提高缺氧耐受力功能评价方法及修订说明

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7提高缺氧耐受力与缓解体力疲劳的保健食品[17页]

（
根据引起缺氧的原因不同可将其分为缺氧性
第
缺氧症、贫血性缺氧症、局部缺氧性缺氧症和组织中毒性缺氧症。
二
根据缺氧发生速度分类，则分为暴发性缺氧
版症、急性缺氧症、亚急性缺氧症和慢性缺氧症。
）
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《
保
（二）缺氧症状的一般表现与危害
健
1.缺氧症状的一般表现
食
（1）心缺氧，表现为心悸、胸闷、气促、口
（
的一种现象，可以分为生理疲劳与心理疲劳两
第
种。体力疲劳又叫躯体性疲劳。
二
脑力疲劳是人们长时间用脑后引起大脑血
版
液和氧气供应不足导致的。
）
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《
保
心理疲劳是现代生活中最常见和较复杂的
健
一种疲劳，其产生与心理、社会环境及生活方
食
式等因素有密切关系。
品
病理疲劳是由于某些疾病所造成的人体虚
品
干、嘴唇发紫，甚至出现恶心、呕吐等。
》
（2）脑缺氧，表现为头晕、目眩、失眠、记
（
忆障碍、神志不清等。
第
二
（3）躯体缺氧，表现为机体反应迟钝、酸痛
版
乏力、手脚发麻等。
）
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《保
2.缺氧对机体生理功能的影响
（1）对神经系统的影响。
健
（2）对消化系统的影响。
食
（3）对呼吸系统的影响。
【技能目标】
通过本章学习，学生能够正确运用提高缺氧耐受力保健食品，能够针对体力疲劳人群的不同特点，开发具有特色的保健食品；懂得中医药理论缓解体力疲劳方面的应用。
）
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保健食品7提高缺氧耐受力与缓解体力疲劳的保健食品

2017/10/6 5
《保健食品》
（第二版）
三、中医药理论在提高缺氧耐受力方面的
应用
根据祖国医学整体观念和辨证论治的理论观点，从益气养阴、活血天然药物，研究开发出安全、有效、低廉的保健食品是供需双方的理想追求。当前药食同源中药材中的益气药为首选药，如人参、党参、刺五加、当归、熟地、龙眼肉、沙参、三七、麦冬、红景天、茯苓、葶苈子、半夏等，这些药食同源中药材的价格低廉，应用安全有效。以祖国医学整体观念和辨证论治的理论观点开发提高缺氧耐受力的保健食品已被广泛应用。
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《保健食品》
（第二版）
二、提高缺氧耐受力的保健食品开发（一）提高缺氧耐受力保健食品开发的一般要求
目前提高机体耐缺氧能力保健食品的研究尚不够深入，好的产品并不多见。
（二）常见的能提高缺氧耐受力的物质
1.维生素 2.微量元素 3.海藻硫酸多糖 4.红景天 5.人参 6.茶多酚 7.角鲨烯 8.其他常用的提高缺氧耐受力的原料
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《保健食品》
（第二版）
（二）体力疲劳的特点与缓解体力疲劳保健食品的本质
1.体力疲劳的特点体力疲劳是生理疲劳。由于运动引起机体生理生化功能改变而导致机体运动能力暂时降低的现象被称为运动性疲劳。 2.从缓解体力疲劳保健食品功能评价内容分析缓解体力疲劳保健食品的本质国家规定“缓解体力疲劳”功能的检验方法是结合两项运动试验和三项生化指标的结果判定。 “缓解体力疲劳”功能是指缓解运动后的体力疲劳即运动性疲劳。
3.乳酸与肌肉疲劳的发生
4.脂肪动用与疲劳
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《保健食品》

