小鼠海马剥离

地黄饮子调节海马神经突触可塑性作用机制研究李少创1，2，韩 诚1，2，张 正1，2，赵雅飞1，2，秦亚莉1，2，刘 昕1，2，贺文彬1，2，张俊龙1，2（1.山西中医药大学分子中医药学国家级国际联合研究中心，山西 太原 030024；2.山西中医药大学中医脑病学山西省重点实验室，山西 太原 030024）［摘要］ 目的：观察地黄饮子改善阿尔茨海默病（AD ）模型小鼠学习记忆能力及对海马突触可塑性的影响，探讨AD 治疗机制。

方法：选用50只6月龄SAMP8小鼠构建AD 动物模型，采用RANDBETWEEN 随机函数将其分为模型组、盐酸美金刚组及地黄饮子低、中、高剂量组各10只，选用同龄SAMR1小鼠10只作为正常组。

地黄饮子各剂量组及盐酸美金刚组按照给药剂量给予相应药物灌胃，正常组和模型组给予等体积纯水灌胃，连续给药12周。

新物体识别、Morris 水迷宫、巴恩斯迷宫法分别检测小鼠的学习记忆能力，在体海马场电位实验记录小鼠海马长时程增强（LTP ）效应，免疫组化实验检测突触后致密蛋白-95（PSD -95）、突触素（SYN ）蛋白水平的变化，蛋白质印迹法检测海马神经元NMDAR1、NMDAR2B 、Ca 2+在细胞内所结合钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）蛋白表达情况。

结果：与模型组比较，地黄饮子各剂量组小鼠新物体识别系数增加，差异有统计学意义（P ＜0.001）；在目标象限停留时间明显增加，差异均有统计学意义（P ＜0.05，P ＜0.01），且平台穿越次数增加，逃避潜伏期缩短；进入逃生箱所需时间减少，但差异无统计学意义（P ＞0.05），在逃生箱所在象限停留时间明显增加，差异有统计学意义（P ＜0.05）。

在体海马场电位记录实验表明，高频刺激前各组小鼠fEPSPs 斜率无明显差异，高频刺激后30 min 、60 min 地黄饮子各剂量组较模型组斜率增高，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。

抗阻运动对胰岛素抵抗小鼠海马内焦亡相关蛋白的影响姬瑞方１＋，卞学鹏１＋，刘蓓蓓２，胡静芸１，薛香莉１，娄淑杰１△（１．上海体育学院，上海２００４３８；２．潍坊医学院，山东潍坊２６１０４２）【摘要】　目的：探讨胰岛素抵抗小鼠海马内焦亡相关蛋白的变化，以及抗阻训练对海马内焦亡相关蛋白的调节作用。

方法：６周龄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄性小鼠随机分为对照组（Ｃ，ｎ＝１２）和高脂膳食组（ＨＦＤ，ｎ＝２６）分别进行普通膳食或高脂膳食喂养１２周。

随后根据葡萄糖耐量实验（ＧＴＴ）和胰岛素耐量实验（ＩＴＴ）的结果，将ＨＦＤ组分为胰岛素抵抗组（ＩＲ，ｎ＝１０）和抗阻运动组（ＲＴ，ｎ＝１０），维持高脂膳食喂养同时ＲＴ组小鼠进行抗阻训练。

１２周后，全部小鼠麻醉后处死，取脑并剥离出海马组织，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测焦亡相关蛋白的表达。

结果：与Ｃ组相比，ＩＲ组小鼠海马内ＮＦ κＢ、ＮＬＲＰ３炎症小体、下游焦亡相关蛋白ＧＳＤＭＤ Ｎ和ＧＳＤＭＤ以及炎症因子ＩＬ １β和ＩＬ １８的蛋白表达量显著性上升（Ｐ＜０．０５），ＳＩＲＴ１蛋白表达量以及ｐ ＡＭＰＫ蛋白水平显著性下降（Ｐ＜０．０５）；与ＩＲ组相比，ＲＴ组小鼠海马内ＮＦ κＢ、ＮＬＲＰ３炎症小体、下游焦亡相关蛋白ＧＳＤＭＤ Ｎ和ＧＳＤＭＤ以及炎症因子ＩＬ １β和ＩＬ １８的蛋白表达量显著性下降（Ｐ＜０．０５），ＳＩＲＴ１蛋白表达量以及ｐ ＡＭＰＫ蛋白水平显著性上升（Ｐ＜０．０１）。

