ELISA的原理及分类

ELISA方法类型及原理ELISA是一种重要的实验技术，用于检测和定量分析蛋白质、抗体、荷尔蒙、生物学分子等。

ELISA的全称是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），它通过将目标物（如抗原或抗体）与特定的酶标记物结合，然后利用染色反应来检测、定量或分析目标物。

根据目标物的不同，ELISA可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、间接竞争ELISA和反向ELISA等方法。

1.直接ELISA直接ELISA是最简单的一种ELISA方法。

它将目标物直接吸附在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的酶标记抗体来检测目标物。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物吸附在载体表面；加入特异性酶标记抗体，与目标物结合；通过染色反应来检测酶的活性和目标物的定量。

2.间接ELISA间接ELISA是较常用的一种ELISA方法。

它将目标物首先吸附在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的初级抗体，再加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗来检测目标物。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物吸附在载体表面；加入特异性的初级抗体，与目标物结合；加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗；通过染色反应来检测酶的活性和目标物的定量。

3.竞争ELISA竞争ELISA是一种用于定量测定样品中目标物含量的ELISA方法。

它将目标物预先包被在固相载体表面，然后加入与目标物特异性结合的酶标记抗体和待测样品，测定抗体与固相载体表面的目标物竞争的程度来定量目标物的含量。

具体步骤包括：将目标物溶液加入固相载体中，使目标物包被在载体表面；加入特异性酶标记抗体和待测样品；通过染色反应来检测酶的活性和竞争程度来定量目标物的含量。

4.间接竞争ELISA间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理。

首先将目标物吸附在固相载体上，然后加入与目标物特异性结合的初级抗体，再加入与初级抗体特异性结合的酶标记二抗和待测样品。

ELISA完整详解(一)原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。

即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。

比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

(二)操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。

在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。

次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

(简称洗涤，下同)。

2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。

然后洗涤。

(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。

37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。

也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于4 50nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D 值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

方法二用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。

ELISA六种方法类型及原理ELISA（酶标检测）是用于检测免疫学反应的一种技术，全称为酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assays, ELISA），该技术是测定抗体及抗原的特异性相互作用的一种常用的检测方法。

ELISA通过酶联试验来灵敏地检测特异性抗体或抗原的含量。

ELISA检测方法有很多种。

常用的ELISA检测方法有以下六种：一、双抗体沉淀反应ELISA（DAP-ELISA）双抗体沉淀反应ELISA是一种比较简单的ELISA方法，该方法的原理是，在受体表面点涂两种类型的抗体，例如兔抗人IgG，而免疫反应物则是人IgG，受体与免疫反应物结合后，形成抗体-抗原复合物，其上自发形成特异性沉淀。

随着浓度的增加，抗原越多，沉淀凝固物也越多，膜上形成沉淀下降，沉淀量可以通过酶标仪测定，或者免疫发光法检测，大体上，兔抗人IgG及抗原分别点涂及酶标探针可能以1:1:2的比例，也就是在100 L的反应液中加入到受体和兔抗人IgG各10 L，抗原20 L的条件下进行反应。

二、夹心ELISA（Sandwich ELISA）夹心ELISA是一种常见的ELISA检测方法，它利用特殊的标记抗体完成免疫反应，以达到检测目的。

以IgG为例，在受体表面点涂一种特异性抗体,如兔抗人IgG，受体与人IgG结合形成复合物，在这一抗原复合物上再添加第二种特异性抗体，如抗兔IgG，第二种抗体结合复合物，并将复合物结合在受体表面，形成抗原“夹心环”，该免疫反应体系可以通过酶标仪来检测指示物的夹心量，计算受体中抗原的含量。

三、竞争ELISA（Competitive ELISA）竞争ELISA提高ELISA检测的灵敏度，竞争式ELISA也属ELISA技术范畴，该技术通过特异性抗体与抗原间竞争性结合而形成的结果来检测特异性抗原的浓度。

竞争ELISA的原理是：将偶氮羟化物体表膜点涂含有特异性抗原区域的抗体，若添加一定量的抗原（相同的特异性抗原）至反应液，则可形成抗原-抗体复合物，受体与抗原的竞争性结合，而非特异性的抗体-抗原复合物。

