实验一 茶鲜叶多酚氧化酶的活性测定(3学时)

一、实验目的1. 了解茶多酚的化学性质和生理功能。

2. 掌握测定茶多酚含量的实验原理和方法。

3. 通过实验操作，提高对分光光度法等实验技术的熟练程度。

4. 比较不同茶叶样品中茶多酚含量的差异。

二、实验原理茶多酚是茶叶中的主要活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血脂、降血压等多种保健功效。

本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚的含量。

该方法基于茶多酚与特定试剂发生显色反应，根据吸光度与茶多酚含量成正比的关系，计算样品中茶多酚的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 绿茶、红茶、乌龙茶等茶叶样品- 茶多酚标准品- 乙醇、氢氧化钠、盐酸、硫酸等试剂- pH7.5磷酸盐缓冲液- 酒石酸亚铁溶液- 水为蒸馏水2. 实验仪器：- 分析天平- 分光光度计- 烧杯、试管、移液管、滴定管等玻璃仪器四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 准备一系列已知浓度的茶多酚标准溶液。

- 将标准溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。

- 以茶多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 称取一定量的茶叶样品，用乙醇提取茶多酚。

- 将提取液稀释至适当浓度。

- 将稀释后的样品溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。

- 根据标准曲线，计算样品中茶多酚的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 在特定波长下，茶多酚标准溶液的吸光度与浓度呈线性关系。

- 标准曲线的线性回归方程为：A = 0.033C + 0.005，相关系数R² = 0.996。

2. 样品测定：- 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量分别为：27.6%、24.2%、22.8%。

- 不同茶叶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。

六、实验结论1. 本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚含量，方法简便、准确、可靠。

2. 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。

朴东日：多酚氧化酶活性的测定。

一、试验目的本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原理及操作技术。

二、试验原理酚氧化酶（PPO）催化各种酚与O2氧化为醌。

本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液PH6.0的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。

三、试验材料、试剂及试验用品材料：李子样本80个（按照80个预算药品）李子处理：果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发育中期果实用1-MCP处理、发育中期果实用乙烯处理。

药品：预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）四、实验方法：1.ＰＰＯ的提取取１ｇ李子果肉样品，冰浴研磨，加入预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）２０ｍＬ，在４℃下离心（４２００ｒ／ｍｉｎ）１０ｍｉｎ，取上清液为蜜柚果肉ＰＰＯ酶提取液。

2.ＰＰＯ活性测定采用比色法测定。

将１ｍＬ（０．１ｍｏｌ／Ｌ）邻苯二酚加入４ｍＬ磷酸缓冲液（ｐＨ６．４）中，加入１ｍＬ酶液，立即于波长４２０ｎｍ下测定吸光度的变化，每隔２０ｓ记录１次，共记录３ｍｉｎ。

以不加酶提取液的反应液做对照，以每分钟吸光度变化０．０１为１个ＰＰＯ酶活性单位。

3.最后作吸光度A与反应时间的关系曲线图，依据曲线最初直线段的斜率(ΔA/t)计算PPO活力。

(注意空白为：2.5 mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚溶液)一个酶活力单位定义为：以每分钟每毫升增加吸光值0.001的酶量为一个酶活力单位U。

4.多酚氧化酶酶活的计算公式：E=M×60/V (式1)式中：M—每秒钟增加的吸光值V—粗酶液的体积/mL。

植物五种酶活性检测方法Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020选择茶树不同品种，每个茶枝接种5头叶蝉，按不同的时间点(0h/6h/12h/18h/24h/36h/48h/72h/96h)取样，每个样品重复三次，测定PPO/POD/PAL/CAT/LOX 五种酶活。

1、多酚化酶（Polyphenoloxidase，PPO）活性的测定适量茶鲜叶（3g）,料液比1:2，加入内含5%PVP（w/v）经遇冷的pH为的柠檬酸-磷酸盐缓冲液（L）,冰浴研磨，隔夜浸提12h，于4℃、9000r/min离心35min，取上清液，过滤得到初酶液。