红景天软胶囊提高缺氧耐受力功能实验研究

受试液，供各剂量组灌胃。对照组给予等体积动物食用油。每日灌胃一次，灌胃量为０１／０・ｗ，连续．ｍｌｇｂ１３天。实验期间动物自由摄取饮水。每天观察动物的０
活动及生长情况。
１５仪器与试剂．
次灌胃后ｌ，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表ｈ
ＣＯＥＵＵＵＡＹＭＹＸ
２１第期总１期草业与畜牧０年７第８１８
何正军，贾国夫，尼科，郭敏
（四川省草原科学研究院，四川成都６１３）１７１
摘
要：利用新研制的红景天软胶囊，按照《保健食品检验与评价技术规范》进行了小鼠常压耐缺氧实验、亚硝酸
钠中毒存活试验和急性脑缺血性缺氧实验研究，结果表明，红景天软胶囊具有提高缺氧耐受力作用，对红景天软胶囊申
报保健食品批准文号、投产销售具有重要的意义。关键词：红景天软胶囊；缺氧实验
中图分类号：Ｒ６－９５２
文献标识码：Ａ
记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。
１．统计分析处理７
电子天平、２０ｍ磨口瓶、亚硝酸钠、钠石灰、５ｌ医用凡士林、手术剪、秒表、镊子、药勺、ｌｌ射ｍ注
器等。
１６实验方法．
用ＳＳ１．软件进行数据转化和统计分析。分析ＰＳ０１时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单
提供的红景天软胶囊，按照《健食品检验与评价技保术规范》要求，开展提高缺氧耐受力功能评价实验。本文对上述实验数据进行搜集总结，为促进川西北高原红景天产业的发展和红景天软胶囊取得国家保健食品批准文号投产上市销售，繁荣保健食品市场提供依据。１材料与方法

提高缺氧耐受力的红景天口服液的实验评价

ｔｉｌｇａａｓｓｍｎｎｓｆｙｔｅｃｔｏａＭＤｖｌｅｆａｎｉｅｒａｅｔａ５ｇ（。ｗ．ｏｃｏｉｌｓｅｓｅｔａｔ，ｈｕｅｒＴａｓｔａｄｍｃｗｒｇｅｔｎ１ｋｂ）ｘｏｃｏｅａｌｕｏｒｓｅｅｒｈ／ｇ
ＬＵＨｎ，ｉｃｕＧＵｎ，ＩＩＭＯＬ— ｈｎ，ＯＹａＸＡＮＧＪ —ｏｇ，Ｅａ－ｕｉｌｎＺＮＧＦｎｊｎ，ｎ（．ｐｒｎｆｏｄＳｉｎｅＳｃｕｎＵｉｅｓｔ，ｈｎｄ１０５ＳｃｕｎＣｉａ２ＳｃｕｎＣｎｅｒｉｅｓ１Ｄｅａｔｔｏｃｅｃ，ｉｈａｎｖｒｉＣｅｇｕ６０６，ｉｈａ，ｈｎ；．ｉｈａｅｔｒｏｓａｅｍｅｏＦｙｆＤ
１产品工艺和配方
红景天能提高机体组织氧的利用率，增加有氧氧化酶的活性，高机体的带氧和供氧能力，实现抗提来缺氧作用。在缺氧环境枸杞多糖对心、、、、肝肺脑肌组
天甙和酪醇［１１。红景天具有抗缺氧、抗疲劳翻等功能，临床上红景天可用于预防高原反应的辅助用药［３１景。红
当人体组织得不到充足的氧，或不能充分利用氧
时，细胞、组织、器官的代谢、能、机甚至形态结构都可能发生异常变化，这一病理过程就称为缺氧。缺氧多见于空气稀薄的高原地区，一些低氧场所，如商场、办公楼、铁、地隧道、地下设施等。一些特殊人群也易发生缺氧症状，如利用氧的效率下降的老年人、脑力劳动者及运动员。因此开发具有缺氧耐受力的保健食品具有重要的意义。红景天为保健食品可用资源，景为天科红景天属多种植物的根及根茎，主要成分有红景

