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高中生物选修一人教版5ＤＮＡ和蛋白质技术5.1ＤＮＡ的粗提取与鉴定1.提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
DNA的粗提取就是利用 DNA与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取 DNA，去除其他成分。
2.DNA粗提取的原理： 1）DNA和蛋白质等其它成分在不同浓度的NaCl 溶液中的溶解度不同。
所以一般选用2mol/L 的 NaCl 溶液充分溶解 DNA,使杂质沉淀，再缓慢注入蒸馏水使NaCl 溶液浓度接近 0.14mol/L ，使 DNA析出。
2）DNA 不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
所以可用体积分数为95%,预冷的酒精溶液来提纯DNA。
3.提取 DNA还可以利用 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
1）酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对 DNA产生影响。
2）温度值为 60～80℃时，会使蛋白质变性沉淀，而 DNA不会变性。
3）植物细胞提取 DNA时，常用洗涤剂瓦解细胞膜，但对 DNA没有影响。
4.在沸水浴条件下， DNA遇二苯胺呈现蓝色，可以检测 DNA的存在。
5.选用 DNA含量相对高的生物组织提取 DNA，成功的可能性更大。
哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和细胞器，不适宜用来提取 DNA，但适宜用来提取血红蛋白。
6.实验设计过程：1）实验材料的选取：本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为其 DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。
2）破碎细胞，获取含DNA 的滤液：往鸡血细胞中加一定量的蒸馏水，同棒搅拌，使细胞吸水胀破释放DNA ，过滤取 DNA 滤液。
3）去除滤液中的杂质：往DNA滤液中加入2mol/L的NaCl溶液，过滤除去不溶的杂质。
再加蒸馏水调节NaCl 溶液浓度接近 0.14mol/L ，析出 DNA，过滤去除溶液中的杂质。
DNA和蛋白质技术生物选修一高频考点提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
下面是小偏整理的DNA和蛋白质技术生物选修一高频考点，感谢您的每一次阅读。
DNA和蛋白质技术生物选修一高频考点1、提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
2、DNA溶解性：①DNA在不同浓度的NaCL溶液中溶解度不同。
在0.14moL/L的NaCL溶液中，溶解度最小。
②DNA不溶于酒精。
3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：因为酶有专一性，蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。
DNA比较能耐高温。
洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA无影响。
4、在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
5、提取DNA的材料一般用鸡血而不用猪血，因为哺乳动物(猪)成熟的红细胞无细胞核，无DNA。
6、破碎鸡血细胞时，可以加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。
7、为了纯化提取的DNA，需要将滤液进一步处理。
在滤液中加入NaCL，使其浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再加入蒸馏水，使NaCL浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质。
8、向溶解了DNA的NaCL溶液中加入体积分数为95%的冷却的酒精溶液，目的是提取含杂质更少的DNA。
9、PCR原理：DNA体外复制10、PCR的条件：①一定的缓冲溶液;②DNA模板;③分别与两条模板链相结合的两种引物;④四种脱氧核苷酸;⑤耐热的DNA聚合酶;⑥控制温度的仪器设备。
11、为什么要引物?因为DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。
DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
12、PCR三步骤：变性、复性和延伸。
在PCR循环之前，常要进行一次预变性，以便增加大分子模板DNA彻底变性的概率。
13、PCR的结果：特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。
DNA和蛋白质技术生物选修一高考考点总结灵活运用这是学好学活生物的关键，认识的目的全在于应用。
灵活运用知识才能记得牢，学了才真正有用。
下面是小偏整理的DNA和蛋白质技术生物选修一高考考点总结，感谢您的每一次阅读。
DNA和蛋白质技术生物选修一高考考点总结1、不同浓度的NaCl溶液中DNA和蛋白质的溶解度差异2、DNA不溶于【酒精】溶液。
3、在【沸水浴】中DNA遇【二苯胺】会出现【蓝色】反应,二苯胺试剂要【现配现用】。
4、DNA粗提取实验通常选用【鸡血】作为实验材料，不选用【哺乳动物成熟红细胞】——哺乳动物成熟红细胞无【细胞核和细胞器】，不含【DNA】5、使用植物细胞作为实验材料，则要加入【洗涤剂】和【食盐】然后进行搅拌和充分研磨，收集研磨液——洗涤剂的作用是【瓦解细胞膜，从而释放DNA】。
6、沉淀DNA时用【冷酒精】——体积分数为【95%】的【4℃】冷酒精可抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解，降低分子运动，使DNA易形成【沉淀】析出，低温还有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。
