致畸试验
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【医学课件】致畸试验
常用方法
致畸试验的常用方法包括体内试验和体外试验。体内试验包括整胎试验、子代试 验和围产期试验等；体外试验包括离体器官培养、细胞培养和基因检测等。
标准
世界卫生组织（WHO）和国际化学品安全规划署（IPCS）等机构颁布了致畸试 验的标准指南和方法，为试验的标准化和规范化提供了依据。同时，各国也制定 了相应的法律法规，对生殖毒性物质的检测和管理做出了明确规定。
致畸试验的结果可以用于制定相关的法律法规 和标准，为保障公众健康和安全提供有效的政 策保障。
致畸试验的研究成果还可以推广应用于临床医 学、预防医学、健康教育等领域，为提高医疗 保健水平和公众健康素养提供科学支持。
未来研究的方向和挑战
未来致畸试验的研究方向应着重于研究胚胎和胎儿发育过程中 更为精细的分子生物学机制，以及更为先进的实验技术和方法 的应用。
化学因素
接触有害化学物质，如某些药物、染料、农药等 ，可能干扰胚胎正常发育。
生物因素
如风疹病毒、巨细胞病毒等感染，可能导致胎儿 畸形。
致畸效应的表现和评价
外观畸形
如唇裂、腭裂、肢体畸形等。
智力与行为异常
智力低下、多动症等问题。
脏器功能异常
如先天性心脏病、肝肾功能不全等 。
生长发育迟缓
身材矮小、体重偏轻等问题。
致畸试验与其他研究的结合
与流行病学研究的结合
通过分析大量数据，可以研究各种致畸因子与胎儿畸形的相关性，并探讨其作用 机制和影响因素，为预防胎儿畸形提供科学依据。
与基础研究的结合
基础研究可以深入探讨胎儿发育过程中各种致畸因子对胎儿组织器官的影响，为 临床干预和治疗提供理论支持。
致畸试验的伦理和法规考虑
02
致畸试验可以为化学品、药品、食品等产品的安全性评估提供参考，为预防和 减少出生缺陷提供有效的技术支持。
致畸试验的常用方法包括体内试验和体外试验。体内试验包括整胎试验、子代试 验和围产期试验等；体外试验包括离体器官培养、细胞培养和基因检测等。
标准
世界卫生组织（WHO）和国际化学品安全规划署（IPCS）等机构颁布了致畸试 验的标准指南和方法，为试验的标准化和规范化提供了依据。同时，各国也制定 了相应的法律法规，对生殖毒性物质的检测和管理做出了明确规定。
致畸试验的结果可以用于制定相关的法律法规 和标准，为保障公众健康和安全提供有效的政 策保障。
致畸试验的研究成果还可以推广应用于临床医 学、预防医学、健康教育等领域，为提高医疗 保健水平和公众健康素养提供科学支持。
未来研究的方向和挑战
未来致畸试验的研究方向应着重于研究胚胎和胎儿发育过程中 更为精细的分子生物学机制，以及更为先进的实验技术和方法 的应用。
化学因素
接触有害化学物质，如某些药物、染料、农药等 ，可能干扰胚胎正常发育。
生物因素
如风疹病毒、巨细胞病毒等感染，可能导致胎儿 畸形。
致畸效应的表现和评价
外观畸形
如唇裂、腭裂、肢体畸形等。
智力与行为异常
智力低下、多动症等问题。
脏器功能异常
如先天性心脏病、肝肾功能不全等 。
生长发育迟缓
身材矮小、体重偏轻等问题。
致畸试验与其他研究的结合
与流行病学研究的结合
通过分析大量数据，可以研究各种致畸因子与胎儿畸形的相关性，并探讨其作用 机制和影响因素，为预防胎儿畸形提供科学依据。
与基础研究的结合
基础研究可以深入探讨胎儿发育过程中各种致畸因子对胎儿组织器官的影响，为 临床干预和治疗提供理论支持。
致畸试验的伦理和法规考虑
02
致畸试验可以为化学品、药品、食品等产品的安全性评估提供参考，为预防和 减少出生缺陷提供有效的技术支持。
致畸
结构异常
指胎儿形态 结构异常， 即畸形。
子代易感性 增加
孕期接触己 烯雌酚。 肥胖。
发生 受精卵未发育即 生长迟缓， 死亡； 胎儿的生长发 胚泡未着床即死 育指标比正常 亡， 对照的均值低 着床后生长发育 2个标准差。 到一定阶段死亡。
结果 早期死亡被吸收 或自子宫排出 (即自然流产)， 晚期死亡成为死 胎。
1960 年 前 后 ， 英 、 德 、
日本等国妇女 “反应停”
（thalidomቤተ መጻሕፍቲ ባይዱde）事件
反应停事件的贡献 • 1966年美国FDA提出 三段生殖毒性试验指 南 • 1986年美国EPA提出 可疑发育毒物危险度 评价指南
现代研究对人类妊娠结局的认识
• 完全正常的健康婴儿＜50％ • 不良妊娠结局：
现代实验畸胎学（19世纪）
发育毒理学（现代）
畸胎学
古代的神话人物
如独眼巨人、海妖等
原型可能来自严重畸
形的婴儿。 独眼巨人
海妖
Hybrid theory（杂交理
论）认为畸形是人和动物 杂交的结果，并且这种杂 交动物广泛存在于神话传
说中，如人头马身怪物，
人身牛头等。
Teratology（畸形学）来自希腊语“ monster”
思考题： 比较生殖毒性和发育毒性。
5.出生缺陷（birth defect）
婴儿出生前即已形成的发育障碍，包括形态结构异 常（畸形）和功能缺陷（如智力低下，代谢和行为
的异常）。
与营养缺乏和环境有害因子有关的出生缺陷（新内容）
－着床后丢失30％。 －畸形：出生时，严重畸形2～3％， 轻微畸形14。 －功能异常：神经功能异常16～17％。
先心病 神经管缺陷 血红蛋白病 唐氏综合征 蚕豆病
致畸(发育毒性)作用机制、试验和评价
一般认为变异不影响正常生理功能，更不危及生 命。在动物致畸试验中，如果某种变异出现较多，并呈 现一定剂量—效应关系，应该引起注意。
3.胚体－胎体毒性
胚体毒性（embryotoxicity）：孕体着床前后直到 器官形成期。
胎儿毒性（fetoxicity）：器官形成期结束后。
在实验动物发育毒性试验中，通常不去区分 胎儿与胚体，统称为胚胎毒性。通常研究的胚胎 毒性是指孕体的死亡和生长发育迟缓，不包括结 构畸形。
了解：致畸（发育毒性）作用机制
案例
背景： 20世纪60年代至70年代，美国陷入越
战的泥潭。 美国空军实施“牧场行动计划”。 1961-1971年向越南丛林喷洒数百万升
落叶型除草剂（橙剂），喷洒面积达 越南南方总面积10％。
后果：
10年间，在橙剂战区活动的士兵和越南军民 长期暴露高浓度橙剂之中深受其害。
现代实验畸胎学 19世纪初期，对哺乳动物进行了实验畸胎学研究。
物理因素 （震动、倒置、针刺）
化学毒物
产生了畸形小鸡
神经管缺陷 无脑畸形 脊柱裂 独眼畸形 …………
1950年，日本水俣湾，汞废水污染引发先天水俣病。
1960年前后，英、德、 日本等国妇女 “反应停” （thalidomide）事件
思考题： 比较生殖毒性和发育毒性。
5.出生缺陷（birth defect）
婴儿出生前即已形成的发育障碍，包括形态结构异常 （畸形）和功能缺陷（如智力低下，代谢和行为的异 常）。
与营养缺乏和环境有害因子有关的出生缺陷（新内容）
如何评价外源化学物是否具有该种毒 性？
第一节 概述
5周人胚
6周人胚
266天（38周）
受精 ─────→ 胎儿成熟娩出
3.胚体－胎体毒性
胚体毒性（embryotoxicity）：孕体着床前后直到 器官形成期。
胎儿毒性（fetoxicity）：器官形成期结束后。
在实验动物发育毒性试验中，通常不去区分 胎儿与胚体，统称为胚胎毒性。通常研究的胚胎 毒性是指孕体的死亡和生长发育迟缓，不包括结 构畸形。
