硫酸盐还原菌杀菌实验 (瓶试法)

硫酸盐还原菌杀菌剂的合成及机理探讨
一、还原硫酸盐杀菌剂的合成
1、首先，将硫酸盐与还原剂混合，加热至反应温度；
2、在混合液中添加酯代谢酶催化剂，在受热的情况下降解硫酸盐；
3、当反应温度升高时，硫酸盐以及还原剂经历水解反应，转化为具有催化性、亲水性和能够容忍中性浓度的硫酸还原杀菌剂；
4、最后，在反应结束后，加入适宜的表面活性剂，使其稳定，生成硫酸还原杀菌剂。

二、硫酸盐还原菌杀菌剂的机理探讨
1、由于硫酸还原菌杀菌剂具有亲水性，故可以有效抑制菌体表面化学水合作用以及细胞外碳酸酐酶酶，从而降低菌体能量水平；
2、硫酸还原菌杀菌剂经过受热后形成氧阴离子，影响细胞膜安全性，从而破坏菌种细胞壁；
3、在超过一定温度时，水溶液就会充满水分子释放的热，使得细菌在连续的温度变化中破坏，最终坏死；
4、此外，硫酸盐还原菌杀菌剂也可以结合细胞膜表面的一些受体，如金属离子、胞外多糖或蛋白质，干扰必需物质的运输，从而达到杀菌作用。

硫酸盐还原菌elisa全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：硫酸盐还原菌是一类在缺氧条件下利用硫酸盐还原过程产生能量的微生物。

这些微生物可以在各种不同的环境中存在，包括深海泥沙，泥煤沼气等。

硫酸盐还原菌的研究对于理解地球生物地球化学循环过程、深海沉积物中沉积物的物理化学和生物地球化学变化具有重要意义。

由于硫酸盐还原菌具有较高的嗜盐性和耐酸性，以及其在生态系统中的显著功能和重要性，因此引起了科学家们的极大兴趣。

在硫酸盐还原菌的研究中，常常需要对其进行定量检测，以便了解其在不同环境条件下的分布和数量。

ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种广泛应用的技术，可以用于定量检测硫酸盐还原菌的存在和数量。

本文将介绍硫酸盐还原菌ELISA的原理、实验步骤和应用。

【硫酸盐还原菌ELISA的原理】ELISA是一种利用特异性抗原和抗体相互作用的技术，通过将待检测的样品中的硫酸盐还原菌特异性抗原与已标记的抗硫酸盐还原菌抗体结合，从而实现对硫酸盐还原菌进行定量检测。

ELISA技术主要包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接-竞争ELISA等多种形式，通常根据具体实验要求进行选择。

