实验教案-温度pH值激活剂和抑制剂对酶活性的影响
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实验六淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验类型:验证型目的和要求1.通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。
2.熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法;电热恒温水浴的使用。
3.了解唾液淀粉酶的收集与预处理。
原理酶具有高度专一性,一种酶只能催化一种或一类底物发生反应,如淀粉酶只能水解淀粉,不能水解蔗糖。
当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时,能使班氏试剂的Cu2+还原成Cu1+,生成砖红色Cu2O沉淀。
淀粉酶的活性受温度、pH、激动剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素影响,因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。
不同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。
通过上述特征性反应,并以蔗糖等作对照,便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。
操作方法一、唾液淀粉酶的收集与处理1.制备唾液实验者先将痰咳尽,用自来水漱口,以清除口腔内食物残渣,再在口腔内含蒸馏水约15ml,并作咀嚼咕漱运动,3分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内,过滤于小烧杯中备用,为与下面稀释唾液相区别,此称制备唾液。
2.煮沸唾液取上述唾液约2ml,盛入1中号试管中,置沸水浴煮沸5分钟备用。
3.稀释唾液调整唾液淀粉酶活性,使之在pH6.8、37℃和既无激动剂又无抑制剂条件下,作用5min,水解淀粉至红色糊精为宜。
具体做法是取12凹白瓷反应板一块,按下列步骤操作:①第1排每凹各加1滴制备唾液,12、13、14凹分别加生理盐水1、2、3滴,用滴管采用抽吸法,由稀到浓(14→12)小心混匀各凹,勿使溅入相邻凹中。
每混匀一凹便取其1滴放入同列的2排凹中,剩余稀释唾液应全部放回原凹中。
②在盛有不同稀释度唾液的第2排各凹中,均加入4滴缓冲液(pH6.8),2滴1%的淀粉液和2滴蒸馏水,用①混匀法充分混匀,置37℃下5min。
③在第2排各凹中加I液一滴,混匀,观察比较各凹颜色,以浅棕-红色对应的稀释倍数,用生理盐水稀释3ml制备唾液备用。
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识,了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质,通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有:催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基,辅酶,金属离子有关等特点。
能提高酶活力的物质,称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性,其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化,导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂,铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的,有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂,而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中,反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的:一方面随着温度的增加,反应速度也增加,直至最大反应速度为止;另一方面随着温度的不断升高,而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样,反应中某一PH范围内酶活力可达最高,在最适PH的两侧活性骤然下降,其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂,主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度,以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶,作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键,迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖,使淀粉的粘度迅速下降,淀粉与碘的反应逐渐消失,这种作用称为液化作用,生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键,因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色,糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色,较小的糊精(少于6个葡萄糖单位)遇碘不显色的呈色反应,来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程,从而了解酶的性质以及动力学参数。