了解：致畸（发育毒性）作用机制
案例
背景： 20世纪60年代至70年代，美国陷入越
战的泥潭。 美国空军实施“牧场行动计划”。 1961-1971年向越南丛林喷洒数百万升
落叶型除草剂（橙剂），喷洒面积达 越南南方总面积10％。
后果：
10年间，在橙剂战区活动的士兵和越南军民 长期暴露高浓度橙剂之中深受其害。
现代实验畸胎学 19世纪初期，对哺乳动物进行了实验畸胎学研究。
物理因素 （震动、倒置、针刺）
化学毒物
产生了畸形小鸡
神经管缺陷 无脑畸形 脊柱裂 独眼畸形 …………
1950年，日本水俣湾，汞废水污染引发先天水俣病。
1960年前后，英、德、 日本等国妇女 “反应停” （thalidomide）事件
思考题： 比较生殖毒性和发育毒性。
5.出生缺陷（birth defect）
婴儿出生前即已形成的发育障碍，包括形态结构异常 （畸形）和功能缺陷（如智力低下，代谢和行为的异 常）。
与营养缺乏和环境有害因子有关的出生缺陷（新内容）
如何评价外源化学物是否具有该种毒 性？
第一节 概述
5周人胚
6周人胚
266天（38周）
受精 ─────→ 胎儿成熟娩出
致畸试验
第七节致畸试验掌握致畸试验的内容。
致畸试验（teratogenic test)：是鉴定动物致畸物的标准试验法，下述的致畸试验方案用以检测药物的致畸性，也能得到有关药物致胚胎死亡及生长迟缓的资料。
一、实验动物理想的致畸实验动物对药物的代谢过程应与人相近，胎盘结构亦相似，产仔多、孕期短、价廉、来源易及操作方便。
在代谢功能与解剖结构方面，比较符合要求的动物是狗和猴；符合经济实用要求的是兔、大鼠、小鼠及豚鼠。
但小动物有不足之外，如兔自发畸形率较高，有时孕期长短不定（32-36天），大鼠对致畸作用有较大耐受性；小鼠对致畸反应介于兔与大鼠之间，‘自发畸形略高于大鼠；豚鼠胎盘结构与人相近，但孕期长（6O天左右）产仔少（4只）。
常用大鼠，小鼠和兔。
特别是大鼠，因为大鼠自发畸形率低，胎鼠大小也适于检查。
雌性动物宜用成年末怀过孕的动物。
动物选择要求对药物敏感性高，而自发畸变形率低，至少采用两种动物，一种啮齿类，另一种要求非啮齿类。
二、动物受孕及检查方法以大鼠为例，选用鼠龄三个月以上，体重200-250g雌鼠，饲养数天后作阴道分泌物涂片检查，以判断是否处于动情期。
如涂片见有较多白色分泌物，镜检发现有较多核上皮细胞，提示雌鼠处于动情前期。
大鼠性周期一般为4-5天，动情前期向动情期移行多在夜间。
处于动情前期的鼠按2:1或3:2比例与同龄雄鼠同笼过夜，次日检查是否受孕。
检查受孕方法有两种。
一是检查阴栓，阴栓是雄鼠精囊与凝固腺分泌液在雌鼠阴道凝结而成的白色块状物，形似米粒，大鼠的阴栓很易脱落，次日可于鼠笼下的糖瓷盘内发现，小鼠的阴栓不易脱落，位置较深时用镊子撑开阴道口方能看清。
二是阴道涂片检查精子，可用棉签插人阴道转动数次后拔出，涂抹在滴有生理盐水的玻片上，在低倍镜下查找精子。
查到阴栓或精子即提示怀孕，检出日为孕期的“0天”，次为第1天，以此推算孕龄。
受孕率在春、秋季较高（可达70％以上）夏、冬季较低(50%），所以也可采用人工控制温度（23℃左右）及光线，让雌雄动物每天同笼6小时后作阴道涂片，以提高受孕率并便于在白夭工作。
毒理学实验六
毒理学实验六传统致畸实验一、实验目的：1、具有致畸作用的外来化学物质，接触妊娠母体后，可使处于细胞分化和器官形成早期的胚胎发育受到影响，导致形态、结构和机能的缺陷，引起胎儿出现畸形。
2、通过致畸试验可检测受试物是否具有致畸作用，造成何种畸形以及致畸出现的主要脏器。
3、通过本实验了解致畸试验中妊娠大鼠的处死方法和胎仔畸形的检查方法。
二、实验内容1．妊娠大鼠的处死2．活胎仔外形检查3．胎仔内脏的检查4．胎仔骨骼的检查5．胎仔骨骼标本制作三、试剂和材料1、试剂：固定液（Bouins液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸饱和液）75份、甲醛20份、冰醋酸5份。
2、器材：玻璃标本瓶、解剖器械（手术剪刀、镊子）、手持放大镜、天平（感量0.1g）、滤纸、透明尺、平皿3、实验动物：妊娠19～20天的大鼠四、实验设计1、动物选择原则代谢过程：与人接近胎盘结构：与人相似妊娠期：短，一致窝产仔数：多动物：大鼠、小鼠、兔2、剂量分组一般设三个剂量：高剂量（不超过1/5-1/3 LD50）低剂量（1/100-1/30 LD50）中剂量阴性对照组阳性对照组五、实验步骤1、动物受孕及其检查方法动物交配：雌:雄=1:1同笼确定受孕：查阴栓，白色蜡状物查精子，雌鼠阴道分泌物涂片分组：确定为孕鼠后按照随机区组的方法。
将其分配到各实验组和对照组。
2、染毒给药时间：器官形成期给药，大、小鼠：在受孕第6-15天给药常见实验动物器官形成期动物种类小鼠大鼠家兔器官形成期6~15 6~15 8~18妊娠期（天）19 21 30~35处死时间第18天第20天第29天3、母鼠解剖和胎鼠检查于大鼠妊娠第20天或小鼠妊娠第18天用乙醚麻醉后颈椎脱臼处死孕鼠，称体重后，立即剖腹暴露子宫检查。
（1）一般检查：:连同胎仔取出子宫。
称胎窝总重。
取出胎鼠，检查活胎、早死胎、晚死胎、吸收胎。
颜色器官外形自然运动对机械刺激的反应胎盘活胎肉红色完整成形有有运动反应红色、较大晚期死胎灰红色完整成形无无运动反应灰红、较小早期死胎乌紫色未完整成形无—暗紫吸收胎暗紫或浅色点块不能辨认——（2）外观检查：:对活胎仔逐一观察外观有无畸形。
致畸胎敏感实验1
1011
（不必切，用眼科镊解剖）
横断面所见 大脑、侧脑室、眼球、鼻中隔、鼻腔 大脑、间脑、延脑，下横断面看腭裂 舌、鼻咽腔、延髓 气管、食道、胸腺 肺、纵隔、心房、脊髓 肺、心室、心室中隔 肺、横膈 肝、胃（小部分）
胃（大部分）、肝、十二指肠、肾上腺 10相当于髂骨前棘处向后切胃（小部分）、肝、肾、 脾、胰、肠 生殖器、膀胱、肾
4
三：剂量设计
一般设3个试验组，最高剂量组应是有轻微母体毒性的剂量，最低 剂量组不应引起明显的毒性效应，中间剂量要有助于观察评价剂量 反应关系。可依据： ①亚急性毒性试验的最大耐受量作为致畸试验的最高剂量，以其 1/30为最低剂量。 ②以LD50为参考，以LD50的1/2~1/3为最高剂量，LD50的 1/30~1/50为最低剂量。 ③人体实际接触量。 另设2个对照组，一个为空白对照或溶剂对照，另一个为阳性对照。
2.胎鼠外观：测量活胎身长和尾长, 检查活胎有无外观异常,外观 异常主要包括：①头部畸形：观察有无脑积水、露脑、无脑畸形、 脑膜膨出、无眼、小眼、无耳、小耳、腭裂等；②四肢畸形：观 察有无多趾、并趾、少趾、无趾、足内翻、短肢等；③躯干畸形： 如脐疝、腹裂、脊髓膨出、脊柱裂、脊柱侧突等；④尾畸形：观 察有无短尾、卷尾、无尾、尾分叉等；⑤有无肛门闭锁等。 鉴 定活胎性别。
常选用的阳性药物有敌枯双、阿斯匹林、维生素A、五氯酚钠等。
5
四：动物分组和给药
1.交配：通常大鼠按雌:雄1:1、小鼠按雌:雄2:1的比例以4～5天 为1个周期进行交配（大鼠性周期4~5天，小鼠性周期为4天）。 次日晨阴道涂片镜检, 查到精子或发现阴栓为妊娠0 d。
2.动物分组：将受精鼠按完全随机化分组分为5 组, 即一个阴性 对照组、三个实验组和一个阳性对照组, 每组16 窝。
【医学PPT课件】致畸试验