取200ml初酶液，加入L柠檬酸-磷酸盐缓冲液200uL,混合反应液（L柠檬酸-磷酸盐缓冲液：脯氨酸：1%邻苯二酚=10:2:3），反应30min（37℃恒温水浴锅），6mol尿素终止反应，460nm波长测吸光度。

对照为不加邻苯二酚的反应混合液。

酶活性单位：本实验条件下，以邻苯二酚反应液在460nm处吸光度值每分钟增加为一个活性单位。

2、苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanineammonialyase，PAL）活性的测定称取新鲜样品于预冷研钵中，加入6ml L（）硼酸钠-硼酸缓冲液，加入适量的石英砂，冰浴研磨后转入离心管中。

混匀后在4℃冰箱中浸提4h。

4℃10000r/min离心20min，取上清液即为酶提取液。

取酶提取液，加入由硼酸钠缓冲液配制的L L-苯丙氨酸，蒸馏水，摇匀，在40℃水浴上反应30min，冰浴中终止反应，测定OD290值，以相同体积缓冲液代替酶液进行同样的反应为对照。

PAL的酶活性以每小时在290nm处吸光度变化为一个活力单位。

3、脂氧合酶(linoleate:oxygen oxidoreductase，LOX)活性的测定取新鲜样品，加7ml经4℃预冷的1mol/L（）的tris-HCL缓冲液冰浴上研磨。

欢迎阅读选择茶树不同品种，每个茶枝接种5头叶蝉，按不同的时间点(0h/6h/12h/18h/24h/36h/48h/72h/96h)取样，每个样品重复三次，测定PPO/POD/PAL/CAT/LOX 五种酶活。

1、多酚化酶（Polyphenoloxidase ，PPO ）活性的测定适量茶鲜叶（3g ）,料液比1:2，加入内含5%PVP （w/v ）经遇冷的pH 为7.2的柠檬酸-，取上取 1.2ml （（37℃恒合液。

0.01为2离心20min 取酶提取液0.2ml ，加入由硼酸钠缓冲液配制的0.1mol/LL-苯丙氨酸，2.8ml 蒸馏水，摇匀，在40℃水浴上反应30min ，冰浴中终止反应，测定OD290值，以相同体积缓冲液代替酶液进行同样的反应为对照。

PAL 的酶活性以每小时在290nm 处吸光度变化0.01OD 为一个活力单位。

3、脂氧合酶(linoleate:oxygenoxidoreductase ，LOX )活性的测定取0.2g新鲜样品，加7ml经4℃预冷的1mol/L（pH7.6）的tris-HCL缓冲液冰浴上研磨。

4℃、12000r/min离心25min,上层清液即为LOX酶提取液。

Lox酶活性单位以每分钟在234nm处吸光度变化0.01OD作为一个活力单位。

4、过氧化物酶（PDA）的活性测定（愈创木酚法）取0.5克剪碎叶片于预冷研钵中，加入5ml的提取介质0.05mol/LPH7.8的磷酸缓冲液（含1%PVP[取2-3ml5分ΔA470积（ml，5取（含1%PVP12h。

1000r/min离心20min,得到酶初提液。

取200mlPBS（0.15M，pH7.0），加入0.3092ml30%的H2O2（原液）摇匀即可。

取3ml反应液加入0.1ml（可视情况调整）酶液，以PBS为对照调零，测定OD240（紫外）。

（测定30s读数一次，5分钟）。

酶活性计算：以每minOD值减少0.01为1个酶活性单位（u）。

1. 了解多酚氧化酶的活性测定原理及方法。

2. 掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的操作技术。

3. 通过实验，分析影响多酚氧化酶活性的因素。

二、实验原理多酚氧化酶（PPO）是一种含铜的氧化酶，广泛存在于植物组织中。

在适宜的条件下，PPO催化酚类物质氧化形成醌类物质，使植物组织发生褐变。

本实验采用分光光度法测定多酚氧化酶活性，以邻苯二酚为底物，通过测定反应过程中吸光度的变化来计算酶活性。

三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜马铃薯、0.1mol/L邻苯二酚溶液、pH6.8磷酸盐缓冲液、NaF溶液、5%三氯乙酸溶液、硫脲、0.01mol/L间苯二酚、蒸馏水。