(一)、溫度、PH對酶活性的影響一、實驗目的了解溫度對酶活性的影響。
了解酶活性的最適PH及掌握一種檢測最適PH的方法。
二、實驗原理三、實驗步驟1、溫度對酶活性的影響取3支試管,編號后按下表加入試劑試管編號試劑1230.2%淀粉溶液 1.5 1.5 1.5稀釋唾液/ml11無煮沸過的稀釋唾液/ml無無1搖勻后,將1、3號兩試管放入37攝氏度恒溫水浴中,2號試管放入冰水中。
10min后取出,將2號試管內的液體分為兩半,用碘化鉀-碘溶液來檢驗1、2、3號試管內淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
將2號試管剩下的一半溶液放入37GAGGAGAGGAFFFFAFAF攝氏度水浴中繼續保溫10min后,再用碘液檢驗,結果如何?記錄并解釋結果。
注意事項:1、唾液制備時,先用蒸餾水漱口,以清除食物殘渣,再含一小口蒸餾水,0.5~1min后,使其流入量筒,并稀釋到50ml。
2、PH對酶活性的影響取4個標有號碼的20ml試管。
用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和0.1mol/L檸檬酸溶液以制備PH=5.0~8.0的4種緩沖液。
試管編號試劑12340.2mol/L磷酸氫二鈉/ml 5.15 6.057.729.720.1mol/L檸檬酸/ml 4.85 3.95 2.280.28PH5 5.8 6.88從4個試管中各取緩沖液3ml,分別注入到4支帶有號碼GAGGAGAGGAFFFFAFAF的試管中,隨后于每個試管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀釋唾液2ml。
向各試管中加入稀釋唾液的時間間隔分別為1min。
將各試管內容物混勻,并依次置于37攝氏度恒溫水浴中保溫。
第四管加入唾液2min后,每隔1min由第二管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1滴碘化鉀-碘溶液,檢驗淀粉的水解程度。
待混合液變為棕黃色時,向所有試管中依次添加1或2滴碘化鉀-碘溶液。
添加碘化鉀-碘溶液的時間間隔從第一管起,均為1min。
觀察各試管內容物呈現的顏色,分析PH對唾液淀粉酶活性的影響。
温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响(间接碘量法)(effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme)一、目的1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响2.学习酶活性的判定二、原理酶活性大小可以用反应速度来表示,即在单位时间内,酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。
酶活性大,反应速度就快。
反之则慢。
酶促反应速度受多种因素的影响。
如温度、pH、激活剂、抑制剂等。
本实验是观察在不同温度,pH,以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。
借以验证各种因素对酶活性的影响。
唾液中含有唾液淀粉酶,此酶可以使淀粉逐步水解,最后生成麦芽糖。
麦芽糖具有还原性。
根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量(即还原性麦芽糖的多少)判定酶活性的大小。
用碘的反滴定法测定还原物的量,还原物多,酶活性大。
具体反应如下:1、试剂成分(S、H、S试剂):CuSO4、Na2CO3、NaHCO3、KI、KIO3、酒石酸钾钠、草酸钾。
2、判定酶活性大小的化学反应过程:Na2CO3 +2H2O —→2NaOH + H2CO3CuSO4+2NaOH —→Cu(OH)2↓+Na2SO45KI +KIO3 + 3H2SO4—→3I2+3K2SO4 +3H2O酶淀粉———→麦芽糖麦芽糖+Cu++—→麦芽糖氧化产物+Cu+Cu++ I2—→Cu++ + 2I-COO- 草酸钾COO-Cu+++|—————→| >CuCOO- 防止逆反应COO-剩余I2+Na2S2O3—→2I- +Na2S4O6(与淀粉呈兰色) (与淀粉无色)3、判定酶活性大小的标志酶活性大→麦芽糖多→Cu+ 生成量多→I2消耗量多→剩余I2少→Na2S2O3消耗量少酶活性越大,Na2S2O3消耗量越少。
空白实验无酶活性,因此Na2S2O3消耗量最多。
与空白实验进行对比,差值越大,说明此条件下酶活性越大。
实验二温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响温度、p H 对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响。
了解酶活性的最适pH 及掌握种检测最适pH 的方法。
二、实验原理(请同学们自已补充)三、实验步骤1、温度对酶活性的影响取 3 支试管,编号后按下表加入试剂试管编号试剂1230.2%淀粉溶液(d) 1.5 1.5 1.5稀释唾液/ml11无煮沸过的稀释唾液/ml无无1摇匀后,将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中,2号试管放入冰水中。