7、DNA粗提取实验中三次过滤8、DNA合成的方向总是从子链的【5’端】向【3’端】延伸9、PCR的反应条件：一定的缓冲液、DNA模板、分别与两条模板链相结合的【引物】、四种脱氧核苷酸、【耐热的DNA聚合酶】以及能严格控制温度变化的温控设备10、凝胶色谱法：大分子蛋白质路程【较短】，移动【快】，小分子蛋白质路程【较长】，移动【慢】11、电泳：常见的电泳有【琼脂糖凝胶电泳】和【SDS—聚丙烯酰胺电泳】;SDS—聚丙烯酰胺电泳中SDS所带负电荷量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，使电泳迁移率完全取决于【分子的大小】12、蛋白质的提取和分离一般分四步：【样品处理】、【粗分离(透析)】、【纯化(凝胶色谱操作)】和【纯度鉴定】13、透析：除去样品中相对分子质量【较小】的杂质或用于【更换样品的缓冲液】综合归纳教师授课尤其是新授课，一般是分块的，但各块各知识点之间有内在的本质的联系，各年级生物知识是连贯的，是一个整体。
选修1专题5DNA和蛋白质技术复习(教案)复习要点1.DNA的粗提取与鉴定2.PCR技术3.血红蛋白的提取和分离复习过程一、DNA的粗提取与鉴定【知识点讲解】1.实验原理(1)DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同(2)DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离。
(3)DNA与二苯胺沸水浴加热，呈蓝色。
2.操作流程(1)材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织(2)破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞一加蒸馏水一用玻璃棒搅拌一用纱布过滤一收集滤液(3)去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质(4)DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液(5)DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5min，溶液变成蓝色【例题讲解】如图为菜花DNA的粗提取与鉴定的实验流程图。
据图回答下列问题：萊花洗禅切成小换（1）选择菜花作为提取DNA的实验材料的原因是。
（2）研磨前，向研钵中加入石英砂的目的是—，加入的物质a是。
（3）研磨液过滤后，应向滤液中加入2mol/L的NaCl溶液，目的是；也可以向滤液中加入嫩肉粉，目的是。
（4）鉴定DNA所用的化学试剂为，鉴定实验中，A、B两支试管属于对照组的是，对照组试管中加入的物质有。
【答案】（1）菜花中的DNA含量相对较高（2）使研磨充分洗涤剂和食盐（3）溶解DNA，析出不溶的杂质分解蛋白质（4）二苯胺ANaCL溶液和二苯胺试剂【解析】（1）原则上含DNA的生物材料都可以作为提取DNA的实验材料，只是选用DNA含量相对较高的生物组织，实验成功的可能性更大。
菜花中DNA含量相对较高，可以作为提取DNA的材料。
（2）向研钵中加入石英砂是为了使研磨更充分。
在本实验中同时向研钵中加入一定量的洗涤剂和食盐，洗涤剂可以瓦解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
5 ＤＮＡ和蛋白质技术 ＤＮＡ的粗提取与鉴定1.提取生物大分子的基本思路DNA 的粗提取就是利用DNA 与理和化学性质方面的差异，提取DNA ，去除其他成分。
粗提取的原理：1）DNA同。
所以一般选用NaCl溶液充分溶解NaCl 溶液浓度接近L ，使295%,3.提取DNA还可以利用DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
1）酶具有专一性，2）温度值为60～80而3）植物细胞提取DNA 时，但对DNA 没有影响。
4.DNA DNA 的存在。
5.选用DNA 含量相对高的生物组织提取DNA ，成功的可能性更大。
哺乳动物成熟的6.实验设计过程：1）实验材料的选取：本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为其而用动物肝脏2）破碎细胞，获取含DNA 的滤液：3）去除滤液中的杂质：往DNA 滤液中加入NaCl 溶液浓度接近4）DNA 的提纯：将析出的DNA 用95%2-3DNA 。
5）DNA 的鉴定：白色丝状物溶于4mL分钟后观察到DNA7.DNA，所以提取DNADNA5.2 多聚酶链式反应扩增DNA 片段1. PCRDNA片段的技术，其复制过程的复制类似。
需要：1DNA 双链）；2供DNA 复制的模板）；3；4化合成DNA 子链）5）引物（使。
2.为了明确地表示DNA 的方向，通常将DNA 3，5，端。
DNA DNA ，而只能从链，因此DNA 复制需要引物。
当引物与DNA 母链通过碱基互补配对结合后，DNA 聚合酶就能从引物的3，端开始延伸DNA 链，因此DNA利用了DNAPCR PCR中进行，须提供DNA 模板、DNA 复制在体外反复进行。
一般要经历30升到DNA 解聚为单链。
复性指当温度下降到DNA结合。
延伸指当温度上升到A 、T 、C 、G ）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA 链。
5PCR酶吸血红蛋白的提取和分离1.负责血液中2.溶解度、吸附性质和对3.法。
内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量质因此得以分离。
专题5 DNA和蛋白质技术【高考新动向】1、蛋白质的提取和分离2、PCR技术的基本操作和应用【考纲全景透析】一、DNA的粗提取与鉴定1、实验原理：(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。
(2)DNA不溶于酒精溶液。
(3)DNA不被蛋白酶所水解。
(4)DNA在沸水浴条件下可被二苯胺染成蓝色。
2．DNA与蛋白质在不同NaCl溶液中溶解度不同3.DNA的析出与鉴定(1)析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液等体积的冷却酒精溶液(体积分数为95%)静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物(此即粗提取的DNA)，用玻璃棒沿一个方向搅拌卷起丝状物。
(2)鉴定二、多聚酶链式反应扩增DNA片段1、PCR：多聚酶链式反应的简称，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
原理：DNA的热变性2、PCR反应过程（1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链（2）复性：温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合（3）延伸：温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸（A,T,C,G）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