毒理学基础实验课
切面5：前肢上缘向后切,观察气管、
5 食管和脊髓 切面6：前肢下缘向后切，观察肺、
6 纵隔、心房、脊髓
7 切面7：剑突下向后切，观察肺、心
8 室、心室中隔
9 切面8：从脐至剑突1/2处向后切，检
查肺、横隔
切面9：从脐向后切 ，观察肝、胃
（小部分）
（6）内脏检查
毒理学基础实验课
毒理学基础实验课
（4）一般发育指标的测量 体重、身长、尾长
毒理学基础实验课
（5）骨骼检查
毒理学基础实验课
徒手切片法
毒理学基础实验课
切面1：通过口经耳后作水平切 面，检查颚与舌。
切面2：将切下的头部沿眼球中 央垂直通过眼球做额状切面，检查 眼及嗅球。
切面3：在切面2与鼻翼间作垂直 额面切片，观察鼻道及鼻中隔。
切面4：在切面2与后脑中间，检 查脑、蛛网膜下腔及脑室。
毒理学基础实验课
动物交配处理 将性成熟雌雄动物按雌雄1:1或2:1的比 例同笼交配。每日将已确定受孕雌鼠随机分入各剂量组 和对照组。（每组至少需要有20只怀孕雌鼠存活） 染毒 在受孕大鼠器官形成期给予受试物。
毒理学基础实验课
阴栓
显微镜下观察到的精子
毒理学基础实验课
孕鼠状况观察 ➢ 一般状况：进食、状态 ➢ 称量体重：3天称量1次
畸形总数 活胎仔总数 100
母体畸胎率（%）=
出现畸胎母体数 妊娠母体总数100
注意事项
毒理学基础实验课
雌雄鼠交配后并非全部怀孕，大鼠妊娠率约 70%同，妊娠率亦不同。 实验组怀孕率明显低于对照组时，对于“未受孕” 的结论，应予谨慎考虑应查明是否是因受试物有较强 的胚胎毒作用。
基本原理
致突变、致畸、致癌效应的区别和联系
致突变、致畸、致癌效应的区别和联系致突变效应：是指环境污染物或其他环境因素引起生物细胞的遗传物质发生突然改变的一种作用，这种变化的遗传物质，在细胞分裂繁殖过程中可传递给子代细胞，使其具有新的遗传特性。
可分为基因突变和染色体变异致畸作用：环境中某些物质或因素通过母体影响胚胎的发育，使细胞分化和器官发育不能正常进行，以致出现器官或形态结构上的畸形，此种作用称为致畸作用或致畸胎作用。
可引起致畸作用的物质称致畸物。
广义的致畸应包括生化、生理功能或行为方面的发育缺陷在内。
致癌作用：环境中致癌物诱发肿瘤的作用。
肿瘤有良性和恶性之分，恶性肿瘤又称癌。
估计80～85%的人类肿瘤与环境中的致癌物有关。
这三者（突变、致畸、致癌效应）的联系：（1）化学物质，物理因素和生物因素都有可能引起三致作用（2）致突变作用如影响生殖细胞而发生突变时，可影响妇女的正常妊娠，而出现不孕、早期流产、畸胎或死胎，还可以发生遗传特性的改变而影响下一代。
致突变作用如发生在体细胞时，则不具有遗传性质，而是使细胞发生不正常的分裂和增生，其结果可能表现为癌的形成（3）致突变与致癌之间的关系非常密切，很多致突变物能引起实验动物的癌症，同样很多动物致癌物也为致突变物。
这三者（突变、致畸、致癌效应）的区别：（1）致突变作用可分为基因突变和染色体畸变两大类。
基因突变只涉及染色体的某一部分，并未涉及整个染色体，是属于分子水平的变化，因此不能用普通光学显微镜直接观察，只能借助其他方法加以测定。
染色体畸变是一个或几个染色体的结构或数目发生变化，这种变化可用光学显微镜进行直接观察。
这两种突变类型仅有程度之分，而无本质差别。
致畸作用可用肉眼进行观察，而致癌作用可用光学显微镜进行直接观察。
（2）基因突变的机理是在致突变物的作用下，DNA中碱基对的排列顺序发生变化，造成基因控制下蛋白质合成错误，可表现为酶功能或结构功能的破坏和丧失，导致细胞的遗传性状发生变化而引起突变。
环境毒理学05-2 致癌试验和致畸试验
同时应设阴性(溶剂或赋形剂)对照组。必要时可设阳性对照 组，阳性致癌物最好与受试物的化学结构相近。
精选课件
3、染毒途径 尽可能模拟人体可能的暴露途径，主要途径有经口
、经皮和吸入三种，应根据受试物的理化性质和接触 方式选择确定。
4、试验期限 一般情况下，试验期限小鼠和仓鼠应为18个月，大
鼠为24个月；然而对于某些生命期较长或自发肿瘤率 低的动物品系，小鼠和仓鼠可持续24个月，大鼠可持 续30个月。
精选课件
癌细胞的生物学特点： 1、持续性增殖，分化不良，体外培养无接触性抑制。永生 性。 2、浸润性生长：可侵入其他组织，并发生转移 3、过分旺盛地合成核酸和氨基酸 4、强烈的有氧酵解：在供氧充分时，仍能将葡萄糖转化为 乳酸，大量的乳酸使pH下降，影响细胞酶活力，破坏内稳 态的维持。 5、可将上述特征遗传给子代细胞
在进行试验的两个物种两种性别动物中，有一种结果为阳 性，即认为该受试物有致癌性。两个物种两种性别动物试验结 果均为阴性时，方能认为未观察到致癌作用。
精选课件
（二）致突变试验用于致癌物筛选 预测致癌性的理想致突变试验应能灵敏地预测
出受试物的致癌性，也能特ห้องสมุดไป่ตู้地预测出受试物的 非致癌性，即要有高的灵敏性和特异性。
-
84／104(81)
-
77／106(73) 4／18(22)
40/54(74)
24／44(55)
8／9(89)
9／15(60)
100／
精选课件
（二）化学致癌的非遗传机制学说 一部分致癌物用目前的致突变试验不能检出其致突变性。
这些非遗传毒性致癌物促进细胞分裂增殖的机制多种多样：
具有细胞毒性的致癌剂可引起细胞变性坏死，细胞释放出的 物质具有刺激细胞分裂增殖的作用。
精选课件
3、染毒途径 尽可能模拟人体可能的暴露途径，主要途径有经口
、经皮和吸入三种，应根据受试物的理化性质和接触 方式选择确定。
4、试验期限 一般情况下，试验期限小鼠和仓鼠应为18个月，大
鼠为24个月；然而对于某些生命期较长或自发肿瘤率 低的动物品系，小鼠和仓鼠可持续24个月，大鼠可持 续30个月。
精选课件
癌细胞的生物学特点： 1、持续性增殖，分化不良，体外培养无接触性抑制。永生 性。 2、浸润性生长：可侵入其他组织，并发生转移 3、过分旺盛地合成核酸和氨基酸 4、强烈的有氧酵解：在供氧充分时，仍能将葡萄糖转化为 乳酸，大量的乳酸使pH下降，影响细胞酶活力，破坏内稳 态的维持。 5、可将上述特征遗传给子代细胞
在进行试验的两个物种两种性别动物中，有一种结果为阳 性，即认为该受试物有致癌性。两个物种两种性别动物试验结 果均为阴性时，方能认为未观察到致癌作用。
精选课件
（二）致突变试验用于致癌物筛选 预测致癌性的理想致突变试验应能灵敏地预测
出受试物的致癌性，也能特ห้องสมุดไป่ตู้地预测出受试物的 非致癌性，即要有高的灵敏性和特异性。
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84／104(81)
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77／106(73) 4／18(22)
40/54(74)
24／44(55)
8／9(89)
9／15(60)
100／
精选课件
（二）化学致癌的非遗传机制学说 一部分致癌物用目前的致突变试验不能检出其致突变性。
这些非遗传毒性致癌物促进细胞分裂增殖的机制多种多样：
具有细胞毒性的致癌剂可引起细胞变性坏死，细胞释放出的 物质具有刺激细胞分裂增殖的作用。
毒理学自学材料之第九章-致畸
第九章发育毒性与致畸作用
1
第一节 第二节 第三节 第四节