2. 仪器：分光光度计、匀浆机、离心机、恒温水浴、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 酶液的制备：取新鲜马铃薯150g，洗净后切块，加入150mL NaF溶液，匀浆后用四层纱布过滤。

取滤液50mL，于3500r/min离心5-10min，取上清液。

2. 酶活性测定：取3支试管，分别编号为A、B、C。

向A、B、C三管中加入0.1mol/L邻苯二酚溶液1mL、pH6.8磷酸盐缓冲液2mL，向A、B管中加入酶液0.5mL，C管不加。

将三管置于恒温水浴中，在反应时间分别为0、10、20、30、40、50min时，取出A、B、C三管，分别加入5%三氯乙酸溶液1mL，摇匀后于410nm波长处测定吸光度。

3. 数据处理：以邻苯二酚为标准曲线，计算酶活性。

五、结果与分析1. 标准曲线的绘制：以邻苯二酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 酶活性计算：根据标准曲线，计算不同反应时间下的酶活性。

3. 影响酶活性的因素分析：通过实验，分析温度、pH、底物浓度、酶浓度等对酶活性的影响。

1. 成功掌握了分光光度法测定多酚氧化酶活性的原理及操作技术。

2. 通过实验，分析了影响多酚氧化酶活性的因素，为后续研究提供了依据。

七、实验讨论1. 在实验过程中，发现温度对酶活性有显著影响。

实验一：茶叶（铁观音）中茶多酚的粗提取与含量测定一、实验目的：1、了解并熟悉茶多酚的元素组成、结构构成、理化性质。

2、掌握溶剂萃取法粗提取茶多酚的原理与操作。

3、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。

4、了解分光光度计的使用方法和注意事项。

二、实验原理和应用：茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。

其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。

茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。

研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。

目前国内外茶多酚粗品的提取的方法主要有：溶剂萃取法、离子沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体萃取法、超声波浸提方法、微波浸提法等等。

在这些提取茶多酚的方法中，每种方法都有它各自的针对性和使用范围，使用时要根据各自的情况而定。

根据实验室的条件及实验要求，本实验采用溶剂萃取法对干茶叶中的茶多酚进行粗提取，即利用茶多酚易溶于乙酸乙酯等有机溶剂的原理进行液-液萃取。

茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。

本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。

酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。

因此可以用比色方法测定。

该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。

三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：分光光度计、干燥箱、电子天平、pH计、真空泵、纱布、漏斗、旋转蒸发仪、250ml 容量瓶、50ml 容量瓶、分液漏斗实验材料：干茶叶（市售散装茶即可）实验试剂：硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) ，酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O) ，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) ，磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O) ，乙酸乙酯。

一、实验目的1. 理解多酚氧化酶（PPO）在植物组织中的作用及其活性测定的原理。

2. 掌握分光光度法测定PPO活性的操作技术。

3. 分析不同条件下PPO活性的变化，如pH值、温度等。

二、实验原理多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，广泛存在于植物组织中。

它能够催化酚类物质与氧气反应生成醌类物质，进而引起植物组织的褐变。

本实验采用分光光度法测定PPO的活性，通过测量反应体系在特定波长下的吸光度变化来反映酶的活性。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：马铃薯、茶叶、茶叶提取物等。

2. 试剂：0.03M磷酸缓冲液（pH 6.0）、0.01mol/L邻苯二酚溶液、5%三氯乙酸溶液、0.01mol/L的间苯二酚溶液、0.01mol/L的NaF溶液、pH 6.8的磷酸盐缓冲液、硫脲等。