1. 样品处理：将待检样品（如土壤、水样等）进行适当处理，提取出硫酸盐还原菌特异性抗原，并进行适当稀释。

2. 捕获抗体：在ELISA板上吸附抗硫酸盐还原菌抗体，形成固定相。

这些抗体具有高度的特异性，只能结合硫酸盐还原菌抗原。

4. 洗涤：洗涤去除未结合的物质，保留结合的复合物。

5. 检测：加入与硫酸盐还原菌抗原结合的标记抗体，形成抗原-抗体-标记抗体复合物。

这种标记抗体通常是酶，如辣根过氧化物酶。

6. 底物反应：加入底物，使酶与底物发生反应，产生荧光或发色的产物。

7. 读板：通过光密度的测定，可以定量测量硫酸盐还原菌抗原的含量。

硫酸盐还原菌ELISA的实验步骤相对比较简单，一般包括以下几个主要步骤：2. ELISA板预处理：将ELISA板进行预处理，吸附硫酸盐还原菌抗体。

不同杀菌剂对硫酸盐还原菌杀菌能力评价高建富;李进;敬超文【摘要】采用静态培养法考察NaClO、1227和异噻唑啉酮3种杀菌剂对循环水中硫酸盐还原菌(SRB)的杀菌效果,并利用扫描电镜(SEM)观察SRB细胞形态结构变化和SS316L不锈钢试件的腐蚀形貌.结果表明,NaClO在投药12h时杀菌效果最佳,早于1227和异噻唑啉酮的24 h; NaClO抑菌持续时间较短,仅为24 h,抑制细菌生长时间最长的杀菌剂为1227,可持续1周左右;在最佳条件下,NaClO、1227、异噻唑啉酮的最大杀菌率分别为86.71％、89.70％、79.70％;随着杀菌时间的延长,SRB细胞结构由局部分解开始,7h后细胞完全解体.在接种SRB的循环冷却水中SS316L表面会生成一层分布不均的生物膜,其对SS316L的腐蚀以点蚀为主.【期刊名称】《工业用水与废水》【年(卷),期】2013(044)006【总页数】4页(P53-56)【关键词】硫酸盐还原菌;SS316L;扫描电镜;杀菌剂;杀菌率【作者】高建富;李进;敬超文【作者单位】北京交通大学土木建筑工程学院,北京 100044;北京交通大学土木建筑工程学院,北京 100044;北京交通大学土木建筑工程学院,北京 100044【正文语种】中文【中图分类】X703.5循环冷却水中微生物成长和繁殖过程中产生的代谢产物对管材具有腐蚀作用，防止微生物对管材腐蚀的主要方法是杀菌灭藻。

国内外常用水处理杀菌剂分为氧化型和非氧化型两类。

氧化型杀菌剂［1］具有杀菌灭藻速度快、广谱性、处理费用较低、对环境污染相对较小、不易产生抗药性等优点，不足之处在于受水中有机物、还原性物质和pH值的影响较大，药效时间短，对沉积物或黏泥的分散渗透和剥离效果差等［2］。

非氧化型杀菌剂是以致毒作用于微生物的特殊部位，受水质影响小，杀菌作用持久，对沉积物或黏泥有较强的渗透和剥离作用，但缺点是处理费用相对氧化型杀菌剂较高，容易引起环境污染，水中的微生物易产生抗药性［3］。

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对返排液杀菌效果的测试方法实验原理：推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。

通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。

实验仪器：1)硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶；2)铁细菌（IB）测试瓶；3)腐生菌（TGB）测试瓶；4)注射器：1ml；5)恒温培养箱；6)电热消毒器。

实验步骤：1)将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶分为三组。

2)用120℃消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡；3)用另一只无菌注射器从第一组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶；4)再更换无菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；5)以此类推一只稀释到最后一瓶为止。

根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；6)将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去1.0ml杀菌后的水样注入到第二组1号瓶内；7)用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去1.0ml水样注入第二组2号瓶；8)以此类推。

根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；9)将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37℃，7d后读数；10)用下列公式计算杀菌率：×100%Y=B1−B2B1Y——杀菌剂的杀菌率，%；B1——加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;B2——加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。

备注：一、注意事项1)SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，表示有腐生菌；IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示有铁细菌。

2)杀菌剂的加量为50mg/L;3)在室温下向水样注入杀菌剂，杀菌时间为4h；4)腐生菌的培养时间是5d~7d；铁细菌的培养时间是7d~14d，硫酸盐还原菌的培养时间是14d~21d。

5)测试瓶大概为3元/瓶。

二、读数方法：1.生长指标的确定原则：1)全部呈阳性反应的最后一列平行样应为生长指标的第一位数。

硫酸盐还原菌检测方法1试样经高温通氧燃烧，使硫转化成二氧化硫，经吸收后可用多种方法进行测定，如碘量法、电导法、红外吸收光谱法等。

2 将试样中的硫转化成硫酸盐并经过分离除去干扰组分后以硫酸钡重量法进行测定。

3 试样溶水解性酸溶液中进上氧化剂并使硫转化成硫酸盐，然后重新加入还原剂并使硫酸盐还原成为硫化氢。

经稀释后用光度法或电位滴定法展开测量。

4 目前，在我国各钢铁企业检测普碳钢、高中低合金钢、不锈钢、生铸铁、球墨铸铁、合金铸铁、锰铁等多种金属材料最常用的方法是用碳硫分析仪检测金属硫的含量，金属成分用最先进的光谱仪检测法，两者结合使金属材料检测更精确，也是保证产品质量的最有利“法宝”1.乙酸锌结晶-过滤法当水样中只含有少量硫代硫酸盐、亚硫酸盐等干扰物质时，可将现场采集并已固定的水样，用中速定量滤纸或玻璃纤维滤膜进行过滤，然后按含量高低选择适当方法，直接测定沉淀中的硫化物。

2.酸化—吹气法若水样中存在悬浮物或浑浊度高、色度深时，可将现场采集固定后的水样加入一定量的磷酸，使水样中的硫化锌转变为硫化氢气体，利用载气将硫化氢吹出，用乙酸锌—乙酸钠溶液或2%氢氧化钠溶液吸收，再行测定。