Elisa的基本原理、方法类型及应用概述Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用于生物化学和生物医学研究领域的实验技术。

它利用酶标记的抗原或抗体与待测物相互作用并生成可读出的信号，从而达到检测和定量分析的目的。

本文将介绍Elisa的基本原理、方法类型及应用。

基本原理Elisa的基本原理是通过特异性抗原与抗体间的结合反应来检测和定量分析待测物。

其基本步骤如下：1.固定：将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板、膜等）上，形成固定相；2.实验样本加入：加入待测物样本到固相载体中，使待测物与固定的抗体或抗原发生特异性结合；3.洗涤：通过洗涤步骤去除非特异性结合的物质；4.酶标记的抗体或抗原结合：加入酶标记的抗体或抗原，使其与待测物发生反应；5.洗涤：再次洗涤以去除未结合的酶标记的抗体或抗原；6.底物添加：加入底物，通过酶催化反应生成可检测的信号；7.信号检测：利用光度计、荧光计等仪器测量所产生的信号。

方法类型Elisa通常可以分为以下几种类型：1.间接Elisa：该方法是最常用的Elisa类型之一。

它通过在固相载体上固定抗原，然后加入待测物和酶标记的抗体，最后通过添加底物产生颜色反应来测定待测物的浓度。

2.直接Elisa：该方法直接在固相载体上固定酶标记的抗原，待测物与固定的抗原发生反应后，通过添加底物测定待测物的浓度。

与间接Elisa相比，直接Elisa节省了一个环节，因此更简单和快速。

3.竞争性Elisa：该方法适用于待测物是小分子的情况。

竞争性Elisa将待测物与酶标记的抗原竞争与固定抗原结合，通过测定底物的酶活性来测定待测物的浓度。

4.逆转Elisa：该方法常用于检测体内特定抗体的浓度。

逆转Elisa是将固定抗体或抗原加入实验样本中，之后加入酶标记的待测物，最后通过添加底物的酶活性来测定抗体的浓度。

应用Elisa在医学、生物学和生化学研究中广泛应用。

以下是Elisa的几个主要应用领域：1.临床诊断：Elisa可以用于检测和诊断人体内的疾病和感染。

elisa基本原理
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在和浓度。

它的基本原理如下：
1. 固相吸附：首先，在试验板上吸附抗原或抗体。

通常使用多孔板（如96孔板），将要检测的抗原或抗体溶液加入到孔中，然后孔中的溶液经过吸附和固定，使抗原或抗体附着在孔壁上。

2. 样品处理：将待测样品加入到试验板中，与固定的抗原或抗体发生特异性的结合反应。

如果样品中存在目标抗原或抗体，它们将与固定在试验板上的抗体或抗原结合形成复合物。

3. 洗涤：通过洗涤步骤，将未结合的物质洗掉，以去除非特异性的成分，使只有特异性结合的复合物留在孔中。

4. 酶标记：加入酶标记的抗体或抗原，它们与目标抗原或抗体发生特异性的结合。

5. 洗涤：再次进行洗涤步骤，去除未结合的酶标记物。

6. 反应物添加：加入适当的底物，使酶标记物催化反应，产生可测量的信号。

常用的底物是染色剂，其颜色与酶标记物的酶活性成正比。

7. 反应停止：加入反应停止剂，停止底物的反应，防止颜色进一步发展。

8. 信号测量：使用光谱仪或酶标仪等设备测量反应产生的信号强度。

信号强度与目标抗原或抗体的浓度成正比。

通过比较待测样品与已知浓度标准曲线的信号强度，可以确定待测样品中目标抗原或抗体的浓度。

ELISA技术在生物医学研究、诊断和药物开发等领域广泛应用，可以检测多种疾病标志物和生物分子。

ELISA的原理和基本类型ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫测定技术，通过测定抗原或抗体与其相应配体之间的特异性反应来检测目标物质的存在和浓度。