四、实验步骤1. 酶提取：取一定量的马铃薯或茶叶，加入适量磷酸缓冲液（pH 6.0），用匀浆机充分匀浆，过滤，收集滤液。

2. 酶活性测定：取适量酶液，加入0.01mol/L邻苯二酚溶液，在410nm波长下测定吸光度。

3. 酶活性计算：根据吸光度变化计算酶活性，公式如下：\[ 酶活性 = \frac{ΔA}{Δt} \times V_{底物} \]其中，ΔA为吸光度变化，Δt为反应时间，V_{底物}为底物体积。

4. 影响因素实验：分别考察pH值、温度、底物浓度等因素对PPO活性的影响。

五、实验结果与分析1. 酶活性测定：通过分光光度法测定，得到不同样品的酶活性数据，如表1所示。

表1 不同样品的酶活性| 样品 | 酶活性（U/mg） || -------- | -------------- || 马铃薯 | 1.23 || 茶叶 | 0.98 || 茶叶提取物 | 1.57 |从表1可以看出，茶叶提取物的酶活性最高，马铃薯次之，茶叶最低。

2. 影响因素实验：（1）pH值：在pH 4.0～7.0范围内，PPO活性随pH值升高而增加，在pH 6.0时达到最大值，随后逐渐下降。

實驗 10蘋果中多酚氧化酶最適溫度的測定江南大學《食品化學》課程小組一、目的●了解多酚氧化酶所催化的反應及酶促褐變的原理●熟悉多酚氧化酶活力測定的方法，能獨立完成多酚氧化酶的提取和活力測定。

二、儀器及材料●儀器●天平、組織搗碎機、水循環真空泵、抽濾瓶、布氏漏斗、濾紙、電吹風、磁力攪拌器、轉子、水浴鍋、製冰機、分光光度計●樣品和試劑●凍藏蘋果小塊、 0.05 mol/L 磷酸鹽緩衝液（ pH6.5 ）、丙酮、 0.2mol/L磷酸鹽緩衝液（ pH6.5 ）、 0.01mol/L 兒茶酚溶液三、原理●多酚氧化酶催化的反應●一元酚羥基化●鄰 - 二酚氧化●如果採用鄰-二酚氧化作物，隨著酶催化反應進行，反應混合物的吸光值因鄰-苯酉昆量增加而變大，因此可採用分光光度計測定多酚氧化酶之活性。

Polyphenol oxidase (PPO)四、實驗步驟1.多酚氧化酶粗提液的製備:將冷凍的蘋果(塊)100克+400毫升的丙酮(預冷至-26℃)，均質化得之漿液，迅速抽氣過濾(不織布或是雙層棉布)保留沉澱物，用冷風烘乾到丙酮無殘留(無丙酮味道)。

丙酮粉溶至150ml 0.05mol/L (PH6.5) 磷酸鹽緩衝溶液(PBS)中，於冰浴條件之下不斷地攪拌30min，並於冷凍離心(3000rpm 10min)，所得之上清液即為多酚氧化酶提取液。

2.測定不同溫度下蘋果中多酚氧化酶之活力:於離心管中加入2ml 0.2mol/L 磷酸鹽緩衝液+0.7ml 兒茶酚溶液，於一定的溫度條件之下(5、15、25、35、45、55℃)攪拌並保溫5min，再加入0.3ml 在相同溫度下保溫5min之酶液，立即攪拌並監測反應，在 400nm處吸光值之變化(2min內，每15sec讀數一回)。

五、數據處理● 1 、以吸光值為縱坐標，反應時間為橫坐標，作出反應曲線，從曲線最初的直線部分的斜率計算出多酚氧化酶的活力，每分鐘吸光值增加 1 定義為一個酶活力單位。

实验四、多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质多酚氧化酶（Polyphenol oxidase, PPO）是一种广泛存在于植物、菌类和动物体内的酶，主要催化化学反应为将多酚氧化成醛或酮。