概述 发育毒性与致畸性 致畸（发育毒性）作用机制 发育毒性和致畸作用试验与评价
2
第一节 概
述
一、发育毒理学（deve1opmenta1 toxico1ogy）
研究出生前暴露于环境有害因子导致的异常发 育结局及有关的作用机制、发病原理、影响因 素和毒物动力学等。
7
孕期吸烟可能引起不良妊娠结 局，多指（趾）、并指（趾）和无指 （趾）是最普遍的畸形。 吸烟越多，发生畸形的危险越高。 每天吸10支，婴儿带有手指或脚 趾畸形的危险增加29％。 每天吸11-20支，婴儿畸形的危险 增加38％。 每天吸21支以上，婴儿畸形的危 险增加78％。
8
孕妇体内缺乏叶酸， 导致神经管畸形 神经管就是胎儿的中枢神 经系统。 神经管畸形指主要包括无 脑畸形和脊柱裂在内的中 枢神经系统发育畸形。 根据国家卫生部推荐的小剂 量叶酸（每片含叶酸0.4毫 克）预防神经管畸形的要 求，具体应用的方法是：孕 前3个月服0 .4毫克/日，孕 后头3个月服0.8毫克/日。
能引起畸形的环境因子
（3） 致畸作用
致畸物引起畸形的过程
致畸性
致畸物引起畸形的特性
16
2．变异（variation）
同一种属的子代与亲代之间或子代的个体之 间，有时出现不完全相同的现象，一般是小的或 次要的结构改变。 例如肋骨或椎骨数目多于或少于正常，某 些内脏易位也属于变异。一般认为变异不影 响正常生理功能，更不危及生命。
二、发育毒性作用的特点和影响因素
21
影响因素
基因突变:小头畸形,肾上腺肥大、软骨 发育不全
遗传因素
染色体畸变:先天愚形,猫叫综合征
1
第一节 第二节 第三节 第四节
概述 发育毒性与致畸性 致畸（发育毒性）作用机制 发育毒性和致畸作用试验与评价
2
第一节 概
述
一、发育毒理学（deve1opmenta1 toxico1ogy）
研究出生前暴露于环境有害因子导致的异常发 育结局及有关的作用机制、发病原理、影响因 素和毒物动力学等。
7
孕期吸烟可能引起不良妊娠结 局，多指（趾）、并指（趾）和无指 （趾）是最普遍的畸形。 吸烟越多，发生畸形的危险越高。 每天吸10支，婴儿带有手指或脚 趾畸形的危险增加29％。 每天吸11-20支，婴儿畸形的危险 增加38％。 每天吸21支以上，婴儿畸形的危 险增加78％。
8
孕妇体内缺乏叶酸， 导致神经管畸形 神经管就是胎儿的中枢神 经系统。 神经管畸形指主要包括无 脑畸形和脊柱裂在内的中 枢神经系统发育畸形。 根据国家卫生部推荐的小剂 量叶酸（每片含叶酸0.4毫 克）预防神经管畸形的要 求，具体应用的方法是：孕 前3个月服0 .4毫克/日，孕 后头3个月服0.8毫克/日。
能引起畸形的环境因子
（3） 致畸作用
致畸物引起畸形的过程
致畸性
致畸物引起畸形的特性
16
2．变异（variation）
同一种属的子代与亲代之间或子代的个体之 间，有时出现不完全相同的现象，一般是小的或 次要的结构改变。 例如肋骨或椎骨数目多于或少于正常，某 些内脏易位也属于变异。一般认为变异不影 响正常生理功能，更不危及生命。
二、发育毒性作用的特点和影响因素
21
影响因素
基因突变:小头畸形,肾上腺肥大、软骨 发育不全
遗传因素
染色体畸变:先天愚形,猫叫综合征
GB 15193-14
对 健 康 造成危害的化学、生物和物理因素，检验的对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品 新 资 源 及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒 剂 、农 药 残留、兽药残留、食品工业用微生物等； — 在试剂中，增加了剥皮用的染色液茜素红溶液； — 在“实验动物”中：去掉了有关小鼠和兔的内容； — 在“剂量及分组”中：增加了各剂量组设计的原则要求和急性毒性试验给予受试物最大剂量（最 大 使 用 浓度和最大灌胃容量）无死亡而求不出 ＬＤＳ。时的剂量设计方法； — 在“操作步骤”中：孕鼠处死和检查中去掉有关小鼠和兔的内容；胎鼠骨标本的制备与检查增加 剥 皮 后 的制备方法；增加了“致畸试验应检查的内容和应记录内容”４个表格。 自本标准实施之 日起，ＧＢ １５１９３．１４－１９９４同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位：浙江医科大学、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准主要起草人：黄幸纤、李悠慧、耿桂英。 本标准于 １９９４年首次发布，本次为第一次修订。
致 畸指 数
＝
雌鼠 ＬＤＳ， 最 小致 畸 剂量
‘．’“．‘·’·。·······… … （１）
致 畸 危 害指 数
＝
最大不致畸剂量 最大可能摄人量
… ‘．······‘······… … （２ ）
８ 结果判定
以致 畸 指 数 １０以下为不致畸，１０＾－１００为致畸，１００以上为强致畸。为表示有害物质在食品中存在 时人体受害几率，可计算致畸危害指数 ，如指数大于 ３００说明该物对人危害小 ，１００＾－３００为中等，小于 １００为大。
４ 实验 动物
常用 试 验 动物为大鼠。选用健康、性成熟（９０天一１００天）大鼠，雌性未交配过的大 鼠 ８０只～ ９０只，雄性减半。
致 畸指 数
＝
雌鼠 ＬＤＳ， 最 小致 畸 剂量
‘．’“．‘·’·。·······… … （１）
致 畸 危 害指 数
＝
最大不致畸剂量 最大可能摄人量
… ‘．······‘······… … （２ ）
８ 结果判定
以致 畸 指 数 １０以下为不致畸，１０＾－１００为致畸，１００以上为强致畸。为表示有害物质在食品中存在 时人体受害几率，可计算致畸危害指数 ，如指数大于 ３００说明该物对人危害小 ，１００＾－３００为中等，小于 １００为大。
４ 实验 动物
常用 试 验 动物为大鼠。选用健康、性成熟（９０天一１００天）大鼠，雌性未交配过的大 鼠 ８０只～ ９０只，雄性减半。
动物体内致畸试验中常见阳性对照剂
中 图分 类 号 ： ８ ７ ２ ￥５．２ 文 献 标 识 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ： ０ ７５ ３ （ ０ ２ ０ — ０ ８０ １ ０ —０ ８ ２ １ ） ２ ０ ９ — ４
生 殖毒性 试 验 中 ， 畸 试 验 的主 要 目的 是评 价 致 受 试物 对妊 娠 动 物 、 胎及 胎 儿 发育 的影 响 。致 畸 胚 性 是孕 期胚 胎直 接接触 致 畸物而 引 起永 久性 的结 构 或 功能 异常 。根 据 生 殖 毒性 试 验 指 导原 则 ， 的 动 新 物系统 、 较长 时 间未进 行过 试验 及新 的试验 设 施等 ， 根据具 体情 况考 虑是 否设 阳性 对 照 组口 。阳性 对 照 ］ 剂 的选 择是 建 立 致 畸模 型 的关 键 ， 致 畸 模 型 建 立 而 的成功 与 否 直 接 关 系 到 试 验 结 果 的 真 实 性 及 可 靠 性 ， 以有 必要 寻 找 针对 不 同实 验 动 物 所 对 应 的 比 所
动 物 医 学 进 展 。０ ２ ３ （ ） ９ —０ ２ １ ，３ ２ ：８ １ １
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
