光合菌的检验方法

西南大学崇德湖中紫色非硫光合细菌的分离及初步鉴定摘要：西南大学校园崇德湖水体污染较严重，而紫色非硫光合细菌可以净化水体，因此对该湖水样进行鉴定，鉴定其紫色非硫光合细菌数量的多少。

利用特异性培养基对西南大学校园崇德湖水样进行富集、分离和纯化, 得到了1株紫色非硫细菌( PNSB) , 依据细菌形态特征及群落形态特征及特性观察实验, 初步鉴定这些光合细菌属于红篓菌属细菌。

关键词：紫色非硫光合细菌；分离；鉴定；崇德湖正文：一般湖中生物在死亡后尸体堆积于湖中。

这些物质腐败后产生的氨氮、硫化氢等有害物质直接污染水体及池底, 这些有害物质除直接危害养殖对象外, 同时也是病原微生物的营养源, 使病菌大量繁殖. 紫色非硫细菌( PNSB) 是光合细菌( PSB) 中最重要的一大类, 是无氧光合细菌中种属最多、分布最广、形态生理生化特征最为多样、系统发育最为复杂的一群。

紫色非硫细菌代谢类型多样, 具光合、固碳、降解大分子有机物、固氮、脱氮、硝化、反硝化、硫化物氧化等多种功能, 且细胞富含蛋白质、氨基酸等多种生理活性物质, 因而成为具有净化养殖水体、增加动物营养、促进生长和增强防病抗病能力等功能的重要微生物资源。

本课题采集校园湖中水样, 对分离出的紫色非硫细菌进行了生物学特性的研究及初步鉴定。

一、材料和方法：（一）样品：西南大学崇德湖水样（二）培养基：1、富集培养基成分：KH2PO4 0.5g；CH3COONa 3g；MgSO4·7H2O 0.2g；CaCl2·6H2O 0.05g；酵母膏0.05g；CH3CH2COONa 0.3g；K2HPO4 0.3g；（NH4）2SO4 0.3g；NaCl0.1g；pH 7.2；蒸馏水100mL。

2、分离培养基成分：酵母膏3g；蛋白胨3g；琼脂5g；CaCl2·6H2O 0.3g；NaCl0.3gMgSO4·7H2O 0.5g；pH 6.8；蒸馏水100mL。

高产辅酶Q10光合细菌的筛选及鉴定光合细菌（Photosynthetic bacteria，PSB）是一大类能利用光能作为能源进行不放氧光合作用的原核生物的总称，是地球上最早出现的具有原始光能合成体系的原核生物，除蓝细菌外，都能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作氢供体兼作碳源，进行不放氧的光合作用以合成自身物质[1]。

光合细菌广泛分布在海洋、湖泊、江河、水田和活性污泥等各个角落，能充分利用光能和各种有机物为其营养源进行自身的营养繁殖[2]。

光合细菌营养丰富，细胞干物质中蛋白质含量超过60%，含有多种维生素，尤其是B族维生素含量极为丰富，VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远高于酵母[3]，在人类生活的多方面都具有极其重要的作用。

光合细菌中辅酶Q10（CoQ10）的产量较高，尤其是红螺菌科细菌。

Yoshida等[4]报道了用Rhodobacter sphaeroides KY - 4113生产CoQ10。

目前日本已实现利用光合细菌工业化发酵生产CoQ10，而国内应用光合细菌发酵生产的技术还未成熟，主要还是用来净化水体、作为生物肥料以及动物饲料添加剂[5～7]。

CoQ10又称泛醌，是一种脂溶性醌类化合物，主要存在于动植物和微生物体内，在细胞内与线粒体内膜结合，作为生物体内细胞呼吸链上的电子递氢体和能量代谢的激活剂，是人体重要的生化辅酶之一。

CoQ10在心血管疾病的治疗中起重要作用，并可提高人体免疫力和治疗人体免疫系统疾病，是一种临床价值很高的生化药物，近年来已广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗[8，9]。