结论：胰岛素抵抗小鼠海马内ＮＬＲＰ３炎症小体被激活，介导海马内发生细胞焦亡；经过１２周的抗阻运动可有效抑制ＮＬＲＰ３炎症小体激活，改善海马内细胞焦亡和炎症状态。

【关键词】　抗阻运动；胰岛素抵抗；海马；ＮＬＲＰ３炎症小体；焦亡；小鼠【中图分类号】Ｇ８０４．２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０２０）０５ ４５６ ００６【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５９６９．２０２０．０９７Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｉｃｅＪＩＲｕｉ ｆａｎｇ１＋，ＢＩＡＮＸｕｅ ｐｅｎｇ１＋，ＬＩＵＢｅｉ ｂｅｉ２，ＨＵＪｉｎｇ ｙｕｎ１，ＸＵＥＸｉａｎｇ ｌｉ１，ＬＯＵＳｈｕ ｊｉｅ１△（１．ＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｐｏｒｔ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３８；２．ＷｅｉｆａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｆａｎｇ２６１０４２，Ｃｈｉｎａ）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｉｃｅａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇｏｎｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｉｘ ｗｅｅｋ ｏｌｄｍａｌｅＣ５７ＢＬ／６Ｊｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｃ，ｎ＝１２）ａｎｄｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔｇｒｏｕｐ（ＨＦＤ，ｎ＝２６）ｆｏｒｎｏｒｍａｌｏｒｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔｆｏｒ１２ｗｅｅｋｓ．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ａｃｃｏｒｄ ｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔ（ＧＴＴ）ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅｔｅｓｔ（ＩＴＴ），ｔｈｅｒａｔｓｆｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｉｎ ｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｒｏｕｐ（ＩＲ，ｎ＝１０）ａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｘｅｒｃｉｓｅｇｒｏｕｐ（ＲＴ，ｎ＝１０）ａｓｗｅｌｌａｓｔｏｍａｉｎｔａｉｎｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｍｉｃｅｉｎｔｈｅＲＴｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇ．Ａｆｔｅｒ１２ｗｅｅｋｓ，ａｌｌｍｉｃｅｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄａｆｔｅｒａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ｂｒａｉｎｗａｓｒｅ ｍｏｖｅｄａｎｄｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｗａｓｅｘｆｏｌｉａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＣｇｒｏｕｐ，ＮＦ κＢ，ｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｔｈｅｉｒｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓＧＳＤＭＤ ＮａｎｄＧＳＤＭＤａｓｗｅｌｌａｓｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓＩＬ １βａｎｄＩＬ １８ｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆＩＲｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＳＩＲＴ１ａｎｄｐ ＡＭＰＫｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＩＲｇｒｏｕｐ，ＮＦ κＢ，ｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｔｈｅｉｒｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓＧＳＤＭＤ ＮａｎｄＧＳＤＭＤａｓｗｅｌｌａｓｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓＩＬ １βａｎｄＩＬ １８ｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆＲＴｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＳＩＲＴ１ａｎｄｐ ＡＭＰＫｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｉｃｅｉｓａｃ ｔｉｖａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈｍｅｄｉａｔｅｓｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．ＴｗｅｌｖｅｗｅｅｋｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＬ ＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｒａｉｎｉｎｇ；　ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ；　ＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ；　ｍｉｃｅ 【基金项目】国家自然科学基金资助项目（８１５７２２４１）；上海市人类运动能力开发与保障重点实验室（上海体育学院）资助项目（１１ＤＺ２２６１１００）【收稿日期】２０１９ １１ ０８【修回日期】２０２０ ０５ １９　△【通讯作者】Ｔｅｌ：（０２１）５１２５３２４３；Ｅ ｍａｉｌ：ｓｈｕｊｉｅｌｏｕ３１９＠１６３．ｃｏｍ．＋：为共同第一作者 高脂膳食可诱发多种代谢紊乱，例如肥胖、高血压、胰岛素抵抗、２型糖尿病和胰岛素抵抗［１］，其中胰岛素抵抗（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＩＲ）是指脂肪细胞、神经元、骨骼肌等靶细胞对正常循环水平的胰岛素反应降低［２］，使胰岛素信号传导发生障碍，继而诱发氧化应激、氮化应激和内质网应激等多种细胞应激。

