染学》医院感染的诊断标准。

2. 结果2.1 各类手术与切口感染的关系调查妇产科收治的各类手术628例，手术后切口感染38例，切口感染率为6.05%，其中Ⅰ类手术感染率为 1.28%，Ⅱ类手术感染率为90.60%，Ⅲ类手术感染率为16.66%。

2.2 急诊手术急诊手术感染率为3.48%，非急诊手术感染率为1.68%，两者差异有显著性(P<0.05)。

2.3 手术时间手术时间<150 min，感染率为4.06%，手术时间≥150 min，感染率为13.68%。

2.4 环境因素对切口感染的影响（1）病房大小：住单人房间感染率为0.60%；住3人房间的感染率为6.78%；住4人房间的感染率为9.37%。

（2）接台手术：调查中发现38例切口感染的手术患者，手术时接台26例中感染有6例，占23.07%。

剖宫产手术切口感染率为7.88%，高于其他妇产科手术。

(3)季节变化：冬季切口感染率高于秋季，春夏季次之。

微生物表面取样方法引言：微生物是一类极其微小的生物体，存在于各种环境中，包括土壤、水体、空气中以及生物体的表面等。

研究微生物对于了解生物界的多样性、生态系统的功能以及人类健康等具有重要意义。

然而，微生物的研究面临着一个重要的问题，即如何有效地采集微生物样品。

本文将介绍几种常用的微生物表面取样方法。

一、刷拭法刷拭法是最常用的微生物表面取样方法之一。

该方法适用于采集微生物富集在固体表面的样品，如建筑物、设备表面等。

操作步骤如下：1. 选择一把消毒过的刷子，并将其浸入含有适当缓冲液的容器中。

缓冲液的选择应根据研究的目的而定，常见的有PBS缓冲液、生理盐水等。

2. 将刷子沿着被采样表面来回刷拭，以保证样品的均匀采集。

3. 将刷子放入含有缓冲液的试管中，并进行震荡或振荡，以使微生物从刷子上脱落到缓冲液中。

4. 取出试管，将液体倒入试管中，并进行后续分析。

二、擦拭法擦拭法是一种适用于平滑表面的微生物采样方法。

常见的应用场景包括医院、实验室等地的台面、玻璃器皿等。

操作步骤如下：1. 选择一块消毒过的无纺布或棉签，并将其浸入含有缓冲液的容器中。

2. 将布或棉签沿着被采样表面来回擦拭，以保证样品的均匀采集。

3. 将布或棉签放入含有缓冲液的试管中，并进行震荡或振荡，使微生物从布或棉签上脱落到缓冲液中。

4. 取出试管，将液体倒入试管中，并进行后续分析。

三、粘贴法粘贴法适用于采集微生物富集在不规则表面或微小孔隙中的样品，如土壤、植物叶片等。

操作步骤如下：1. 准备一块消毒过的胶片或胶带，并将其贴在采样区域上。

2. 将胶片或胶带撕下，并放入含有缓冲液的试管中。

3. 进行震荡或振荡，使微生物从胶片或胶带上脱落到缓冲液中。

4. 取出试管，将液体倒入试管中，并进行后续分析。

四、切割法切割法适用于采集微生物富集在固体样品表面的样品，如食品、植物组织等。

操作步骤如下：1. 准备一把消毒过的刀具，并将其切割在需要采样的区域。

2. 将切割下来的样品放入含有缓冲液的试管中。

微生物取样方法、微生物检测标准举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。

2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。

2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。

3培养：于37℃培养24小时。

4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。

1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。

结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。

微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。

2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。

3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。

4）对采集的样品一般要求随机取样。

若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。

5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。

如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。

6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。

7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。

8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。

9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。

这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。

食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。

原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。

生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。

对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。

洁净区表面微生物测试操作流程
1.洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

2.从冷藏柜中取出接触碟，并恢复至室温。

3.将接触碟传送至洁净间，打开外包装，并标记取样地点（部位）、取样日期和取样人。

洁净区取样：每个房间检测1个墙壁1个台面；四联体和分体洁净服取样四个点：额头、胸前、左手腕、右手腕；左手或右手的五个手指。

4.取样：打开碟盖，将平板倒印在物体表面上，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，计时1min，再盖上碟盖。

5.取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

6.将接触碟传送出洁净间，于35~37℃倒置培养24~48h（设置空白对照）。

7.计算菌落数并记录。

微生物涂抹方法及标准 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。

d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。

e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。

f)正常生产状态的擦拭，每周一次。

（2）采样方法：a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

（3）采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。

对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间细菌·大肠菌群的检测培养:样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。

