分子生物学实验设计报告

分子生物学综合大实验实验报告分子生物学综合大实验实验报告外源基因SOC1的扩增和重组载体的构建与筛选班级姓名学号实验目的通过PCR技术克隆外援基因SOC1的目的片段。

通过质粒提取，酶切和连接技术，把SOC1基因重组进TA克隆载体并完成筛选。

实验用品材料：植物叶片，TA克隆载体试剂：DNA提取液（1L）TE缓冲液；琼脂糖；核酸染料；；DNAmarker；6×上样缓冲液（0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油）、DNA聚合酶、dNTP、上下游引物器材：研钵，恒温水浴，离心机，离心管，PCR仪、生化培养箱、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统，去离子水、超净工作台，低温台式离心机，分光光度计，水浴锅，高压灭菌锅，酒精灯等。

实验原理通过配制DNA提取液，利用研磨法获得DNA模板，然后采用PCR技术扩增基SOC1基因获得目的片段，然后通过酶切和连接方法把SOC1基因连接到TA载体上。

大肠杆菌感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA与Ca2+形成的复合物粘附于细胞表面，经过42℃短暂的热激处理后，DNA与Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养基中短暂培养，使转入大肠杆菌质粒上的抗生素抗性基因表达，在含相应抗生素的选择培养基上可将转化菌（含质粒）与未转化细菌分开，转化细菌经过不断分裂增殖形成菌落，而未转化的细菌则不能。

并通过氨苄抗性筛选获得重组子实验方法步骤1、植物基因组DNA的小量提取（1）剪取新鲜幼嫩的植物叶片1~2片于1.5 mL离心管中.（2）先加入少量的DNA提取液100 μL，用研磨棒充分研磨尽量避免提取液溅出。

（3）再加入600 μL的DNA提取液，使DNA提取液的总体积为700μL，上下颠倒混合均匀。

（4）放入高速离心机4℃条件下12 000 rpm离心15 min。

（5）取上层水相，移入标有相应序号的新的离心管中，加入600 μL的异丙醇（与加入DNA 提取液的总体积相同），上下颠倒混匀。

分子生物学实验报告
实验目的：
通过本次实验，我们旨在探究DNA复制、基因表达和蛋白质合成等分子生物学的基本原理，加深对分子水平生物学过程的理解，培养实验操作技能和科学思维能力。

实验材料与方法：
1. 实验材料：大肠杆菌（E. coli）细菌菌斑、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、琼脂糖电泳试剂、PCR扩增仪、电泳仪等。

2. 实验步骤：
a. DNA提取：取一支含E. coli细菌菌斑的移液管，用DNA提取试剂盒提取DNA。

b. PCR扩增：将提取的DNA加入PCR试剂盒中进行PCR扩增反应。

c. 原核表达：将扩增后的DNA片段转入大肠杆菌进行原核表达。

d. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶，通过电泳进行蛋白质分子量的分离。

实验结果与分析：
1. DNA提取：成功提取到E. coli细菌的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳观察到DNA的带型。

2. PCR扩增：成功扩增出目标DNA片段，并经过验证测序结果正确。

3. 原核表达：大肠杆菌成功表达了目标蛋白质，通过SDS-PAGE电泳观察到目标蛋白质的条带。

4. SDS-PAGE电泳：观察到蛋白质的分子量差异，验证了蛋白质的分离效果。

结论与讨论：
通过本次实验，我们成功实现了DNA提取、PCR扩增、原核表达和蛋白质分离等分子生物学实验步骤，从而全面了解了分子生物学过程的基本原理。

实验结果表明，实验操作规范，结果可靠，为今后的科研工作和实验基础奠定了坚实的基础。

同时，也发现了实验中的一些不足之处，提出了改进的建议，为进一步的研究工作提供了参考。

参考文献：
无。

分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。

本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。

实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。

本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。

材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。

2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。

3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。

结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。

这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。

讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。

DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。

这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。

实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。

本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。

材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。

2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。

3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。

结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。

这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。

讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。

RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。

这种选择性转录是基因调控的关键。

实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。

分子生物学实验报告 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT分子生物学实验院系：生命科学与技术学院专业：生物科学（基地）班级： 201101班学号：姓名：分子生物学基础实验分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。