秣专论与讲座劫 ％
罄 ’
动 物 体 内致 畸试 验 中常见 阳性 对 照 剂
英 永 ， 建廷 ， 胡 王韶 艳 ， 卉 锦 ， 屈 李 艳 ， 王凤 乾
较理想 的阳性对 照剂 。
把 阿 司 匹 林 作 为 阳 性 致 畸 物 ， 推 荐 剂 量 为 且
２ ０ｍｇ ｋ ￣３ ０ｍｇ ｋ ５ ／ ｇ ０ ／ ｇ体 重 『 。为 评 价 阿 司 匹 林 ４ ］
对 Ｓ 大 鼠的母体 及胎仔 毒性 ， 敏等 将 ３ Ｄ 赵 ２只 Ｓ Ｄ 孕 鼠随机 分为 阿 司 匹林 组 及 对 照 组 ， 于大 鼠受 孕 的 第 ７ ６天 ， 照 ２ ０ｍｇ ｋ ～１ 按 ８ ／ ｇ体 重 灌 胃给 予 阿 司 匹
生 殖毒性 试 验 中 ， 畸 试 验 的主 要 目的 是评 价 致 受 试物 对妊 娠 动 物 、 胎及 胎 儿 发育 的影 响 。致 畸 胚 性 是孕 期胚 胎直 接接触 致 畸物而 引 起永 久性 的结 构 或 功能 异常 。根 据 生 殖 毒性 试 验 指 导原 则 ， 的 动 新 物系统 、 较长 时 间未进 行过 试验 及新 的试验 设 施等 ， 根据具 体情 况考 虑是 否设 阳性 对 照 组口 。阳性 对 照 ］ 剂 的选 择是 建 立 致 畸模 型 的关 键 ， 致 畸 模 型 建 立 而 的成功 与 否 直 接 关 系 到 试 验 结 果 的 真 实 性 及 可 靠 性 ， 以有 必要 寻 找 针对 不 同实 验 动 物 所 对 应 的 比 所
动 物 医 学 进 展 。０ ２ ３ （ ） ９ —０ ２ １ ，３ ２ ：８ １ １
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
秣专论与讲座劫 ％
罄 ’
动 物 体 内致 畸试 验 中常见 阳性 对 照 剂
英 永 ， 建廷 ， 胡 王韶 艳 ， 卉 锦 ， 屈 李 艳 ， 王凤 乾
较理想 的阳性对 照剂 。
把 阿 司 匹 林 作 为 阳 性 致 畸 物 ， 推 荐 剂 量 为 且
２ ０ｍｇ ｋ ￣３ ０ｍｇ ｋ ５ ／ ｇ ０ ／ ｇ体 重 『 。为 评 价 阿 司 匹 林 ４ ］
对 Ｓ 大 鼠的母体 及胎仔 毒性 ， 敏等 将 ３ Ｄ 赵 ２只 Ｓ Ｄ 孕 鼠随机 分为 阿 司 匹林 组 及 对 照 组 ， 于大 鼠受 孕 的 第 ７ ６天 ， 照 ２ ０ｍｇ ｋ ～１ 按 ８ ／ ｇ体 重 灌 胃给 予 阿 司 匹
致畸试验-精品文档
析。
数据整理和分析
对收集到的数据进行整理和分析， 比较不同剂量组之间的差异，并评 估受试物对胚胎或胎儿的影响程度 。
结果评估与报告
根据分析结果，撰写致畸试验报告 ，对受试物对胚胎或胎儿的影响进 行评估，并提出相应的建议和措施 。
安全防护与质量控制
实验室安全保障
确保实验室具备良好的通风、防 火、防爆等安全设施，并严格按 照实验室安全规范进行操作和管
评价标准
制定评价致畸物的标准，如剂量、暴露时间、效应等指标，为致畸物的风险评估提供依据。
05
致畸试验的应用与展望
医学研究领域的应用
致畸试验在医学研究领域的应用
致畸试验是一种用于评估药物、化学物质或生物因子对胚胎或胎儿发育潜在影响的试验方 法。在医学研究中，致畸试验为临床前研究的重要组成部分，为药物研发、毒理学评价以 及环境科学领域的研究提供了重要的数据支持。
提高试验质量和可靠性
致畸试验的可靠性和准确性对于风险评估和决策具有重要 意义。未来需要不断提高致畸试验的质量和可靠性，通过 改进试验方法、规范操作流程、加强数据监管等方式，提 高试验数据的准确性和可靠性。
06
参考文献
参考文献
要点一
总结词
该文献研究了致畸试验在评估药物安 全性中的重要性。
要点二
详细描述
02
致畸试验的目的是检测受试物对 胚胎或胎儿的损害作用，从而评 估其风险性和安全性。
试验设计原则
致畸试验应遵循随机、对照、重复和 量效的原则。
试验设计时需考虑受试物浓度、染毒 时间、动物种属和性别等因素。
染毒方法及实施步骤
染毒方法包括经口染毒、经皮染毒、经呼吸道染毒等，根据受试物性质和试验目 的选择合适的染毒途径。
数据整理和分析
对收集到的数据进行整理和分析， 比较不同剂量组之间的差异，并评 估受试物对胚胎或胎儿的影响程度 。
结果评估与报告
根据分析结果，撰写致畸试验报告 ，对受试物对胚胎或胎儿的影响进 行评估，并提出相应的建议和措施 。
安全防护与质量控制
实验室安全保障
确保实验室具备良好的通风、防 火、防爆等安全设施，并严格按 照实验室安全规范进行操作和管
评价标准
制定评价致畸物的标准，如剂量、暴露时间、效应等指标，为致畸物的风险评估提供依据。
05
致畸试验的应用与展望
医学研究领域的应用
致畸试验在医学研究领域的应用
致畸试验是一种用于评估药物、化学物质或生物因子对胚胎或胎儿发育潜在影响的试验方 法。在医学研究中，致畸试验为临床前研究的重要组成部分，为药物研发、毒理学评价以 及环境科学领域的研究提供了重要的数据支持。
提高试验质量和可靠性
致畸试验的可靠性和准确性对于风险评估和决策具有重要 意义。未来需要不断提高致畸试验的质量和可靠性，通过 改进试验方法、规范操作流程、加强数据监管等方式，提 高试验数据的准确性和可靠性。
06
参考文献
参考文献
要点一
总结词
该文献研究了致畸试验在评估药物安 全性中的重要性。
要点二
详细描述
02
致畸试验的目的是检测受试物对 胚胎或胎儿的损害作用，从而评 估其风险性和安全性。
试验设计原则
致畸试验应遵循随机、对照、重复和 量效的原则。
试验设计时需考虑受试物浓度、染毒 时间、动物种属和性别等因素。
染毒方法及实施步骤
染毒方法包括经口染毒、经皮染毒、经呼吸道染毒等，根据受试物性质和试验目 的选择合适的染毒途径。
保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容
保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容
毒理试验的四个阶段和内容
1第一阶段：急性毒性试验
经口急性毒性：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受
量试验。
2第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致
畸试验
2.1基因突变试验：鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验）为首选，其次考虑选用V79/HGPRT基因突变试验，必要时可另选其它试验。
2.2骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸
变试验。
2.3TK基因突变试验。
2.4小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸变分析。
2.5其它备选遗传毒性试验：显性致死试验、果蝇伴
性隐性致死试验，非程序性DNA合成试验。
2.630天喂养试验。
2.7传统致畸试验。
3第三阶段：亚慢性毒性试验----90天喂养试验、繁
殖试验、代谢试验
4第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）