10min 后取出,将 2 号试管内的液体分为两半,用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3 号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
将 2 号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min 后,再用碘液检验,结果如何?记录并解释结果。
注意事项:唾液制备时,先用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,再含一小口蒸馏水,0.5~1min 后,使其流入量筒,并稀释到50ml。
2、pH对酶活性的影响取 4 个标有号码的20ml 试管。
用吸管按下表添加0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L 柠檬酸溶液以制备pH=5.0~8.0 的 4 种缓冲液试管编号试剂12345.16.07.79.70.2mol/L 磷酸氢二钠/ml55224.8 3.9 2.20.20.1mol/L 柠檬酸/ml5588pH5 5.8 6.88从 4 个试管中各取缓3ml,分别注入 4 支带有号码的试管中,每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml 和稀释唾液2ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。
将各试管内容物混匀,并依次置于37 摄氏度恒温水浴中保温。
第 4 管加入唾液2min 后,每隔1min 由第 2 管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加 1 滴碘化钾-碘溶液,检验淀粉的水解程度。
待混合液变为棕黄色时,向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。
添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第 1 管起,均为1min。
实验题目:温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响实验原理:1.唾液淀粉酶作用的底物--淀粉,可以被分解成各种糊精、麦芽糖等水解产物。
2.淀粉被酶水解速度的变化,可以利用其产物遇碘呈不同颜色来观察。
3.淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序,遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈颜色反应(棕黄色)。
实验步骤:⒈收集唾液:用少量蒸馏水漱口。
取小漏斗一支,垫以小块脱脂棉,过滤唾液,收集约2毫升,用蒸馏水稀释 10 倍左右,混合后备用。
⒉取试管2支,各加稀释唾液约3毫升,一管直接加热煮沸,另一管置冷浴中预冷10分钟。
⒊另取试管4支编号按下表操作:步骤、编号 1 2 3 4一1%淀粉20滴1%淀粉20滴1%淀粉20滴1%淀粉20滴二置于0-4℃冰浴5分钟置于0-4℃冰浴5分钟置于37℃水浴5分钟置于37℃水浴5分钟三遇冷唾液10滴,混匀遇冷唾液10滴,混匀唾液10滴,混匀煮沸唾液10滴,混匀四置于0-4℃冰浴10分钟置于0-4℃冰浴5分钟移至37℃水浴5分钟置于37℃水浴10分钟置于37℃水浴10分钟五碘液2滴摇匀碘液2滴摇匀碘液2滴摇匀碘液2滴摇匀比较各管溶液的颜色,判断淀粉被唾液淀粉酶水解的程度,并说明温度对唾液淀粉酶活性的影响。
4.取试管3支编号,按下表操作:编号 1 2 3磷酸盐缓冲液(ml)2(pH5.0)2(pH6.8) 2(pH8.0)1%淀粉液(ml)2 2 2稀释的唾液(滴)10 10 105. 将各管混合,取瓷比色皿一个,预先在各比色池分别加入1-2滴碘液,每隔 30 秒从第二管吸取水解液一滴加到已有碘液的比色皿小池中,检验淀粉的水解程度,直至此管不与碘液呈色(即只显碘液本身的浅棕色)时,立即向各管加碘液2滴摇匀观察。
比较各管溶液颜色,说明 pH 对唾液淀粉酶活性的影响。
6. 取清洁试管4支,编号,按下表操作:编号 1 2 3 41%淀粉液(滴)20 20 20 201%NaCl(滴) 2 0 0 01%CuSO4(滴)0 2 0 01%Na2SO4(滴)0 0 2 0蒸馏水(滴)0 0 0 2稀释唾液(滴)10 10 10 107. 将各管混合,取瓷比色皿一个,预先在各比色池分别加入1-2滴碘液,每隔 30秒从第一管吸取水解液一滴加到比色皿中,检验淀粉的水解程度,直至第一管不与碘液呈色(即只显碘的浅棕色)时,立即向各管加碘液2滴摇匀观察。
化学实验教案酶的温度与pH值对活性的影响化学实验教案:酶的温度与pH值对活性的影响引言:酶是一种生物催化剂,它能够加速生物体内的化学反应速率而不改变自身,其中温度和pH值是两个重要的影响因素。
本教案旨在通过实验验证酶的活性受温度和pH值的影响,并探讨最适宜的条件。
实验材料:- 水浴装置- 试管架- 温度计- 手套- 洗涤液(如洗衣粉溶液)- 柠檬汁- 盐酸(HCl)- 5个玻璃试管- 奶粉混悬液(作为酶的底物)- 同一浓度的酶溶液- 观察记录表实验步骤:1. 实验准备a. 将玻璃试管清洗干净,并编号为1至5。
b. 在试管1中加入5mL奶粉混悬液作为底物。
c. 在试管2至5中分别加入相同体积的酶溶液,分别为25°C、40°C、60°C和80°C。
d. 提前将水浴装置加热到相应的温度。