为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。

它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。

实验一质粒DNA的小量制备一、实验原理要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。

载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。

作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。

细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。

质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。

质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。

它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。

质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。

分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。

实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。

2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。

3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。

4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。

方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。

2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。

3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。

实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。

2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。

3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。

实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。

这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。

在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。

DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。

在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。

PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。

实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。

PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。

在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。

分⼦⽣物学实验报告PCR基因扩增实验⽬的：通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。

实验原理：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR)，是⼀种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的⽅法，故⼜称为基因的体外扩增法。

在待扩增的DNA⽚断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退⽕和延伸若⼲个循环后，DNA扩增2的n 次⽅倍。

实验仪器：基因扩增仪移液器实验试剂：10×PCR缓冲液(含Mg2＋)4种dNTPTaq酶DNA模板两种引物（正向引物和反向引物）实验步骤:`1、按顺序向微量离⼼管中依次加⼊：ddH2O 20µlDNA 样品5µl10×PCR 缓冲液5µldNTP 4µl引物I 5µl引物Ⅱ5µl混匀。

2、PCR反应参数(1) 94℃变性2min(2) 94℃变性30sec，(3) 66℃退⽕30sec，(4) 72 ℃延伸1min。

(5) 重复(2)-(4)40次（6）72 ℃延伸7min。

（7）4℃保存3、琼脂糖凝胶电泳检测PCR的结果：取10µl PCR扩增产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

保持电流40mA。

电泳结束后，⽤EB染⾊15min，紫外灯下观察结果。

实验结果：照⽚结果图1 2 3 41.10ul样品2.样品3.DNA相对分⼦质量标准4.对照DNA琼脂糖凝胶电泳实验⽬的：通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的⽅法和技术。

实验原理：DNA分⼦在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分⼦筛效应，DNA在碱性的溶液中带有负电荷，因此，在电场作⽤下朝正极移动。

在琼脂糖凝胶中电泳时，由于琼脂糖凝胶具有⼀定孔径，长度不同的DNA分⼦由于所受凝胶的阻遏作⽤⼤⼩不⼀，迁移的速度不同，从⽽可以按照分⼦量⼤⼩得到有效分离。

在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应，即分⼦本⾝的⼤⼩和构型。

分子生物学实验报告实验二从 cDNA 文库中靶片断扩增（ 4h ）一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。

2.掌握移液枪和PCR 仪的基本操作技术。

二、实验原理：PCR 技术，即聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR）。

经典的PCR 过程包括：变性（denaturing step ）、退火（annealing step ）和延伸（extension step ）三个步骤。

变性过程，即在高温94℃ ~98 ℃下，模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之形成两条单链ssDNA 。

随后，模板DNA 与引物的退火（复性）过程中，温度降至55℃左右，特异序列的引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；之后，引物的延伸过程，DNA 模板-引物结合物在耐热的DNA 聚合酶（如：Taq 酶）的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。

重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2～4 分钟，2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

PCR 反应的成分和作用：总体积：一般为25μ l ～100 μl（一）无Mg2+buffer ：由纯水、kcl 、Tris 组成。

Tris 用于调节反应体系pH 值，使Taq 酶在偏碱性环境中反挥活性。

kcl 可降低退火温度，但不能超过50 mmol/L ，否则会抑制DNA 聚合酶活性。

（二）Mg2+: 终浓度为 1.5 ～ 2.0mmol/L ，其对应dNTP 为200 μ mol/L ，注意Mg2+ 与dNTPs 之间的浓度关系，由于dNTP 与Taq 酶竟争Mg2+ ，当dNTP 浓度达到 1 mmol/L 时会抑制Taq 酶的活性。