本实验旨在通过测定PPO的活性来了解酶的基本特性及其酶学性质。

一、实验材料1、经过离心沉淀的香蕉、苹果、洋葱原汁。

2、6%聚乙烯醇（PVA）溶液。

3、明胶溶液（1%）。

4、酚酞指示剂。

5、75mM bicine缓冲液（pH 8.5）。

6、0.05% 过氧化氢溶液。

7、1% 多巴胺溶液。

8、分光光度计。

二、实验原理多酚氧化酶是一种铜单子酶，催化剂的过程时首先将基质中的酚乙酸类化合物与氧气反应形成间醌，然后间醌的氧化、聚合，形成花青素、黑色素等产物。

本实验采用的基质是多巴胺（L-dopa），媒介是酚酞指示剂，测定体系的光学吸收度。

酶的活性按单位时间内反应的基质质量而计算。

三、实验步骤1、提取PPO将香蕉、苹果、洋葱各取50g，切碎，加入200ml 0.1M盐酸溶液，搅拌后放在4℃冷库20-30min，滤去上清液。

将残渣加入100ml冷水，搅拌，离心至沉淀物无明显色泽，取上清液后pH调节至8.5，保存于冷库。

2、测定PPO的活性（1）制备基质溶液：10mg多巴胺溶于2ml 0.1M的硫酸钠溶液中，用1M的NaOH溶液调节pH至8.5，加入12ml0.75M缓冲液，加水至50ml。

（2）制备酚酞指示剂溶液：2mg的酚酞溶于100ml的乙醇中，加水至1L，制成0.2%的酚酞溶液。

（3）测定反应系统：将基质溶液、酚酞指示剂溶液和一定量提取液混合，在25℃下恒温反应5min。

（4）实验对照：在上述条件下，仅加入基质溶液和酚酞指示剂溶液，无提取液作为实验对照。

（5）催化反应停止：加入0.5ml 的聚乙烯醇溶液。

（6）光度计测量：在650nm处上述反应体系产生的色素的吸光度。

4、结果计算将吸收度计算为1cm光程曲线的峰高比，用表格法计算多酚氧化酶活性反应速率以μmol/min为单位。

毕业论文开题报告生物工程多酚氧化酶活性测定及控制一、选题的背景、意义多酚氧化酶（PPO）广泛存在于自然界，在果实和蔬菜收获后，PPO所引起的反应常常会使果肉发生褐变、产生异味和损失营养。

本研究就PPO的活性和影响该酶作用的因素进行阐述，为果蔬贮藏和加工中酶促褐变的防治提供思路。

二、相关研究的最新成果及动态2.1鲜切莲藕组织中多酚氧化酶的分离纯化从鲜切藕中粗提多酚氧化酶，并通过硫酸铵盐析沉淀，DEAE-SepH-Arose离子交换柱层析以及PHenyl SepHArose 6FAsT Flow疏水柱层析进行纯化后，经SDS-PAGE电泳确定为单一条带，表明该酶已被纯化到电泳均一。

在整个过程中，该酶纯化了95．66倍，产率为2．4％。

同时研究表明，鲜切莲藕组织中PPO相对分子质量在65 900～66 100之间。

2.2 不同小麦多酚氧化酶活性检测方法的比较以邻苯二酚和酪氨酸为底物所测PPO活性极显著相关,邻苯二酚所测活性强,但酪氨酸所测活性的变异系数大。

面粉PPO活性和面粉及面制品色泽的变化相关性最强,但籽粒和全麦粉中的PPO活性高,变异系数大。

2.3 PPO活性与小麦粉主要理化指标的关系PPO活性与小麦粉白度成极显著负相关性,与灰分含量成极显著正相关性;前路粉流PPO 活性比后路粉流低;物料含皮较多的在线粉流PPO活性高;物料来源于小麦胚乳外层的粉流PPO活性高。

2.4 核桃组织培养中外植体褐变多酚氧化酶活性的控制在抑制PPO活性方面,PVP作用最明显,其次是NA2S2O3、AGNO3。

2.5 石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性测定的最佳试验条件以邻苯二酚为底物时,底物浓度宜大于20mmol/L,其最适波长为420nm,最适pH值为6.8,最适温度为50℃,反应时间不宜超过20min,反应完成后在20min后测定PPO的活性最为稳定。

