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水稻病害病原菌分子鉴定与检测技术研究水稻病害是全球范围内严重威胁水稻产量和品质的主要因素之一。
病原菌是引起水稻病害的主要致病因子，因此研究水稻病原菌的分子鉴定与检测技术对于预防和控制水稻病害具有重要的意义。
本文将对水稻病原菌分子鉴定与检测技术的研究进行探讨。
水稻病害病原菌主要包括稻瘟病、稻飞虱、白叶枯病等。
为了准确鉴定病原菌种类和数量，研究人员使用了一系列分子生物学技术。
其中，PCR技术是最常用的技术之一。
通过提取水稻植株中的DNA或RNA，研究人员可以使用特定的引物和适当的PCR条件来扩增目标基因片段。
这些基因片段可以用于病原菌的鉴定和定量分析。
除了PCR技术，还可以使用其他分子鉴定技术，例如实时荧光定量PCR、PCR-DGGE和PCR-RFLP等。
实时荧光定量PCR是一种快速而准确的检测技术，可以在短时间内确定病原菌的存在和数量。
另外，PCR-DGGE技术通过电泳分离PCR产物，根据不同的电泳图谱来鉴定病原菌的种类。
PCR-RFLP技术则是将PCR产物经过限制性内切酶切割后进行鉴定。
这些技术的应用为病原菌的鉴定和检测提供了快速和有效的方法。
另外，新近的基因组学研究使得水稻病原菌分子鉴定与检测技术得到了全新的突破。
通过对病原菌基因组的测序和比对，研究人员可以确定病原菌的物种和种群结构。
基因组学研究还可以揭示病原菌的致病机制和抗药性的形成机制，为病害防治提供理论依据。
此外，近年来，人工智能在水稻病原菌分子鉴定与检测技术领域也得到了广泛应用。
通过采集大量的病害样本和对应的分子数据，建立机器学习模型可以有效地识别和预测病原菌的存在和致病性。
这种新兴技术的应用将大大提高病原菌检测的准确性和速度。
总体而言，水稻病原菌分子鉴定与检测技术的研究是为了更好地了解水稻病原菌种类、数量和致病机制，从而制定针对性的防治策略。
随着分子生物学、基因组学和人工智能等技术的不断发展，水稻病原菌的鉴定和检测技术将变得更加高效和准确，帮助农民预防和控制水稻病害，提高水稻的产量和品质。
基金项目上海市科技兴农项目（沪农科推字〔2021〕第1-3号）；安徽省科技重大专项（201903a06020011）。
作者简介吴浩然（1997—），男，安徽肥东人，助理农艺师，从事水稻遗传转化工作。
*通信作者收稿日期2022-06-09水稻愈伤组织褐化的机理及影响因素研究进展吴浩然张从合*王慧陈思黄艳玲杨力管昌红（安徽荃银高科种业股份有限公司/农业农村部杂交稻新品种创制重点实验室，安徽合肥230088）摘要在水稻愈伤诱导、愈伤继代等过程中，影响愈伤褐化因素较多，包括水稻基因型、培养条件、培养基成分以及继代时间等，且不同因素对愈伤褐化的影响程度不同。
本文简要概述了引起外植体和愈伤组织褐化的机理、褐化类型及引起褐化的因素，同时对其研究方向进行了展望，以期为植物组织培养提供参考。
关键词水稻；愈伤组织；基因型；褐化机理；抗氧化剂；多酚氧化酶中图分类号S511文献标识码A文章编号1007-5739（2023）05-0021-05DOI ：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.05.006开放科学（资源服务）标识码（OSID ）：Research Progress on Browning Mechanism of Rice Callus and Its Affecting FactorsWU HaoranZHANG Conghe *WANG HuiCHEN SiHUANG YanlingYANG LiGUAN Changhong(Anhui Win-all Hi-tech Seed Co.,Ltd./National Key Laboratory for New Variety Development of Hybrid Rice of Ministry of Agriculture and Rural Affairs ，Hefei Anhui 230088)AbstractIn the process of rice callus induction and callus subculture,there are many factors affecting callusbrowning,including rice genotype,culture conditions,medium composition and subculture time,and different factors have different influence degrees on callus browning.In this paper,the mechanism,types and affecting factors of browning of explants and calli were briefly summarized,and the research direction was prospected,in order to providereferences for plant tissue culture.Keywordsrice;callus;genotype;browning mechanism;antioxidant;polyphenol oxidase褐化现象常见于水稻愈伤诱导和愈伤继代培养过程中，在褐化初期，愈伤组织颜色变深，呈现出棕色或黑褐色，并且会逐步扩散到周边其他愈伤，最后直至愈伤死亡。
农业生态系统中水稻根际微生物的种类及其功能研究近年来，随着人们对生态环境的重视和对农业可持续发展的追求，研究水稻根际微生物在农业生态系统中的作用逐渐成为了热门话题。
水稻根际微生物是指与水稻根部紧密接触并生活在其中的微生物，包括细菌、真菌、古菌、放线菌等。
它们与水稻植株之间存在着复杂的相互关系，能够对提高水稻生长和产量、改善水稻品质、促进土壤健康等方面发挥重要作用。
一、水稻根际微生物的种类及其多样性水稻根际微生物的多样性极高，在水稻生长周期不同的时期和不同地理位置中，其种类和数量也会有所变化。
以细菌为例，在水稻根际中已经发现了近900种不同的细菌，涉及革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和放线菌等多个类别。
而真菌、古菌等微生物的种类也同样繁多。
水稻根际微生物种类的多样性有多种原因，其中包括土壤地理位置、气候条件、植物品种等。
同时，也与水稻在整个生长过程中所具有的高放化和活性有关，因此比其它农作物的根际微生物种类更为丰富。
二、水稻根际微生物的功能及其研究进展1. 促进植物生长和发育水稻根际微生物中存在着多种有益细菌和真菌，它们能够与水稻形成互惠互利的共生关系，在过程中产生激素、抗病物质等。
同时，有利菌也能够在根际中摄取水分及养分，帮助水稻更好地吸收养分和水分，从而促进水稻生长发育。
2. 提高水稻的抗旱能力研究发现，水稻根际微生物与植物根系合作作用，能够帮助植物更好地调节光合作用、利用养分等，从而提高其对干旱的适应能力。