中粮中宏生物：提高缺氧耐受力,精神焕发好身体

角鲨烯
——提高缺氧耐受力
本文图片来自网络
什么是角鲨烯？什么是提高缺氧耐受力？为什么要提高缺氧耐受力？如何提高缺氧耐受力？
本文图片来自网络
什么是角鲨烯？
角鲨烯，1916年，日本化学科学家 Tsujimoto在深海鲨鱼肝脏中发现一种新的淡黄色不饱和烃类化合物[2] ，是一种天然存在的三萜烯类，是高度不饱和脂肪族 [1] 。是人体胆固醇代谢途径中一个关键的中间产物[2] 。
等营养物质无法彻底分解、氧化、利用。释放能量减少，机体便发生各种生理变化，如血压升高或血脂、血糖升高等。
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什么是提高缺氧耐受力？
提高缺氧耐受力在哪些情况下有所体现？
人体由于环境或机体生理原因导致组织细胞不能充分获得氧气时，缺氧耐受力强具有重要意义。如：高空、井下、水底、商场、会议室、雾霾等环境，及人体呼吸系统、循环系统出现故障时。
身处高原地区时
密闭的空调房内时
空气环境污染时
获得氧的能力降低时
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为什么要提高缺氧耐受力？
慢性缺氧
缺氧我们很熟悉，慢性缺氧呢？
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为什么要提高缺氧耐受力？
正常情况1下% 空气的成分
21%
78%
环境中氧气含量21%左右时，机体是相对舒服的。
王元龙·空气和氧气_专题复习的探索与实践王浩宇·空调房间缺氧环境对人体的影响及补氧方案探讨2018
如何提高缺氧耐受力？
角鲨烯+有氧运动
角鲨烯可以增强细胞内线粒体代谢功能，提高组织细胞在缺氧环境状态下的耐受能力。通过提高缺氧耐受力，各种营养物质正常代谢和转换，维持内环境营养平衡。
动力工厂
角鲨烯软胶囊提高缺氧耐受力的研究_邱春媚

藏悠游胶囊安全性毒理学评价及提高缺氧耐受力功能研究

[6] 李明潺, 唐安生, 段宏泉. 野雉尾金粉蕨化学成分研究[J]. 中草药,2010, 41(5): 685-688.[7] 赵丹, 吴桐宇, 关永强, 等. 天山假狼毒根的化学成分研究[J]. 中国中药杂志, 2017, 42(17): 3379-3384.[8] 王春辉, 魏攀蕾, 严诗楷, 等. 滇南羊耳菊乙酸乙酯部位化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发, 2014, 26(1): 33-37.[9] Jakupovic J, Zdero C, Paredes L, et al. Sesquiterpene glycosides andother constituents from osteospermum species[J]. Phytochemistry, 1988, 27(9): 2881-2886.[10] Sun H, Zhang X Q, Cai Y, et al. Study on chemical constituents ofIlex rotunda Thunb.[J]. Chem Ind Forest Prod, 2009, 29(1): 111-114.[11] 夏文绮, 崔保松, 李帅. 四季青化学成分的研究[J]. 中草药, 2016,47(8): 1272-1277.[12] 汪玲, 张朝凤, 张勉, 等. 西非产阔叶乌檀中三萜和甾醇类成分的研究[J]. 中国中药杂志, 2011, (18): 2511-2514.[13] Nguyen H T, Ho D V, Vo H Q, et al. Antibacterial activities ofchemical constituents from the aerial parts of Hedyotis pilulifera[J].Pharm Biol, 2017, 55(1): 787.藏悠游胶囊安全性毒理学评价及提高缺氧耐受力功能研究张娟，李水仙，王春芳，赵岩，祝清芬*（山东省食品药品检验研究院，山东济南 250101）摘要：目的评价保健食品藏悠游胶囊的食用安全性和提高缺氧耐受力的功能。