e. 准备盐酸和柠檬汁作为改变试管3和4 pH值的溶液。
2. 酶活性测定a. 将试管1放置在室温下作为对照组。
b. 将试管2至5分别加入预先准备好的温度水浴中,温度保持恒定。
c. 在试管3和4分别加入少量盐酸和柠檬汁,用以改变pH值。
d. 将所有试管置于试管架中,并以相同的时间间隔观察酶活性的变化。
e. 观察并记录底物的颜色和变化速度以评估酶活性。
f. 记录各试管的温度和pH值。
结果与讨论:根据观察结果,我们可以得出以下结论:1. 温度对酶活性的影响:- 在较低温度下(25°C),酶活性较低,底物转化速度缓慢。
- 当温度升高至40°C,酶活性明显提高,底物转化速度加快。
- 在过高温度下(60°C和80°C),酶的构象发生改变,活性受到抑制,底物转化速度降低。
2. pH值对酶活性的影响:- 在中性条件下(pH值约为7),酶活性较高,底物转化速度较快。
- 当pH值偏向酸性(低于7)或碱性(高于7)时,酶活性均下降,底物转化速度减慢。
结论:通过以上实验结果可以得出结论:酶的活性受温度和pH值的影响。
酶的特性一、实验目的1.通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响二、实验原理本实验由温度对酶活力的影响;PH对酶活力的影响;酶的激活剂及抑制剂;酶的专一性4组实验组成。
(一)温度对酶活力的影响酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下,酶的反应速度最高。
大多数动物酶的最适温度为37-40℃,植物酶的最适温度为50-60℃。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。
有些酶的干燥制剂,虽加热到100℃,其活性并无明显的改变,但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。
低温能降低酶或抑制酶的活性,但不能使酶失活。
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色,糊精按其分子的大小,遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。
最简单的糊精遇碘不呈颜色,麦芽糖遇碘也不呈色,在不同温度下,淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
(二)PH对酶活力的影响酶的活力受环境PH值的影响极为显著。
不同酶的最适PH不同。
本实验观察PH 对唾液淀粉酶活性的影响。
唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。
(三)唾液淀粉酶的活化及抑制酶的活性受活化剂或抑制剂的影响,氯离子为唾液淀粉酶的活化剂,铜离子为其抑制剂。
酶具有高度的专一性。
本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例,来说明酶的专一性。
(四)酶的专一性淀粉和蔗糖无还原性,唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖,但不能催化蔗糖的水解。
用Benedict试剂检查糖的还原性。
三、实验物品仪器:试管及试管架,恒温水浴,冰浴,沸水浴,吸管,滴管,锥形瓶药品:稀释30倍的唾液(用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,再含一口蒸馏水,半分钟后使其流入量筒并稀释30倍。
混匀备用。
)KI-I2碘溶液(将KI 20g及I210g溶于100ml水中,使用前再稀释10倍。
)0.2 mol Na2HPO3溶液,1% NaCl溶液,1% CuSO4溶液,1%Na2SO4溶液,2%蔗糖溶液,0.1%淀粉溶液,溶于0.3% NaCl的1%淀粉溶液,溶于0.3% NaCl的0.2%淀粉淀粉溶液,溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液四、实验过程(一)温度对酶活力影响往三只试管各加入1.5ml0.2%淀粉的0.3% NaCl溶液,冰浴5min,再加入已冰浴5min的稀释唾液1ml ,摇匀后,将1号试管继续冰浴、2号两试管放入37 ℃恒温水浴中,3号试管放入沸水浴中,10min后去处,将2号管内液体分为两半,用KI-I2溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇) 影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解,生成一系列水解产物,即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。
淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。
在不同温度,不同PH值下,唾液淀粉酶活性不同,催化淀粉水解程度不一,生成的产物也就不同。
此外,激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性,影响淀粉的水解。
因此可根据在不同反应条件下,溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度,从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