因此，筛选高产CoQ10的光合细菌具有积极的现实意义。

我们利用富集培养基从池塘污泥中富集和分离出5株光合细菌，对这5株光合细菌产生的CoQ10进行了定性定量分析，并对CoQ10产量最高的菌株进行了表型特征、生理生化特性及16S rDNA的系统发育分析，为以后提高CoQ10产量提供菌株材料。

光合细菌的分离及初步鉴定【摘要】利用从西南大学北校区崇德湖的边泥，富集分离得到两种光合细菌，该菌株厌氧培养后呈现出红色和绿色，革兰氏染色呈阴性，通过形态学观察及文献资料查询鉴定，初步鉴定为该菌株属于红假单胞菌属和蓝细菌。

【关键词】光合细菌富集分离鉴定目的初步了解无氧操作，学会无菌操作和革兰氏染色，掌握微生物实验的基本技能，学习分离厌氧光合细菌及初步鉴定的方法。

原理光合细菌在有光照缺氧的环境中能进行光合作用，利用光能进行光合作用，利用光能同化二氧化碳，与绿色植物不同的是，它们的光合作用是不产氧的。

光合细菌在自身的同化代谢过程中，又完成了产氢、固氮、分解有机物三个自然界物质循环中极为重要的化学过程。

从厌氧且能得到光照的环境采样，选用特定的富集和分离培养基，在厌氧并有光照的条件下进行培养，可分离到不同的光合细菌。

材料与用具1、材料崇德湖池塘边透光处采取淤泥2、培养基及试剂光合细菌液体富集培养基（以下配方为500ml所用）：CH3COONa 1.5 g；CH3CH2COONa 0.15 g；NaCl 0.5 g；(NH4)2SO4 0.15 g；MnSO4 12.5 mg；K2HPO4 0.15g；KH2PO4 0.25 g；CaCl2 0.025 g；MgSO4•7H2O 0.1 g；FeSO4•7H2O 0.0025 g；酵母膏0.05 g；蛋白胨0.005 g；蒸馏水500 ml；pH 7．0光合细菌分离培养基（以下配方为500ml用）：CH3COONa 1.5g；CH3CH2COONa 0.15g；NaC1 0.25 g；NH4CI 0.5 g；MgSO4•7H2O 0.1g；K2HPO4 0.15g；KH2PO4 0.25 g；CaC12 0.025g；MnC12•4H2O 0．0015 g；FeSO4-7H2O 0.0025 g；酵母膏0.05g；蛋白胨0.005 g；谷氨酸0.0001 g；蒸馏水500 ml；琼脂10 g；pH 7.2—7.4无菌水、无菌液体石蜡3、仪器及用具光照培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、三角瓶、培养皿、试管、接种环、接种针、玻璃珠等。

