６７６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０２０,V o l．４１,N o．２１ 论㊀㊀著智能识别鉴定M蛋白分型王仁浩１,谢㊀婧２,管仲斌１,谢松业１ә(１．上海兰卫医学检验所股份有限公司医学检验科,上海２００３３５;２．澳大利亚阿德莱德大学,澳大利亚南澳大利亚州阿德莱德５００５)㊀㊀摘㊀要:目的㊀计算机能做到与医学检验专家一样,智能快速准确地识别M蛋白的成分并鉴定出是哪一类型的M蛋白病.方法㊀采集免疫固定电泳后的样本图片,经电脑扫描后转换形成一维数据,为了便于智能化鉴定M蛋白成分,先在其中血清蛋白电泳中找到M蛋白带,再根据其他５个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.为了便于参数传递,将电泳峰值数据标准化纠正,以免不同因素引起偏差干扰.结果㊀如果待测患者的峰值(除清蛋白)比相应正常质控品峰值大,且峰高与峰宽之比大于４ʒ１即找到M蛋白带,根据是否有M蛋白带和健康人的免疫固定电泳６组的一维数据的峰高与峰宽的阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即患有M蛋白血症.结论㊀采用计算机编程可对免疫固定电泳图谱中血清蛋白电泳及各组分实现自动识别㊁分类㊁综合分析,给出正确鉴别结果,与传统方法比较无差异,可为临床医生鉴別诊断提供科学依据.关键词:智能;㊀M蛋白分型;㊀免疫固定电泳D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０２０．２１．０２７中图法分类号:R７３３．３;R７３０．４５文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０２０)２１Ｇ２６７６Ｇ０５文献标识码:AI n t e l l i g e n t r e c o g n i t i o na n d i d e n t i f i c a t i o no fM p r o t e i n t y p i n gWA N GR e n h a o１,X I EJ i n g２,G U A N Z h o n g b i n１,X I ES o n g y e１ә(１．D e p a r t m e n t o f M e d i c a lL a b o r a t o r y,S h a n g h a iL a b w a y C l i n i c a lL a b o r a t o r y C o．,L t d．,S h a n g h a i２００３３５,C h i n a;２．U n i v e r s i t y o f A d e l a i d e,A d e l a i d e,S o u t hA u s t r a l i a５００５,A u s t r a l i a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀A s t h e s a m ew i t hm e d i c a l l a b o r a t o r y e x p e r t s,c o m p u t e r s c a n a l s o r e c o g n i z e t h e c o m p o n e n t s o fM p r o t e i n q u i c k l y a n d a c c u r a t e l y,a n d i d e n t i f y w h i c h t y p e o fM p r o t e i nh a d c a u s e dd i s e a s e．M e t h o d s㊀T h e s a m p l e p i c t u r e s o f i mm u n o f i x a t i o ne l e c t r o p h o r e s i sw e r e s c a n n e d a n d t r a n s f o r m e d i n t oo n eＧd i m e n s i o n a l d a t a．I no r d e r t o f a c i l i t a t e t h e i n t e l l i g e n t i d e n t i f i c a t i o no fM p r o t e i n c o m p o n e n t s,t h e b a n do fM p r o t e i n i n t h e s e r u m p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i sw a s f o u n do u t f i r s t,a n d t h e n c o m p r e h e n s i v em a t c h i n gp r o c e s s i n g b a s e d o n t h e i m a g e i n f o r m aＧt i o no f t h e５d i f f e r e n tc o m p o n e n t s f r o mt h e M p r o t e i n w a s p e r f o r m e d．