土样中淀粉降解细菌的筛选

降解菌的筛选
降解菌的筛选过程包括以下步骤：
1.采集具有代表性的土壤样品。

选择具有代表性的若干采样点，使用铲子或样品采集器采集土壤样品。

注意避免受到污染，避免接触有机物、农药等潜在干扰物。

将采集到的土壤样品倒入干净的塑料袋或容器中，并将多个采样点的样品混合均匀，以获得代表性的复合土壤样品。

对于大面积的稻田，可能需要采集多个复合样品。

2.将采集的土壤样品进行富集培养。

例如，在富集培养基配方中，添加活性污泥，于30℃、150rpm振荡培养，直到颜色变浅后，将菌液转接入新鲜培养基中。

重复这一过程3次-4次，得到能够使溴氨酸脱色的菌群。

3.进行平板分离。

将菌液稀释，分别取0.1mL菌液于平板中，用涂棒涂布均匀。

静置几分钟后，将平板倒置于30℃的培养箱中培养。

4.进行好氧培养。

将无菌操作台的紫外灯打开，灭菌20min后，用接种环从已脱色平板中挑若干单菌分别放入不同三角瓶中，用棉塞封口。

于30℃、150rpm 振荡培养。

第一章绪论1.1 简介1.1.1 淀粉淀粉是葡萄糖的高聚体，通式是(C6H10O5)n，水解到二糖阶段为麦芽糖，化学式是(C12H22O11），完全水解后得到葡萄糖，化学式是(C6H12O6)。

淀粉有直链淀粉和支链淀粉两类。

淀粉是植物体中贮存的养分，贮存在种子和块茎中，各类植物中的淀粉含量都较高。

淀粉可分为直链淀粉（糖淀粉）和支链淀粉（胶淀粉）。

前者为无分支的螺旋结构；后者以24~30个葡萄糖残基以α-1,4-糖苷键首尾相连而成，在支链处为α-1,6-糖苷键。

直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色。

这并非是淀粉与碘发生了化学反应(reaction)，而是产生相互作用(interaction)，而是淀粉螺旋中央空穴恰能容下碘分子，通过范德华力，两者形成一种蓝黑色错合物。

实验证明，单独的碘分子不能使淀粉变蓝，实际上使淀粉变蓝的是碘分子离子。

本实验的检测方式则利用了直链淀粉遇碘呈蓝色的特点。

1.1.2 淀粉废水的产生淀粉是一种重要的化工原料，广泛应用于食品、化工、纺织、造纸、医药等行业。

而在淀粉生产中会排放大量废水属高浓度有机废水，其COD 浓度几千甚至上万，BOD 浓度也有几千，SS量也较高。

如将废水直接排放，不仅是水资源的巨大浪费，而且将造成严重的环境污染。

因此，国内外学者都在力求研究出一种快速、高效、低能耗的淀粉废水处理工艺。

1.1.3 淀粉废水的处理方式对于淀粉废水的治理，由于其污染物浓度高，危害大的特点，所以普通的化学治理方法难以达到很好的治理效果。

目前对于淀粉废水的处理研究广泛采用生物治理方式，其技术方案大致包括厌氧生物处理法和好氧生物处理法。

1.2 国内外的研究进展续前面所提到的厌氧生物处理法和好氧生物处理法，下面笔者将简单介绍两种方式的应用特点。

(1) 厌氧生物法厌氧法处理淀粉废水，其最终产物是以甲烷为主的可燃气体，可作为能源回收利用；剩余污泥量少且易于脱水浓缩，可作为肥料使用；处理工艺运转费用低。

土壤中产淀粉酶细菌菌株的筛选张路、彭亚娣、吴亚琴、王思怡、蒲兰琼、陶蕾摘要土壤中含有多种微生物，通过选择培养基可将需要的微生物从中分离出来。

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

由于不同微生物对营养物质的要求不同，可在培养基中加入或减少某种物质以营造一个只适于所选微生物生长而抑制其他微生物生长的环境，便可淘汰不需要的微生物，分离出所需微生物。