1、药物的毒性试验分为两类，其一特殊毒性试验，包含致癌、致残、致突变，号称三致试验；作此试验的单位必须是国家指定并认可的；一般单位即使做了也不被国家认可！通常一类创新药必须做的。
无论一个药物的药效如何好，只要含有三致试验的特殊毒性（动物若干代繁殖后，查看），该药物将不会允许上市的。
2、其二，一般毒性试验，通常用老鼠或兔子去做，主要是测定半数致死量；若某个药物的半数致死量是有效使用剂量的2倍以上，通常认为是临床使用安全的，若半数致死量比有效剂量略大一点，那就谁也不敢使用了，万一略微超一点量就会导致患者死亡！。
如何设计动物致畸试验报告
如何设计动物致畸试验报告1. 引言动物致畸试验是一种重要的实验方法，用于评估化学物质、药物或其他环境因素对动物胚胎或胎儿发育的影响。
设计一个合理、准确的动物致畸试验报告对于保证数据可靠性、结果可重复性以及科学研究的推进具有重要意义。
本文将介绍如何设计一份完整的动物致畸试验报告。
2. 报告结构动物致畸试验报告应具备清晰的结构，以下是一个典型的报告结构：2.1 前言前言部分应包括对试验目的和背景的简要介绍。
描述试验的研究问题和假设以及试验的目标。
2.2 材料和方法材料和方法部分应详细描述试验所使用的动物模型、实验设计、试验物质、试验方法以及实验条件。
包括但不限于：- 动物模型的选取：说明所选模型的依据、动物种类、品系等信息。
- 实验设计：指明对照组和实验组的设置、样本数量、随机分组过程等。
- 试验物质：包括致畸试验物质的纯度、剂量、给药途径、给药频率等信息。
- 试验方法：描述出具体的试验步骤，确保实验可复制。
- 实验条件：详细描述实验所处的环境条件，如温度、湿度等。
2.3 结果结果部分应准确、客观地呈现实验获得的数据和观察结果。
数据可以通过表格、图表或图形等形式来展示。
这部分需要包括但不限于：- 数值数据：列出各组试验指标的数据、平均值、标准差等统计量。
- 图表：使用合适的图表展示数据，如柱状图、折线图等。
- 观察结果：描述对试验动物的观察结果，包括体重变化、外部畸形等。
2.4 讨论讨论部分是对实验结果的解释和分析。
这一部分应结合前人研究结果，讨论实验结果的可信度、与预期结果的一致性、可能的机制等。
同时，也要指出实验中存在的局限性和不足之处。
2.5 结论结论部分对实验结果进行总结，并回答研究问题和假设。
简明扼要地阐述实验结果对于研究领域的意义和可能的应用。
2.6 参考文献报告中应列出所有在文中引用的文献，并按照规范的格式进行编号和排版。
3. 其他要点在设计动物致畸试验报告时，还需要注意以下要点：3.1 语言规范性报告应使用清晰、准确的语言进行描述，避免使用模糊、主观的表达。
致畸试验
致畸试验1 范围GB/T 15670的本部分规定了致畸试验的基本原则、方法和要求。
本部分适用于为农药登记而进行的致畸试验。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 14925 实验动物环境及设施3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1致畸性teratogenicity在胚胎发育期引起子代永久性结构和功能异常的化学物质的特性。
3.2母体毒性maternal toxicity引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应。
4 试验目的检测妊娠动物接触受试物后引起的子代致畸可能性。
5 试验概述将性成熟期的雌性动物与雄性动物进行交配，将确认怀孕的雌性动物随机分配到各个剂量组，在妊娠动物的胚胎发育器官形成期给予受试物染毒，并在子代预期出生前将母体处死，取出子宫，检查吸收胎、活胎、死胎及胎仔的外观、内脏和骨骼畸形情况。
6 仪器与试剂6.1 仪器实验室常用设备、生物显微镜及体视显微镜、游标卡尺（百分尺）等。
6.2 试剂6.2.1 茜素红贮备液：茜素红饱和液（溶剂为50%乙酸）5.0 mL、甘油10.0 mL、1%水合氯醛60.0 mL 混合，放入棕色瓶中（适用于不剥皮法骨骼染色）。
6.2.2 茜素红应用液：取贮备液3 mL～5 mL，用1 g/100 mL～2 g/100 mL氢氧化钾液稀释至1000 mL，存于棕色瓶中。
6.2.3 茜素红溶液：茜素红0.1 g、氢氧化钾10 g、与蒸馏水1000 mL混合，临用前配制（适用于剥皮法骨骼染色）。
6.2.4 透明液A：甘油200 mL、氢氧化钾10 g，与蒸馏水790 mL混合。
6.2.5 透明液B：甘油与蒸馏水等量混合。
6.2.6 固定液（Bouins液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸）饱和液75份、甲醛20份、与冰乙酸5份混合。
化妆品致畸试验
附件10致畸试验Teratogenicity Test1 范围本规范规定了动物致畸试验的基本原则，试验方法和技术要求。
本规范用于检测化妆品原料的致畸作用。
2 术语和定义2.1 致畸性teratogenicity化学物质在器官发生期间引起子代永久性结构异常的特性。
2.2 母体毒性maternal toxicity化学物质引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡。
3 试验原理与目的母体在孕期受到可通过胎盘屏障的某种有害物质作用，影响胚胎的器官分化与发育，导致结构异常，出现胎仔畸形。
在胚胎发育的器官形成期给予妊娠动物化学物质，可检测该化学物质对胎仔的致畸作用。
检测妊娠动物接触化妆品原料后引起胎仔畸形的可能性，预测其对人体可能的致畸性。
4 仪器和试剂4.1 仪器和器材实验室常用设备、生物显微镜、体视显微镜、游标卡尺、电子天平。
4.2 主要试剂4.2.1 甲醛、冰乙酸、2,4,6-三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红。
4.2.2 茜素红储备液：以50% 乙酸为溶剂的茜素红饱和液5.0mL，甘油10.0mL，1%水合氯醛60.0mL混合，存于棕色瓶中。
4.2.3 茜素红应用液：取储备液3mL～5mL，用10g/L～20g/L氢氧化钾液稀释至1000mL，存于棕色瓶中。
4.2.4 茜素红溶液：茜素红0.1g，氢氧化钾10g，蒸馏水1000 mL，临用时配制（剥皮法骨骼染色法）。
4.2.5 透明液A：甘油200mL，氢氧化钾10g，蒸馏水790mL 混合。
4.2.6 透明液B：甘油与蒸馏水等体积混合。
4.2.7 固定液（Bouins液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸饱和液）75份、40 %甲醛20份、冰乙酸5份。
5 试验方法5.1 受试物受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应对受试物进行适当处理。
5.2 实验动物和饲养环境5.2.1 动物选择：啮齿动物首选大鼠，非啮齿类动物首选家兔。
食品毒理学第1阶段测试题1b
食品毒理学第1阶段测试题1b一、单项选择题1、毒理学研究的最终目的是研究（）对人体的损害作用（毒作用）及其机制。