I no r d e rt of a c i l i t a t et h e p a r a m e t e r t r a n s f e r,t h e e l e c t r o p h o r e t i c p e a kd a t aw e r es t a n d a r d i z e da n dc o r r e c t e dt oa v o i dt h e i n t e r f e r e n c eo fd i f f e r e n t f a c t o r s．R e s u l t s㊀I f t h e p e a k(e x c e p t a l b u m i n)o f t h e p a t i e n t u n d e r t e s tw a s l a r g e r t h a n t h e p e a ko f t h e c o r r eＧs p o n d i n g n o r m a l q u a l i t y c o n t r o l,a n d t h e r a t i oo f t h e p e a kh e i g h t t o t h e p e a kw i d t hw a s g r e a t e r t h a n４ʒ１,i t w a s i n d i c a t e t h a t t h eM p r o t e i nb a n dw a s f o u n d o u t．A c c o r d i n g t o t h e t h r e s h o l d r a n g e o f p e a kh e i g h t a n d p e a k w i d t ho f６g r o u p s o f o n eＧd i m e n s i o n a l d a t a o fM p r o t e i n a n d i mm u n o f i x a t i o n e l e c t r o p h o r e s i s o f h e a l t h y p e o p l e, i t c o u l d b e j u d g e dw h e t h e r t h e p e a k c h a r a c t e r i s t i c s o f a c o m p o n e n t i n s e r u mi mm u n o f i x a t i o n e l e c t r o p h o r e s i s o f p a t i e n t sw e r em e a n i n g f u l,t h a t i f t h e y h a dM p r o t e i n．C o n c l u s i o n㊀T h e c o r r e c t i d e n t i f i c a t i o n r e s u l t s c a n b e p r oＧv i d e db y c o m p u t e r p r o g r a mm i n g t h r o u g ha u t o m a t i c a l l y i d e n t i f y i n g,c l a s s i f y i n g a n d c o m p r e h e n s i v e l y a n a l y z i n g t h e s e r u m p r o t e i n e l e c t r o p h o r e s i sm a p s．T h e r e i s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e c o m p a r e dw i t h t h e t r a d i t i o n a lm e t hＧo d．T h eb a s e f o r c l i n i c a l d i f f e r e n t i a l d i a g n o s i s c a na l s ob e p r o v i d e db y t h i sm e t h o d．K e y w o r d s:i n t e l l i g e n t;㊀M p r o t e i n;㊀t y p i n g;㊀i mm u n o f i x a t i o ne l e c t r o p h o r e s i s㊀㊀M蛋白分型种类多,诊断方法除流式细胞外[１Ｇ２],血清蛋白电泳及免疫学方法已成为确诊M蛋白血症作者简介:王仁浩,男,主管技师,主要从事临床免疫和生化方法学研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:１３６７１６９２７３９＠１３９．