提高缺氧耐受力功能评价方法(征求意见稿)及修订说明

附件5：提高缺氧耐受力功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目1.1 体重1.2 常压耐缺氧实验：存活时间1.3常压缺氧模型实验：红细胞数和血红蛋白，丙二醛（MDA），总抗氧化能力（T-AOC）1.4 亚硝酸钠中毒缺氧实验：1.4.1 缺氧损伤实验: 高铁血红蛋白含量（MetHb）1.4.2 缺氧存活实验: 存活时间2 试验原则所列指标均为必做项目3 结果判定3.1常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒缺氧实验、常压缺氧模型实验三项实验中任两项结果阳性可判定受试样品具有提高缺氧耐受力功能。

3.2其中缺氧存活实验、缺氧损伤实验的结果均为阳性可判定亚硝酸钠中毒缺氧实验结果阳性。

提高缺氧耐受力功能检验方法Method for the Assessment ofEnhancing Anoxia Endurance Function1.常压耐缺氧实验1.1 原理缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。

1.2 材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）。

1.3 实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，小鼠体重18－22克，每组10-15只。

1.4 实验方法1.4.1 剂量和分组至少设三个剂量组，同时设对照组。

以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量的30倍。

1.4.2受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料，并记录每只动物的饲料摄入量。

受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。

1.4.3 实验步骤每日经口灌胃给予受试样品，对照组给予纯净水。

将动物每周称重两次，按体重调整给予受试样品的量。

各组于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶内（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠死亡的时间。

提高耐缺氧耐受力功能学检验方法

提高耐缺氧耐受力功能学检验方法1常压耐缺氧实验：1．1原理缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化功能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧功能不足而死亡。

1．2材料：250ml磨口瓶秒表凡士林钠石灰1．3实验动物单一性别成年小鼠，18-22g，每组10-15只。

1．4剂量分组及受试样品给予时间实验设置三剂量组和一个阴性对照组，一推荐人体的10倍为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设置阳性对照组，受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.5 实验步骤各剂量组经灌胃联系给予不同剂量浓度受试样品，对照组给予同等剂量溶剂，于末次灌胃1h后，各组动物分别放入盛有钠石灰的250ml磨口瓶内，每瓶一只，用凡士林封口。

盖严，使之不漏气，立即计时，一呼吸停止位指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

1.6 统计方法及结果判定缺氧时间为计量数据，采用方差分析，但需要方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F<0.05,结论：各组数据差异无显著性；F≥0.05，P≤0.05，采用德国实验组和一个对照组拘束的两两比较进行统计，对非正态方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后还未达到正态或方差的目的，改用秩和检验进行统计。

计算小鼠耗氧量将小鼠放入广口瓶内，塞好瓶塞，关闭通气管，使装置密闭，立刻记录实验开始时间，小鼠吸入O2 呼出CO2，CO2 被钠石灰吸收，装置内气体压力降低，烧杯内的水在移液管内上升。

随时读取移液管内液面上升高度，即为小鼠在不同时间的耗氧量，以mL 为单位。

1．7 注意事项每个磨口瓶内最好只放一只小鼠，一防止相互干扰影响缺氧能力的测定。

磨口瓶一定要密闭封严，否则会影响结果。

磨口瓶必需等容量，实验前先用水加以校正。

每批次是按动物的体重尽量保持一致。

亚硝酸钠中毒存活实验2。

.1 原理亚硝酸钠使正常的二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，破坏血红蛋白携氧能力，造成组织缺氧而死亡。

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3.2其中缺氧存活实验、缺氧损伤实验的结果均为阳性可判定亚硝酸钠中毒缺氧实验结果阳性。

提高缺氧耐受力功能检验方法Method for the Assessment ofEnhancing Anoxia Endurance Function1.常压耐缺氧实验1.1 原理缺氧对机体是一种紧性刺激，影响机体各种代，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。

1.2 材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）。

1.3 实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，小鼠体重18－22克，每组10-15只。

1.4 实验方法1.4.1 剂量和分组至少设三个剂量组，同时设对照组。

以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量的30倍。

1.4.2受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料，并记录每只动物的饲料摄入量。

受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。

1.4.3 实验步骤每日经口灌胃给予受试样品，对照组给予纯净水。

将动物每周称重两次，按体重调整给予受试样品的量。

各组于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠死亡的时间。

1.4.4 检测指标小鼠因缺氧而死亡的时间。

1.5 数据处理数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值>F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