临床细菌常规检验方法1.样本收集：通常采用微生物标本采集套装，如采血培养瓶、骨髓培养瓶、尿培养瓶、分泌物培养瓶等。

不同类型的标本要按照不同的采集方法进行采集，以确保样本的纯度和无污染。

2.样本处理：在获得样本后，要进行适当的处理，如血液样本要进行离心分离，分离出红细胞和血浆/血清。

尿液样本要进行离心去除悬浊物等。

3.细菌培养：将已处理的样本分别接种到含有适当培养基的培养皿中，并在适当温度和湿度下培养一段时间。

通常常规培养采用的培养基包括血浆琼脂、麦康凯琼脂等。

培养时间通常为24-48小时，特殊细菌可能需要更长的培养时间。

4.细菌鉴定：对培养出的菌落进行初步的形态学鉴定，如观察菌落形状、大小、颜色等。

然后进行革兰染色，观察细菌的形态特征，如是否革兰阳性或革兰阴性。

根据初步鉴定的结果，可以选择进一步的生化试验或分子生物学检测，如氧化/发酵试验、羟基酸钠试验、目标序列扩增等。

最终确定细菌的种类和特征。

5.药敏试验：对已鉴定出的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各类抗生素的敏感性。

药敏试验通常采用纸片扩散法或肉汤稀释法，通过观察菌落的生长抑制区域大小来判断细菌对抗生素的敏感程度。

6.结果分析和报告：根据细菌培养和鉴定的结果以及药敏试验的结果，进行结果分析和判断。

最后将结果整理成报告，提供给临床医生参考，帮助临床医生做出正确的诊断和治疗决策。

总的来说，临床细菌常规检验方法包括了样本收集、样本处理、细菌培养、细菌鉴定、药敏试验等步骤。

这些步骤的顺序和方法都有一定的规范和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。

临床细菌常规检验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，可以帮助医生选择合适的抗生素治疗方案，提高治疗效果。

光合细菌分离筛选与培养着色菌属或称红硫菌属的分离与纯化培养，着色细菌与绿菌属一样也是光合细菌，但它们除了含有叶绿素外，还含有胡罗卜素，而且后者占优势。

其细胞除球形外．有柱状，偶有弯曲有荚膜及极生鞭毛，能运动，细胞团块呈深浅不一的红色或紫红色。

在有硫化氢条件下生长时，能氧化硫化氢与硫，累积硫于细胞内，而绿色硫细菌却沉硫于细胞外。

分布在有腐烂藻类植物的海泥和淡水泥中。

1 分离培养基成分及其配制，由于此种完全培养基的有些成分不能在高压灭菌．或在高温下不相容必须先制备好基础培养基，然后把其他成分的无菌溶液加到冷基础培养基中。

（1）基础培养基：NH4Cl 0.1 克 KH2PO40.1 克 MgCl20.05克 NaCl海生种30 克淡水种10克琼脂 20克水 925毫升，溶解以上无机盐于水中，加入琼脂，加热至121℃ 15分钟，使琼脂溶解，分装于试管或螺旋口瓶里．121 ℃蒸汽下灭菌15分钟。

不加琼脂可作为液体培养基。

（2）无菌碳酸氛钠溶液：将NaHCO3 5克加水至100 毫升，在121℃蒸汽下灭菌15 分钟。

（3）无菌硫化钠溶液：此液既作为HS-的来源，又起脱氧剂作用，若是预先配制，必须把它保存在没有氧的密闭容器里，否则应在临用前配制。

取Na2S·9H2O 5克加水至100 毫升，在121 ℃蒸汽下灭菌15分钟．（4）完全培养基：基础培养基（融化冷至45 ℃） 10毫升 NaHCO3溶液 0.4毫升 Na2S9H2O 0.2毫升，依次无菌地如到基础培养基中，混匀后可用。

