免疫实验2

高二生物 第1页(共12页) 2021年秋期高中二年级期终质量评估

生 物 试 题

注意事项：

1．答题前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上，并用2B铅笔将准考证号及考试科目在相应位置填涂。

2．选择题答案使用2B铅笔填涂，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号；非选择题答案使用0.5毫米的黑色中性(签字)笔或碳素笔书写，字体工整、笔迹清楚。

3．请按照题号在各题的答题区域(黑色线框)内作答，超出答题区域书写答案无效。

4．保持卡面清洁，不折叠，不破损。

一、选择题（每题1.5分，共45分。每题只有一个正确答案。）

1．下列关于人体内环境的叙述，不正确的是

A．内环境主要包括血浆、组织液和淋巴

B．血浆中含有Na+、肾上腺素、呼吸酶等物质

C．血浆渗透压的大小与蛋白质、Na+、Cl-等物质的含量均有关

D．剧烈运动时，血浆pH仍保持相对稳定与HCO3-、HPO42-等离子有关

2.下列有关内环境和稳态的叙述，正确的是

A．若②为肝细胞，则饥饿时a处的葡萄糖浓度高于b处

B．内环境的稳态就是指①③④中温度、渗透压及pH的相对稳定状态

C．①中的蛋白质含量高于④，其最终汇入血浆参与血液循环

D．在人体中，稳态的维持需要神经系统、内分泌系统和免疫系统等的共同调节

3．2021年10月16日，神舟十三号载人飞船发射成功，将翟志刚、王亚平和叶光富三名宇航员送入太空。航天器内有生命保障系统，以维持载人航天器密闭舱内的气体环境等，保障宇航员的生命安全。下列哪一项不是为维持内环境稳态而设计的

A．氧源（气瓶）和供气调压组件能为航天员提供呼吸用氧，同时还可以清除航天服高二生物 第2页(共12页) 内的CO2

B．水升华器和水冷却循环装置能控制航天服内的压力、温度和湿度

C．通信设备、控制组件和电源、报警系统等及时与地面相联系

D．适当的食物供给装置有利于保证宇航员的物质和能量供应

4．如图表示人体皮下的组织，b、c、d表示细胞外液。下面罗列的诸多因素中，可能引起病人组织水肿的是

免疫组化（IHC）实验具体步骤及说明

一、试剂和溶液

乙醇: 无水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇 抗原修复液: 0.01M 的柠檬酸钠缓冲液：58.82g 柠檬酸三钠及 7.56g 柠檬酸溶于 200ml 纯水，调

pH 至 6.0，纯水 1:100 稀释为工作液 3%过氧化氢-甲醇: 30%的过氧化氢与无水甲醇 1:9 稀释 10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和 2.4g

KH2PO4 加 1 L 纯水，调 pH 至 7.4 洗涤液: 1×PBS：纯水稀释 10× PBS；1× PBST：含 0.05% Tween-20 的 1×PBS（1×PBST） super block，生物素标记的 UltraTek Anti-Polyvalent 二抗，酶标亲和素 UltraTek HRP，DAB 显色试剂盒：Cat. KT1002a 抗体稀释液：3%BSA-PBS 0.5%盐酸-乙醇：0.5～1%盐酸，95.0-95.5%乙醇 苏木素：苏木精 2g 溶于 250ml 无水乙醇，十六水合硫酸铝 17.6g 溶与 750ml 纯水，以上溶液充 分混合，加入碘酸钠 0.2g

和冰醋酸 20ml

二、实验步骤

1. 组织固定：烘箱温度 65-75℃ 30min 或者 65℃过夜；

2. 脱蜡：二甲苯浸泡三次，每次 10 分钟；

3. 水化：依次经过无水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇浸泡，每次 5min；

4. 洗涤：自来水冲洗 1 次，PBS 浸泡 3min；

5. 抗原修复：放入稀释 100 倍的柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0) 中，高压锅煮沸

10min，常温冷却 30min；

6. 洗涤：纯水浸泡 2 次，PBS 浸泡 1 次，每次 3min；

7. 灭活酶：室温下 3%过氧化氢-甲醇暗处处理切片 15min； 8. 洗涤：纯水浸泡 1 次，PBS 浸泡 2 次，每次 3min；

细菌感染的先天免疫传感器的识别

1，苏希尔·库马尔英格尔1，Harshad

免疫实验室，生物科学系研究 所，印度科学教育和研究（IISER）博帕尔，印度

2 ，瑜珈Vemana大学微生物学系，Kadapa，印度

3 ，WPI宿主防御，免疫学前沿研究中心，日本大阪大学，日本的实验室

SK和HI同样对这项工作的贡献。

人士Himanshu库马尔博士，免疫实验室，生物科学系，印度研究所的科学教育和研究（IISER） ，通讯地址：博帕尔印度。电子邮件：hkumar@iiserb.ac.in

摘要

通过激活先天免疫和适应性免疫，微生物挑战的主机发起一系列的防御过程。先天免疫系统包括传感器或模式识别受体（PRRS）上表达的免疫和非免疫细胞和感保守来源于病原体的分子或在不同的室中的宿主细胞的病原体相关的分子模式（PAMPS）。PAMPS猪蓝耳病的识别触发的炎性细胞因子和I型干扰素通过诱导的抗菌效应的反应。在先天免疫和宿主防御，蓝耳病，如Toll样受体（TLRs），NOD-的受体（NLRS），RIG-I-的受体（RLRs），以及DNA传感器及其相应的PAMPS的几个家庭都得到了很好的研究。在这里，我们回顾了最近的调查结果细菌识别Toll样受体和NLRS，由这些传感器的信号转导通路激活。