1.6 结果判定受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。

1.7 注意事项：1.7.1每个磨口瓶只放1只小鼠。

1.7.2磨口瓶一定要密闭封严，以防漏气，否则会影响实验结果。

1.7.3磨口瓶必须等容量(误差 1ml)，实验前先用水加以校正。

1.7.4每批实验动物的体重应尽量保持一致。

2 常压缺氧损伤模型实验2.1 原理在总大气压保持不变的情况下，降低空气中氧的百分含量，机体吸入氧量降低，导致血液中氧含量降低，组织细胞不能从血液中获得充足的氧而使能量代障碍，导致重要脏器组织细胞的损伤。

2.2 仪器低氧分压呼吸效应实验系统、血细胞分析仪、可见光分光光度计、酶标仪、微量加样器、恒温水浴锅、普通离心机、混旋器、具塞离心管、组织匀浆器。

2.3 实验动物推荐用近交系成年小鼠，单一性别，体重18－22g，每组10-15只。

2.4 实验方法2.4.1 剂量和分组至少设三个剂量组，同时设阴性对照组和模型对照组二个对照组。

以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量的30倍。

2.4.2受试样品的给予经口灌胃给予受试样品，受试样品给予时间30天，必要时可以延长至45天。

2.4.3 实验步骤2.4.3.1造模方法每日经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予同等容量溶剂。

将动物每周称重两次，以调整受试样品剂量。

每次给予样品后，将模型对照组与各剂量组的实验动物依次放入常压缺氧装置中，通过充入氮气方法把装置的氧含量从21%大气氧含量调整下降至10.0±0.5 % 氧含量，维持此低氧含量处理样品组和模型对照组动物6～8 h/天，每周5～6次，连续2～3周。

末次缺氧处理后，采血并取脑进行各项指标的检测。

2.4.4指标检测体重、血红蛋白含量（Hb）、脑匀浆丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）。

2.4.4.1血红蛋白含量测定方法EDTA·K2能与血液中的钙离子结合成为螯合物，从而阻止血液凝固，全血抗凝后用一般血常规检验的血细胞分析仪检测(仪器法)。

2.4.4.1.1试剂配制乙二胺四乙酸二钾（EDTA·K2·2H2O，MW404.47）,称量8mg EDTA·K2加纯净水至100ml制成抗凝剂，50μl抗凝剂可抗凝1ml小鼠全血。

1.5～2.2mg 的EDTA·K2可阻止1ml血液凝固。

2.4.4.1.2 采血以摘除小鼠眼球的方法采集全血，采用干净无菌的眼科镊子摘取小鼠一侧或双侧眼球，让血液自由滴入装有抗凝剂的1.5ml离心管（或商品化的抗凝管）中，采血过程中不断混匀血液与抗凝剂防止血液凝固，每只动物采集抗凝全血约1ml。

2.4.4.1.3 检测分析上机前血液颠倒混匀，注意检查是否存在凝块。

在24h以全血细胞分析仪检测血液红Hb。

上机操作参照仪器说明书。

2.4.4.2组织中过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）含量测定2.4.4.2.1 原理MDA（malondiadehycle）是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，测其含量可间接估计脂质过氧化的程度。

1个丙二醛（MDA）分子与2个硫代巴比妥酸（TBA）分子在酸性条件下共热，形成粉红色复合物。

该物质在波长532nm有极大吸收峰。

可用分光光法进行测定。

2.4.4.2.2试剂0.2M乙酸盐缓冲液pH3.50.2M乙酸溶液185mL0.2M乙酸钠溶液15mL1mmol/L四乙氧基丙烷（贮备液，4℃保存3个月），临用前用水稀释成40nmol/mL8.1%十二烷基硫酸钠SDS0.8%硫代巴比妥酸TBA0.2M磷酸盐缓冲液pH7.40.2M磷酸氢二钠1920mL0.2M 磷酸二氢钾480mL2.4.4.2.3 实验步骤2.4.4.2.3.1 样品制备组织匀浆样品：取一定量的大脑组织，生理盐水冲洗、拭干、称重，置匀浆器中，加入0.2M磷酸盐缓冲液，以20000r/min匀浆10s，间歇30s，反复进行3次，制成10％组织匀浆（W/V），3000r/min离心5－10min，取上清液待测。