这项技术具有高灵敏度、高特异性和高通量性的优势，已广泛应用于医学、生物学、环境科学和食品安全等领域的研究和临床诊断中。

1.直接ELISA：直接ELISA是最简单的ELISA形式之一、在直接ELISA中，适量的抗原被吸附在固相（如微孔板）上后，样本中的抗体与其结合。

接着，通过与该抗体特异性结合的酶标记抗体检测目标物质的存在与否。

最后，加入底物使酶催化发生彩色反应，根据颜色的强度来确定抗原浓度。

2.间接ELISA：间接ELISA是最常用的ELISA形式之一、在间接ELISA中，抗原被吸附在固相上，然后与试样中的抗体结合。

随后，加入与试样中抗体结合的酶标记抗体，再加入底物以进行酶催化的彩色反应。

该方法的优势在于，只需要极少量目标抗原即可进行检测。

3.竞争ELISA：竞争ELISA用于测定抗体或抗原浓度，是一种定量分析的方法。

在竞争ELISA中，抗原或抗体与固相相结合的抗体或抗原发生竞争结合，测定竞争反应的结果来确定目标物质的浓度。

4.夹心ELISA：夹心ELISA又被称为“双抗体夹心ELISA”。

该方法可用于检测样品中特异的抗原或抗体。

在夹心ELISA中，首先将一种抗体吸附在固相上，样品中的抗原与之结合。

然后加入酶标记的第二抗体与抗原再次结合。

最后，加底物使酶发生催化反应，并测量酶催化发生的信号。

总而言之，ELISA是一种高灵敏度、高特异性的免疫测定技术，可以通过测定抗原和抗体之间的特异性反应来快速、准确地检测目标物质的存在和浓度。

在不同类型的ELISA中，抗原或抗体通过固相吸附、结合特异性的酶标记抗体、进行酶催化反应的彩色反应来实现检测。

ELISA技术在医学、生物学和环境科学等领域的研究和诊断中发挥了重要作用。

elisa常见实验方法摘要：1.ELISA实验原理简介2.ELISA实验步骤概述3.常见ELISA实验方法分类4.各类ELISA实验方法的优缺点及应用场景5.提高ELISA实验效果的方法6.ELISA实验中常见问题及解决策略正文：ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用于生物医学领域，用于检测蛋白质、抗原和抗体等生物分子的方法。

ELISA实验通过特异性抗体与待检测物结合，再通过酶标记的二抗检测结合物，从而实现对目标分子的定量分析。

以下是ELISA常见实验方法的详细介绍。

1.ELISA实验原理简介ELISA实验基于抗原抗体反应原理，将抗原或抗体固定在固相载体上，待检测样品中的目标分子与固定在载体上的抗体结合，再加入酶标记的二抗，与结合在载体上的抗原或抗体发生反应。

最后，通过底物显色反应，根据颜色的深浅判断待测物含量。

2.ELISA实验步骤概述ELISA实验一般分为以下四个步骤：（1）抗原或抗体固定：将抗原或抗体吸附在固相载体（如酶标板）上；（2）样品处理：对待测样品进行适当处理，使其与实验体系相适应；（3）加样：将处理后的样品和酶标记的二抗加入酶标板，incubate；（4）底物显色：加入底物，酶标记的二抗与抗原或抗体结合后，底物被酶催化显色；（5）读数：用酶标仪测定显色程度，换算成待测物浓度。

3.常见ELISA实验方法分类根据实验过程中抗原抗体结合的方式，ELISA实验可分为以下几类：（1）双抗原夹心法：待测物为抗原，实验中使用两种针对抗原不同表位的抗体；（2）竞争法：待测物为抗体，与固定抗原竞争结合酶标抗体；（3）间接法：待测物为抗体，通过酶标记的二抗检测；（4）免疫共沉淀法：利用抗原抗体结合后形成的免疫复合物与底物结合。

4.各类ELISA实验方法的优缺点及应用场景（1）双抗原夹心法：优点为特异性高、灵敏度高，适用于抗原含量较低的检测；缺点为操作复杂，易出现交叉反应。

（2）竞争法：优点为操作简便，适用于抗体含量较低的检测；缺点为特异性相对较低，易受其他物质干扰。

ELISA的原理和类型ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，用于检测体液中的特定蛋白质或其他分子。