3、PCR结果：DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。
三、血红蛋白的提取和分离实验1、方法及原理相对分子质量的大小分离蛋白质种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白2、操作程序：（1）样品处理：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液（2）粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。
（3）纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。
（4）纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。
3、细胞内DNA复制与PCR技术的比较【热点难点全析】一、DNA 和蛋白质的技术1、比较细胞内DNA 复制与DNA 扩增（PCR ）2.血红蛋白的提取和分离方法(1)凝胶色谱法①含义：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法。
高三DNA与蛋白质技术知识点高三阶段是学生们备战高考的重要时期，各种科目的知识点都需要加强学习。
在生物学科中，DNA与蛋白质技术是重要且复杂的知识点。
本文将从DNA分析、蛋白质分析以及相关实验方法等方面，介绍高三阶段常见的DNA与蛋白质技术知识点。
一、DNA分析1. PCR技术聚合酶链式反应（PCR）是一种用于从少量DNA样本扩增特定DNA序列的技术。
PCR的过程包括三个步骤：变性、退火和延伸。
通过PCR技术，可以在短时间内快速扩增DNA片段，用于基因检测、犯罪学和亲子鉴定等领域。
2. 基因测序技术基因测序是指对DNA序列进行逐个碱基的测定与分析的过程。
常见的基因测序技术有Sanger测序、高通量测序和第三代测序等。
通过基因测序，科学家可以了解到一个物种的基因组信息，并研究基因与特定生物现象之间的关联。
3. 基因芯片技术基因芯片技术是一种可以快速检测大量基因表达水平的方法。
通过将DNA片段固定在芯片表面，实现多样品大规模并行分析。
基因芯片技术在基因组学研究、疾病诊断和药物筛选等领域有着广泛的应用。
二、蛋白质分析1. SDS-PAGE技术聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是常见的蛋白质分析技术。
通过对蛋白质进行变性和电荷分离，使蛋白质根据其大小与电荷的不同而形成条带，从而进行蛋白质的分离与分析。
SDS-PAGE技术广泛应用于生命科学领域，如蛋白质组分析、克隆表达和纯化等。
2. 质谱技术质谱技术是一种可以测定分子质量和结构的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、MALDI-TOF和ESI-MS等。
质谱技术可以用于鉴定蛋白质结构、研究蛋白质修饰以及蛋白质复杂体的组成等。
3. Western blotting技术Western blotting是一种常用的蛋白质检测和分析方法。
通过将蛋白质经电泳分离后，转移到膜上，然后使用特异性抗体进行检测与分析。
Western blotting技术能够检测特定的蛋白质，并确定其分子量和表达水平。
专题五ＤＮＡ和蛋白质技术课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定一、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。
②在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。
酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。
2.从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。
一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
3.采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。
4.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。
温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。
补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。
5.洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。
6.当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。
原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。
二、实验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同。
在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。
本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。
一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。
三、破碎细胞，获取含DNA的滤液1、若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。
2.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。
3．在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。
血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤。
4.在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量减少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
具体做法。
10mL鸡血＋20mL蒸馏水→同方向搅拌→3层尼龙布过滤→滤液三、去除滤液中的杂质1.为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。