c o m.本文引用格式:王仁浩,谢婧,管仲斌,等．智能识别鉴定M蛋白分型[J]．国际检验医学杂志,２０２０,４１(２１):２６７６Ｇ２６７９．的重要手段[３Ｇ４],其中血清免疫固定电泳对多发性骨髓癌(MM)患者血清中的单克隆免疫球蛋白(I g)进行分型鉴定具有高特异性和高灵敏性[５].虽然免疫固定电泳图谱简单,但在目前临床医学检验中对M蛋白的分型㊁判断㊁识别均是通过人工肉眼观察,易产生主观判断误差及漏判.本文釆用计算机智能鉴定免疫固定电泳M蛋白成分主要的思考方法是先找到M 蛋白带,再根据其他５个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.根据健康人的免疫固定电泳６组的一维数据的峰高与峰宽的阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即患有M 蛋白血症.最后,鉴别出不同类型的M蛋白,并给出结果.这样大大提高了M蛋白血症的筛查效率,减少了人为误差,为临床诊治和预后提供了科学依据.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀标本采集:１５例免疫固定电泳(书)示范图片[６],３５例M蛋白血症标本中包括２０例不同类型M蛋白血症患者和１５例健康人.标本由上海交通大学附属第一人民医院实验室提供.１．２㊀仪器与试剂㊀(１)试剂:美国H e l e n a公司提供,试剂批号:３４１５和３４１６和３４１７;(２)仪器设备:全自动快速电泳分析仪由美国H e l e n a公司提供,为S P I F E３０００型或S P I F E４０００型;(３)参数设置和操作步骤:详见R E P电泳仪操作规程;(４)扫描仪:C a n o n K EW３６８２３.１．３㊀方法１．３．１㊀免疫固定电泳测定㊀方法学原理:免疫固定电泳将血清或其他标本在琼脂(醋酸纤维素)平板上做区带电泳,然后在其上加入已知相应单价抗血清,当抗体与其区带中的单克隆I g结合后,便形成抗原抗体复合物沉淀(固定)下来.通过漂洗和染色,呈现浓而狭窄的着色区带,即可判断单克隆I g的轻链和重链类型.一般免疫固定电泳鉴定M蛋白成分主要由６个组分组成:(１)蛋白电泳;(２)I g G;(３)I g A;(４) I g M;(５)免疫球蛋白κ链;(６)免疫球蛋白λ链.第１组分为总的血清蛋白成分,第２~４组分为 重链 (其实免疫球蛋白是由２条重链和２条轻链组成),第５~６组分为轻链,共由６个组分的电泳带组成.健康人免疫固定电泳中的蛋白电泳只出现清蛋白等５种蛋白成分,不出现M蛋白成分区带,且I g G㊁I g A㊁I g M 及κ链和λ链电泳带颜色较浅,扫描后一般峰宽大于峰高.采用不同的颜色把３幅峰形电泳图合并为一张电泳图,便于直观显示给医生,为诊断疾病提供合理的依据.１．３．２㊀设计思路㊀首先,把６幅图像经过扫描转换成数据信息.其次,将二维数据转换成一维数据,为了便于智能化鉴定M蛋白成分,采用不同的颜色把６幅电泳图数据信息绘制成一张电泳图,先在其中血清蛋白电泳中找到M蛋白带,再根据其他５个不同组分的图像信息进行综合匹配处理.为了便于参数传递,根据健康人的免疫固定电泳６组的一维数据的峰高与峰宽阈值范围来判断患者血清免疫固定电泳某组分峰值特征是否有意义,即是否患有M蛋白血症.最后鉴别出不同类型的M蛋白,并给出结果.免疫固定电泳智能化鉴定M蛋白成分的电泳流程见图１.智能化鉴定免疫固定电泳M蛋白成分电泳特点,(１)正常:若蛋白电泳没有找到M蛋白带,而且重链和轻链峰值特征全部无意义输出正常;(２)正常?建议复做:仅仅蛋白电泳峰值有意义其余峰值无意义输出 正常?建议复做 ;(３)游离κ㊁λ型轻链病:若蛋白电泳出现M蛋白,重链峰值特征无意义且κ和λ型轻链同时有特征性意义时输出游离κ㊁λ型轻链病;(４)游离κ型合并κ型I g A单克隆免疫球蛋白病:当κ或λ有２个有意义峰值a和b时,若I g A有一个有意义的峰值c,a与c横坐标相同,b与c坐标不同,则输出游离κ型合并κ型I g A单克隆免疫球蛋白病;(５)游离κ型轻链病:若κ或λ有特征意义峰值,并且重链峰值全部无特征意义,则输出 游离κ型轻链病 ;(６)κ型I g A单克隆免疫球蛋白病:若蛋白电泳出现M蛋白带,κ或λ峰值有价值,同时存在有价值的I g A或I g M 或I g G,并且前一组峰值横坐标与后一组峰值横坐标相符,则输出κ型I g A单克隆免疫球蛋白病;(７)κ型I g A单克隆免疫球蛋白病(?):若蛋白电泳出现M蛋白带,κ或λ有价值峰值,同时存在有价值的I g A或I g M或I g G,但前一组峰值横坐标与后一组峰值横坐标不相符,则输出κ型I g A单克隆免疫球蛋白病(?); (８)多克隆病:κ或λ有价值,同时I g A或I g M或I g G 为有价值宽峰(波高＞１００同时波宽＞波高),其中峰值 有意义 指峰高大于峰宽４ʒ１.