抑制剂NAHSO4的有效抑制浓度为0.8mmol/L。

2.6 纯化的莲藕多酚氧化酶(PPO)与底物和抑制剂相互作用时的二级结构变化园二色谱分析表明莲藕PPO主要含有α一螺旋和β一折叠结构。

茶多酚萃取实验报告茶多酚萃取实验报告茶多酚是一种重要的天然生物活性物质，广泛存在于茶叶中。

它具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生理活性，对人体健康具有重要的保护作用。

本实验旨在通过提取茶叶中的茶多酚，并对其进行定性和定量分析，以探究茶多酚的提取方法及其含量。

实验步骤：1. 准备茶叶样品：选择优质的绿茶叶作为实验样品，将其研磨成细粉备用。

2. 茶叶样品预处理：取适量茶叶粉末，加入适量的乙醇溶液，搅拌均匀后静置一段时间，使茶叶中的茶多酚充分溶解。

3. 茶多酚提取：将预处理后的茶叶溶液进行过滤，得到茶多酚提取液。

4. 茶多酚定性分析：采用显色反应，将提取液与铁(III)盐溶液反应，观察颜色的变化。

茶多酚与铁(III)盐反应生成的蓝色络合物可以用来判断茶多酚的存在。

5. 茶多酚定量分析：采用分光光度法对茶多酚的含量进行测定。

通过测量不同浓度茶多酚溶液的吸光度，建立标准曲线，然后根据待测茶多酚溶液的吸光度，利用标准曲线进行定量分析。

实验结果：经过茶叶样品的预处理和提取，得到了茶多酚提取液。

在茶多酚定性分析中，观察到了明显的颜色变化，证实了茶叶中含有茶多酚。

而在茶多酚定量分析中，通过建立标准曲线，可以计算出茶叶中茶多酚的含量。

根据实验数据，我们可以得出茶叶中茶多酚的含量为X mg/g。

讨论与分析：茶多酚的提取方法对实验结果有重要影响。

在本实验中，我们选择了乙醇溶液作为提取剂，这是因为乙醇对茶多酚具有较好的溶解性。

然而，不同的提取剂对茶多酚的提取效果可能存在差异，因此可以进一步研究不同提取剂对茶多酚提取效果的影响。

此外，茶多酚的定性分析方法也值得探究。

虽然本实验采用了显色反应来判断茶多酚的存在，但这种方法只能提供茶多酚的初步判断，并不能定量分析。

因此，可以进一步研究其他定性分析方法，如红外光谱分析等。

在茶多酚的定量分析中，分光光度法是常用的方法之一。

然而，在实际测量中，仍然存在一定的误差。

为减小误差，可以进一步优化实验条件，如调整波长、控制反应时间等。

多酚氧化酶活性的测定多酚氧化酶(POD)是一种酶类，广泛存在于植物、细菌和真菌等生物体中，具有氧化多酚的功能，可将多酚类物质氧化为其对应的醛酮或烯醇。

多酚氧化酶活性的测定是研究植物生理生态、农业及食品科学等领域的重要技术手段之一。

多酚氧化酶活性的测定方法有多种，常见的测定方法有单宁酸、苯胺、硫脲、芳香胺等底物的光度法、荧光法、色谱法和电化学法等。

其中，光度法测定多酚氧化酶活性是相对最简便、经济、有效的方法之一。

一、实验原理多酚氧化酶活性的测定原理基于多酚类物质的氧化反应，其反应方程式如下：多酚+ H2O2 → 多酚氧化酶→ 合成物 + H2O在光度法中，用苯酚为底物，通过苯酚酸化后生成背景吸光度，再将多酚加到反应体系中，多酚在酸性条件下与过氧化氢发生氧化反应，产生黄色的产物苯醛，可在310nm处检测吸光度增加。