Mg2+能影响反应的特异性和产率。

分子生物学实验方案设计（五篇模版）第一篇：分子生物学实验方案设计梅衣属ITS条形码物种的快速鉴定实验目的：一、学习并熟练地衣DNA提取技术二、掌握PCR技术的原理及操作三、DNA条形码技术的应用实验技术路线：1、地衣总DNA的提取2、PCR扩增3、基因测序4、基因序列对比地衣总DNA提取：1.取带有子囊盘或未有子囊盘的带藻地衣体30~300mg，用无菌水冲洗，除去表面杂质，再用DNA提取液浸泡2~3h（4℃）。

2.将地衣体取出，滤纸吸干表面液体，剪碎放于预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状。

3.将粉末小心、全部转入1.5ml离心管中，加入400μL DNA提取液，混匀。

4.加入10% SDS 50μL、氯化苄150μL，振荡混合，于50℃保温1h，每隔10min振荡混合一次。

5.保温1h后，每管加入3mol/L NaAc 50μL，混匀冰浴15min.6.用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）和等体积酚：氯仿（1：1）各抽提一次，直至无白色沉淀为止。

7.移上清液于另一离心管，加入2倍体积无水乙醇，4℃放置2~3h，15000r/min，离心10min（4℃），弃上清液。

8.将沉淀用70%乙醇冲洗2次后，真空干燥，再加入50~80μL TE 缓冲液，保存于冰箱（4℃）PCR扩增：稀释50 倍用于后续 PCR 操作。

真菌 ITS rDNA 由通用引物 ITS5（5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′）、ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）。

PCR 反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸 2min，反应 32 个循环；72℃延伸 10min，4℃保存。

反应结束后，PCR 产物通过0.8%的琼脂糖凝胶电泳检验,ABI3730DNA 分析仪测序。

序列比对：所获测序结果序列包含小亚基部分结尾序列、ITS1-5.8S-ITS2、大亚基部分起始序列，去除大小亚基部分序列后所得片段大小约500bp，即为所需的序列利用 DNAMAN（Lynnon Biosoft）软件将测序结果同 GenBank 下载数据进行比对分析，如果序列长度不同，则只保留共有区段。

分子实验[优秀范文五篇]第一篇：分子实验分子生物学实验设计方案学院：专业班级：课程：实验名称：组员：实验日期：一、实验目的1、学习与掌握利用ITS序列鉴定真菌的原理；2、掌握用ITS序列鉴定真菌的方法有步骤。

二、实验原理1、菌物是真核生物的重要类别，传统的菌物分类以子实体形态特征和生理生化指标为分类基础，由于部分菌物的子实体不易获得，形态特征不易掌握，少数形态特征和生理生化指标随着环境的变化而不稳定，是传统的菌物鉴定工作困难或分类系统意见分歧。

内转录间隔区ITS(internal transcribed space), 位于5.8S和18S之间（ITS1）以及5.8S和28SrDNA之间(ITS2)，ITS1和ITS2常被合称为ITS，并且5.8SRNA基因也被包括在ITS之内。

近年来，利用真核生物在rDNA 的ITS区域既具保守性又在科、属、种水平上均有特异性序列的特性，对ITS区进行PCR扩增、测序。

随着核糖体rDNA ITS序列分析技术在菌物研究中的应用，一些分类地位不明确、亲缘关系不清楚的物种通过该技术得到了解决，一些重要的菌物遗传信息得到阐明。

2、ITS（Internal Transcribed Spacer）：内转录间隔区。

是真菌核糖体RNA（rRNA）基因非转录区的一部分。

用于真菌鉴定的ITS 序列通常包括ITS1、5.8 S 和ITS2。

真菌ITS 区域长度一般在650 ～750 bp(碱基对)。

ITS（Internal Transcribed Spacer）鉴定是指对ITS序列进行DNA测序，通过将测序得到的ITS序列与已知真菌ITS序列比较，从而获得未知真菌种属信息的一种方法。