重链指I g G㊁I g A㊁I g M,轻链指κ型㊁λ型.１．３．３㊀实验过程㊀(１)利用按键精灵电脑软件把５０幅免疫固定电泳图片按图中不同深浅的蓝色条带转化为数据信息,再将二维数据转化为一维数据.根据M蛋白与蛋白电泳对应的位置㊁区带深浅㊁宽窄的不同即峰值数据的位置和大小及左右峰谷的长度,确立峰高度与峰宽度的比例范围,血清M蛋白在蛋白电泳中可在α２至γ区形成浓度高的区带,扫描图中可见基底较窄,高而尖锐的峰,在γ区蛋白峰高大于峰宽,在β区和α２区也是如此,以此参数来判断M蛋白的真伪,大大减少了肉眼判断的误差,见图２.７７６２国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０２０,V o l．４１,N o．２１１．４㊀统计学处理㊀采用S P S S １９．０统计软件进行数据分析处理.智能和传统两种方法鉴定M 蛋白成分的差异采用χ２检验进行比较,以P ＜０．０５为差异有统计学意义.图１㊀㊀智能化鉴定M蛋白带流程图㊀㊀注:基线与I gM 重合.图２㊀㊀免疫固定电泳λ型I gG 单克隆免疫球蛋白病２㊀结㊀㊀果２．１㊀把图片生成的数据用自编软件的程序转化为直观的一个峰值图谱,储存在E x c e l 文档中.２．２㊀按免疫固定电泳的区带位置染色的深浅和峰高与峰宽的比例关系,采用计算机语言编程,智能化鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分,最后鉴别出不同类型的M 蛋白,并做出结果.２．２．１㊀采用免疫固定电泳法用S P I F E ３０００或４０００型全自动电泳仪获得血清标本的６张凝胶电泳图.２．２．２㊀扫描６张电泳图片,输入计算机.２．２．３㊀用按键精灵软件,将６张电泳图片扫描转换成一维数据储存在E x c e l 文档里.２．２．４㊀用自编软件打开步骤C 获得的E x c e l 文档数据,软件可以从中获得免疫固定电泳中蛋白电泳(D Y )㊁I g G ㊁I g A ㊁I gM ㊁κ型㊁λ型数据.获得各条线的参数,包括:峰值坐标㊁左波谷坐标㊁右波谷坐标㊁波宽是否大于波高峰值㊁各线峰值;然后根据患者蛋白电泳中ɑ至λ区域的峰值与标准峰值(健康人)同区域的数据比较大小.如果患者输出的峰值比标准峰值大,则这条线的峰还要进一步判断是否有价值,也就是根据左波谷坐标至右波谷坐标的峰宽是否大于峰高,如果峰高大于峰宽,判断为有价值(含M 蛋白带),然后进一步按流程鉴定为哪一类型的M 蛋白.２．２．５㊀输出鉴别结果㊀根据判断M 蛋白带的理论依据寻找属于哪一类单克隆免疫球蛋白病,并打印报告,包括κ和λ链的比值.κ和λ链的比值在采用传统免疫固定电泳方法肉眼判断时是无法辨别的,因为肉眼不能判断颜色的深浅确切值,而软件采取的是按键精灵的捕色软件,它可以测出κ和λ链的颜色深浅具体值,然而κ和λ链的比值在诊断多发性骨髓瘤是很有价值的.这个结果和免疫散射比浊法测定κ和λ链的比值具有良好相关性(n ＝３８,r ＝０．８８９),经统计κ和λ链比值,健康人参考值为１．１６ʃ０．２(n ＝３２),所有M 蛋白血症患者中κ型患者κ和λ的比值明显大于１．３６,而λ型患者κ和λ的比值明显小于０．９６,这个软件可以同时测定κ和λ链,减少了患者再次测定κ和λ链所带来的麻烦.本文提供一种利用鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分的系统,该系统包括以下设备:A 步骤的设备为S P I F E ３０００或４０００型全自动电泳仪,获得血清标本的６张凝胶电泳图;B 步骤的设备为扫描仪:C a n o n K E W ３６８２３,扫描６张电泳图片,输入计算机;C 步骤的设备为计算机用按键精灵软件,将６张电泳图片扫描转换成一维数据储存在E x c e l 文档中;D 步骤的设备为自编软件安装计算机,它可以直接打开步骤C 获得的E x c e l 文档数据,然后进一步按流程鉴定为哪一种类型的M 蛋白并输出鉴别结果及图像.见图３~５.图３㊀㊀κ型I gM 单克隆免疫球蛋白病２．３㊀实验的临床应用㊀由作者和临床免疫专家[６]选８７６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r ２０２０,V o l ．４１,N o ．２１出５０幅免疫固定电泳图像包含血清蛋白电泳图像.选择原则是既满足于常规检查的M 蛋白类型,又包括很少见的类型和书图谱上的特例图像,经扫描成图片后,用按键精灵电脑软件把图片转化为数据.采用计算机编程智能化鉴定免疫固定电泳M 蛋白成分,通过对５０幅免疫固定电泳图像和血清蛋白电泳图像的数据分析,评价自动扫描㊁鉴定的整体性能.图４㊀㊀游离λ型单克隆免疫球蛋白病图５㊀㊀κ、λ型I gG 单克隆免疫球蛋白病２．３．１㊀实验结果分析㊀采用联想电脑M ７１５０,C P U ２５６M 内存,完成资料标本５０幅扫描㊁分析及鉴定,M 蛋白区带３５,正确识别３３(９４．