A、内源化学物 B、外源化学物 C、内分泌物质 D、体内代谢物2、（）表示外源化学物的剂量与某一群体中质反应发生率之间的关系。
A、剂量－反应关系 B、剂量－量反应关系 C、剂量－质反应关系 D、剂量－效应关系3、水和食物中的有害物质主要是通过（）吸收。
A、呼吸道 B、消化道 C、皮肤 D、肌肉4、除了（）和乙酰化结合外，其它Ⅱ相反应显著增加毒物的水溶性，促进其排泄。
A、氨基化 B、葡糖醛酸结合 C、硫酸结合 D、甲基化 5、化学物的同分异构体之间的毒性不同，一般来说，（）A、邻位>间位>对位B、对位>邻位>间位C、间位>对位>邻位D、对位>间位>邻位 6、理论上，毒性的强度主要取决于终毒物在其作用部位的（）和持续时间。
A、溶解度B、存在方式C、浓度D、作用方式7、一般毒性作用根据接触毒物的时间的长短又可分为急性毒性、（）和慢性毒性。
A、致突变毒性 B、生殖毒性 C、免疫毒性 D、亚慢性毒性 8、胺类化合物按其毒性大小一次为：（）A、叔胺>伯胺>仲胺B、仲胺>叔胺>伯胺C、伯胺>仲胺>叔胺D、仲胺>伯胺>叔胺 9、生物转化的Ⅰ相反应主要包括（）、还原和水解反应。
A、氧化 B、加成 C、氢化 D、脱氢10、化学毒物在体内的吸收、分布和排泄过程称为（）。
A、生物转化B、消除C、生物转运D、代谢二、多项选择题1、危险度也称为危险性或风险度，可分为（）。
A、间接危险度B、归因危险度C、相对危险度D、直接危险度 2、一般情况下，剂量－反应曲线包括的类型有（）。
A、直线型 B、抛物线型 C、S型曲线 D、“全或无”反应 3、毒理学研究中常用来反映毒作用重点的观察指标可以分为（）。
A、特异指标 B、形态学指标 C、组织学指标 D、死亡指标 4、肾脏对外源化学物的的排泄机理包括（）。
保健用品毒理学评价程序与检验方法——致畸试验
DB22/T 396.10—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第10部分：致畸试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。
本标准并未指出所有可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围本标准规定了保健用品毒理学致畸试验评价程序。
本标准适用于保健用品毒理学致畸试验检验方法。
2 致畸试验方法2.1 试剂及其配制（实验用水为纯水）2.1.1 甲醛、冰乙酸、2,4,6-三硝基酚、氢氧化钾、甘油、水合氯醛、茜素红；2.1.2 茜素红贮备液：茜素红-S，50 %乙酸饱和液5.0 mL，甘油10.0 mL，1%水合氯醛溶液60.0 mL 混合，放入棕色瓶中；2.1.3 茜素红应用液：取贮备液3 mL～5 mL，用1 g/100 mL～2g/100 mL氢氧化钾液稀释至l000 mL，存于棕色瓶中；2.1.4 透明液A：甘油200 mL、氢氧化钾10 g、蒸馏水790 mL混合；2.1.5 透明液B：甘油与蒸馏水等量混合；2.1.6 固定液：Bouins液：2,4,6-三硝基酚75份、甲醛20份、冰乙酸5份。
2.2 仪器与设备2.2.1 分析天平：精确度为0.1 g；2.2.2 生物显微镜；2.2.3 体视显微镜；2.2.4 游标卡尺（百分尺）。
2.3 实验动物常用试验动物为大鼠、小鼠和家兔。
传统致畸应选用健康性成熟(90 d～100 d)雌、雄大鼠，雌性应为未交配过的大鼠80 只～90 只。
雄鼠减半。
2.4 剂量分组至少设四个组，一个空白对照组，3个试验组。
剂量原则上可采用1/4、1/16、l/64 LD50，或以长期毒性试验的最大无作用剂量为高剂量组，其1/30左右为低剂量组，在其间设一组。
对某种新的动物，初次试验可设一阳性对照组。
每组至少12 只孕鼠。
常用阳性对照物有敌枯双（0.5 mg/kg～1.0 mg/kg体重）、五氯酚钠阿斯匹林(30 mg/kg体重)及维生素A 25000 IU～40000 IU等。
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第七节致畸试验掌握致畸试验的内容。
致畸试验（teratogenic test)：是鉴定动物致畸物的标准试验法，下述的致畸试验方案用以检测药物的致畸性，也能得到有关药物致胚胎死亡及生长迟缓的资料。
一、实验动物理想的致畸实验动物对药物的代谢过程应和人相近，胎盘结构亦相似，产仔多、孕期短、价廉、来源易及操作方便。
在代谢功能和解剖结构方面，比较符合要求的动物是狗和猴；符合经济实用要求的是兔、大鼠、小鼠及豚鼠。
但小动物有不足之外，如兔自发畸形率较高，有时孕期长短不定（32-36天），大鼠对致畸作用有较大耐受性；小鼠对致畸反应介于兔和大鼠之间，‘自发畸形略高于大鼠；豚鼠胎盘结构和人相近，但孕期长（6O天左右）产仔少（4只）。
常用大鼠，小鼠和兔。
特别是大鼠，因为大鼠自发畸形率低，胎鼠大小也适于检查。
雌性动物宜用成年末怀过孕的动物。
动物选择要求对药物敏感性高，而自发畸变形率低，至少采用两种动物，一种啮齿类，另一种要求非啮齿类。
二、动物受孕及检查方法以大鼠为例，选用鼠龄三个月以上，体重200-250g雌鼠，饲养数天后作阴道分泌物涂片检查，以判断是否处于动情期。
如涂片见有较多白色分泌物，镜检发现有较多核上皮细胞，提示雌鼠处于动情前期。
大鼠性周期一般为4-5天，动情前期向动情期移行多在夜间。
处于动情前期的鼠按2:1或3:2比例和同龄雄鼠同笼过夜，次日检查是否受孕。
检查受孕方法有两种。
一是检查阴栓，阴栓是雄鼠精囊和凝固腺分泌液在雌鼠阴道凝结而成的白色块状物，形似米粒，大鼠的阴栓很易脱落，次日可于鼠笼下的糖瓷盘内发现，小鼠的阴栓不易脱落，位置较深时用镊子撑开阴道口方能看清。
二是阴道涂片检查精子，可用棉签插人阴道转动数次后拔出，涂抹在滴有生理盐水的玻片上，在低倍镜下查找精子。
查到阴栓或精子即提示怀孕，检出日为孕期的“0天”，次为第1天，以此推算孕龄。
受孕率在春、秋季较高（可达70％以上）夏、冬季较低(50%），所以也可采用人工控制温度（23℃左右）及光线，让雌雄动物每天同笼6小时后作阴道涂片，以提高受孕率并便于在白夭工作。
三、剂量分组，给药方式及时间受试动物分为4-5组，其中3个剂量组（高、中、低），其余两组为阳性对照和阴性对照组。
高剂量组应有母体毒性反应，或为最大给药量。
摄食量的减少，体重增长缓慢或下降，阴道出血，流血等均是毒性反应的表现；低剂量组应为母体和胚胎毒性反应剂量。
一般为临床拟用剂量的某些倍量。
中间剂量应在高、低剂量组之间，剂量组间距应为几何级数，并能显示微小的毒性差别。
也可用LD50的1/3-1/5为高剂量组，低剂量组用1/30-1/100LD50，按等比差在高、低剂量组间插进中间剂量，以期得出最小致畸剂量或最大无作用剂量。
如已掌握或能估计人类实际接触量，也可以人实际接触量（或估计量）为低剂量组，并以其数倍（如10倍）为高剂量组。
阴性对照组为溶剂（赋形剂）对照。
阳性对照可用乙酞水杨酸(大鼠250mg/kg,小鼠150mg/kg),维生素A(浓鱼肝油5m1/kg)。
家兔可用6-氨基烟酰胺（2.5mg/kg）。
已经进行过致畸试验，并确知所用的试验动物对致畸物有阳性结果的实验室可略去阳性对照，每组受孕动物数大鼠和小鼠15-20只，兔8-10只，狗和猴3-4只。