此液为1：10稀释液。

如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。

细菌总数：（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。

（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。

（3）结果报告：报告每cm2食品接触面中或每只手的菌落数（4）细菌菌落总数检测将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1m L样液，放人灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基.每个样品平行接种两块平皿，置35℃士2'C培养48 h，计数平板上细菌菌落数。

微生物涂抹方法及标准Last revision on 21 December 2020工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。

d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。

e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。

f)正常生产状态的擦拭，每周一次。

（2）采样方法：a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

（3）采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。

对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间细菌·大肠菌群的检测培养:样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。

此液为1：10稀释液。

如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。

细菌总数：（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。

（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。

（3）结果报告：报告每cm2食品接触面中或每只手的菌落数（4）细菌菌落总数检测将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1m L样液，放人灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基.每个样品平行接种两块平皿，置35℃士2'C培养48 h，计数平板上细菌菌落数。

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。

表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。

如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。

不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。

4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。

6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。

将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。

翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。

7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

微生物的取样方法
常见的微生物取样方法包括：
1. 表面取样法：使用无菌棉签或无菌采样布，在被检测表面擦拭或拍取，将生物样品收集到无菌管中。

2. 空气取样法：通过空气采样器或空气压力采样器，收集空气中的微生物到无菌培养基上。

3. 液体取样法：对液体样品进行取样，包括悬浮液、沉淀液、过滤液等。

4. 直接取样法：直接从生物体内取样，包括血液、尿液、粪便等。

5. 环境土壤取样法：将土壤样品取样到无菌容器中，进行分离和培养。

6. 水体取样法：将水体样品收集到无菌容器中，进行分离和培养。

注：以上方法均需注意无菌操作，避免交叉污染。

如果需要进行纯培养，可以进行单个微生物的分离，采用接种环、压板等方法。

药品生产设备表面微生物取样方法确认颜若曦北京紫竹药业有限公司，北京（100024）E-mail: s ssyrx@摘要：目前国内外法规在药品生产设备的清洁验证中仅仅要求对化学残留的取样方法进行验证。

本文提出在药品生产设备清洁验证中对微生物取样方法进行评估、确认的必要性，建立了一种评价药品生产设备表面微生物取样回收率和重复性的方法：采用304 不锈钢板作载体，以大肠埃希菌作为细菌的代表，白色念珠珠作为真菌的代表，同步制备菌种载体，同时检测菌种载体活菌数计算回收率，方法消除了载体制备过程中微生物死亡对回收率计算的影响。

同时对目前国内药品生产企业常用的表面微生物取样方法（玻璃棉签擦拭、一次性医用棉签擦拭和淋洗水取样）进行评价，建立检测药品生产设备表面真实活菌数的方法。

关键词：表面微生物；回收率；清洁验证中图分类号：TQ0 引言国内外法规均规定：“药品生产的每道工序完成后，需对药品生产设备进行清洁，并对清洁的方法进行验证，在清洁验证中要求对化学残留的取样方法进行验证”，却未要求对微生物的取样方法进行确认。

[2-5，10]目前为此，尚未发现关于表面微生物采样方法确认的文献与报道。

微生物在适当的温湿度下以残留物中的有机物为营养可大量繁殖，产生各种代谢物，从而大大增加残留物的复杂性和危害程度。

进而对下批产品造成不良影响。

[5]因此必须药品生产设备的微生物进行严格控制。

不进行微生物取样方法的确认，检测结果将是不可信的。

不准确的检测结果将对药品的生产造成不良的影响。

为解决这一问题，本文建立了一种评价药品生产设备表面微生物取样回收率的方法，并对目前国内药品生产企业常用的表面微生物取样方法进行简单分析。

1 实验试剂、原料及菌种1.1 实验试剂及原料1.1.1 培养基实验用营养琼脂培养基干粉试剂、玫瑰红钠琼脂培养基干粉试剂、pH7.0 氯化钠—蛋白胨缓冲液干粉试剂、营养肉汤培养基干粉试剂、改良马丁培养基干粉试剂均为北京三药科技开发公司生产。

食品接触面微生物的检验方法及注意事项汇总1目的检测生产车间操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。

2参照标准中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－2002、《HACCP原理与实施》、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。

3采样与检测方法3.1工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。

d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。

e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。

f)正常生产状态的擦拭，每周一次。

（2）采样方法：a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25c㎡的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

1.手内侧涂抹2.手外侧涂抹3.手指间涂抹4.将棉签浸入装有无菌水的试管中（3）采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。