3. 促进土壤健康水稻根际微生物在农业生态系统中也是一种重要的生物保健益菌。
水稻根际微生物有利菌群优越，能够抑制土壤病原菌的生长，增强土壤抗病性，提高土壤质量，从而实现可持续农业生产。
4. 提高水稻品质水稻根际微生物也有助于提高水稻的品质。
研究发现，与水稻根际微生物共生的真菌，如接合菌属（Gluconacetobacter）等，能够促进水稻、产量增加同时，还能增加水稻中淀粉的含量，达到优质、高产的效果。
木霉菌在水稻上的应用研究进展木霉菌是一种在自然界中普遍存在的真菌，具有多种生物活性和生物学功能。
近年来，关于木霉菌在水稻上的应用研究逐渐受到人们的关注，并取得了一定的进展。
本文将对木霉菌在水稻上的应用研究进展进行综述，以期为相关研究提供参考和借鉴。
一、木霉菌的生物学特性木霉菌是一种分布广泛的真菌，主要生长在植物的凋落物、土壤和有机质中，是一种重要的腐生菌。
木霉菌的生长环境对其生物学特性有一定影响，主要包括温度、湿度、营养物质和微生物种群等因素。
在适宜的生长条件下，木霉菌可以产生大量的孢子，形成白色或灰色的绒状菌丝体，具有较强的生长和繁殖能力。
木霉菌在水稻上的应用研究主要集中在其对水稻生长发育、产量和质量等方面的影响，以及其在水稻病虫害防治中的应用。
下文将从这两个方面对木霉菌在水稻上的应用研究进展进行详细介绍。
二、木霉菌对水稻生长发育的影响1. 木霉菌对水稻的生长促进作用研究表明，木霉菌可以促进水稻的生长发育，提高水稻的生物产量和质量。
木霉菌可以产生生长激素和生长调节物质，促进水稻幼苗的生长，增加根系的发达和吸收营养元素的能力，提高光合作用和养分利用效率。
木霉菌还可以促进水稻的开花结果和籽粒充实，增加水稻的籽粒产量和品质。
木霉菌可以增强水稻的抗逆性，提高水稻抵抗病虫害和环境胁迫的能力。
研究表明，木霉菌可以诱导水稻产生一些抗逆蛋白和抗氧化酶，提高水稻对生物、物理和化学胁迫的抵抗能力。
木霉菌还可以促进水稻产生一些次生代谢产物，增强水稻对病原菌和害虫的抗性。
三、木霉菌在水稻病虫害防治中的应用木霉菌可以有效防治水稻的多种病害，包括水稻纹枯病、水稻稻瘟病、水稻白叶枯病等。
木霉菌可以产生一些抗真菌物质，对水稻病原菌具有一定的杀灭和抑制作用。
木霉菌还可以诱导水稻产生一些抗病物质，增强水稻对病原菌的免疫能力。
木霉菌在水稻上的应用研究已经取得了一定的进展，未来的研究重点主要包括以下几个方面：1. 木霉菌的应用技术研究需要加强木霉菌在水稻上的应用技术研究，包括木霉菌的筛选鉴定、培养培育、制剂配方和施用方法等方面的研究。
盘二孢菌的生物学特性及防控研究盘二孢菌，也称为镰刀菌，是一种常见的土壤中的真菌。
它属于担子菌门，镰刀菌科，镰刀菌属。
盘二孢菌具有一系列生物学特性，并对农作物生长和植物病原菌控制具有潜在的经济意义。
本文将探讨盘二孢菌的生物学特性以及防控研究。
盘二孢菌的生物学特性：1. 形态特征：盘二孢菌的菌落呈白色至灰白色，表面平滑，边缘呈波状或环形。
其菌丝为无色或浅黄色，具有分枝。
产孢器为倒卵圆形或椭圆形，上方有一个盖子状结构，由此得名盘二孢菌。
2. 生长条件：盘二孢菌在适宜的温度和湿度下能够快速生长。
最适生长温度一般在25-28℃，最低生长温度为5℃，最高生长温度为40-45℃。
相对湿度在60-80%之间，菌丝和分生孢子的形成较为理想。
盘二孢菌对土壤pH值和氧气含量较为适应。
3. 营养生长：盘二孢菌是一种典型的真菌，能够通过异养和自养两种方式获取营养。
在异养营养条件下，其能够利用有机物质、糖类、蛋白质等作为碳源和能源。
在自养营养条件下，盘二孢菌可以通过光合作用产生能量和有机物质。
4. 生理代谢：盘二孢菌具有丰富的次生代谢产物，包括抗生素、酸、酶等活性物质。
这些物质对其在农业和医学上的应用具有重要意义。
盘二孢菌还能分解和利用一些有害物质，发挥着环境修复的作用。
5. 对病原菌的控制：盘二孢菌具有广谱抗菌活性，对多种植物病原菌具有杀菌作用。
其主要通过产生抗生素、降解植物细胞壁以及竞争营养等方式对病原菌进行控制。
盘二孢菌的防控研究：1. 生物防治：盘二孢菌被广泛应用于农业生产中的生物防治。
研究表明，盘二孢菌对多种农作物病原菌，如稻瘟病菌、烟草霜霉菌等具有较好的控制效果。
采用盘二孢菌制剂进行喷施或土壤处理，可以有效地控制农作物病害，减少化学农药的使用。
2. 培养条件优化：研究盘二孢菌的菌丝和孢子生长的适宜温度、湿度、营养物质等条件，有助于提高盘二孢菌的生物量和产孢量，从而提高其在生物防治中的应用效果。
3. 分子机制研究：通过分子生物学和基因工程技术，研究盘二孢菌对病原菌的抑制作用的分子机制。
水稻稻瘟病菌侵染机理及综合防治技术水稻稻瘟病是由稻瘟病菌（Pyricularia oryzae Cavara）引起的一种常见的水稻病害。
该病菌在潮湿温暖的环境下生长迅速，症状表现为叶片上出现黄褐色的小斑点，逐渐扩大并汇合形成长条状或不规则形的病斑。
严重感染时，叶片呈焦枯、干瘪状，严重影响水稻的产量和品质。
稻瘟病菌的侵染机理主要包括以下几个方面：1. 病菌入侵：病原体主要通过氛围孢子、分生孢子或腐生体进入植株。
氛围孢子主要通过水流或气流传播，进入植株后，侵入叶片上皮组织。
分生孢子直接通过叶片上皮组织透过，或通过伤口侵入植株。
腐生体则通过伤口侵入植株。
2. 病原体的生长：病原菌在寄主体内通过产生酶类和毒素等物质破坏植物组织，从而造成寄主的病症。
病原菌在寄主体内长出菌丝，通过菌丝无性生殖产生分生孢子，继续感染其他部位的植株组织。
3. 寄主抗性：水稻对稻瘟病具有一定的抗性。
抗性主要通过两种机制实现：一是通过激发植物的免疫系统来抵抗病原菌的入侵；二是通过产生抗病物质来抑制病原菌的生长。
这些抗病物质包括化学物质、酶类和抗菌肽等。
为了控制和防治水稻稻瘟病，可以采用综合的防治技术：1. 遗传抗性：利用遗传工程的手段，选育抗稻瘟病的水稻品种。
通过基因转化或杂交选育，将具有抗稻瘟病基因的品种和优良品种进行杂交，培育出具有抗病性和高产性的新品种。
2. 病害监测：定期对水稻稻瘟病进行监测，及时发现病害的发生和流行趋势，为制定防治措施提供数据支持。
3. 种植健康种子：选用健康的种子进行播种，避免因种子携带病原菌而引发病害发生。
4. 配套栽培措施：合理的施肥和水分管理，保持植株的生长健壮，提高植物的抵抗病原菌的能力。
5. 农药防治：使用合适的农药进行喷洒防治。
在病害发生的高发期，及时对叶面进行喷洒农药，防止病害的进一步扩散。
6. 病害防治措施：包括病田封堵、轮作、间作、深松土地等。
封堵病田可以防止病原菌扩散，轮作和间作可以减少病菌的数量，深松土地可以促进土壤通气和排水。
水稻主要病害生物防治的研究进展一、内容综述随着全球人口的增长和粮食需求的不断提高，水稻作为世界上最重要的粮食作物之一，其产量和质量对人类生存和发展具有重要意义。
然而水稻生产过程中病虫害的发生严重制约了水稻产量的提高和质量的保障。
为了解决这一问题，科学家们对水稻主要病害生物防治的研究取得了显著进展。
本文将综述近年来在水稻主要病害生物防治方面的主要研究进展，包括病原物鉴定、病害监测预警、生物防治技术研究等方面。
首先病原物鉴定是病害防治的基础，通过对水稻病原菌、病毒和寄生线虫等病原物的鉴定，科学家们可以明确病害的类型和来源，为制定针对性的防治措施提供依据。