2.4.4.2.3.2样品测定试剂空白管样品管标准管10％脑组织匀浆0.2mL40nmol/mL四乙氧基丙烷0.2mL8.1%SDS 0.2mL 0.2mL 0.2mL0.2M乙酸盐缓冲液 1.5mL 1.5mL 1.5mL0.8%TBA 1.5mL 1.5mL 1.5mLH2O 0.8mL 0.7mL 0.7mL混匀，避光沸水浴60min，流水冷却，于532nm比色注：如用试剂盒，可按试剂盒的操作要求进行2.4.4.2.3.3计算B - A B- A 1过氧化脂质含量＝————×C×K = ———×40×————————（nmol/mg组织） F - A F - A 0.2×10%×1000A: 空白管吸光度B：样品管吸光度F：四乙氧基丙烷吸光度C：四乙氧基丙烷浓度（40nmol/mL）K：稀释倍数2.4.4.3 组织中总抗氧化能力（T-AOC）测定方法2.4.4.3.1 原理机体中有许多抗氧化物质，能使Fe2+还原成Fe3+，后者可与菲啉类物质形成稳定的橙黄色络合物，通过在520nm比色可测出其抗氧化能力的高低。

2.4.4.3.2 试剂采用商品试剂盒：抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒。

2.4.4.3.3 样品制备准确称取脑组织重量，按重量体积比加9倍生理盐水，以20000r/min匀浆10s，间歇30s，反复进行3次，制成10％组织匀浆（W/V），2000～2500r/min 离心10min，取上清液待测。

同时用双缩脲试剂测定10%脑组织匀浆蛋白。

2.4.4.3.4 样品测定：按试剂盒的操作要求进行。

如：试剂对照管（mL）样品管（mL）10％脑组织匀浆ａ*试剂一 1.0 1.0试剂二 2.0mL 2.0mL试剂三应用液0.5mL 0.5mL漩涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟试剂四0.2mL 0.2mL待测样本ａ*试剂五0.2 mL 0.2 mL混匀，放置10分钟，蒸馏水调零1cm光径，520nm测各管吸光度。

* 参考取样量：10%组织匀浆参考取样量：0.1～0.2ml2.4.4.3.5计算OD U-OD C总抗氧化能力＝——————÷30×N÷C prot（单位/mg蛋白）0.01OD U: 测定管吸光度OD C：对照管吸光度N：反应体系稀释倍数（反应液总体积/取样量）C prot：稀释倍数待测样本蛋白浓度（mg/ml）2.5 数据处理数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。

方差齐，计算F值，F值< F0.05，各组均数间差异无显著性；F值>F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。

对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2.6 结果判定模型对照组与阴性对照组比较，Hb、MDA升高、T-AOC含量降低有统计学显著性意义（P<0.05），表示模型成立。

在模型成立的前提下，受试样品组MDA含量降低或T-AOC含量升高有统计学意义（P<0.05），且Hb＜210g/L，判定该项实验结果阳性。

注: 红细胞增多症评价标准参考值Hb＞210g/L。

3 亚硝酸钠中毒缺氧实验3.1 原理亚硝酸钠使二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，生成高铁血红蛋白（MetHb），破坏血红蛋白携氧能力，造成组织细胞缺氧，随着亚硝酸钠剂量的增加，MetHb含量增加，导致组织缺氧直至死亡。

3.2 实验动物推荐使用近交系成年雄性小鼠，体重18～22g，每组10～15只。

3.3 材料亚硝酸钠, 20μl毛细管, 1ml注射器，秒表。

3.4 剂量分组实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设两个剂量组。

受试样品给予时间30天。