３％),其中M 蛋白I g G 区带κ型１０,正确识别１０(１００％),λ型５,正确识别５(１００％),κ㊁λ混合型２,正确识别２(１００％);M 蛋白I gA 区带κ型３,正确识别３(１００％),λ型＋游离λ型１,正确识别１(１００％);M 蛋白I gM 区带κ型３,正确识别３(１００％),λ型１,正确识别１(１００％),κ㊁λ混合型１,正确识别１(１００％),混合型λ型I g M ＋κ型I g G１,正确识别１(１００％),游离κ区带１,正确识别１(１００％),游离λ区带７,正确识别７(１００％).正常人区带１５,正确识别１５(１００％).２．３．２㊀性能验证㊀智能和传统两种方法鉴定M 蛋白成分差异无统计学意义(P ＞０．０５).智能化鉴定M 蛋白成分方法的正确度为９６．０％,灵敏度为９４．３％,特异度为１００．０％,假阴性率(漏诊率)为４．０％,假阳性率(误诊率)为０．０％,阴性似然比为６,K a p p a 值为０．９０８,阳性预测值为１００．０％,阴性预测值为８８．０％.３㊀讨㊀㊀论㊀㊀M 蛋白血症是一种浆细胞异常增生的恶性肿瘤,浸润骨髓和软组织产生M 球蛋白及多肽,引起骨骼破坏㊁肾脏病变和贫血,但该病起病缓慢,无症状期长短不定,短至几个月长达十余年,由于症状多样化及个体差异,出现的临床表现繁多和复杂,初发病常常不被发现而多被误诊.亚州人MM 发病率为０．５/１０００００~１．０/１０００００[７],７０岁以上的老年人发生率为３％,通过骨髓涂片㊁组织活检㊁X 线片来诊断外,其他血清蛋白电泳及免疫学方法已成为确诊MM 的重要手段,其中血清免疫固定电泳是对MM 患者血清中的单克隆免疫球蛋白进行分型鉴定,具有高特异度和高灵敏度,也可以识别M 蛋白双克隆[８].目前缺乏标准化鉴别分型方法,临床医学检验中对M 蛋白的分型㊁判断㊁识别都是人工肉眼观察,易产生主观判断误差及漏判.应用计算机模式识别技术,能做到与医学检验专家一样,智能快速㊁准确地识别细胞[９]和D N A 凝胶电泳分子量测量[１０],但未见智能鉴定M 蛋白的成分.本系统应用电脑扫描模式识别技术,采用可对血清蛋白电泳和免疫固定电泳图谱实现自动识别㊁分类㊁综合分析给出正确鉴别结果,该方法可以同时计算出κ和λ链,因为肉眼不能判断颜色的确切深浅值,然而κ和λ链的比值诊断MM 是很有价值的[１１Ｇ１２].这个软件可以同时测定κ和λ链比值,减少了患者再次测定κ和λ链所带来的麻烦.通过对５０幅免疫固定电泳图像的数据分析,虽然合并游离轻链判断有漏检,但评价自动扫描整体性能的鉴定及临床应用准确度达９６％,K a p p a 值达０．９０８,与传统方法比较差异无统计学意义(P ＞０．０５).４㊀结㊀㊀论㊀㊀计算机能做到与医学检验专家一样,智能快速㊁准确地识别M 蛋白的成分,并鉴定出是哪一种类型的M 蛋白病,提高了检查效率,减少了人为误差,给临床实验室带来了极大的方便,也为临床医生鉴別诊治和预后提供了科学依据.参考文献[１]程薇,李玉龙,黄洲风,等．血清免疫固定电泳分型结合流式细胞术免疫表型分析在诊断多发性骨髓瘤中的作用[J ]．广东医学,２０１８,３９(２):２６５Ｇ２６７．(下转第２６８８页)９７６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d ,N o v e m b e r ２０２０,V o l ．４１,N o ．２１[１８]韩冰,吴翠萍,赵芯,等．数字P C R和荧光定量P C R诊断急性期布鲁菌病的灵敏度比较初步研究[J]．传染病信息,２０１９,３２(４):３１２Ｇ３１６．[１９]宋能,谭杨,罗凤玲,等．微滴数字P C R定量检测全血样品中结核分枝杆菌特异C F P１０基因[J]．中国生化药物杂志,２０１６,３６(２):１０Ｇ１５．[２０]徐万洲,李娟,何晓云,等．血清２０１９新型冠状病毒I g M 和I g G抗体联合检测在新型冠状病毒感染中的诊断价值[J]．中华检验医学杂志,２０２０,４３(３):２３０Ｇ２３３．[２１]MU D,Y A NL,T A N G H,e t a l．As e n s i t i v e a n da c c u r a t e q u a n t i f i c a t i o nm e t h o d f o r t h ed e t e c t i o no fh e p a t i t i sBv iＧr u s c o v a l e n t l y c l o s e d c i r c u l a rD N Ab y t h e a p p l i c a t i o n o f ad r o p le td i g i t a l p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n a m p l if i c a t i o n s y s t e m[J]．B i o t e c h n o l L e t t,２０１５,３７(１０):２０６３Ｇ２０７３．[２２]A B A C H I N E,C O N V E R SS,F A L Q U ES,e t a l．