ELISA可用于诊断疾病、监测药物治疗效果、研究疾病发病机理等。

本文将介绍ELISA的原理和类型。

##ELISA的原理1.涂覆：将待测物质（抗原或抗体）固定在微孔板上。

2.结合：加入样本液，待测物质与样本中的目标分子结合。

3.探针：加入与目标分子结合的第二抗体，或标记有酶的第二抗体。

4.显色：加入底物，酶与底物发生反应，形成可见的颜色变化。

5.检测：通过测量颜色强度或荧光强度来定量检测目标分子的浓度。

根据酶与抗体/抗原结合的方式，ELISA可以分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等不同类型。

###直接ELISA直接ELISA是最简单的ELISA类型之一、在直接ELISA中，待测物质被直接固定在微孔板上，然后加入与待测物质特异性结合的第一抗体。

随后加入与第一抗体结合的酶标记的第二抗体，最后通过显色反应来检测目标分子的浓度。

###间接ELISA在间接ELISA中，待测物质被固定在微孔板上，然后加入与待测物质特异性结合的第一抗体。

接着加入与第一抗体结合的未标记的第二抗体，最后再加入与第二抗体结合的酶标记的第三抗体。

通过酶与底物的反应来检测目标分子的浓度。

###竞争ELISA竞争ELISA是一种测定待测物质浓度的方法。

在竞争ELISA中，待测物质与酶标记的抗体结合时，用于检测的抗体与酶标记的抗体之间存在竞争。

通过测量酶的活性来确定待测物质的浓度。

###间接竞争ELISA间接竞争ELISA结合了间接ELISA和竞争ELISA的原理。

在此类型的ELISA中，待测物质被固定在微孔板上，然后加入抗体，抗体与待测物质结合。

接着加入酶标记的抗体，酶标记的抗体与待测物质结合。

通过测量酶的活性来确定待测物质的浓度。

ELISA原理和几种方法ELISA（Enzyme-linked immunosorbent assay）是一种基于免疫学原理的广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的试验方法。

其原理是利用酶标记的抗体特异性结合待检测样品中的抗原，通过酶的催化作用可产生可测量的信号，从而得到待检测物质的含量或者存在与否。

1.直接和间接ELISA直接ELISA方法利用抗体的特异性与待测抗原结合，然后使用酶标记的二抗与抗体结合，最后通过酶促反应产生可测量的信号。

这种方法的优势是快速、简便、灵敏，但可能会受到待测样品中其他成分对结果影响。

间接ELISA方法在抗原检测过程中引入第二抗体，即先将待测样品中的抗原与特异性抗体结合，然后再添加酶标记的二抗，最后通过酶促反应产生可测量的信号。

间接ELISA方法具有较高的灵敏性和特异性。

2.竞争ELISA竞争ELISA方法主要用于检测待测样品中含有的抗原或者小分子的结合物。

这种方法将标记好的抗原和样品中的抗原同时参与竞争与抗体结合，通过比较信号减弱程度来推断待测样品中的抗原含量。

竞争ELISA方法适用于测定一些药物、激素、多肽等小分子物质。

3.夹心ELISA夹心ELISA方法与间接ELISA类似，不同之处在于在固定的抗原上添加待测物和酶标记的抗体，形成“抗原-待测物-抗体-酶标记抗体”的夹心结构。

夹心ELISA方法可以检测血清中的抗体或者病原微生物，具有高灵敏度、高特异性的优点。

4.反应速率ELISA反应速率ELISA方法是通过等量连续添加底物，通过酶催化反应的速率来测定待检测物质的含量。

这种方法通常更加灵敏，并且可以测定底物转化的程度，可以应用于药物浓度测定和代谢物鉴定等领域。

总之，ELISA方法是一种非常重要的生物学检测技术，可以快速、简便地检测待测物质的含量或者存在与否。

不同的ELISA方法适用于不同的检测对象和目的，在生物医学研究和临床诊断中起到了重要的作用。

ELISA的原理和类型ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常见的免疫学实验技术，用于检测和诊断环境样品、食物、血液以及其他生物样品中的特定分子（如蛋白质、抗体、抗原等）。