因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。
方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。
方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。
四、析出与鉴定1.在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置2～3分钟，析出的白色丝状物就是DNA。
DNA呈白色。
2.怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA呢？具体做法。
试管2支，编号甲乙→各加等量5mLNaCl溶液→甲中放入少量白色丝状物，使之溶解→各加4mL二苯胺，混合均匀→沸水浴5min→观察颜色变化五、实验操作制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心↓破碎细胞，释放DNA…加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。
溶解核内DNA…………加入NaCl至2mol/L，同一方向缓慢搅拌↓DNA析出………………加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在溶解到2mol/L溶液中↓→除去细胞质中的大部分物质。
DNA初步纯化…………与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。
DNA鉴定………………二苯胺，沸水浴，呈现蓝色注意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。
课题二多聚酶链式反应扩增DNA片段基础知识PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：1．细胞内DNA复制条件分析：条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量ATP 为解螺旋和合成子链供能引物RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点2．细胞内DNA复制过程的解析：解旋：解旋酶、ATP，DNA两条链打开，形成两条DNA单链。
引物结合：在DNA单链3’端与DNA反向配对结合。
DNA聚合酶结合：DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。
子链合成：DNA聚合酶从引物3’端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。
后续加工：D NA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来（半不连续合成。
先导链，滞后链）3． DNA分子复制的人工控制实验操作步骤①照PCR反应体系配方配制反应液；②②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）中；③将微量离心管放到PCR 仪中；④设置PCR 仪的工作参数。
⑤DNA 在PCR 仪中大量扩增。
4．实验注意事项（1）避免外源DNA 污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。
（2）缓冲液和酶分装成小份，－20℃低温保存。
（3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。
（4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。
总结、点评课题三 血红蛋白的提取和分离一、实验原理蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
（4）作用： 分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。
2．缓冲溶液 多聚酶链式反应扩增DNAPCR 原理 DNA 的复制需要酶、原料、能量、引物 PCR 过程 变性 复性 延伸 操作步骤 配制PCR 反应体系 移入离心管 放入PCR 设置工作参DNA 扩增 测定含量 稀释 调零 测定并读计算（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
3．凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。
二、实验步骤1．样品处理红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。
②血红蛋白的释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。
加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。
2．粗分离①分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。
②透析取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。
透析可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。
3．纯化调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝↓胶面平齐，关闭出口。
加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。
加样后，∣打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后，↓关闭出口。
调节缓冲液面：加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度↓洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。
↓收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集。
4.纯度鉴定------SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）三、注意事项电泳技术电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。