近年来基因组学技术的发展为水稻病原物鉴定提供了新方法，如基于PCR技术的分子标记辅助鉴定技术、基于转录组测序技术的基因组学分析方法等，这些技术的应用大大提高了病原物鉴定的准确性和效率。
其次病害监测预警是病害防治的关键环节，通过对水稻生长过程中的各项指标进行实时监测，可以及时发现病害的发生和蔓延趋势，为采取有效的防治措施提供科学依据。
近年来随着遥感技术、无人机技术和人工智能技术的发展，水稻病害监测预警技术得到了极大提升，如基于遥感技术的多光谱影像分析方法、基于无人机技术的大范围快速监测方法等，这些技术的应用使得病害监测预警更加精确、高效和全面。
生物防治技术研究是实现水稻病害可持续控制的重要途径，通过研究和应用各种生物防治剂，如微生物制剂、昆虫防控剂和植物源性农药等，可以有效降低化学农药的使用量，减少环境污染，同时提高农业生产的经济效益。
近年来以基因工程为核心的生物防治技术研究取得了重要突破，如抗性基因的克隆和表达、新型生物防治剂的研发等，这些成果为水稻病害生物防治技术的推广应用奠定了坚实基础。
水稻主要病害生物防治的研究进展涉及病原物鉴定、病害监测预警和生物防治技术研究等多个方面，这些研究成果为实现水稻高产、优质、高效生产提供了有力支持。
然而由于水稻生产环境的复杂性和病害种类的多样性，未来仍需进一步深化研究，开发出更多高效、安全、环保的病害防治技术和方法。
㊀山东农业科学㊀２０２３ꎬ５５(８):５６~６４ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.０８.００８收稿日期:２０２２－１０－２０基金项目:国家自然科学基金项目(３２００１９２９)ꎻ山东省自然科学基金项目(ＺＲ２０２０ＭＣ１２５)作者简介:赵晓彤(２０００ )ꎬ女ꎬ山东东营人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为园林植物种质资源创新与应用ꎮＥ－ｍａｉｌ:２５８１１４６９４９＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:王桂清(１９６８ )ꎬ女ꎬ河北泊头人ꎬ博士ꎬ教授ꎬ主要从事植物保护教学与科研工作ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｗａｎｇｇｕｉｑｉｎｇ＠ｌｃｕ.ｅｄｕ.ｃｎ不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响赵晓彤ꎬ王桂清(聊城大学农学与农业工程学院ꎬ山东聊城㊀２５２０００)㊀㊀摘要:采用十字交叉法和血球计数法分析不同培养基㊁温度㊁光照㊁酸碱度㊁碳源和氮源等对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９菌丝生长和孢子形成的影响ꎬ明确两种木霉生长繁殖的最佳条件ꎬ指导其人工扩繁和工厂化生产ꎮ结果表明ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９在含碳源和有机氮的ＰＤＡ㊁ＣＤＡ培养基中ꎬ常温㊁黑暗㊁非强酸强碱培养条件下其菌丝生长良好ꎬ光照㊁果糖㊁牛肉膏培养条件更有利于二者孢子形成ꎻ温度㊁酸碱度和培养基是影响ＳＭＦ２和Ｔ３９孢子形成的主要因素ꎬ３５ħ㊁ｐＨ值为７㊁ＰＤＡ培养基最利于ＳＭＦ２产孢ꎬ３０ħ㊁ｐＨ值为６㊁ＣＤＡ培养基最利于Ｔ３９产孢ꎻ相同条件下ꎬＳＭＦ２的菌丝生长略快ꎬ而Ｔ３９的产孢能力更强ꎻ单糖和有机氮更有利于促进ＳＭＦ２和Ｔ３９产孢ꎮ关键词:培养条件ꎻ长枝木霉ＳＭＦ２ꎻ哈茨木霉Ｔ３９ꎻ菌丝生长ꎻ孢子形成中图分类号:Ｓ４７６.１㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２３)０８－００５６－０９ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＣｕｌｔｕｒｅＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎＧｒｏｗｔｈａｎｄＳｐｏｒｕｌａｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａＬｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＳＭＦ２ａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａＨａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ＺｈａｏＸｉａｏｔｏｎｇꎬＷａｎｇＧｕｉｑｉｎｇ(ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＳｃｈｏｏｌꎬＬｉａｏｃｈｅｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬｉａｏｃｈｅｎｇ２５２０００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａꎬｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬｌｉｇｈｔꎬｐＨꎬｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｓｏｎｔｈｅｈｙｐｈａｇｒｏｗｔｈａｎｄｓｐｏｒｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＳＭＦ２ａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｃｒｏｓｓｍｅｔｈｏｄａｎｄｂｌｏｏｄｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄ.Ｉｔｗａｓａｉｍｅｄｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉ￣ｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｗｏＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｅｃｉｅｓꎬａｎｄｔｏｇｕｉｄｅｔｈｅｉｒａｒｔｉｆｉｃｉａｌｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎａｎｄｆａｃｔｏｒｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＳＭＦ２ａｎｄＴ３９ｈａｄｂｅｔｔｅｒｈｙｐｈａｇｒｏｗｔｈｕｎｄｅｒｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａ￣ｔｕｒｅꎬｄａｒｋꎬｎｏｎ￣ｓｔｒｏｎｇａｃｉｄａｎｄａｌｋａｌｉｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎＰＤＡａｎｄＣＤＡｍｅｄｉａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅａｎｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎꎬａｎｄｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｌｉｇｈｔꎬｆｒｕｃｔｏｓｅａｎｄｂｅｅｆｐａｓｔｅｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｔｈｅｓｐｏｒｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ.ＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬｐＨａｎｄｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｔｈｅｍａｉｎｆａｃｔｏｒｓａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳＭＦ２ａｎｄＴ３９ｓｐｏｒｅｓꎻ３５ħꎬｐＨ＝７ａｎｄＰＤＡｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏＳＭＦ２ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎꎬａｎｄ３０ħꎬｐＨ＝６ａｎｄＣＤＡｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏＴ３９ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ.ＵｎｄｅｒｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎬｔｈｅｈｙｐｈａｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｆＳＭＦ２ｗａｓｓｌｉｇｈｔｌｙｆａｓｔｅｒꎬａｎｄｔｈｅｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆＴ３９ｗａｓｓｔｒｏｎｇｅｒ.Ｍｏｎｏ￣ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏＳＭＦ２ａｎｄＴ３９ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＣｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎻＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍＳＭＦ２ꎻＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ꎻＨｙ￣ｐｈａｇｒｏｗｔｈꎻＳｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ㊀㊀生防真菌在防治作物病害(尤其是土传病害)方面发挥着巨大作用ꎬ其中研究最多和应用最广的为木霉菌(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ.)[１]ꎮ木霉菌广泛分布于不同生态环境中ꎬ以丰富的次生代谢物和强大的竞争能力及重寄生特性实现其生物防治作用ꎬ在土壤修复㊁促进植物生长和控制病害方面发挥着重要作用[２]ꎬ可作为高效㊁经济㊁环保的原材料应用于工业和农业生产[３]ꎮ因其具有生长分布的广泛性㊁种类株系的适应性㊁拮抗真菌的广谱性㊁活性物质的多样性㊁作用机制的复杂性和对环境的友好性等特点而成为最有应用前途的生防因子[４－６]ꎮ最为常见的木霉菌有哈茨木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍ)㊁棘孢木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａａｓｐｅｒｅｌｌｕｍ)㊁长枝木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ)和绿色木霉(Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ)等ꎮ哈茨木霉是目前农业生物防治中最具商业化价值的木霉菌ꎬ应用广泛ꎻ长枝木霉是较为常见的拮抗类木霉ꎬ在植病生防中越来越受到重视ꎮ哈茨木霉Ｔ２２㊁Ｔ３９作为生防产品已登记注册ꎬ不仅可以诱导寄主防御基因表达产生抗病性而防治植物病害ꎬ还可以促进作物生长进而提高生物量[７－９]ꎮ长枝木霉ＳＭＦ２主要通过产生抗菌肽康宁霉素(ｔｒｉｃｈｏｋｏｎｉｎｓꎬＴＫｓ)而对植物病害产生抑制作用ꎬ同时对苦瓜㊁白三叶草等植物具有明显的促生作用[１ꎬ１０]ꎮ木霉菌种类不同㊁菌株不同ꎬ其生态适应性也不同ꎮ绿色木霉ＴＲ－８㊁哈茨木霉ＴＨ－１均可在ＰＤＡ培养基上正常生长ꎻ光照可促进孢子产生ꎬ但二者最适生长温度㊁ｐＨ值等略有不同ꎻ微量元素Ｍｎ对ＴＲ－８菌丝生长有一定的促进作用[１１－１２]ꎮ生物学特性是研究真菌繁殖条件㊁发生规律㊁生态调控等方面的理论基础ꎬ对生防菌的科学利用具有指导作用[１３]ꎮ本试验通过研究不同培养条件下长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９的生物学特性ꎬ明确其生长繁殖条件ꎬ为其人工扩繁和工厂化生产奠定理论基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀供试材料供试菌种为长枝木霉(Ｔ.ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ)ＳＭＦ２和哈茨木霉(Ｔ.ｈａｒｚｉａｎｕｍ)Ｔ３９ꎬ由聊城大学植物病理实验室提供ꎮ将供试菌种在(２５ʃ１)ħ㊁ＬʒＤ(光照ʒ黑暗)＝１２ｈʒ１２ｈ的恒温光照培养箱内采用ＰＤＡ培养基培养３ｄ后ꎬ用打孔器取直径０.７ｃｍ的菌饼备用ꎮ１.２㊀试验设计１.２.１㊀培养基㊀供试培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(ＰＤＡ:去皮马铃薯２００ｇ㊁葡萄糖２０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁察氏培养基(ＣＤＡ:葡萄糖２０ｇ㊁ＫＨ２ＰＯ４０.５ｇ㊁Ｋ２ＨＰＯ４０.６ｇ㊁ＭｇＳＯ４ ７Ｈ２Ｏ０.５ｇ㊁ＮａＣｌ０.１ｇ㊁天门冬酰胺５ｇ㊁ＣａＣｌ２０.１ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁燕麦培养基(ＯＭＡ:燕麦片４０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁基础固体培养基(ＢＣＭ:蛋白胨１０ｇ㊁牛肉浸膏３ｇ㊁Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ㊁ＮａＣｌ５ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)㊁麦芽糖琼脂培养基(ＭＥＡ:麦芽糖２０ｇ㊁琼脂２０ｇ㊁蒸馏水１Ｌ)[１５]共５种ꎮ１.