ELISA具有高灵敏度、高特异性和较低的成本，广泛应用于医学、农业、环境科学和食品工业等领域。

间接式ELISA是最常用和经典的类型，其原理基本分为四步：1.固相吸附：将待测抗原分子固定在微孔板上，一般使用多孔质料（如聚合物）涂覆表面。

2.阻塞：为了防止非特异性结合，可以在固相吸附的基础上加入一层非特异性蛋白质（如牛血清白蛋白，BSA）来阻止未被抗原结合的空位。

3.特异性抗体结合：在孔中加入与抗原特异性结合的抗体，抗体会和已固定的抗原结合形成抗原-抗体复合物。

4.标记酶和底物检测：将酶标记的二级抗体加入孔中，与特异性抗体结合，再加入一种底物，使酶发生反应，并产生可观察的信号，如颜色反应。

夹心ELISA和间接式ELISA的步骤类似，但有所区别。

夹心ELISA在特异性抗体结合前和后都进行了固相吸附，因此可以检测出更弱的信号。

夹心ELISA也有更高的特异性，因为特异性抗体的结合位置被抗原所固定。

竞争ELISA用于测量待测样品中特定抗原的浓度。

与其他ELISA类型不同的是，竞争ELISA中待测物和标准抗原竞争与已固定抗原的特异性抗体结合。

待测样品中特定抗原的浓度越高，抗原与抗体结合的信号就越弱。

竞争ELISA的原理和标准曲线相关，用标准曲线中不同抗原浓度对应的信号强度来计算待测物的浓度。

直接ELISA是一种较少使用的类型，它通过直接将酶标记的特异性抗体与待测抗原结合，然后检测酶标记物的反应来获得结果。

直接ELISA省略了二级抗体的使用，所以比其他类型的ELISA快速，但灵敏度较低。

ELISA技术的应用范围非常广泛，如检测疾病诊断和筛查、食品卫生检测、生物制药质量控制以及环境监测等。

它通过测量特定分子的浓度，可以定量评估样品中待测物的含量，从而实现对疾病、食品质量或环境污染的检测、监测和控制。

简述elisa的基本原理Elisa的基本原理Elisa（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和测量生物样品中特定分子的存在和浓度。