可用平板法分离土壤中产淀粉酶的微生物。

关键词培养基、微生物、分离、平板法（一）引言自然界中各种微生物混杂生长在一起，即使取很少量的样品也会有很多微生物共生在一起。

人们要想研究某种微生物的特性或要确定每种微生物菌株的分类，首先应该对该微生物进行纯培养。

稀释涂布法或平板法时常用的分离与纯化的方法，这几种方法不需要特殊的仪器设备，操作比较简单，一般情况下就能得到比较好的效果。

土壤中含有各种微生物，将含有微生物的土壤制成菌悬液，用十倍递减稀释法稀释后涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基上，在适宜的条件下培养，待长出菌落后，从各个菌落上挑取单菌种接种到淀粉培养基上，适宜条件下培养，长出菌落后，在各个菌落上滴加碘液，菌落周围如出现无色透明圈，说明淀粉被酶解，即该细菌菌株能产淀粉酶。

我们分离得到产淀粉酶的细菌后可快速高效的生产淀粉酶，以运用到实际生活中，如制淀粉酶片，以助含淀粉酶事物的消化。

（二）人员安排1、包装器材、配培养基（1）配培养基牛肉膏蛋白胨培养基：陶蕾、吴雅琴淀粉培养基：蒲兰琼、王思怡（2）无菌水：彭亚娣、张路（3）包扎：彭亚娣、张路、王思怡、蒲兰琼2、高压灭菌高压灭菌过程中彭亚娣、吴雅琴全程看守，控制阀门的开和关3、制菌悬液、第一次接种（1）取土：陶蕾、吴雅琴（2）配液：王思怡、吴雅琴、张路（3）接种：陶蕾、彭亚娣、吴雅琴、蒲兰琼4、第二次接种（转接）转接:吴雅琴、彭亚娣、王思怡、张路、蒲兰琼、陶蕾5、检测滴定：吴雅琴、彭亚娣、王思怡、张路、蒲兰琼、陶蕾6、结果分析：陶蕾、吴雅琴7、拍照：王思怡、陶蕾、张路8、资料搜集：张路、陶蕾（三）材料与方法1、材料已灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏1.5ｇ、蛋白胨2.5ｇ、琼脂10ｇ、NaCl 0.5ｇ、水500ml、pH 7.0～7.2）、已灭菌的淀粉培养基（蛋白胨2.5ｇ、淀粉1.5ｇ、NaCl 0.5ｇ、琼脂10ｇ、pH7.2～7.4）、90ml无菌水一瓶、含9ml无菌水的试管6支、无菌培养皿18个、1ml 无菌移液管、土壤样品、天平、称量纸、试管架、涂布器、500ml烧杯2个等。