3.过滤器—酸化—吹气分离法若水样污染严重，不仅含有不溶性物质及影响测定的还原性物质，并且浊度和色度都高时，宜用此法。

即将现场采集且固定的水样，用中速定量滤纸或玻璃纤维滤膜过滤后，按酸化吹气法进行预处理。

预处理操作是测定硫化物的一个关健性步骤，应注意既消除干扰物的影响，又不致造成硫化物的损失。

工业市场需求硫在工业中很重要，比如作为电池中或溶液中的硫酸。

硫被用来制造火药。

在橡胶工业中做硫化剂。

硫还被用来杀真菌，用做化肥。

硫化物在造纸业中用来漂白。

硫酸盐在烟火中也有用途。

硫代硫酸钠和硫代硫酸氨在照相中做定影剂。

肥料。

生产硫酸、亚硫酸盐、杀虫剂、塑料、搪瓷、合成染料。

橡胶硫化。

染料。

药物。

油漆。

硫矿物最主要的用途是生产硫酸和硫磺。

硫酸是耗硫大户，中国约有70%以上的硫用于硫酸生产。

851 概述目前我国石油行业执行的注水水质标准为《碎屑岩油藏注水水质推荐指标及分析方法》（SY5329—2012），鄯善采油厂通过多年试验研究发现，该标准中的几项关键性指标，如悬浮物、铁含量、硫化物、腐蚀速率均与硫酸盐还原菌（SRB）有关，只要能有效杀灭SRB，就能有效控制水质中的4项指标[1]。

因此，采油废水长期运行后对水质处理的关键是有效杀灭SRB。

2 SRB对注水系统的影响SRB是一种弧状的厌氧性细菌[2]，体内有一种过氧化氢酶，能将硫酸盐还原成硫化氢，获得生存的能量。

由于过氧化氢酶需在还原状态下才能存活，因此氧会使它们致死，故SRB在有氧的情况下不会繁殖，所以它常生存在好气性硫细菌的沉积物下面。

SRB生存的pH值在5.5～9.0之间[3]，油田采出水中的SRB是去磺孤菌属，主要是成群或成菌落附着在管壁上[4]。

主要危害（1）对金属表面的去极化作用，加速对管道和设备的腐蚀，腐蚀产物FeS又可以堵塞注水管线和注水井[5]。

（2）产生的FeS与其它垢污结合时[6]，常附着于管壁上，使其与管壁间形成适于SRB生长的封闭区，进一步加剧管线的腐蚀，形成严重的坑蚀或局部腐蚀，破坏污水和注水设备[7]。

3 实验部分3.1 原水水质实验水样为鄯善油田鄯善工区污水处理站接收罐进口的采油废水，水质指标为SRB 3×103个/mL，腐生菌（TGB）2×102个/mL，含油=48mg/L，pH为7.68，温度18℃。

3.2 实验方案设计（1）在接触反应时间均为5min的相同条件下，向原水中分别加入ClO 2量（0~16mg/L），比较灭菌率。

实验ClO 2采用鸿康科技公司产品。

（2）根据3.2.1实验结果控制ClO 2浓度在一定的实验条件下，改变杀菌时间，比较灭菌率。

（3）根据前2个实验结果，改变CT值比较杀菌效果。

3.3 测试与分析方法采用《屑岩油藏注水水质推荐指标及分析方法》（SY5329—2012）推荐的绝迹稀释法测定反应前后SRB菌数。

硫酸盐还原菌杀菌实验一、方法提要MPN法-测试瓶法，在35℃（或实际水养环境温度下）培养7天。

二、硫酸盐还原菌生长显示特征硫酸盐还原菌测试瓶中的液体变黑、有黑色沉淀或铁钉变黑，均表示有硫酸盐还原菌生长。

三、试验仪器和设备1、生化培养箱2、无菌注射器：1mL3、SRB—HX测试瓶（七天）4、100mL试剂瓶。

四、实验前的准备1.准备好所需无菌注射器和测菌瓶；2.待检测的现场水样（或驯化好的SRB富集液—其获得见“五-1-菌种的制备”）。

五、测定步骤1、菌种的制备一般采用现场取得含菌水样作为待用的菌悬液。

当没有现场水样或水样不足时，可采用以下方法进行SRB的富集液培养：（1）向SRB测试瓶（9mL规格，如北京华兴化学试剂厂产的SRB-HX型细菌测试瓶）中注入1ml含SRB菌种的水样，可根据需要量做多个平行瓶；（2）将注菌的SRB测试瓶于恒温培养箱中合适温度（最好与现场待测水样温度一致，误差可为±5℃）下培养4～7天；如果测试瓶发黑则表明培养成功；然后放入冰箱（4℃）内，作为菌种保存备用。