二、实验步骤步骤一：制备反应液(1)苯酚称取1g苯酚溶于50ml0.1mol/L的钠碳酸中，加入2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定至显红色终点，记录滴定体积，再用0.1mol/L的氢氧化钠溶液滴定至淡粉色的时间，同时记录滴定体积，测定得到苯酚的浓度。

(2)过氧化氢称取30%的过氧化氢溶液，在室温下稀释成0.04%过氧化氢溶液。

(3)缓冲液将0.2mol/L的柠檬酸-磷酸缓冲液(PH 6.0)浓度稀释成0.05mol/L。

(4)酶提取液在质量浓度等于1的0.05mol/L的柠檬酸-磷酸缓冲液中先加入1mmol/L的PEG6000，频繁将其混合均匀之后，再加入5%聚乙烯醇，在最后再加入一些几丁糖粉，并不断地搅拌混合均匀之后过滤清除残留物，提取所需酶液。

(1)标准液分别取0-40μmol/L的马尾松酚，加入0.1mol/L的硫酸调节pH至1，在0.1mol/L的缓冲液溶液中进行100μl反应，80℃下控制反应时间在5min在323nm检测吸光度，绘制标准曲线。

(2)样品处理将植物或细胞样品在工作台上用0.1mol/L的N/2 H2SO4溶解，然后过滤，用样品液稀释1倍。

茶多酚抗氧化实验1. 引言茶多酚是一类存在于茶叶中的多酚类化合物，被广泛认为具有强大的抗氧化作用。

茶多酚通过抑制自由基的产生和对自由基的清除，发挥了抗氧化的效果。

本实验旨在研究茶多酚的抗氧化能力，并探究其对氧化物质的影响。

2. 实验方法2.1 实验材料•茶叶样品•离心管•碱式溶胶•乙醚•纯水•氢氧化钠溶液•辣根过氧化物酶溶液•双酚A（BHA）溶液•丙二醇•氯仿•硝酸铁盐试剂2.2 实验步骤1.将茶叶样品研磨成细末，取适量样品放入离心管中。

2.加入适量的碱式溶胶并摇匀，静置一段时间。

3.使用乙醚提取溶胶中的茶多酚，重复该步骤2次。

4.将提取得到的茶多酚溶液通过离心分离。

5.将离心得到的茶多酚溶液过滤并浓缩，得到茶多酚提取物。

6.准备一系列不同浓度的茶多酚溶液。

7.分别取一定体积的茶多酚溶液，加入辣根过氧化物酶溶液，使过氧化氢生成。

8.测定过氧化氢在不同茶多酚浓度下的产生量。

9.根据产生的过氧化氢量，计算茶多酚的抗氧化能力。

10.与BHA溶液进行对照实验，评估茶多酚的抗氧化能力。

3. 实验结果与讨论3.1 茶多酚的抗氧化能力通过实验测定茶多酚在不同浓度下对过氧化氢的抑制能力，得到以下结果：茶多酚浓度（mg/ml）过氧化氢产生量（μmol/ml）0.1 2.50.2 2.00.3 1.50.4 1.00.5 0.5由上表可以看出，随着茶多酚浓度的增加，过氧化氢的产生量逐渐下降，说明茶多酚具有一定的抗氧化能力。

3.2 茶多酚与BHA溶液的比较将茶多酚溶液的抗氧化能力与BHA溶液进行比较，得到以下结果：物质过氧化氢产生量（μmol/ml）茶多酚 1.5BHA溶液0.5从上表可以看出，茶多酚的抗氧化能力略强于BHA溶液，说明茶多酚在抗氧化方面具有潜力。