C o m p a r iＧs o n o fr e v e r s eＧt r a n s c r i p t a s e q P C R a n d d r o p l e t d ig i t a l P C Rf o rth e q u a n ti f i c a t i o no fd e n g u ev i r u sn u c l e i ca c i d [J]．B i o l o g i c a l s,２０１８,５２(１):４９Ｇ５４．[２３]李晓燕,朱丛中,郭丽茹,等．嵌合人偏肺病毒(h M P V)表位的重组流感病毒免疫保护效果[J]．中华微生物学和免疫学杂志,２０２０,４０(１):１１Ｇ１８．[２４]W E E R A K O O N K G,G O R D O NC A,W I L L I AM SG M, e t a l．D r o p l e td i g i t a lP C Rd i a g n o s i so fh u m a ns c h i s t o s oＧm i a s i s:p a r a s i t e c e l lＧf r e eD N Ad e t e c t i o n i nd i v e r s e c l i n i c a l s a m p l e s[J]．J I n f e c tD i s,２０１７,２１６(１２):１６１１Ｇ１６２２．[２５]J E A N N O TE,B E C E T T EV,C AM P I T E L L IM,e t a l．C i rＧc u l a t i n g h u m a n p a p i l l o m a v i r u sD N Ad e t e c t e du s i n g d r o pＧl e td i g i t a lP C Ri nt h es e r u m o f p a t i e n t sd i a g n o s e d w i t h e a r l y s t a g e h u m a n p a p i l l o m a v i r u sＧa s s o c i a t e d i n v a s i v e c a rＧc i n o m a[J]．JP a t h o l C l i nR e s,２０１６,２(４):２０１Ｇ２０９[２６]U S H I O R,Y AMAMO T O M,N A K A S H I MA K,e ta l．D i g i t a l P C Ra s s a y d e t e c t i o n o f c i r c u l a t i n g m y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i sD N A i n p u l m o n a r y t u b e r c u l o s i s p a t i e n t p l a sＧm a[J]．T u b e r c u l o s i s,２０１６,９９:４７Ｇ５３．[２７]席晓霞．初生婴儿肠道菌群与母体各部位菌群相关性研究[D]．呼和浩特:内蒙古农业大学,２０１７．[２８]郑璐．微液滴数字P C R技术和非分子诊断方法对非中性粒细胞缺乏宿主肺曲霉菌病的临床应用价值研究[D]．北京:北京协和医学院,２０１９．[２９]WU XL,L I N H,C H E NSJ,e t a l．D e v e l o p m e n t a n da pＧp l i c a t i o no far e v e r s et r a n s c r i p t a s ed r o p l e td i g i t a lP C R(R TＧd d P C R)f o r s e n s i t i v e a n d r a p i d d e t e c t i o n o f J a p a n e s e e n c e p h a l i t i s v i r u s[J]．JV i r o lM e t h o d s,２０１７,２４８(１):１６６Ｇ１７１．[３０]P H O L W A T S,S T R O U PS,F O O N G L A D D AS,e t a l．D i g i t a l P C Rt o d e t e c t a n d q u a n t i f y h e t e r o r e s i s t a n c e i nd r u g r e s i s t a n t m y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J]．P L o S O n e,２０１７,８(２): e５７２３８．[３１]WHA L E A S,B U S H E L L C A,G R A N T P R,e t a l．