ITS鉴定的原理：rDNA 上的5.8、18 和28 SrRNA 基因有极大的保守性, 即存在着广泛的异种同源性。

而由于ITS 区不加入成熟核糖体, 所以ITS 片段在进化过程中承受的自然选择压力非常小,因此能容忍更多的变异。

分子生物学实验一二报告实验一：DNA提取引言：DNA提取是分子生物学实验中的基础实验，通过提取DNA我们可以进一步进行分子生物学上的一系列实验。

DNA提取的目的是从细胞中分离出DNA，常用于构建基因库、PCR扩增等实验。

材料与方法：1.取一定数量的细胞样本，如细菌、植物、动物组织等。

2.加入细胞裂解缓冲液，将细胞破裂释放DNA。

3.加入蛋白酶K以降解蛋白质。

4.加入酒精使DNA沉淀，并用无菌纯水洗涤DNA沉淀。

5. 用Tris-EDTA缓冲液溶解DNA。

6.用紫外可见光谱仪检测DNA浓度和纯度。

结果与讨论：通过以上步骤，我们成功地从细胞中提取出了DNA。

观察到DNA溶液呈现典型的黄绿色，说明DNA浓度较高。

利用紫外可见光谱仪检测DNA的浓度和纯度，结果显示DNA浓度为2μg/μL，纯度（A260/A280）为1.8，表明提取的DNA质量良好。

实验二：PCR扩增引言：PCR全称聚合酶链式反应，是一种快速、特异性并且高灵敏度的DNA扩增技术。

PCR可以扩增出目标DNA的大量复制品，常用于基因克隆、基因突变分析等实验。

材料与方法：1.准备PCR反应体系，包括目标DNA，引物，聚合酶、缓冲液及dNTPs。

2.将反应体系加入PCR仪中，设置好反应条件（温度、时间）。

3.进行PCR扩增反应。

4.用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

结果与讨论：通过PCR扩增反应，我们成功得到了目标DNA的扩增产物。

在琼脂糖凝胶电泳中观察到明显的目标DNA条带，且相对应的分子量与预期一致。

这表明PCR扩增反应成功地复制出了目标DNA，并得到纯净的PCR产物。

结论：通过DNA提取实验，我们成功地从细胞中提取出了DNA，并通过PCR扩增技术得到了目标DNA的扩增产物。

这些结果验证了我们实验的有效性，并为后续的分子生物学研究奠定了基础。

附注：以上报告仅为示例，实际报告应根据具体实验结果和实验目的进行撰写。

分子生物学实验设计报告绿色荧光蛋白的克隆表达一、引言荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白。

绿色荧光蛋白是由日本学者下村修于1962年从多管水母中发现并分离得到的一种发光蛋白。

它是由238个氨基酸构成的“ 3 -桶”型三维立体结构，其中65至67位氨基酸（丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸）形成发光团，为主要的发光位置。

通过生物化学的方法将基因做小小的改变，就可以改变GFP中的氨基酸，得到变异GFP。

目前应用较多的GFP的突变体-增强型绿色荧光蛋白（简称EGFP）传统的PCR产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR产物经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。

这两种方法费时费力，过程繁冗。

而本实验采用的无缝克隆和组装技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法，旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA的片断的插入，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。

突破传统的双酶切再加上连接，只需要一步重组法，即可得到高效率克隆的重组载体，这个重组载体能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子。

研究绿色荧光蛋白在大肠杆菌体内的基因克隆和表达。

通过质粒重组形成所需要的重组质粒pET-28a-GFP，将重组质粒导入大肠杆菌体内，通过酶切、PCR及用IPTG诱导检测是否在大肠杆菌体内诱导表达成功。

菌液PCR是直接用菌液作为模板进行PCR的一种选取成功导入载体的菌落的方法，省时，快捷，但容易出现假阳性。

为了避免这种情况，我们需在设计引物时加上目的基因片段以及改进菌液处理方法。

、实验流程使用无缝克隆试剂盒或改进方法进行重组质粒的构建三、实验步骤1. 质粒DNA的提取1.1实验原理：1.1.1.质粒：一种染色体外的遗传因子，大小在1kb~200kb之间，是具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。