小鼠大脑皮层和海马神经元的分离与培养一、玻片的准备A．玻片的清洗1. 第一天，将玻片(12mm，633009，Carolina) 逐片置于装有浓硝酸(HNO3) 或者洗液的平皿中，混匀，然后浸泡过夜。

2. 第二天，将玻片放在有单蒸水的陶瓷盘中，搁在摇床上晃动，速度为200rpm，将玻片上的硝酸残液清洗干净。

每10min换水一次，要换20次以上。

晚上置于双蒸水中浸泡过夜。

3. 第三天，换双蒸水，重洗两次，每次速度为200rpm ，时间为60min，去除玻片上的离子和其它杂质，最后再换用无水乙醇，清洗三次以上。

洗完后置于小烧杯中，拿到细胞房超净台将玻片浸泡在无水乙醇中室温保存。

4. 解剖小鼠取细胞前两天将玻片从无水乙醇中取出，在酒精灯焰上烘干，稍微在空气中停一下，再放到灭菌的parafilm膜上。

玻片高温易碎，速度要快。

完成后在紫外下照射1h。

B. 玻片的包被（PDL包被）用0.1M的硼酸钠溶液将PDL配成0.01mg/ml PDL的溶液(pH 8.4)。

1.准备500ml 0.1M的硼酸钠（Na2B4O7·10H2O, B3545-500G，Sigma）溶液。

2.在超净台中，往一整瓶Poly-D-Lysine（PDL，5mg/ml，Sigma, P6407-5MG）中加入25ml的该硼酸钠溶液。

盖上瓶盖，溶解5min，可以轻轻晃动。

然后将该溶液加到剩下的硼酸钠溶液中。

即为所配溶液，0.22μm过滤，用锡纸包好，4℃避光保存。

3.使用的时候，6/12/24孔板每孔加1ml/500μl/250ul的PDL溶液，12mm盖玻片每片加50μl的PDL溶液，放在超净台中，室温包被4hrs或者过夜。

4.第二天，紫外照射超净台1-2hrs，再将PDL吸干。

将板和玻片盖揭开，室温晾过夜。

5.第三天，将每个孔/玻片用灭菌水洗两遍，吸干，盖上盖，避光待用。

二. 大脑皮层与海马的解剖A. 解剖前的准备1.解剖器械的灭菌解剖前将器械放在铝饭盒中，倒入75%乙醇，并在超净台中放入适量卷纸，打开紫外杀菌1-2hrs。

解郁安神颗粒对卒中后抑郁小鼠模型的抗抑郁作用邹龑;杜源;傅风华【摘要】目的探讨解郁安神颗粒(JY)对卒中后抑郁(PSD)小鼠模型的抗抑郁作用.方法将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、艾司西酞普兰组(5 mg?kg-1)及JY小、中、大剂量组(JY 0.75,1.50,3.00 g?kg-1),每组12只.采用双侧颈总动脉线栓再灌注制备脑缺血小鼠模型,给予慢性不可预知性温和刺激制备PSD小鼠模型.艾司西酞普兰及JY灌胃给药,每天1次,连续给药28 d.通过悬尾实验及强迫游泳实验评价JY对PSD小鼠抑郁行为的影响.采用高效液相色谱法检测PSD小鼠海马去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)水平.采用Western blotting检测PSD小鼠海马5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)表达.结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠悬尾及游泳不动时间明显增加(P<0.05);与模型对照组比较,JY小、中、大剂量组小鼠悬尾及游泳不动时间明显减少(P<0.05或P<0.01).与正常对照组比较,模型对照组小鼠海马NE、DA及5-HT水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),海马5-HT1A R表达明显降低(P<0.05).与模型对照组比较,JY小、中剂量组小鼠海马NE、DA及5-HT水平明显升高(P<0.05或P<0.01),海马5-HT1A R表达明显升高(P<0.05).结论 JY对PSD小鼠模型具有抗抑郁作用,其作用机制可能与提高海马NE、DA及5-HT水平,以及上调海马5-HT1A R表达有关.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2019(038)001【总页数】5页(P22-26)【关键词】解郁安神颗粒;抑郁,卒中后;神经递质【作者】邹龑;杜源;傅风华【作者单位】山东中医药大学药学院,济南 250014;烟台大学药学院,烟台 264005;山东中医药大学药学院,济南 250014;烟台大学药学院,烟台 264005【正文语种】中文【中图分类】R964;R741.05卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是最常见的脑血管疾病并发症，是卒中后出现的以思维缓慢、情感低落、语言动作迟滞为主要表现的情感障碍性疾病[1]，其卒中后发病率29%～70%[2]。