从土壤中分离筛选菌种的流程一、引言土壤是一个复杂的生态系统，其中包含着丰富的微生物资源。

微生物在土壤中起着非常重要的作用，能够参与土壤的养分循环、有机物降解、植物生长调节等多种生态功能。

因此，从土壤中分离筛选菌种对于研究土壤微生物的多样性、功能和应用具有重要意义。

二、分离菌种的基本步骤1. 样品采集需要在目标土壤中采集样品。

样品的选择应该代表性，可以从不同地理位置、土壤类型、植被类型等方面进行选择。

采集样品时，应使用无菌工具，避免外部微生物的污染。

2. 样品处理采集的土壤样品需要进行一系列的处理步骤，以便分离目标菌种。

首先，样品需要经过筛选，去除大颗粒杂质。

然后，样品需要进行稀释，以获得合适的菌落形成单位（CFU）浓度。

3. 菌种分离将处理后的土壤样品均匀涂布在含有富含营养物的琼脂平板上。

琼脂平板中的富含营养物能够促进菌落的形成。

将涂布好的琼脂平板置于恒温培养箱中，使菌落在适宜的温度下生长。

4. 菌种筛选在菌落形成后，需要进行菌种的筛选。

筛选的方法可以根据需要选择不同的方式，比如形态学特征、生理生化特性、抗生素敏感性等。

通过筛选，可以得到具有特定特征的菌种。

5. 单菌分离在筛选得到目标菌种后，需要进行单菌分离。

单菌分离可以通过传代培养的方式进行，即从单个菌落中选取一个单独的菌落，再次进行涂布培养，确保得到纯种的菌株。

6. 菌株保存经过单菌分离后，需要对菌株进行保存，以便后续的研究和应用。

常用的保存方式有冷冻保存和冻干保存等。

冷冻保存可以利用低温冰箱或液氮罐，将菌株保存在-80℃以下的低温环境中。

冻干保存则是将菌株培养液进行冻干处理，保存在干燥的状态下。

三、分离筛选菌种的注意事项1. 样品采集时，需要避免污染，使用无菌工具，并在无菌条件下进行操作。

2. 样品处理时，需要保持样品的湿润状态，避免样品过度干燥。

3. 琼脂平板的选择应根据菌种的需求来确定，可以选择不同富含营养物的琼脂平板。

4. 菌种筛选时，需要根据研究目的选择合适的筛选方法，确保得到具有特定特征的菌种。

土壤中高产淀粉酶菌株的筛选方案：一、实验材料样品:四川化工职业技术学院采集的土样若干试剂:营养琼脂、淀粉、土壤、碘液等仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱 .移液管、培养皿、试管、三角瓶、量筒、酒精灯、接种环等液体培养基:淀粉10 g、硫酸铵10 g、氯化钠5 g、硫酸0.5 g、磷酸氢二钾1 g、牛肉膏1 g，定容1 L二.实验步骤(一)培养基的配置1.称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

2.溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。

将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，应控制火力并需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。

3.分装将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

4．加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染。

5.包扎加塞后，将全部试管和三角瓶用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

培养皿、移液管、涂布棒用报纸包扎好。

试管里面加入45ml 自来水，三角瓶里面加入90ml自来水和玻璃珠，加塞，包扎。

6.灭菌将上述培养基及其仪器121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。

7.搁置斜面及倒平板将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷却水太多），将试管口一端搁置在书边上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

三角烧瓶里的培养基在超净工作台上倒平板，然后静止，待其凝固（二）产淀粉酶菌株的分离、纯化1.土样的采集（1）地点的选取：四川化工职业技术学院花园（潮湿）（2）采集时间:2013-9-5 8:00 （3）采集原则：地点选取后，用小铲子出去5cm表土，取离地面5-20cm处的土，盛与袋中并标明时间，地点及环境情况。

实验二土壤中产淀粉酶细菌的分离一、实验目的从土壤中分离出产淀粉酶的细菌。

二、实验原理微生物的分离和纯化就是从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。

选择适合于待分离微生物的生长条件，如温度、营养、PH和O2等条件。

或加入特定底物、抑制剂淘汰一些不需要的微生物。

通过稀释涂布平板法培养后，挑取在固体培养基生长的单菌落纯培养。

平板分离法是微生物分离和纯化常用的方法之一，该方法操作简便。

三、实验器材与试剂材料与试剂：淀粉培养基、碘液、土样1g仪器：恒温培养箱、高压灭菌锅、超净工作台、移液枪、培养皿、试管、三角瓶、量筒、玻璃涂棒、酒精灯、记号笔等四、实验步骤1.培养基与器皿的准备和灭菌（1）培养基的配制实验一已制备（2）无菌水的制备取250ml三角瓶中并加入玻璃珠和100ml蒸馏水加塞后用牛皮纸包扎，然后取5支试管均加入9ml蒸馏水，加塞后用牛皮纸包扎捆绑，将三角瓶和5支试管放入高压蒸汽灭菌锅灭菌备用。

（3）器皿的准备将盒装移液枪枪头、培养皿用牛皮纸包扎，放入高温灭菌箱灭菌备用。

2.菌悬液的制备和梯度稀释（1）取1g土壤样品加入灭菌后100ml无菌水三角瓶中摇匀震荡约20min, 然后静置分层，上清即菌悬液。

（2）取5只加入9ml无菌水试管分别编号1—5，用移液枪从菌悬液中取1ml 上清液加入1号管后震荡摇匀，然后再从1号管中取1ml加入2号管震荡摇匀，依次操作5个试管，得到10-3、10-4、10-5、10-6和10-7五个稀释度的菌悬液。

3．制备空白平板（1）将已灭菌淀粉培养基加热熔化稍冷却，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手无菌培养皿，左手拔出棉塞。

（2）右手拿锥形瓶，瓶口迅速通过火焰；用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中培养基倒入培养基，左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀，冷却凝固，倒6皿。

4.涂布平板（1）将冷却的平板分三组，用记号笔在皿底分别标注10-5、10-6和10-7。