对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间。

3.1.2 菌落总数·大肠菌群的检测培养:样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。

此液为1：10稀释液。

如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。

微生物取样方法举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按中条配制2采样（空气沉降法）布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。

采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。

采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。

3培养：于37℃培养24小时。

4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。

1采样方法涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

2检验方法细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。

结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2致病菌的检验沙门氏菌，参照进行金黄色葡球菌，参照进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。

一、目的：建立表面微生物检验标准操作规程，确保表面微生物检验结果的准确。

二、适用范围：适用于表面微生物检验操作。

三、责任人：QC检验人员负责本规程的实施，QA负责人、QC负责人监督检查。

四、内容：1、测试方法方法提要表面微生物测试可采用棉签擦拭法取样或市售预制TSA培养皿直接接触采样法，即通过对一定面积的（约25m2）的表面进行取样后，接种至培养基后，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内表面和操作人员单位面积表面的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。

所用的仪器、设备和培养基a）一次性采样管；b）培养皿；c）培养基；d）恒温培养箱。

注意事项：1）采样用采样棒及培养皿或培养基均应在有效期内且包装密封完好。

2）所有取样操作应在生产关键操作结束后取样。

2、测试步骤：、棉签擦拭法取样选择取样点后，打开一次性采样管，提出采样棒，于管口处轻轻挤压多余的溶液，在取样范围内，在向前移动的同时将其从一边移到另一边；翻转取样棉签，让棉签的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直，擦拭时稍用力。

取样方式：擦拭取样示意图取样后立即将采样棒插入采样管中，拧紧，并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。

将取样后的采样管用力振摇3分钟以上，将管内溶液照微生物限度检查法（薄膜过滤法）进行检查，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。

、表面接触皿取样选择取样点后，打开市售预制TSA培养皿，对取样范围表面进行接触取样，接触时间不少于5秒钟，取样完成后立即加盖,并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。

将取样后的培养皿用其所附包装袋包装好后，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。

3、取样对象及取样点3．1 洁净区操作间及设备表面100级区（A级区）：每班3个样品，在关键操作点任意取样（灌装机轨道、台面，胶塞振荡斗、胶塞下料轨道、理瓶盘、触摸屏、冻干箱搁板、周转盘、人手须接触的容器具表面、不锈钢桶盖提手处）万级无菌区：每班任意在工作面取2-3个样品（回风口上方墙面、地面、人物流门把手）万级区、十万级区：在关键操作点设备、容器具表面或操作间表面取3-5个点。

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准目的：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。