关键词： 细菌感染， 先天免疫， 模式识别受体， Toll样受体， NOD样受体

介绍

病原体入口处进入主机发起来源于病原体的分子的阵列和主机传感器之间复杂的相互作用。这些相互作用的目标是通过动态网络的先天免疫细胞和它们的调停的分子（Akira等人2006年，2007年a Medzhitov）适当的免疫反应的诱导。在哺乳动物中，免疫力分为两部分，先天免疫和适应性免疫。先天免疫力，这是最有效的第一道防线，在防守中起着至关重要的作用，对多数微生物感染（詹韦1989）。这种免疫系统由一个家庭的可溶性分子和各种先天免疫细胞。的可溶性分子，如补体和抗微生物肽，绑定的病原体，并启动其间隙通过转录独立的免疫过程如吞噬作用，脱颗粒，和补体结合，以消除病原体。先天免疫细胞包括各种组织的巨噬细胞，树突状细胞，并表达了家庭的模式识别受体（PRRS）被称为先天受体或传感器的嗜中性粒细胞。PRRS是进化上保守胚芽行编码的受体感觉到来源于病原体的签名称为病原体相关的分子模式（PAMPS）分子。PAMPS是建立在主机感染致病性不仅是必要的，但也很重要的病原体的生存。PRRS包括如Toll样受体（TLR），类似NOD-的受体（NLRS），RIG-I等的受体（RLRs），C-型凝集素受体 （CLRS），和检测的DNA分子（Kumar等人的几个家庭。2009A）。在各舱室的细胞，包括细胞表面，内吞小泡和细胞质（Janeway和2009年Medzhitov 2002年，晃，：Barbalat等。2011）的的PRRS意义PAMPS 。TLR和NLR的大部分成员在检测细菌中发挥了举足轻重的作用，，而RLRs和DNA传感器主要是必需的感知的病毒（Inohara等。2007年b，2005年，Medzhitov 弗兰基等人，2009年，Ranjan等人，2009年）。与此相反，C-型凝集素是必不可少的，用于感测真菌和分枝杆菌（Figdor等人，2002）。由PRRS PAMPS的感测启动级联激活各种转录因子如NF-κB和干扰素调节的因素（IRFS）的信号转导途径，通过生产的各种抗微生物肽，促炎细胞因子，趋化因子诱导的抗菌响应， I型干扰素（干扰素）（2007年Trinchieri和谢尔河合2011年，黑泽明）。总的来说，这些反应开始通过直接杀灭或抑制病原体的复制的先天免疫系统来清除感染。此外，诱导的先天免疫反应的启动病原体特异性的适应性免疫通过B-或T-淋巴细胞（Nemazee等人，2006，岩崎和Medzhitov 2010）。本文将集中在最近的调查结果的确认致病细菌及其零部件的Toll样受体和的NLRS，以及由这些传感器的信号转导通路激活。 Toll-样受体

免疫组化步骤：

一． 标本脱蜡及水化

1. 90℃恒温烘箱孵育半小时。（或者60℃恒温烘箱孵育2h或过夜）（目的：使

蜡块融化）

2. 依次放入二甲苯I,II各处理20min。（目的：脱蜡）

3. 按不同的酒精浓度（100%，90%，80%，70%）（610室 100%，95%，80%，75%）

分别水化10min。（目的：洗去石蜡，然后一遍一遍置换高浓度的酒精）

4. 蒸馏水洗涤5min×2次。（目的：洗去酒精）

5. PBS缓冲液洗涤5min×2次。

二． 标本抗原修复及封闭

1. 取出切片，放置于3%的过氧化氢槽中（30%过氧化氢30ml 加蒸馏水到300ml，

即稀释10倍），室温孵育15min。（目的：脱去内源性过氧化物酶）

2. PBS缓冲液洗涤5min×2次。（目的：洗去过氧化氢）

3. 取出标本，加入95℃~100℃预热抗原修复液（柠檬酸抗原修复液，PH 6.0）

中低火、微波15min。（抗原修复液先加热至100℃沸腾，然后微波炉调至解

冻档，即差不多95℃~100℃。目的：打开键，利于之后的抗原抗体反应）

4. 自然冷却至室温。（或者放在冰水里冷却，速度较快）

5. PBS缓冲液洗涤3min×3。

6. 取出切片，擦干切片组织周围的液体，放置于湿盒中，标本加入羊血清

（5%~10%），每张片子约50ul（30ul~50ul不等，即覆盖组织即可），室温孵

育30min。（此步骤为封闭）（SUPER PAP PEN在组织周围画圈，即可防止羊血

清外溢）

三． 抗体加入及显色

1. 将切片上的液体甩干，滴加入50ul一抗工作液于组织上，于4℃冰箱中过夜

（一般8~10小时，时间过一些问题也不大）。（或者37℃恒温箱中孵育2h）

2. 将切片上的液体甩干，放置PBS缓冲液中洗涤3~5min×3~5次。（时间可以短

一些，但多洗涤几次）

3. 将切片上的液体甩干，加入二抗（每张片子约30ul~50ul，覆盖组织即可）室温下孵育30min。