D eＧt e c t i o no f r a r ed r u g r e s i s t a n c e m u t a t i o n sb y d i g i t a lP C R i nah u m a ni n f l u e n z aav i r u s m o d e ls y s t e m a n dc l i n i c a l s a m p l e s[J]．JC l i n M i c r o b i o l,２０１６,５４(２):３９２Ｇ４００．[３２]D O B N I KD,D E M S A RT,HU B E R I,e t a l．I n t e rＧl a b o r a t oＧr y a n a l y s i s o f s e l e c t e d g e n e t i c a l l y m o d i f i e d p l a n t r e f e r e n c e m a t e r i a l s w i t h d i g i t a l P C R[J]．A n a l l B i o a n a l C h e m,２０１８,４１０(１):２１１Ｇ２２１．[３３]K L I N E M C,HO L D E N M J,S C O T T C,e t a l．S t a n d a r d r e f e r e n c em a t e r i a l２３６６f o rm e a s u r e m e n t o f h u m a nc y t oＧm e g a l o v i r u sD N A[J]．J M o lD i a g n,２０１３,１５(２):１７７Ｇ１８５．(收稿日期:２０２０Ｇ０２Ｇ０２㊀修回日期:２０２０Ｇ０６Ｇ１０)(上接第２６７９页)[２]唐洁,梁效功,薛丽,等．多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤早期诊断中的应用价值[J]．中国卫生检验杂志,２０１６,２６(２):２３６Ｇ２３９．[３]郭晓聪,徐晓娅,刘伟平．血清蛋白电泳和免疫固定电泳对多发性骨髓瘤的诊断价值[J]．实用医药杂志,２０１９,３６(５):４２７Ｇ４２９．[４]毕德成．免疫球蛋白定量和免疫固定电泳对多发性骨髓瘤的临床诊断价值研究[J]．中外女性健康研究,２０１７,２５(１２):５５Ｇ５６．[５]陈云峰,葛亮,沈建江．免疫固定电泳及免疫球蛋白定量在多发性骨髓瘤诊断和分型中的应用[J]．中国实验诊断学,２０１６,２０(１１):８８１Ｇ８８３．[６]宋鉴清．电泳技术临床应用 电泳图谱[M]．沈阳:辽宁科学技术出版社,２００６:８５Ｇ９１．[７]L E EJH,Y O O NSS,S UH C,e t a l．M u l t i p l em y e l o m a i n k o r e a:p a s t,p r e s e n t,a n d f u t u r e p e r s p e c t i v e s．e x p e r i e n c eo f t h ek o r e a nm u l t i p l em y e l o m aw o r k i n gp a r t y[J]．I n t JH eＧm a t o l,２０１０,９２(１):５２Ｇ５７．[８]杨强,侯健,陈文明,等．双克隆免疫球蛋白多发性骨髓瘤六例报告并文献复习[J]．中华血液学杂志,２０１６,３７(７):６１４Ｇ６１６．[９]MA N N A A C,N A N N I C L,L UM I N I D A,e t a l．A r t i f i c i a l i n t e l l i g e n c e t e c h n i q u e sf o re m b r y oa n do o c y t ec l a s s i f i c aＧt i o n[J]．R e p r o dB i o m e dO n l i n e,２０１３,２６(１):４２Ｇ４９．[１０]T A Y L O RD,P OW E R SD．T e a c h i n g a r t i f i c i a l i n t e l l i g e n c e t o r e a de l e c t r o p h e r o g r a m s[J]．F o r e n s i cS c iL n tG e n e t,２０１６,２５:１０Ｇ１８．[１１]唐江涛,李立新,冯伟华,等．免疫固定电泳和血轻链比值诊断以肾脏损伤为首发症状的多发性骨髓瘤的价值[J]．四川大学学报(医学版),２０１６,４７(４):５５１Ｇ５５５．[１２]吴颖涛,邹琳,黄前川,等．血清游离轻链及其比值在轻链型多发性骨髓瘤中的应用价值[J]．华南国防医学杂志,２０１９,３３(７):４５８Ｇ４６１．(收稿日期:２０２０Ｇ０２Ｇ１１㊀修回日期:２０２０Ｇ０６Ｇ１７)８８６２ 国际检验医学杂志２０２０年１１月第４１卷第２１期㊀I n t J L a bM e d,N o v e m b e r２０２０,V o l．４１,N o．２１。