（3）在实验的前一天需在使用原培养温度下活化培养3-5小时，作为制备菌悬液之用。

当然，SRB富集液的培养也可采用更为复杂的自制培养基进行驯化培养，但由于相对测菌瓶而言比较费时复杂，一般情况下采用以上方法即可。

2、菌悬液的制备取现场水样为试验用菌悬液。

如果现场水样菌数不足或因存放过久没有细菌可如下操作获得菌悬液：将冰箱内驯化的富集液在使用原培养温度下活化培养3-5小时，然后用滤纸过滤，按照菌种：现场水样=1：20～200比例（根据需要的空白菌数选择相应的稀释），加入至现场水样中，搅匀后即可作为菌悬液使用。

3、药剂的配制将被检测药剂配成10mg/mL（1%）水溶液。

（可根据具体的检测要求具体配制药剂浓度）4、7、试样菌药接触培养取100mL菌悬液加入试剂瓶中，再加入规定浓度药剂后，密封放入生化培养箱中35℃（或实际水养环境温度下）培养接触4h（可根据具体实验规定接触培养时间），待测。

一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法摘要：本文介绍了一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法。

该方法采用聚丙烯材料制造测试瓶的底部和盖子，瓶身采用玻璃材料制造，以确保瓶内细菌的正常生长和观察。

同时，对测试瓶进行了严密封装，以防止外界污染。

该方法制备的硫酸盐还原菌测试瓶具有结构坚固、封装性好的特点，有助于进行硫酸盐还原菌的检测。

关键词：硫酸盐还原菌；测试瓶；生产方法1.引言硫酸盐还原菌是一类菌群，具有重要的生态学意义。

测定硫酸盐还原菌含量是环境监测和地质勘探等领域的重要内容。

为了方便研究人员进行硫酸盐还原菌的检测，需要设计一种方便使用、结构坚固的测试瓶。

本文介绍了一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法。

2.材料与仪器2.1材料（1）聚丙烯材料（2）玻璃材料（3）硫酸盐还原菌培养基2.2仪器（1）注塑机（2）玻璃吹塑机（3）灭菌器（4）电子天平（5）显微镜3.生产方法3.1制备测试瓶底部和盖子（1）准备聚丙烯材料和注塑机。