２.２㊀温度㊀以ＰＤＡ培养基为营养源ꎬ温度范围５~４０ħ之间ꎬ设置５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５㊁３０㊁３５㊁４０ħ共８个处理ꎮ１.２.３㊀光照㊀以ＰＤＡ培养基为营养源ꎬ设置全光照㊁光暗交替(ＬʒＤ＝１２ｈʒ１２ｈ)㊁全黑暗３个处理ꎮ１.２.４㊀ｐＨ值㊀以ＰＤＡ培养基为营养源ꎬ使用１.０ｍｏｌ/ＬＨＣｌ溶液和１.０ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ溶液调节ＰＤＡ培养基的ｐＨ值ꎬ设ｐＨ值为３㊁４㊁５㊁６㊁７㊁８㊁９㊁１０㊁１１㊁１２共１０个处理ꎮ１.２.５㊀碳源㊀以ＣＤＡ培养基作为基础培养基ꎬ用供试碳源等量替换其中的葡萄糖(标准碳)ꎬ制成不同碳源培养基ꎮ供试碳源选用蔗糖㊁麦芽糖㊁乳糖㊁果糖㊁海藻糖㊁阿拉伯糖㊁可溶性淀粉㊁微晶纤维素共８种ꎬ并以无碳处理作为空白对照ꎮ１.２.６㊀氮源㊀以ＣＤＡ培养基作为基础培养基ꎬ用供试氮源等量替换其中的天门冬酰胺(标准氮)ꎬ制成不同氮源培养基ꎮ供试氮源选用硫酸铵㊁氯化铵㊁硝酸钠㊁牛肉膏㊁酵母浸膏㊁蛋白胨㊁甘氨酸共７种ꎬ并以无氮处理作为空白对照ꎮ１.３㊀测定项目及方法将高压湿热灭菌后的培养基制成平板(直径９ｃｍ)ꎬ于培养皿内接种木霉菌饼ꎬ１皿１饼ꎬ重复３次ꎮ研究不同培养基㊁温度㊁光照㊁ｐＨ值㊁碳源和氮源对ＳＭＦ２㊁Ｔ３９菌丝生长和产孢量的影响ꎮ不同处理分别于(２５ʃ１)ħ㊁ＬʒＤ＝１２ｈʒ１２ｈ的恒温光照培养箱培养４８ｈ后ꎬ采用十字交叉法测量菌落直径ꎬ７２ｈ后用相机拍照记录培养性状ꎬ采用血球计数法计算产孢量[１４－１５]ꎮ７５㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响１.４㊀数据处理与分析利用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ２０２０处理数据ꎬ用ＡｄｏｂｅＰｈｏｔｏｓｈｏｐ２０２０软件处理照片ꎬ用ＤＰＳ１９.０５中的Ｄｕｎｃａｎ ｓ法进行多组样本间的差异显著性分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀不同培养基对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图１显示ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９在５种供试培养基中均可生长ꎬ菌丝生长呈辐射状ꎬ色素颜色为黄绿色ꎬ培养基不同菌丝色素颜色深浅不同ꎮ其中ꎬ二者在ＭＥＡ培养基上生长均不理想ꎬ菌丝稀薄ꎬ不产生色素ꎬ产孢量小ꎮ不同培养基条件下两种木霉菌丝生长速度和产孢量存在差异ꎮ由图２可知ꎬ二者在ＰＤＡ培养基上生长状况最好ꎬ菌落大㊁菌丝生长旺盛ꎬ产孢量大ꎮＳＭＦ２菌落直径达７.６９ｃｍꎬ是Ｔ３９的１.２５倍(表１)ꎬ产孢量为２.６４ˑ１０１０个/皿ꎻＴ３９菌落直径为６.１６ｃｍꎬ产孢量为３.８６ˑ１０１０个/皿ꎮ在ＣＤＡ㊁ＯＭＡ㊁ＢＣＭ培养基上ꎬ二者生长状况较好ꎬＴ３９的产孢量是ＳＭＦ２的１.２７~６.５５倍(表１)ꎬ且Ｔ３９在ＣＤＡ上的产孢量高达４.５８ˑ１０１０个/皿ꎮ上行图为ＳＭＦ２ꎬ下行图为Ｔ３９ꎬ下同ꎻ从左至右依次为ＰＤＡ㊁ＣＤＡ㊁ＯＭＡ㊁ＢＣＭ㊁ＭＥＡꎮ图１㊀不同培养基条件下两种木霉培养结果比较图２㊀不同培养基对两种木霉菌丝生长和产孢量的影响㊀㊀表１㊀不同培养基下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标ＰＤＡＣＤＡＯＭＡＢＣＭＭＥＡ菌落直径１.２５１.０５０.９７１.０９０.８４产孢量１.４６６.５５１.２７２.０１０.８８㊀㊀注:表中菌落直径的倍数为ＳＭＦ２/Ｔ３９ꎬ产孢量的倍数为Ｔ３９/ＳＭＦ２ꎬ下同ꎮ㊀㊀综合菌丝生长速度㊁产孢量和培养性状ꎬＰＤＡ为ＳＭＦ２菌株生长发育的最佳培养基ꎬＣＤＡ为Ｔ３９的最佳培养基ꎮＴ３９菌株的产孢能力明显大于ＳＭＦ２ꎮ２.２㊀不同温度对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响由图３可知ꎬ两种木霉在２５~３５ħ范围内菌丝生长旺盛ꎬ呈辐射状ꎬ菌落致密ꎬ在整个培养基上密布成堆ꎮ当培养温度ɤ２０ħ或高达４０ħ时ꎬ两种木霉生长状况均较差ꎬ菌丝稀薄ꎬ产孢量少ꎮ由图４可知ꎬ供试温度范围内ꎬ随着温度升高ꎬ两种木霉的菌落直径和产孢量均呈现先升高后降低的变化ꎮＳＭＦ２的菌落直径和产孢量拐点均出现在３５ħꎬ菌落直径最大达８.７５ｃｍꎬ是Ｔ３９的１.２９倍(表２)ꎬ产孢量最高达６１.０６ˑ１０８８５㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀个/皿ꎻ而Ｔ３９的菌落直径拐点出现在２５ħꎬ最大达８.３５ｃｍꎬ产孢量拐点出现在３０ħꎬ最高达２０６.４６ˑ１０８个/皿ꎮ５~３０ħ范围内ꎬ同一温度下ꎬＴ３９的产孢能力强于ＳＭＦ２ꎬ前者的产孢量是后者的１.１１~２３.８３倍(表２)ꎻ而３５~４０ħ时ꎬＴ３９的产孢能力低于ＳＭＦ２ꎬ后者的产孢量是前者的１.０６~１.９６倍ꎮ从左至右依次为５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５㊁３０㊁３５㊁４０ħꎮ图３㊀不同温度条件下两种木霉培养结果比较㊀㊀表明两种木霉在最适培养温度上有差异ꎬＳＭＦ２的菌丝生长和产孢最适温度均为３５ħꎬＴ３９的菌丝生长最适温度为２５~３０ħꎬ产孢最适温度为３０ħꎮ相同温度下Ｔ３９产孢量整体较高ꎮ图４㊀不同温度条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较㊀㊀表２㊀不同温度条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标５ħ１０ħ１５ħ２０ħ２５ħ３０ħ３５ħ４０ħ菌落直径０.９０１.４９２.２４１.２１０.９３０.９８１.２９０.９４产孢量１.１７１.１１４.００３.７０２３.８３１３.６２０.５１０.９５２.３㊀不同光照对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图５显示ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９在３种不同光照条件下均能正常生长ꎬ菌落致密ꎬ菌丝呈辐射状ꎬ生长旺盛ꎮ二者在全光照条件下产孢最多ꎬ光暗交替条件下次之ꎬ全黑暗条件下最少ꎮ由图６可知ꎬ不同光照条件下ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９的菌落直径范围分别为６.３１~８.１３㊁５.７５~６.６７ｃｍꎬ且菌落直径均在全黑暗条件下达到最大ꎬ全光照条件下次之ꎬ光暗交替条件下最小ꎮＳＭＦ２菌丝生长较快ꎬ是Ｔ３９的１.