4. 结论本实验通过测定茶多酚在不同浓度下的抗氧化能力，发现茶多酚具有一定的抗氧化作用。

与常用的抗氧化剂BHA溶液相比，茶多酚的抗氧化能力略强。

这为进一步研究茶多酚的抗氧化机制提供了基础，并为茶叶的营养价值和保健功能的开发提供了科学依据。

xx 日：多酚氧化酶活性的测定。

一、试验目的本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原理及操作技术。

二、试验原理酚氧化酶（PPO催化各种酚与02氧化为醌。

本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠—0.1M柠檬酸缓冲液PH6.0的反应体系中，PP0催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。

三、试验材料、试剂及试验用品材料：李子样本80 个（按照80 个预算药品）李子处理：果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发育中期果实用1-MCP处理、发育中期果实用乙烯处理。

药品：预冷的磷酸缓冲液（pH6.4）20mLlmL（0.1mol/L）邻苯二酚4mL磷酸缓冲液（pH6.4）四、实验方法：1.PPO的提取取lg李子果肉样品，冰浴研磨，加入预冷的磷酸缓冲液（pH6.4）20mL，在4 C 下离心（4 2 0 0 r/min）10mi n,取上清液为蜜柚果肉PPO酶提取液。

2.PPO活性测定采用比色法测定。

将lmL（0.1mol/L ）邻苯二酚加入4mL磷酸缓冲液（pH6.4 ）中，加入ImL酶液，立即于波长42 0nm下测定吸光度的变化，每隔20s记录1次，共记录3min。

以不加酶提取液的反应液做对照，以每分钟吸光度变化0.01为1个PPO酶活性单位。

3.最后作吸光度A与反应时间的关系曲线图，依据曲线最初直线段的斜率（△ A/计算PPO活力。

（注意空白为：2.5mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚溶液）一个酶活力单位定义为：以每分钟每毫升增加吸光值0.001 的酶量为一个酶活力单位U。

4.多酚氧化酶酶活的计算公式：E=M k 60/V式1）式中：M —每秒钟增加的吸光值V—粗酶液的体积/mL。

植物生物学实验（植物生理）教案实验一多酚氧化酶活性测定（3学时）一、实验目的：掌握测定多酚氧化酶活性的方法；了解多酚氧化酶的特性二、实验原理：多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌。

醌有颜色，在525nm下有最大光吸收，通过分光光度法测定反应体系颜色变化可测定酶活性。

三、器材与试剂低温离心机、s22pc分光光度计、儿茶酚、pH 7.2磷酸缓冲液四、实验内容：1．称取马铃薯0.5克，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，少许PVP，研磨匀浆，转移到离心管，再用2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液。

4℃ 4000rpm离心15分钟，上清液即为粗酶液。

2．在试管中，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，1.5mL 儿茶酚以及1mL 粗酶液，空白调零以1mL磷酸缓冲液代替粗酶液。

3．A值测定：加入粗酶液后迅速混匀，立刻于525nm下测定反应体系的A值，每隔30秒记录一次，共记录5次。

4．计算酶活力。

按下式计算PPO活性＝U/min gFWA值增加0.001定义为一个酶活力单位。

五、实验报告：计算所测材料的PPO活性。

选择A值变化均匀的三组数值求平均值。

实验二植物耐盐生理指标测定（9学时）一、实验目的：1、了解盐胁迫的机理以及植物的耐盐机制2、了解植物盐处理的方法3、掌握植物体内脯氨酸含量测定的原理和方法4、掌握过氧化物酶活性的测定原理和方法5、掌握丙二醛含量的测定方法6、掌握基本的数据统计方法二、实验原理植物在盐胁迫下,植物可通过积累一定量的脯氨酸降低水势, 维持植物体内的水分平衡, 保证植物的正常生长。

脯氨酸本身是一种水溶性最大的氨基酸，它可以防止原生质体的水分散失，在植物细胞生理干旱时，它的增加有助于细胞或组织保持水分。

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

在520nm波长下比色，从标准曲线上查出脯氨酸的含量。