（2）将聚丙烯材料放入注塑机中进行熔化。

（3）将熔化的聚丙烯注入测试瓶模具中，待其凝固。

（4）取出测试瓶底部和盖子，进行修整和打磨，确保其平整。

3.2制备测试瓶瓶身（1）准备玻璃材料和玻璃吹塑机。

（2）将玻璃材料熔化，并吹制成测试瓶的瓶身。

（3）对测试瓶进行修整和打磨，确保其平整。

3.3封装硫酸盐还原菌培养基（1）准备好硫酸盐还原菌培养基。

（2）将硫酸盐还原菌培养基倒入测试瓶中。

（3）将测试瓶放入灭菌器中进行灭菌处理，以杀灭其中的细菌。

3.4细菌检测（1）将待测物样品接种到灭菌过的测试瓶中。

（2）将测试瓶放入恒温培养箱中进行培养。

（3）培养一定时间后，取出测试瓶进行观察。

使用显微镜观察瓶内的硫酸盐还原菌数量和形态。

4.结果与讨论通过本实验制备的硫酸盐还原菌测试瓶结构坚固，封装性好。

经过灭菌处理后，在测试瓶内培养硫酸盐还原菌，能正常生长和观察。

5.结论本实验制备的硫酸盐还原菌测试瓶具有结构坚固、封装性好的特点，可用于硫酸盐还原菌的检测。

硫酸盐还原菌甲基红实验一、引言硫酸盐还原菌是一类可以利用硫酸盐作为电子受体进行呼吸代谢的微生物。

甲基红是一种常用的指示剂，可用于判断硫酸盐还原菌的存在与活性。

本实验旨在通过观察甲基红颜色的变化，验证硫酸盐还原菌的存在及其对硫酸盐的还原能力。

二、实验材料与方法1. 实验材料甲基红溶液、硫酸盐还原菌培养液、硫酸盐还原菌培养基、蒸馏水、试管、培养皿、移液管、无菌培养瓶等。

2. 实验方法（1）准备工作将硫酸盐还原菌培养液接种于含有硫酸盐还原菌培养基的无菌培养瓶中，放入恒温摇床中培养至细菌生长稳定。

（2）制备甲基红溶液将适量的甲基红溶解于蒸馏水中，制备出一定浓度的甲基红溶液。

（3）实验操作①取一部分硫酸盐还原菌培养液加入试管中，作为实验组。

②取一部分无菌培养基加入试管中，作为对照组。

③分别向实验组和对照组中加入适量的甲基红溶液。

④将试管置于恒温摇床中，培养一定时间（例如24小时）。

⑤观察实验组和对照组的甲基红颜色变化，并进行比较分析。

三、实验结果与讨论在实验进行的过程中，我们观察到了以下现象：在实验组中，甲基红溶液的颜色逐渐变为无色或淡黄色，表明硫酸盐被还原为硫化物，产生了还原反应。

而对照组中，甲基红溶液的颜色保持不变，维持了原本的红色。

根据实验结果，我们可以得出以下结论：硫酸盐还原菌具有对硫酸盐的还原能力，能够将硫酸盐还原为硫化物。

这是由于硫酸盐还原菌内部存在着一种特殊的酶，能够催化硫酸盐与电子供体之间的反应，从而实现硫酸盐的还原。

实验中选择甲基红作为指示剂的原因是，甲基红在酸性条件下呈现红色，在还原反应发生后，pH值升高导致颜色变为无色或淡黄色。

甲基红的变色可以直观地反映硫酸盐还原菌的活性和对硫酸盐的还原能力。

四、实验应用与展望硫酸盐还原菌的还原能力在环境工程、生物地球化学等领域有着重要的应用价值。

比如在环境修复中，可以利用硫酸盐还原菌还原污染物，达到净化土壤和水体的效果。

随着科学技术的不断发展，对硫酸盐还原菌的研究还有许多拓展空间。

收稿日期:2008-09-09作者简介:王丹(1983-),女(汉族),辽宁盖州人,硕士研究生,E -m ail w angdan0417@yaho o com cn ;游松(1963-),男(汉族),辽宁沈阳人,教授,博士,主要从事天然产物生物学与药学研究,T el .024-********,E -m ail y ousong206@y ahoo com cn 。

文章编号:1006-2858(2009)06-0502-05硫酸盐还原菌的培养及检测方法的研究进展王 丹,贾 贞,游 松(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁沈阳110016)摘要:目的综述硫酸盐还原菌的培养及其检测方法的研究进展。

方法在查阅国内外文献的基础上,以其中的26篇文献为依据,对硫酸盐还原菌的培养及检测方法进行分析和归纳。

结果与结论由于硫酸盐还原菌自身的特点,尤其在制药等行业废水治理方面的优势,硫酸盐还原菌的研究已引起人们的广泛关注。

通过综述硫酸盐还原菌的培养方法及其检测技术,为该菌的进一步研究打下了基础。

关键词:硫酸盐还原菌;培养;检测;废水处理中图分类号:Q 81 文献标志码:A硫酸盐还原菌(su lfate -reduc i n g bacteria ,SRB)是一类形态、营养多样化,利用硫酸盐作为有机物异化作用的电子受体的严格厌氧菌。

1895年首先由Be ij e rinck 发现,1903年De l d en 发表了有关海水中耐盐菌种的报道。

1925年E lion 发现了一种嗜热的SRB [1]。

SRB 生长能力顽强,生存环境广泛,是引起钢铁、金属等材料腐蚀的重要原因之一。

据估计,在美国,油井的腐蚀77%以上由SRB 造成[2]。

然而,由于SRB 可将硫酸盐异化还原生成硫化氢,硫化氢又能与废水中的许多重金属生成沉淀,使得SRB 在废水处理方面表现出很大的优越性和可行性[3-4]。

制药等行业排出的废水属于高硫酸盐有机废水,利用SRB 可有效去除废水中的硫酸盐,SRB 法得到了越来越多的重视。