０５~１.２２倍(表３)ꎮ从左到右依次为全光照㊁光暗交替㊁全黑暗ꎮ图５㊀不同光照条件下两种木霉培养结果比较Ｔ３９㊁ＳＭＦ２产孢量均在全光照条件下达到最大ꎬ分别为３３.８３ˑ１０８㊁９.５０ˑ１０８个/皿ꎻ不同光照条件下ꎬＴ３９的产孢量为ＳＭＦ２的２.４５~４.１４倍(表３)ꎮ表明光照条件能够有效增加二者的产孢量ꎬ且同一光照条件下ꎬＴ３９产孢量明显高于ＳＭＦ２ꎮ图６㊀不同光照条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较９５㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响㊀㊀表３㊀不同光照条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标全光照光暗交替全黑暗菌落直径１.０５１.１０１.２２产孢量３.５６２.４５４.１４２.４㊀不同ｐＨ值对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图７显示ꎬ两种木霉在ｐＨ值为４~１１条件下均可生长ꎬ菌落相对致密ꎬ菌丝生长比较旺盛ꎬ孢子均匀密布整个培养基ꎻ但极强的酸㊁碱环境即ｐＨ值为３㊁１２条件下ꎬ二者生长状况较差ꎬｐＨ值为１２条件下菌丝生长缓慢ꎬ菌落较小ꎬ产孢量较少ꎻｐＨ值为３条件下由于酸性过大ꎬ培养基无法凝固ꎬ两种菌生长缓慢ꎬ产孢极少ꎮ从左到右依次为ｐＨ＝３㊁４㊁５㊁６㊁７㊁８㊁９㊁１０㊁１１㊁１２ꎮ图７㊀不同ｐＨ值条件下两种木霉培养结果比较㊀㊀由图８可知ꎬｐＨ值为４~１１条件下ꎬＳＭＦ２㊁Ｔ３９的菌丝生长和产孢量存在明显差异ꎮＳＭＦ２的菌落直径范围为６.５１~８.４５ｃｍꎬｐＨ值为９时菌落直径最大ꎻＴ３９的菌落直径范围为４.９５~７.４８ｃｍꎬｐＨ值为４时菌落直径最大ꎬ且随ｐＨ值增大整体呈减小趋势ꎮｐＨ值为４~５时ꎬＴ３９的菌丝生长比较快ꎬ其菌落直径是ＳＭＦ２的１.０７~１.１５倍ꎻｐＨ值为６~１１时ꎬＳＭＦ２的菌丝生长比较快ꎬ其菌落直径是Ｔ３９的１.１７~１.５９倍(表４)ꎮｐＨ值为４~１１条件下ꎬＳＭＦ２的产孢量为(０.４６~２.９１)ˑ１０１０个/皿ꎬｐＨ值为７时孢子量最多ꎻＴ３９的产孢量为(１.４８~５.２２)ˑ１０１０个/皿ꎬｐＨ值为６时孢子量最多ꎮ相同ｐＨ值下Ｔ３９的产孢量是ＳＭＦ２的１.２５~４.２０倍(表４)ꎮ表明中性偏碱环境有利于ＳＭＦ２的生长和繁殖ꎬ其菌丝生长和产孢的最适ｐＨ值分别为９和７ꎻ偏酸条件则更有利于Ｔ３９的生长发育ꎬ其菌丝生长和产孢的最适ｐＨ值分别为４和６ꎮ图８㊀不同ｐＨ值条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较㊀㊀表４㊀不同ｐＨ值条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标３４５６７８９１０１１１２菌落直径１.２９０.８７０.９３１.２４１.１７１.２１１.５９１.２３１.５４１.３４产孢量４.８９３.６８４.２０３.１３１.２５１.３２１.７６１.９３１.４３１.１７２.５㊀不同碳源对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图９显示ꎬ两种木霉在无碳培养基上可产孢ꎬ从左到右依次为无碳㊁果糖㊁阿拉伯糖㊁海藻糖㊁麦芽糖㊁蔗糖㊁乳糖㊁可溶性淀粉㊁微晶纤维素ꎮ图９㊀不同碳源条件下两种木霉培养结果比较０６㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀但产孢量较少㊁生长较差ꎬ菌落直径相对较小ꎬ菌丝稀疏ꎻ在其他碳源培养基上菌丝生长均较旺盛ꎬ产孢量大ꎬ呈辐射状ꎬ分生孢子密布于菌落上ꎮ不同碳源处理下两种木霉的生长发育状况较无碳对照均明显提高ꎬ表明其对碳源的要求不严格ꎬ但对单糖(果糖㊁阿拉伯糖)的利用效果优于双糖(海藻糖㊁麦芽糖㊁蔗糖㊁乳糖)和多糖(可溶性淀粉㊁微晶纤维素)ꎮ微晶纤维素由于自身溶解性较差ꎬ以其为碳源时ꎬ菌丝生长和产孢能力不理想ꎬ但其生长发育状况仍优于无碳对照ꎮ由图１０可知ꎬ无碳条件下ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９菌落直径均低于５ｃｍꎬ产孢量不超过１.００ˑ１０１０个/皿ꎮ不同碳源处理下ꎬＳＭＦ２的菌落直径为５.１６~７.７１ｃｍꎬ产孢量为(０.９５~１.６２)ˑ１０１０个/皿ꎬ分别是无碳培养基的１.０６~１.５９㊁２.７１~４.６３倍ꎻＴ３９的菌落直径为４.２０~５.６２ｃｍꎬ产孢量为(１.５６~２.５０)ˑ１０１０个/皿ꎬ与无碳培养基相比ꎬ前者产孢量是后者的１.６８~２.６９倍ꎬ菌落直径的倍数关系在１.０１~１.３６之间ꎬ差异较小ꎮ阿拉伯糖为ＳＭＦ２和Ｔ３９菌丝生长的最适碳源ꎬ果糖为二者产孢的最佳碳源ꎮ由表５可知ꎬ不同碳源条件下ꎬＳＭＦ２的菌丝生长较快ꎬ菌落直径是Ｔ３９的１.２３~１.４７倍ꎻＴ３９的产孢能力明显大于ＳＭＦ２ꎬ前者是后者的１.１０~１.６４倍ꎮ图１０㊀不同碳源条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较㊀㊀表５㊀不同碳源条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标无碳果糖阿拉伯糖海藻糖麦芽糖蔗糖乳糖可溶性淀粉微晶纤维素菌落直径１.１７１.４７１.３７１.４４１.４１１.３３１.３３１.３５１.２３产孢量２.６５１.５４１.４２１.５２１.５５１.４６１.１０１.５５１.６４２.６㊀不同氮源对两种木霉菌丝生长和产孢能力的影响图１１显示ꎬ无氮条件下ꎬ两种木霉的孢子肉眼几乎不可见ꎮ相比较无氮对照ꎬ两种木霉在以蛋白胨㊁酵母浸膏㊁牛肉膏㊁甘氨酸为氮源的培养基上生长良好ꎬ菌丝致密ꎬ产孢量较多ꎻ而在其他氮源培养基中ꎬ菌丝稀薄ꎬ产孢量少ꎬ生长㊁产孢均不理想ꎮ从左到右依次为无氮㊁蛋白胨㊁牛肉膏㊁酵母浸膏㊁甘氨酸㊁硝酸钠㊁硫酸铵㊁氯化铵ꎮ图１１㊀不同氮源条件下两种木霉培养结果比较㊀㊀由图１２可知ꎬ不同氮源条件下两种木霉的菌丝生长差异明显ꎮ在以有机氮(蛋白胨㊁牛肉膏㊁酵母浸膏)㊁氨基酸态氮(甘氨酸)为氮源的培养基上生长速率均快于铵态氮(硫酸铵㊁氯化铵)和硝态氮(硝酸钠)ꎮ在有机氮㊁氨基酸态氮为氮源的培养基上菌落直径为４.２８~７.６９ｃｍꎬ在其他氮源培养基上的菌落直径仅为０.９２~１.８７ｃｍꎮ其中ꎬＳＭＦ２在有机氮㊁氮基酸态氮㊁硝态氮为氮源的培养基上菌落直径大于Ｔ３９ꎬ前者是后者的１.０３~１.３９倍(表６)ꎮ１６㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响无氮条件下ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９的菌落直径分别为３.７２㊁４.７２ｃｍꎬ产孢量为９.１７ˑ１０８㊁７３.７５ˑ１０８个/皿ꎮ不同有机氮源条件下ꎬＳＭＦ２产孢量达到(３０４.３８~５２８.３３)ˑ１０８个/皿ꎬＴ３９产孢量达到(９１.８８~１５９.３８)ˑ１０８个/皿ꎬＳＭＦ２的产孢量是Ｔ３９的２.９４~５.