小鼠原代神经元提取
1. 背景介绍
小鼠是神经科学研究中常用的实验动物，尤其是小鼠原代神经元是研究神经细胞生长、形态及功能的理想模型。

提取小鼠原代神经元是展开这类研究的重要步骤。

2. 提取方法
2.1 原代神经元分离
将小鼠脑的皮层或海马区取出，用酶消化等方法分离出原代神经元。

其中，较为常用的来源是阿霉素（Ara-C）处理后，剥离出菜花状星形胶质细胞后得到神经元。

2.2 细胞贴附
将原代神经元移植到附着于玻璃片或培养皿的细胞培养基中，使其附着并生长。

2.3 细胞培养
在培养基中加入营养物质，如神经生长因子、谷氨酸等，加速神经元的生长，并使组成更加丰富多彩。

2.4 细胞鉴定
通过标记染色、光镜观察等手段，检测培养出来的细胞是否为神经元。

3. 应用领域
小鼠原代神经元的提取及培养成为研究神经科学和神经元特性的
重要手段。

研究重点主要包括神经元的细胞膜特性、各种信号转导途径、神经元与神经胶质细胞之间的相互作用及神经元发育等问题。

此外，还可运用于药理学研究、癫痫及脑防护药物的开发研究等。

4. 注意事项
提取方法中，对原代神经元的提取、分离及培养有许多细节问题，包括材料选择、酶消化时间调节、培养基添加条件等。

在实验过程中，需要注意操作规范化、洁净化，并遵守实验室安全规范。

原代海马及皮质神经元培养方法海马和皮质神经元是神经系统的重要组成部分，在研究神经生物学和药物疗效等方面具有重要价值。

为了研究这些神经元的生理特性和功能，我们常常需要从动物体内分离和培养这些神经元。

以下是针对原代海马和皮质神经元的培养方法。

1.实验动物准备：首先，需要准备实验所需的动物。

一般情况下，小鼠是最常用的实验动物。

在实验进行前，需要确保动物符合实验伦理和动物保护要求，并获得相应的实验动物使用许可。

2.动物脑组织的获取：在实验动物处死后，需要尽快取出脑组织。

使用无菌技术将大脑取出，并将其放入生理盐水或培养基中。

3.脑组织的分离和消化：将脑组织放入含有0.02％的溴酚红的磷酸缓冲生理盐水中，用无菌剪刀和镊子将其剪碎成小块。

然后，将组织块放入含有0.25％胰酶的溶液中，在37℃的恒温培养箱中消化2至5分钟。

然后，将溶液过滤并离心，以去除细胞碎片和大块组织。

4.细胞的分离和培养：将离心沉淀涂布在含有25％培养基和10％胎牛血清的培养皿中，然后放入37℃的恒温培养箱中。

培养基的成分可以根据具体需要进行调整。

细胞会附着在培养皿上，并开始生长和繁殖。

在细胞培养过程中，需要定期更换培养基，以提供细胞所需的营养物质。

5.细胞的处理和分选：在培养4至7天后，细胞会形成较为密集的神经元网络。

在这个时候，可以通过处理和分选细胞来提高神经元的纯度。

例如，使用抗体标记法可以针对神经元选择性地杀死胶质细胞。

此外，还可以使用细胞遗传方法，如转染特定基因或使用荧光探针标记细胞。

6.测试和分析：经过特定时间的培养后，可以对原代海马和皮质神经元进行测试和分析。

这些测试和分析可以包括细胞生存率、纯度、形态特征、电生理活性、细胞内信号和细胞功能等方面的内容。

这些测试和分析的方法可以通过显微镜观察、电生理仪器、蛋白质和基因分析等手段进行。

7.特殊处理：有时对于特定的研究需要，还可以对原代海马和皮质神经元进行特殊处理。

例如，可以通过给予特定药物、激素或其他刺激条件，来模拟不同的疾病模型或研究特定功能。