染毒途径应根据受试物的性质及人类可能的接触方式而定，一般多用灌胃和腹腔注射。
染毒时间应选择胚胎对致畸物的易感期（器官形成期）。
大、小鼠和兔进行致畸试验的日程安排见。
每只试验动物在试验期间都应有准确记录受精日期，给予受试物日期和剂量，给药后动物的体重应每隔3-4天称一次（0,3,7,10,13、16,20），并根据体重调整给药剂量，，另一方面也可对受试物动物受精后怀孕和否及受试物对胚胎发育有无影响作出初步估计，如怀孕胚胎发育正常，则受试动物的体重可明显地持续增长；若胚胎中毒死亡或流产，母体体重则停止增长以至下降。
四、观察⑴对母体的观察：每天检查有无中毒症状，对有流产或早产征兆者（如见阴道出血），及时处死检查。
⑵对胎仔的观察：于分娩前1-2日处死受孕动物，以防止自然分娩后母鼠吞食畸形仔鼠。
剖腹取出子宫和卵巢，称重辨认子宫内的活胎、死胎及吸收数，并从左侧子宫角顶端开始直到右侧子宫顶端，按顺序编号记录：然后检查和记录黄体数。
活胎：完整成形，肉红色，看自然运动，对机械刺激有运动反应；胎盘红色，较大。
晚死胎：完整成形，灰红色，无自然运动，对机械刺激无反应；胎盘灰红色，较小。
早死胎：紫褐色，未完整成形，无自然运动，胎盘暗紫。
吸收胎：暗紫或浅色点块，不能辨认胚胎和胎盘。
黄体：在卵巢表面呈黄色鱼子状突起，提示孕鼠的排卵数。
活胎的外观畸形并记录的类型、部位及程度。
将每只母鼠的2/3活胎剥去皮肤和内脏，经茜素红染色及脱水透明后，检查骨骼畸形；余1/3活胎浸人鲍音氏(Bouin)固定液，供检查内脏畸形。
常见的外观、骨骼和内脏见表18-6、表18-7、表18-8。
由于目前没有充分证据表明骨骼对致畸物比内脏更敏感，因此，有人主张将来自两个子宫角的胎鼠随机分配到骨骼畸形检查中。
现将胎仔的外部检查及骨骼和内脏畸形检查的具体方法叙述如下：⑴胎仔外部检查：将处死（或深度麻醉）的试验动物剖腹暴露子宫，进行下列的检查和记录。
①确定怀孕情况、顺序编号依次鉴别检查活胎数，早期死胎数，晚期死胎数和吸收胎数。
②剪开子宫，按编号顺序，对胎仔逐一检查记录性别、体重、身长、尾长和全窝胎盘总量。
③对活胎仔由头部、躯干、四肢、尾部进行外观检查，各部位常见的畸形见表18-6。
(2)胎仔的骨骼检查：胎仔的骨骼检查是致畸试验一项重要观察内容，一般是将每窝胎仔的1/2或2/3数量留作此项检查。
其具体方法如下：①将留作骨骼检查的胎仔放入75%-90%的乙醉溶液中进行固定，时间2-5天。
②固定好的胎仔置于1%的氢氧化钾溶液中3-10天，直至肌肉透明可见骨骼为止。
在此期间依据情况可更换1%,氢氧化钾溶液数次，每次更换溶液时将胎仔脱落的皮肤洗去。
③经1％氢氧化钾溶液处理后的胎仔，用茜素红进行染色直至骨骼染成桃红色或紫色为止，一般需2-5天，必要时中间须更换新染色液数次。
茜素红染色液的配制：将茜素红加人下面混合液中至饱和为止。
冰醋酸 5m1纯甘油 10ml1％水合氯醛 60ml使用时取上述茜素红饱和溶液lml，加1%氢氧化钾溶液至1000ml混合配成使用液。
④经染色后的胎仔置于以下透明液中1-2天。
若透明不够满意时，可适当延长在透明液中的时间。
透明液I：甘油20分，2 %氢氧化钾溶液3分，蒸馏水77分。
透明液II：甘油50分，2%氢氧化钾溶液3分，蒸馏水47分。
透明液III：甘油75分，蒸馏水25分。
经上述处理的胎仔骨骼标本，可在肉眼或放大镜，解剖显微镜下观察检查。
注意检查各骨骼的状态，大小，数量有无异常及骨化程度。
(3)胎仔的内脏检查：经外观检查后的胎仔随机法将胎仔数1/2或1/3置于鲍音(Bouin）氏液中固定1-2周后，即可用徒手切片观察方法进行检查，其具体方法如下：头部器官的检查一通过以下切面来进行观察检查。
①戴橡皮手套取出固定好的胎仔标本，在自来水下洗去固定液，用单面刀徒手沿口经耳作一水平切面，这一切面将口腔上下愕分开，主要检查有无愕裂，舌缺或分叉。
②把上述切面切下的颅顶部，沿眼球前沿垂直作额状切面，这一切面着重检查鼻道有无畸形，如鼻道扩大、单鼻道等。
③沿着眼球正中垂直作第二额状切面，检查眼球有无畸形，如少眼，小眼，无眼。
检查有无脑积水，有无脑室扩大。
④沿眼球后缘垂直作第三个额切面，检查有无脑水肿积水，有无脑室扩大。
胸腔、腹腔和盆腔检查沿胸、腹壁中线和肋下缘水平线作“十”字切开胸腹，暴露胸腔、腹腔及盆腔内的器官，然后逐一检查各主要脏器的位置、数目、大小匀称性及形状等有无异常。
五、结果评定主要计算畸胎总数和畸形总数。
在计算畸胎总数时，每一活胎仔出现一种或一种以上畸形，均作为一个畸胎。
计算畸形总数时，在同一活胎仔出现一种畸形，作为一个畸形计算，如出现两种或两个畸形，即作为两个畸形计算，并依此类推。
计算畸胎总数和畸形总数的同时，必须考虑其有无剂量一效应关系，更重要的是按下列指标和对照组进行比较： 1．对各组母动物需统计如下指标⑴交配成功动物及交配率。
⑵死亡动物数及死亡率。
⑶剖检母动物的平均体重及孕期体重增长值或母体增重。
母体增重（g）＝处死时母体体重-妊娠第６日体重-处死时子宫连胎重⑷母体畸胎出现率，主要根据出现畸胎的母体在妊娠母体总数中所占的百分率。
计算出现畸形母体数时，同一母体不论出现多少畸形胎仔或多种畸形，一律按一个出现畸形胎仔的母体计算。
2．对各组胎仔需统计如下指标⑴平均活胎数及活胎率⑵吸收胎数和吸收胎率⑶死胎数和死胎率。
⑷外观畸形率、骨骼畸形率、内脏畸形率3．实验组及对照组的数据进行统计学分析不同指标用不同的显著性检验方法处理。
平均体重、平均黄体数、平均着床数、平均活胎数、平均活胎体重用t检验：妊娠率、交配率、受孕率、活胎率、用χ2检验；胎吸收率、死胎率、畸胎率用非参数统计。
可能时计算剂量一效应关系。
根据上述指标计算后，最后评定结果，确定此种受试物是否具有致畸作用，尚要注意下列间题：(1)致畸作用具有剂量和效应关系，所以，对任何畸形的出现是否具有剂量一效应关系应该充分考虑‘更重要的是必须经过统计学处理，肯定试验组出现致畸胎的母体显著高于对照组，并且试验组动物活胎仔出现的畸形率应显著高于对照组，才可考虑其致畸作用。
(2)每个实验室应掌握所用试验动物长期以来的自然畸形发生情况，包括自然出现的畸形类型和频率。
试验组动物出现的畸形，如长期以来在对照组动物未曾出现过，则对受试物致畸作用，更应认真对待；反之，则应慎重做出结论。
(3)生物体常有变异现象，变异是群体中个体间的差异。
特别是同一物种内一个体和另一些个体的差异。
变异为基因所控制，具有适应和进化的意义，和外来化合物干扰胚胎正常生长发育所引起的畸形完全不同，有人认为肋骨椎骨数目比正常多一个或少一个等现象皆属于变异，不能做为致畸。
但变异出现率一般较低，也不呈现剂量和效应关系，借此可将两者加以区别。
(4)致畸作用中存在种属差异，而且同种动物的品系间亦有差异。
因此，在一种动物出现致畸作用后，最好在另一种动物再进行试验或至少在同种动物再重复进行试验。
如结果一致，才可以认为对动物确有致畸作用。
⑸由于致畸作用存在种属差异，所以任何外来化合物对动物具有致畸作用，不一定对人类致畸。
一方面应进一步进行人群流行病学调查，以确定其在人体的致畸作用；另一方面应认识致畸作用是外来化合物的毒性表现的一种。
凡是对动物具有致畸作用的化合物，也应看作对人体致畸的可能，故应采取各种措施，使人类尽量减少和其接触，这一问题涉及动物致畸试验结果推论到人的问题。