６９倍ꎻ而以硝态氮和铵态氮为氮源时ꎬＴ３９的产孢能力增强ꎬ其产孢量是ＳＭＦ２的２.７３~４.６８倍(表６)ꎮ㊀㊀表６㊀不同氮源条件下ＳＭＦ２与Ｔ３９生物量的倍数比较指标无氮蛋白胨牛肉膏酵母浸膏甘氨酸硝酸钠硫酸铵氯化铵菌落直径０.７９１.３９１.０５１.０３１.０６１.１６０.８６０.８１产孢量８.０５０.１８０.３００.３４０.４３４.６８３.０６２.７３㊀㊀添加有机氮源培养基的ＳＭＦ２和Ｔ３９菌落直径㊁产孢量分别是无氮源添加的１.１１~２.０７㊁１.２５~５７.６４倍ꎮ且两种木霉的菌落直径和产孢量均在有机氮源培养基中达到最大值ꎬ其菌落直径和产孢量的最佳氮源分别为酵母浸膏和牛肉膏ꎬ表明二者对有机氮源的利用情况优于其他氮源ꎮ图１２㊀不同氮源条件下两种木霉菌丝生长和产孢量比较３㊀讨论培养基㊁温度㊁光照㊁酸碱度㊁碳源和氮源均对木霉菌的菌丝生长和孢子形成有不同影响ꎮ３.１㊀不同培养基对两种菌培养的影响培养基是微生物学研究和微生物发酵工业的基础ꎬ其营养组成直接影响微生物生长发育ꎮ目前培养木霉菌常用的培养基有ＰＤＡ㊁ＣＤＡ㊁ＭＥＡ㊁ＰＳＡ㊁糖浆培养基㊁玉米粉葡萄糖培养基㊁小麦汁培养基和玉米培养基[１６]等ꎮ马铃薯是ＰＤＡ的重要组分ꎬ含有丰富的Ｂ族维生素㊁纤维素㊁微量元素㊁氨基酸㊁蛋白质㊁脂肪和优质淀粉等营养元素ꎬ为微生物生长提供充裕碳源㊁氮源㊁维生素和无机盐ꎻ葡萄糖是活细胞的能量来源和新陈代谢的中间产物ꎬ能够提供优质碳源ꎮＣＤＡ中葡萄糖和天门冬酰胺为重要的碳源㊁氮源ꎬ含量较高的氯化钠具有抑制细菌和减缓毛霉生长的作用ꎬ其他成分则提供必需离子ꎻＯＭＡ中的燕麦含有丰富的蛋白质㊁脂肪㊁淀粉㊁微量元素和膳食纤维ꎬ是氮源㊁碳源和微量元素等的重要来源ꎻＢＣＭ中的牛肉膏和蛋白胨为碳源㊁氮源㊁磷酸盐和维生素的主要来源ꎬ氯化钠则提供无机盐ꎮ有研究表明ꎬ长枝木霉Ｔ０５在ＰＤＡ㊁ＭＥＡ㊁ＣＤＡ㊁ＢＣＭ上都能生长ꎬ且菌丝在ＰＤＡ上生长最快[１７]ꎻ哈茨木霉ＴＨ－１分别在ＰＤＡ㊁ＭＥＡ㊁ＣＤＡ㊁ＢＣＭ上培养均能产孢ꎬ其中ＰＤＡ为最适培养基[１２]ꎮ本试验中ＰＤＡ㊁ＣＤＡ㊁ＯＭＡ㊁ＢＣＭ四种培养基因营养成分丰富ꎬ成为ＳＭＦ２和Ｔ３９菌丝生长及孢子繁殖的适宜培养基ꎬ以ＰＤＡ和ＣＤＡ最佳ꎬ而ＭＥＡ培养基成分单一ꎬ除凝固剂琼脂外ꎬ仅含有麦芽糖ꎬ故两种木霉在其上生长发育不理想ꎮ这与前人研究结果大体一致ꎬ进一步证明木霉菌株对营养环境的广泛适应性ꎮ３.２㊀不同温度对两种菌培养的影响木霉菌是一种嗜温真菌ꎬ棘孢木霉ＰＺ６在１５~３７ħ均能生长ꎬ２５~３７ħ菌丝生长较好ꎬ以３０ħ菌丝生长最快[１６]ꎻ长枝木霉ＨＱ１㊁非洲哈茨木霉ＢＢ１２菌株适宜培养温度为２８~３３ħ[１８]ꎮ本试验中Ｔ３９㊁ＳＭＦ２在２５~３５ħ范围内生长发育良好ꎻ在高温(４０ħ)或低温(２０ħ及以下)环境条件下ꎬ由于没有达到木霉菌生长发育的起点温度或有效积温积累不足ꎬ或者环境温度过高导致菌体内蛋白质㊁核酸等重要组成物质遭受不可逆的破坏ꎬ致使其生长较差ꎮ３.３㊀不同光照对两种菌培养的影响光为木霉菌菌丝生长和孢子形成提供能量ꎮ光照对哈茨木霉ＴＨ－１菌丝生长影响不大但明显影响菌株产孢量ꎬ光照时间越长产孢量越大[１２]ꎻ全黑暗条件有利于长枝木霉ＧＡＡＳＬ３－１－０.８菌丝的营养生长ꎬ而光暗交替条件则对产孢有利[１９]ꎬ即光照可以促进分生孢子产生ꎮ本试验中２６㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀Ｔ３９㊁ＳＭＦ２在全光照㊁光暗交替㊁全黑暗３种条件下均可正常生长ꎬ全黑暗条件对菌丝生长更为有利ꎬ而全光照条件对产孢更有利ꎮ这与前人的研究结果相吻合ꎬ且相同光照条件下ꎬ长枝木霉ＳＭＦ２菌丝生长较快ꎬ而哈茨木霉Ｔ３９产孢量更大ꎮ３.４㊀不同ｐＨ值对两种菌培养的影响ｐＨ值不仅通过影响真菌体内的酶活性而影响酶促反应效率ꎬ而且还通过影响膜结构稳定性和细胞质膜的通透性而影响其对营养物质的吸收ꎮ有研究表明ꎬ棘孢木霉ＰＺ６最适生长和产孢的ｐＨ值为５~９[１６]ꎻ哈茨木霉Ｔｈ－８１㊁短密木霉(Ｔ.ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ)Ｔｂ－５０和长枝木霉Ｔ１－７０在ｐＨ值为２~７时均能生长ꎬ最适生长的ｐＨ值为４[２０]ꎮ本试验中ꎬＴ３９㊁ＳＭＦ２对酸碱度的适应性较强㊁范围较广ꎬ在ｐＨ值为４~１１条件下均生长较好ꎬ且中性至弱碱性(ｐＨ值７~９)为ＳＭＦ２培养的最佳酸碱条件ꎬ其菌丝生长㊁产孢最适ｐＨ值分别为９和７ꎻＴ３９培养的最佳酸碱条件为弱酸和偏酸(ｐＨ值４~６)ꎬ其菌丝生长㊁产孢最适ｐＨ值分别为４和６ꎮ３.５㊀不同碳源对两种菌培养的影响碳源物质是真菌生长的碳素来源ꎮ木霉菌对单糖㊁双糖㊁多糖㊁嘌呤㊁嘧啶和氨基酸等的利用效果均较好[２１]ꎮ不同木霉菌其最适碳源有所差异ꎬ长枝木霉ＧＡＡＳＬ３－１－０.８以葡萄糖㊁麦芽糖㊁果糖和乳糖为碳源时ꎬ菌丝生长和产孢较好ꎬ葡萄糖为最适碳源[１９]ꎻ木糖㊁果糖和蔗糖有利于哈茨木霉Ｔ２１的菌丝生长和产孢ꎬ木糖为最适碳源[２２]ꎮ本试验中ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９在无碳源添加的培养基中虽能生长ꎬ但其菌丝质量和产孢量均不理想ꎮ碳源的加入提供了必要的营养物质ꎬ提升其生长发育质量ꎮ微晶纤维素主要成分为以β－１ꎬ４－葡萄糖苷键结合的直链式多糖类物质ꎬ由于自身不易溶解致使碳源的促生作用较差ꎮ单糖(果糖㊁阿拉伯糖)补充热能的效果比双糖㊁多糖更快ꎬ故以果糖和阿拉伯糖为碳源时ＳＭＦ２和Ｔ３９的生长发育最优ꎬ且ＳＭＦ２的菌丝生长优于Ｔ３９ꎬ但Ｔ３９的产孢能力更强ꎬ这可为二者混合使用以防治病害提供理论基础ꎮ３.６㊀不同氮源对两种菌培养的影响氮源是真菌生长的重要氮素来源ꎬ主要用于合成蛋白质等含氮物质ꎬ有助于产孢ꎮ有机氮源像蛋白胨㊁牛肉膏和酵母浸膏等成分复杂㊁营养丰富ꎬ微生物在其培养基中常表现出生长旺盛㊁菌体增长迅速等特点ꎮ有研究表明ꎬ蛋白胨和酵母膏分别为长枝木霉Ｔ０５和ＧＡＡＳＬ３－１－０.８营养生长和产孢的最适氮源[１７ꎬ１９]ꎬ哈茨木霉Ｔ２１在以牛肉膏为氮源的培养基中菌丝生长和产孢最优[２２]ꎮ氨基酸态氮(甘氨酸)存在于土壤蛋白质和多肽类化合物中ꎬ降解后只释放出相应的氨基酸为微生物生长发育提供单一营养ꎻ硝态氮和铵态氮为无机氮源(硫酸铵㊁氯化铵㊁硝酸钠)ꎬ易被菌体直接利用ꎬ促进菌体生长ꎬ但与有机氮源相比ꎬ因其成分简单㊁缺乏营养物质㊁利用效率低致使木霉菌菌丝稀薄㊁产孢量较少ꎮ因此ꎬ相比于氨基酸态氮㊁硝态氮和铵态氮ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９在以有机氮(蛋白胨㊁牛肉膏㊁酵母浸膏)为氮源的培养基中生长发育更优ꎬ有机氮源为ＳＭＦ２和Ｔ３９生长发育的适宜氮源ꎬ这与前人的研究结果一致ꎮ且ＳＭＦ２和Ｔ３９对氮源的要求相较于碳源而言更严格ꎮ４㊀结论本研究结果表明ꎬＳＭＦ２和Ｔ３９具有广泛的适应性ꎬ对环境条件要求不严格ꎬ在常温㊁黑暗㊁非强酸强碱㊁含有碳源和有机氮源的条件下ꎬ二者的菌丝生长和孢子形成状况均较为优良ꎮ光照㊁果糖㊁牛肉膏更有利于二者孢子形成ꎻＰＤＡ和ＣＤＡ最适宜产孢ꎻ且二者对氮源的要求相较于碳源而言更严格ꎬ两种木霉在无碳条件下可产孢ꎬ但产孢量较少ꎬ而在无氮条件下孢子肉眼几乎不可见ꎮＳＭＦ２和Ｔ３９在添加碳源培养基中的菌落直径㊁产孢量是无碳源添加的１.