它是一种高度敏感、特异性强的实验方法，被广泛应用于医学诊断、生物医学研究和制药等领域。

Elisa的基本原理是利用酶标记抗体或酶标记抗原与待测物相互作用，在固相载体上形成特定的抗原-抗体复合物。

通过检测酶底物的反应产物浓度，可以间接测量待测物的浓度。

Elisa实验通常分为直接Elisa、间接Elisa、竞争性Elisa和间接竞争性Elisa四种类型。

下面将逐一介绍这四种Elisa实验的基本原理。

直接Elisa是最简单的一种Elisa实验方法。

将待测物溶液加入固相载体表面，使其与固相载体上的抗体发生特异性结合。

然后加入酶标记的二抗，与待测物结合形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。

经过洗涤去除未结合的物质后，加入底物，酶催化底物生成可测量的产物。

通过测量产物的光学密度，可以间接测量待测物的浓度。

间接Elisa是最常用的Elisa实验方法。

同样将待测物加入固相载体表面，与固相载体上的抗体结合。

然后加入酶标记的二抗，二抗与固相载体上的抗体结合，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。

经过洗涤去除未结合的物质后，加入底物，酶催化底物生成可测量的产物。

通过测量产物的光学密度，可以间接测量待测物的浓度。

竞争性Elisa是一种用于测量抗原或抗体浓度的方法。

将已知浓度的抗原或抗体与酶标记的抗原或抗体竞争结合固相载体上的抗体。

然后加入待测物，待测物与固相载体上的抗体竞争结合，形成抗原-抗体-酶标记抗原或抗体复合物。

经过洗涤去除未结合的物质后，加入底物，酶催化底物生成可测量的产物。

通过测量产物的光学密度，可以间接测量待测物的浓度。

间接竞争性Elisa是一种用于测量抗体浓度的方法。

将已知浓度的抗原与固相载体上的抗体结合。

然后加入酶标记的抗原，酶标记的抗原与固相载体上的抗体竞争结合，形成抗原-抗体-酶标记抗原复合物。

elisa原理Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用于检测特定抗原或抗体的实验方法。

它基于酶与抗原抗体相互作用的特性，通过检测酶的活性来间接测定待测物质的存在与数量。

Elisa的原理可以分为间接法、直接法和间接夹心法。

以下是介绍这些方法的详细原理：1. 间接法：该方法用于检测抗原。

首先，在试验板上涂布含有待测抗原的物质。

然后加入与该抗原特异性反应的抗体。

这些抗体通常与酶（如辣根过氧化物酶）结合在一起。

随后，加入试液，其中包含检测样本中的抗体。

样本中的抗体与已有的抗原结合，形成抗原-抗体-酶复合物。

接下来，通过加入底物，酶的活性导致底物发生化学反应，生成可检测的产物。

产物的浓度与样本中的抗体浓度成正比，从而可以确定待测样本中的抗体含量。

2. 直接法：该方法用于检测抗体。

首先，在试验板上涂布已知抗原。

然后加入待测样本，其中的抗体将与试板上的抗原结合形成抗原-抗体复合物。

接下来，加入与该抗体特异性反应的酶标记二抗。

酶标记二抗与抗原-抗体复合物结合，形成双重复合物。

通过加入底物，酶的活性导致底物发生化学反应，生成可检测的产物。

产物的浓度与待测样本中的抗体浓度成正比。

3. 间接夹心法：该方法既可以用于检测抗原，也可以用于检测抗体。

首先，在试验板上涂布已知抗原。

然后加入待测样本，其中特异的抗体与试板上的抗原结合。

接下来，加入与该抗体特异性反应的酶标记二抗，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。

随后，加入另一抗体（通常是与酶标记二抗相反的抗体）来结合酶标记二抗的未结合部分，形成夹心型复合物。

最后，通过加入底物，酶的活性导致底物发生化学反应，生成可检测的产物。

产物的浓度与待测样本中的抗原/抗体浓度成正比。

Elisa方法因其灵敏度高、特异性好、操作简单等优点而被广泛应用于医学、生物学和生物化学等领域，用于疾病的诊断、检测生物标志物、药物研发等。

ELISA（酶联免疫吸附）的基本原理、应用及方法和类型ELISA的基本原理有三条：(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性;(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。

也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。

不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。

本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。

因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面： 1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

2、研究抗酶抗体的合成。

3、显现微量的免疫沉淀反应。

4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～1 0μg/ml。

在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。

次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

(简称洗涤，下同)。

2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。

然后洗涤。

(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度) 0.1ml。

37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

ELISA的种类及原理
ELISA（酶联免疫吸附试验）的种类有直接ELISA、间接ELISA、双抗体夹心ELISA、竞争ELISA、间接竞争ELISA
和间接/夹心ELISA。

直接ELISA的原理是将需要检测的抗原直接固定在微孔板上，然后加入与抗原结合的标记抗体，最后用底物检测标志物对微孔板进行显色，以确定抗原的存在。

间接ELISA的原理是先将需要检测的抗原固定在微孔板上，
然后加入特异性抗体，再加入标记二抗与特异性抗体结合，最后用底物检测标志物对微孔板进行显色，以检测抗原的存在。

双抗体夹心ELISA的原理是用两种具有特异性的抗体来检测
抗原。

首先将捕获抗体固定到微孔板上，加入待检样品，待抗原与捕获抗体结合后，加入检测抗体，最后再加入与检测抗体结合的标记二抗进行检测。

竞争ELISA的原理是在抗原与特异性抗体的竞争下检测抗原。

将捕获抗体固定到微孔板上，加入已知抗原浓度的标准样品和待检样品，再加入特异性抗体与标记抗体竞争结合。

间接竞争ELISA的原理同竞争ELISA类似，但检测抗体不是
标记抗体而是另一种竞争性抗体。

间接/夹心ELISA的原理是将捕获抗体固定在微孔板上，加入
待检样品和检测抗体，再加入标记二抗，最后用底物检测标志物对微孔板进行显色，并检测抗原的存在。