参照标准：中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。

采样与检测方法：3.1空气的采样与测试方法3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。

e)正常生产状态的采样，每周一次。

（2）采样方法在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。

采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。

采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。

3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。

（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。

微生物表面取样方法(二)
微生物表面取样方法
简介
微生物表面取样是一种常用的研究微生物群落的方法。

通过采集表面的微生物样本，可以了解微生物的分布情况、组成结构以及功能特性。

本文将介绍几种常见的微生物表面取样方法。

表面刷样法
•使用无菌棉签或刷子在待采样的表面来回刷动。

•适合采样各种平整表面，如实验室台面、家具等。

表面刮取法
•使用无菌刮板或刮片在待采样的表面轻轻刮取。

•适合采样粗糙表面，如地板、土壤等。

直接印样法
•将无菌培养基或琼脂块直接按压在待采样的表面上。

•待培养基或琼脂凝固后，将其取下，形成微生物样本。

曝露培养法
•将无菌培养基或琼脂块暴露在待采样表面空气中。

•短暂或长时间的曝露，可以采集空气中的微生物。

粉末采集法
•使用无菌刷子将待采样表面的粉末刷入无菌袋中。

•适合采集稀疏微生物的表面，如空调过滤器、尘土等。

静电吸附法
•将带电荷的薄膜或滤纸静置在待采样表面上。

•待采样时间过后，将薄膜或滤纸取下，获取微生物样本。

粘贴法
•将透明胶带或捕捉液粘贴在待采样表面上。

•撕下透明胶带或将捕捉液滴入培养基中，获得微生物样本。

结论
微生物表面取样方法多种多样，选择合适的方法可以有效获取微生物样本。

根据待采样表面的特点，我们可以选择适合的取样方法，以便更好地研究微生物群落的结构和功能。

以上就是一些常见的微生物表面取样方法，希望本文的介绍对您有所帮助！。

微生物无菌取样方法概述：微生物无菌取样是一种重要的实验操作，用于采集样品中的微生物，并保持其在取样和处理过程中的无菌状态。

本文将介绍几种常用的微生物无菌取样方法，以帮助实验人员正确进行无菌操作。

无菌取样方法：1. 火焰消毒法火焰消毒法是最常见的无菌取样方法之一。

首先，将待取样的工具（如镊子、培养皿等）放置在火焰中，直至工具表面完全变红；然后，将待取样的区域靠近工具焰口，让火焰的热量将其消毒。

在取样前后，务必将工具放回火焰中进行再次消毒，以确保无菌状态的维持。

2. 酒精消毒法酒精消毒法适用于对火焰敏感的材料。

首先，将待取样的工具浸泡在酒精中片刻，使其充分浸润；然后，将工具从酒精中取出，迅速挥发酒精。

在取样前，务必等待工具表面干燥，避免酒精残留对微生物生长的影响。

3. 紫外线消毒法紫外线消毒法利用紫外线的辐射杀灭微生物。

首先，将待取样的工具放置在已配备紫外线灯管的消毒设备中；然后，将设备关闭，开启紫外线灯管。

在一定时间内，让紫外线对工具表面进行照射，以杀灭潜在的微生物。

取样前后，务必使用前述火焰或酒精方法进行消毒。

4. 过滤法过滤法适用于液态样品的无菌取样。

首先，选用0.2微米的微孔过滤膜，将其装配在过滤器上；然后，将待取样的液态样品通过过滤器，使样品中的微生物被截留在过滤膜上。

取样后，将过滤膜移至培养基上，使截留的微生物在培养基上生长，并进行后续分析。

注意事项：1. 取样器具及培养皿等实验工具需提前进行高温高压灭菌，以确保其无菌状态。

2. 取样时要防止被周围空气中的微生物污染，避免把手触碰到取样区域。

3. 在无菌取样过程中，务必避免交叉污染，每次取样前后都要对工具进行消毒。

4. 注意避免取样过程中发生气溶胶扩散，防止微生物通过空气传播。

5. 紫外线辐射对人体有一定危害性，使用紫外线消毒法时要注意安全。

结语：微生物无菌取样是实验操作中的重要步骤，为了得到准确和可靠的实验结果，实验人员需要选择适合的无菌取样方法，并严格遵守操作规程。

车间工器具及环境微生物取样的规范1.取样目的监控车间生产中和生产后的设备、工器具、环境、工作人员等的卫生控制状况，防止不良卫生状况及工作习惯造成的食品污染，以减少食品安全隐患。

2.取样原则取样应随机抽取，要有代表性，尽量使所取的样品能代表车间平时的水平。

3.取样范围3.1生产班后的卫生，包括各工序的设备、工器具的食品直接接触面，或者是可能会引起交叉污染的间接接触面和所有食品加工的工作环境。

3.2生产班中的卫生，包括各工序的环境、设备、工器具、工作人员的个人卫生等，或者是取样过程中发现的，由于不良的工作卫生习惯，造成了污染的食品直接接触面或间接接触面。

4.取样程序4.1取样每周一次，分别对出口一厂、出口二厂、综合厂、开发区分厂等四个分厂，不定时随机抽取，每个分厂根据取样当时的实际情况随机抽取20至25个，一个月内要将车间所有工序检测到位。

4.2取样操作按照《微生物取样标准操作规范》实行。

4.3取样报告最晚在下周三之前，把上一周的结果，通过OA分发给各个分厂厂长及技术副厂长。

4.4对上一周中出现的不合格的情况，下一周要验证。

若经过验证仍然不合格，则要做持续验证。

4.5班后取样按照国标考核，班中取样标准待定。

5.关于取样的补充说明5.1取样员取样应严格按照要求执行，必须做到公正、严谨，而车间的工作人员在取样时应当配合取样员的工作，不可以找借口妨碍、阻挠或破坏取样员取样，否则，取样员有权将此项直接判为不合格。

5.2班中取样是主要是指生产过程当中，按要求需要定时清洗和消毒的操作台面、人手、工作衣、手套、毛巾、馅碗、饺子脱、汤圆托、盛馅斗、盛肉筐、钢盘、饺子机传送带等等，取样点不固定，对于一些在班后无法监控到位的，也可以视为班中抽检，随机抽取。

5.3班后卫生是指车间生产结束后,按要求应当清洗和消毒的设备、工器具。

取样员在未进车间以前，如果对班已经交接班，并且已经将物料投入进去，取样员则不可以再取样;取样员进车间以后，对班投入物料前，要事先询问一下取样员是否还要抽取，如果在没有征询取样员意见的情况下，直接投入物料，取样员可以取未与物料接触的一面，取样正常有效。