０１~１.５９㊁１.６８~４.６３倍ꎬ而在添加有机氮源培养基中的菌落直径㊁产孢量是无氮源添加的１.１１~２.０７㊁１.２５~５７.６４倍ꎮ相同条件下ꎬＳＭＦ２菌丝生长较快ꎬ而哈茨木霉Ｔ３９产孢能力更高ꎮ３５ħ㊁ｐＨ值为７时最利于ＳＭＦ２产孢ꎬ而３０ħ㊁ｐＨ值为６时最利于Ｔ３９产孢ꎮ人工扩繁时ꎬ可通过调节环境温度和培养基酸碱度调控ＳＭＦ２㊁Ｔ３９的产孢情况ꎻ有机氮和单糖更有利于ＳＭＦ２和Ｔ３９菌丝生长和孢子形成ꎮ３６㊀第８期㊀㊀㊀㊀㊀赵晓彤ꎬ等:不同培养条件对长枝木霉ＳＭＦ２和哈茨木霉Ｔ３９生长与产孢的影响参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀王永阳ꎬ杜佳ꎬ高克祥.苦瓜枯萎病生防木霉的筛选鉴定及其定殖的ｑＰＣＲ检测[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０１８ꎬ５０(８):１１０－１１５.[２]㊀ＲａｎｉｍｏｌＧꎬＴｈｕｌａｓｉＶꎬＳｈｉｊｉＧꎬｅｔａｌ.ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌａｃｃａｓｅｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｙｅｄｅｃｏ￣ｌｏｕｒｉｓａｔｉｏｎ[Ｊ].ＢｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ１６:４００－４０４.[３]㊀ＢｏｒｉｓｏｖａＡＳꎬＥｎｅｙｓｋａｙａＥＶꎬＪａｎａＳꎬｅｔａｌ.ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒｅꎬｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｄｙｎａｍｉｃｓｉｎＧＨ７ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒｏ￣ｌａｓｅｓｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａａｔｒｏｖｉｒｉｄｅꎬＴ.ｒｅｅｓｅｉａｎｄＴ.ｈａｒｚｉａｎｕｍ[Ｊ].ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＢｉｏｆｕｅｌｓꎬ２０１８ꎬ１１(１):５. [４]㊀邓薇ꎬ张祖衔ꎬ曹宇航ꎬ等.绿色木霉缓解干旱胁迫对玉米幼苗根系生长的影响[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０２２ꎬ５４(２):４０－４５. [５]㊀ＢａｇｅｗａｄｉＺＫꎬＭｕｌｌａＳＩꎬＮｉｎｎｅｋａｒＨＺ.ＲｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｂａｓｅｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｋｅｒａｔｉｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍｉｓｏｌａｔｅＨＺＮ１２ｕｓｉｎｇｃｈｉｃｋｅｎｆｅａｔｈｅｒｗａｓｔｅａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｅｈａｉｒｉｎｇｏｆｈｉｄｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬ２０１８ꎬ６(４):４８２８－４８３９.[６]㊀ｄｅＯｌｉｖｅｉｒａＧＳꎬＡｄｒｉａｎｉＰＰꎬＲｉｂｅｉｒｏＪＡꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｍｏｌｅｃｕ￣ｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｎｅｐｏｘｉｄｅｈｙｄｒｏｌａｓｅｆｒｏｍＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉｉｎｃｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈｕｒｅａｏｒａｍｉｄｅ￣ｂａｓｅｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１９ꎬ１２９:６５３－６５８. [７]㊀李玲ꎬ刘宝军ꎬ杨凯ꎬ等.木霉菌对小麦白粉病的田间防效研究[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０２１ꎬ５３(７):９６－１００. [８]㊀ＰｅｒａｚｚｏｌｌｉＭꎬＭｏｒｅｔｔｏＭꎬＦｏｎｔａｎａＰꎬｅｔａｌ.Ｄｏｗｎｙｍｉｌｄｅｗｒｅ￣ｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９ｉｎｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｇｒａｐｅｖｉｎｅｓｐａｒｔｉａｌｌｙｍｉｍｉｃｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓ[Ｊ].ＢＭＣＧｅｎｏｍｉｃｓꎬ２０１２ꎬ１３(１):６６０. [９]㊀ＨａｒｅｌＹＭꎬＭｅｈａｒｉＺＨꎬＲａｖ￣ＤａｖｉｄＤꎬｅｔａｌ.Ｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅｔｏｇｒａｙｍｏｌｄｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｏｍａｔｏｂｙｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉａｚｏｌｅａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｈａｒｚｉａｎｕｍＴ３９[Ｊ].Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１４ꎬ１０４(２):１５０－１５７.[１０]商娜.长枝木霉菌对白三叶草病害的防治机理及其对植物生长影响的研究[Ｄ].聊城:聊城大学ꎬ２０２１.[１１]纪明山ꎬ李博强ꎬ许远ꎬ等.绿色木霉ＴＲ－８菌株的生物学特性研究[Ｊ].沈阳农业大学学报ꎬ２００４ꎬ３５(３):１９５－１９９. [１２]李梅云ꎬ谭丽华ꎬ方敦煌ꎬ等.哈茨木霉的培养及其对烟草疫霉生长的抑制研究[Ｊ].微生物学通报ꎬ２００６ꎬ３３(６):７９－８３. [１３]王桂清ꎬ曾路ꎬ马迪ꎬ等.我国近１０年植物致病真菌生物学特性研究综述[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０１８ꎬ４６(１９):１－５. 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