2.分离与纯化培养（1）分离培养：在广口玻璃瓶底放一层0.5-1厘米厚的混有腐烂海藻的海泥，用海水覆盖，暴露于光下。

直至培养器最靠近光源的壁上长出红色菌为止。

这些红色生长物通常含有着色菌．它的生长决定于泥中硫酸盐的还原，和随后释放的H2S。

（2）纯化培养①深层试管法：a 、选取具有着色菌特征的红色生长物（已用显微镜检查过细胞形态），放于一定量的完全培养液中，混匀。

细菌鉴定及检测方法细菌是一类微生物，其病原性和耐药性等特性对人类健康和环境安全有着重要影响。

因此，准确的细菌鉴定和检测方法对于疾病诊断、食品安全、环境监测以及抗生素治疗等领域至关重要。

本文将详细介绍常用的细菌鉴定和检测方法。

一、细菌鉴定方法1.形态学鉴定：通过观察细菌的形态特征，如细胞形状、大小、颜色等，可以初步判断其属于哪一类菌。

这种方法主要适用于形态特征非常典型的细菌。

2.染色法鉴定：常用的细菌染色方法有革兰氏染色、抗酸染色等。

革兰氏染色可以根据细菌的细胞壁特性将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。

抗酸染色适用于检测酸忍受性细菌，如结核分枝杆菌等。

3.生理生化特性鉴定：这是一种常用的鉴定细菌的方法，通过观察细菌对特定物质的代谢反应，例如对糖、气体等的发酵、氧要求等，可以初步确定细菌的鉴定组。

4.分子生物学鉴定：分子生物学方法可以通过提取细菌基因组DNA或RNA，利用PCR扩增、序列分析、16SrRNA测序等技术，从而精确确定细菌的鉴定种属。

分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，广泛应用于细菌鉴定中。

二、细菌检测方法1.培养法：这是一种常用的细菌检测方法，通过在富含营养物的培养基上培养细菌，并根据菌落形态、色素、气体产生等进行初步鉴定。

培养法可以用于检测食品、水源、空气中的细菌等。

然而，一些特殊的细菌可能无法在常规培养条件下生长，所以培养法在一些情况下可能会有限制。

2.免疫学方法：包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术。

这些方法利用细菌表面特异的抗原与特定抗体的结合反应来检测细菌，并通过检测结果的颜色或荧光信号来判断细菌是否存在。

免疫学方法具有高度的特异性和灵敏性，适用于检测特定细菌的存在或细菌相关的抗体等。

3.分子生物学方法：分子生物学方法在细菌检测中也起着重要作用。

PCR和实时荧光PCR是常用的检测细菌DNA的方法，可以通过特定引物和探针分别扩增和检测目标细菌的DNA。

此外，基于DNA测序技术的全基因组测序也可用于快速鉴定和检测细菌。

商务版 | 政务版 | ENGLISH 首页 > 政策法规 > 通知农牧函[1998]30号沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品质量暂行标准作者：摘自：日期：1998-08-04中华人民共和国农业部通知农牧函[1998]30号各省市、自治区、直辖市畜牧（农牧）厅（局）、饲料工业办公室：根据农业部有关饲料添加剂审批的规定，经审核，批准北京市奇威生物工程研究所研制的沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂为水产养殖用新饲料添加剂。

试产期二年，试产期实行产品保护。

试产期内该产品的生产监督按我部发布的质量暂行标准执行。

一九九八年八月四日附件沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品质量暂行标准1．主题内容与适用范围本标准规定了沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品的质量指标、试验方法、检验规则、标志包装、运输、储存的要求。

本标准适用于沼泽红假单胞菌类（光合细菌）水剂的生产。

2．引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。

在标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用标准的各方应探讨、使用下列标准最新版本的可能性。

GB 13079－91饲料卫生标准GB 13091－91饲料中沙门氏菌的检验方法GB 8381－87 饲料中黄曲霉素B1的测定方法GB 13079－91饲料中总砷的测定方法GB 13080－91 饲料中铅的测定方法GB 10648－93饲料标签3．技术要求3．1微生物指标3．1．1菌落形态本品稀释后在琼脂培养皿上培养，菌落形态为草帽形或园形，表面光滑，少隆起，边缘整齐，棕红色。

3．1．2菌体形态显微镜下观察，本产品菌体形态为短杆状或卵园形，宽0.5-0.9微米，长1.2-2.0微米，无芽孢，无荚膜，单极鞭毛，可运动。

3．1．3革兰氏染色阴性3．2感观指标本品为红色悬浮液体，带培养基发酵味，长时间静置红色悬浮菌体会逐渐下沉，振荡后可恢复悬浮液状，无臭味。

3．3光合细菌含量总菌数不低于30亿个／ml活菌数不低于20亿个／ml3．4理化指标酸度PH6.5-7.0电导率6－8ms/cm3．5光谱指标光吸收植A660＞1.5A490＞2.5A805＞1.7A860＞1.93．6卫生指标沙门氏菌无黄曲霉素B1 Mg/Kg ＜0.02总砷（AS） Mg/Kg ＜0.5铅 Mg/Kg ＜2.04．试验方法4．1试剂和溶液除特别注明外，试验中所用试剂为分析纯试剂，水为蒸馏水或相应程度的水，溶液为水溶液。