海马神经细胞特异性DRD2基因条件性敲除小鼠模型的建立与鉴定段朝霞;陈魁君;张东冬;张洁元;王建民【摘要】目的拟构建DRD2基因大脑海马组织特异性敲除小鼠模型,旨在进一步深入研究DRD2的生物学功能.方法运用逆转录病毒基因标记技术,结合Cre-loxP重组酶系统,设计和构建打靶载体,然后将打靶载体电转至小鼠胚胎细胞,用PCR和Southern blot验证ES克隆的正确性,最后将筛选出的ES显微注射到胚囊内,经过PCR鉴定得到Neo delete杂合子小鼠(flox/+).将Neo delete杂合子小鼠(flox/+)自交获得Neo delete纯合子小鼠(flox/flox)小鼠,经PCR筛选出的在DRD2flox/flox纯合子小鼠与海马组织特异性表达Cre基因的CaMKⅡα-Cre工具鼠杂交,获得了DRD2 flox/flox的特异性组织条件性敲除小鼠,并用定量PCR和Western blot法对其进行鉴定.利用PCR和Western blot方法检测成年DRD2条件性敲除小鼠大脑不同部位(前额、海马)的DRD2表达情况.结果经过多层筛选、鉴定,最后得到DRD2 flox/flox的特异性组织条件性敲除小鼠.所制备的DRD2条件性敲除小鼠基因缺失主要发生在海马组织中,前额组织中表达水平变化不大.DRD2表达水平在不同小鼠的海马组织中降低.DRD2海马组织特异性敲除小鼠在交配饲养过程中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象,也未发现其他器官组织结构的异常改变.结论成功建立大脑海马神经细胞特异性DRD2基因敲除模型,为进一步深入研究DRD2的生物学功能,尤其是DRD2在精神类疾病的发生、发展中的作用机制提供了研究基础.【期刊名称】《解放军医药杂志》【年(卷),期】2019(031)004【总页数】5页(P1-5)【关键词】DRD2;小鼠,基因敲除;精神病【作者】段朝霞;陈魁君;张东冬;张洁元;王建民【作者单位】400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室;400042 重庆,陆军军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室【正文语种】中文【中图分类】R-332;R74多巴胺是机体内非常重要的一类神经递质，在调节认知、记忆、运动及情绪等多种功能中起至关重要的作用，多巴胺信号通路及其相关分子的基因改变与多种精神异常的易感性相关[1-8]。

小鼠海马组织提取过程
小鼠海马组织提取过程
海马是大脑皮层中与记忆处理相关的区域，小鼠海马组织提取过程是神经科学研究中重要的一步。

下面将介绍小鼠海马组织提取的步骤和注意事项。

步骤一：准备实验材料
需要准备组织切片刀、显微镜、培养培养皿、离心机等实验材料；还需要购买磷酸盐缓冲液(PBS)、胶原酶等药品。

步骤二：准备小鼠海马
在实验前将小鼠捕捉并消毒，随后在其头部进行开颅手术，取出大脑组织样本，分离出小鼠海马组织。

步骤三：组织分离
将小鼠海马组织切成小块，用胶原酶等酶类溶液进行处理，避免组织死亡和堆积。

处理后的组织可以通过显微镜进行查看，并且在操作中应让操作规范化和标准化，以避免人为干扰。

步骤四：离心处理
将处理后的小鼠海马组织进行离心处理，取出其上清液，用PBS溶液进行洗涤，防止污染物质残留。

步骤五：离心沉淀
将洗涤后的小鼠海马组织进行离心沉淀，分离出其中的细胞块，获得目标提取物质。

注意事项：
1. 在处理小鼠海马组织的过程中，应防止组织的氧化和干燥，避免影响实验结果。

2. 在组织分离的过程中，应选择合适的酶类溶液，并进行恰当的组织处理处理。

3. 在离心沉淀的时候，顶部要避免和底部过于接近，避免损坏组织和提取物。

小鼠海马组织的提取对于神经科学研究具有重要的作用，在实验中应遵守实验规范，保护动物权益，准确完成实验操作。