分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。

二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。

质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。

特别是常用的大肠杆菌。

大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。

它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。

当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。

然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。

最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。

此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。

培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。

实验室中最常用的是LB培养基。

三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。

分子生物学实验设计报告绿色荧光蛋白的克隆表达一、引言荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白。

绿色荧光蛋白是由日本学者下村修于1962年从多管水母中发现并分离得到的一种发光蛋白。

它是由238个氨基酸构成的“ 3 -桶”型三维立体结构，其中65至67位氨基酸（丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸）形成发光团，为主要的发光位置。

通过生物化学的方法将基因做小小的改变，就可以改变GFP中的氨基酸，得到变异GFP。

目前应用较多的GFP的突变体-增强型绿色荧光蛋白（简称EGFP）传统的PCR产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR产物经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。

这两种方法费时费力，过程繁冗。

而本实验采用的无缝克隆和组装技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法，旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA的片断的插入，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。

突破传统的双酶切再加上连接，只需要一步重组法，即可得到高效率克隆的重组载体，这个重组载体能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子。

研究绿色荧光蛋白在大肠杆菌体内的基因克隆和表达。

通过质粒重组形成所需要的重组质粒pET-28a-GFP，将重组质粒导入大肠杆菌体内，通过酶切、PCR及用IPTG诱导检测是否在大肠杆菌体内诱导表达成功。

菌液PCR是直接用菌液作为模板进行PCR的一种选取成功导入载体的菌落的方法，省时，快捷，但容易出现假阳性。

为了避免这种情况，我们需在设计引物时加上目的基因片段以及改进菌液处理方法。

、实验流程使用无缝克隆试剂盒或改进方法进行重组质粒的构建三、实验步骤1. 质粒DNA的提取1.1实验原理：1.1.1.质粒：一种染色体外的遗传因子，大小在1kb~200kb之间，是具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。

福州大学分子生物学实验报告
一、实验目的
1、掌握大肠杆菌的质粒抽提方法；
2、掌握DNA提取、电泳和定性染色；
3、利用网络进行结果探索性分析。

二、实验原理和步骤
1、大肠杆菌质粒抽提：将细胞悬液中的质粒吸附到分子筛上，再通过不同pH值的溶液来把质粒从分子筛上除去。

2、DNA提取：利用能解聚离键的其他物质来使得DNA除去蛋白和脂质，然后分离出来。

3、电泳：将提取出来的DNA经过加热溶解，并加入Therees buffe（2摩尔/升）或Tris EDTA（0.5摩尔/升）溶液。

然后将溶液分装到水解电泳槽中，加入电流，在水解条件下进行电泳，完成DNA图谱。

4、定性染色：根据定性染色原理将DNA染成不同颜色，以观察DNA 模式或进行DNA比较。

三、结果分析
1、结果表明：经过抽提，U管的水解产物具有良好的阴离子称做，并可以清楚地看到不同大小的限制性片段，此结果说明质粒抽提是有效的；
2、经过电泳，U管的水解产物可以清晰地看到DNA图谱，表明DNA 提取有效；
3、经过定性染色，U管的水解产物清晰地呈现不同的染色模式，表明定性染色有效；
4、利用网络进行结果探索性分析，可以准确地获取分析结果。

分⼦⽣物学试验报告分⼦⽣物学实验报告实验⼀真核基因组DNA的制备与分析⼀、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的⽼⿏尾巴组织块，⽤⽣理盐⽔洗净，剪碎⾄糜状。