菌的检测方法菌是一类微生物，广泛存在于自然界的各种生物体中，对人类健康和环境具有重要影响。

为确保食品安全、环境卫生和医疗卫生的需要，菌的检测成为必要的工作。

本文将介绍几种常用的菌的检测方法。

二、传统培养法传统培养法是一种常见的菌的检测方法。

其主要步骤包括样品采集、接种培养基、培养、菌落计数等。

首先，从待测样品中采集菌落并转移到培养基上。

然后，将培养基置于适宜的温度和湿度条件下，培养一定时间后观察菌落的形成和生长情况。

最后，通过菌落计数来确定待测样品中菌落的数量并进行分析。

三、分子生物学方法近年来，随着分子生物学技术的发展，分子生物学方法也被广泛应用于菌的检测中。

其中，聚合酶链反应（PCR）是一种常用的分子生物学方法。

该方法通过特定引物选择性地扩增待测样品中的目标基因序列，然后使用凝胶电泳等技术进行目标基因的检测和分析。

相比传统培养法，分子生物学方法具有更高的灵敏度和特异性，能够检测到更低浓度的菌，并且不受菌种生长条件的限制。

四、免疫学方法免疫学方法是另一种常用的菌的检测方法。

该方法基于菌体表面的抗原与特异性抗体的结合，通过免疫反应来检测菌的存在。

常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和免疫荧光技术。

这些方法具有快速、准确的特点，可以进行大规模样品的高通量检测。

五、快速检测方法为了满足现代社会对快速、便捷、准确的菌检测需求，一些快速检测方法也被提出和发展。

比如，基于光学传感技术的生物传感器，利用菌体与传感器之间的相互作用来快速检测菌的存在。

同时，一些生物芯片技术也应用于菌的检测中，通过微小芯片上的微阵列来同时检测多个菌种。

综上所述，菌的检测是确保食品安全、环境卫生和医疗卫生的关键环节。

传统培养法、分子生物学方法、免疫学方法以及快速检测方法都是常用的菌的检测方法。

在选择适合的方法时，需要考虑样品的特点、检测的目的以及实验条件等因素。

在未来，随着技术的不断进步和创新，菌的检测方法将更加多样化和高效化，为人类保障健康提供更强有力的支持。

一株光合细菌分离与初步鉴定
一、材料与器材
1. 全水：用于分离和洗涤细菌。

2. 乳酸：用于识别光合细菌。

3. 盘状冰膜：用于分离光合细菌。

4. 尿素：用于识别光合细菌。

5. 液体无氧培养基：用于支持细菌生长。

6. 杆状细菌培养物：用于支持细菌生长。

7. 高选择性培养基：用于培养光合细菌。

8. 实验室细胞膜：用于分离细菌。

二、流程
a. 收集样品：采集的样品应及时运输至实验室，以避免培养条件的变化，为分离细菌提供最佳环境。

b. 启动培养基：将采集样品放入液体培养基，稀释后供细菌培养。

c. 浇发：在实验台上放置一块冰箱冰膜，将未拆分的培养液浇注在上面，采用盘状法，可以将培养的细菌分离、纯化。

d. 识别：在分离的细菌培养物中添加乳酸和尿素，看是否有光合细菌的特征出现，从而判断细菌的表型。

e. 鉴定：使用高选择性培养基培养分离出的细菌，检查该株细菌的形成、形态和生活习性，鉴别出细菌种类。

三、结果
根据上述流程，成功分离出一株光合细菌，经鉴定属于假丝酵母菌。

其具体特征包括：在高选择性培养基上，以星状小颗粒菌群生成，菌落褐色；细胞多呈球形，偶尔有枝节；光合酶微量出现，具有酸性氨基甲酸酯酶、呋喃胺酶（URA）和α-
糖原酶（GLU）活性，而不含β-惰性酶。

综上，成功分离出一株光合细菌，经过初步鉴定，此株光合细菌属于假丝酵母菌。