（2）将上述组织碎末加⼊盛有500uL裂解液的2mL离⼼管中，37℃⽔浴1h。

2、⽤蛋⽩酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋⽩酶K，温和的将酶混⼊粘滞的溶液中。

（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃⽔浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，⾄看不到明显的组织块为⽌。

（3）将溶液冷却⾄室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离⼼管⾄两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离⼼10min，使两相分开。

（4）⽤⼤⼝径移液管将上层粘稠的⽔相移到⼀洁净的离⼼管中，⽤酚重复抽提2次。

（5）第三次酚抽提后，将⽔相移⾄另⼀离⼼管中，于室温加100uL的10M⼄酸铵和1000uL 的⼄醇，转动离⼼管使溶液充分混合，DNA⽴即形成沉淀，通常可⽤吸管将沉淀从⼄醇溶液中移除。

如果DNA沉淀为碎⽚，则与室温离⼼收集。

（6）DNA沉淀⽤70%的⼄醇洗涤，离⼼收集。

将离⼼管于室温下放置实验台上，直⾄⼄醇挥发殆尽。

不要使DNA沉淀完全⼲燥，否则极难溶解。

（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24⼩时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。

（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加⾄上述凝胶上样孔内。

（3）取适量标准DNA溶液同样加⾄凝胶上样孔内。

（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极⾄阴极为准。

（5）电泳结束后，将凝胶放⼊含溴化⼄锭（0.5ug/mL）的⽔中室温浸染10min，⽤紫外灯观察凝胶和照相。

⼆、实验结果如上图所⽰，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单⼀条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。

三、结果分析提取的基因组DNA⽚段只有30kb左右，偏⼩。

分⼦⽣物学实验设计报告分⼦⽣物学实验设计报告——得到表达绿⾊荧光蛋⽩基因的⼤肠杆菌郭晓涵艾珉吉实验最终⽬标：得到表达绿⾊荧光蛋⽩基因的⼤肠杆菌实验所需质粒：PET28a质粒、pEGFP-N3质粒（⽼师提供）（pEGFP-N3载体为真核细胞表达载体）实验所需细胞：DH-5α和BL-21感受态细胞（⽼师提供）实验主要部分：将PET28a质粒及pEGFP-N3质粒转⼊感受态细胞并扩⼤培养；提取上述两种质粒并酶切检测；扩增EGPF基因⽚段和pET-28a酶切质粒并构建重组质粒；重组质粒转⼊DH-5α扩增及菌落PCR检测与细胞发光检测。

图⽰如下：两种质粒扩⼤培养及酶切检测载体质粒PET-28a ⽬的基因质粒(绿⾊荧光蛋⽩)质粒重组具体步骤：分离质粒DNA的⽅法⼀般包括三个基本步骤：培养细菌使质粒扩增收集和裂解细菌分离和纯化质粒DNA重组质粒PET-28a-GFP的构建：E.coli DH-5α（pEGFP-N3） E.coli DH-5α（pET-28a）质粒pEGFP-N3 质粒pET-28a插⼊⽚段连接插⼊⽚段重组质粒（PET-28a-GFP）⼀、将PET28a质粒及pEGFP-N3质粒转⼊DH-5α感受态细胞并扩⼤培养1. 取200 µl制备好的感受态细胞，冰上解冻，均匀悬浮。

2. 分别加⼊2 µl⽬的质粒，轻轻混匀，冰上静置10-30 min。

3. 42 ℃⽔浴2min后，冰上放置2 min。

4. 加⼊400µl LB液体培养基，37 ℃，50-100 rpm振荡培养1 h。

5. 取200 µl悬浮细胞均匀涂布在LB固体培养基（含卡那霉素）上，培养⽫正放静置1-2 h后，封⼝膜封好，37 ℃倒置培养12-18 h，留做备⽤。

注：LB培养液的制备⽅法——胰蛋⽩胨（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeast extract）5 g，NaCl 5g，琼脂（固体培养基）15g，⽤1N NaOH调pH 7.5。