淀粉I2 【操作】1. 温度对酶促反应速度的影响取3支试管,编号,按下表操作:2. PH对酶促反应速度的影响取3支试管,编号,按下表操作:3.激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管,编号,按下表操作:【结果及分析】观察各管颜色变化,说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
【实验注意事项】篇二:生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么?答:生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。
从科研工作的角度选材,还应当注意具体的情况,如植物的季节性、地理位置和生长环境等,动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等,微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。
2、材料的破碎方法有哪些?答:(1) 机械的方法:包括研磨法、组织捣碎法;(2) 物理法:包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等;(3) 化学与生物化学方法:包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。
实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定?两种滴定方法各有何优缺点?答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。
间接法的优点是操作简便、反应条件温和,缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差;直接法的优点是反应原理直观易懂,缺点是操作较复杂,条件剧烈,不易控制。
实验三温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响一、目的验证温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响二、原理酶的化学本质是蛋白质,凡是能够影响蛋白质变性的因素,都可以使酶失活。
此外,温度、pH、激活剂和抑制剂对酶的活性均有显著影响。
酶的活性通常是通过测定酶所作用的底物在作用前后的变化来研究的。
本实验是唾液淀粉酶作用的底物-淀粉,被唾液淀粉酶分解成糊精、麦芽糖等产物的变化来观察该酶在各种环境(温度、pH值、激活剂和抑制剂)条件下的活性.淀粉被酶水解的变化,可以借遇碘呈不同颜色来观察,淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序,遇碘呈蓝、紫、红等不同颜色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。
三、主要仪器、材料和试剂器材电热恒温水浴锅、电炉、比色盘、吸管、试管、漏斗、烧杯等试剂0.5%淀粉溶液、碘化钾-碘溶液、1%CuSO4、0.5%NaCl溶液、pH5缓冲液、pH6.8缓冲液、pH8缓冲液、四、操作步骤(一)制备唾液淀粉酶每人用自来水漱口3次,然后取20ml蒸馏水你含于口中,半分钟后吐入烧杯内,4层纱布过滤。
以此酶液作如下实验(二)温度对酶活性的影响1.取3支试管,编号后按下表操作:2. 各管加入0.5%淀粉溶液后,放入各自温度的水浴,待管内温度一致时,3支试管同时迅速加入酶液,摇匀及时放回水浴中。
3. 在比色盘中,各孔中置碘液2滴,每隔1分钟从2号管中取反应液1滴与比色盘中的碘液混合,观察颜色变化。
4.待第二管反应液遇碘不发生颜色变化(即只有碘液的颜色)时,从水浴中取出各管,向管中加入1-2滴碘液,摇匀后,观察各管颜色,说明温度对酶活性的影响。
三、pH对酶活性的影响1.取3支试管,编号后按下表操作:2.将以上3支试管摇匀,放入37℃水浴中保温。
每隔1分钟从2号管中取1滴反应液与碘液混合观察,待遇碘不发生颜色变化时,向各管中加入碘液1-2滴,充分混匀,观察并记录各管颜色,解释pH对酶活性的影响。
四、激活剂和抑制剂对酶活性的影响1.取3支试管,编号后按下表操作:2.将以上3支试管摇匀,放入37℃水浴中,每隔1-2分钟在比色盘上用碘液检查2号管,待碘液不变色时,再向各管内加入碘液1-2滴,观察、记录结果,并解释原因。
实验三温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
一、目的
验证温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
二、原理
酶的化学本质是蛋白质,凡是能够影响蛋白质变性的因素,都可以使酶失活。
此外,温度、pH、激活剂和抑制剂对酶的活性均有显著影响。
酶的活性通常是通过测定酶所作用的底物在作用前后的变化来研究的。
本实验是唾液淀粉酶作用的底物-淀粉,被唾液淀粉酶分解成糊精、麦芽糖等产物的变化来观察该酶在各种环境(温度、pH值、激活剂和抑制剂)条件下的活性.
淀粉被酶水解的变化,可以借遇碘呈不同颜色来观察,淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序,遇碘呈蓝、紫、红等不同颜色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。
三、主要仪器、材料和试剂
器材
电热恒温水浴锅、电炉、比色盘、吸管、试管、漏斗、烧杯等
试剂
0.5%淀粉溶液、碘化钾-碘溶液、1%CuSO4、0.5%NaCl溶液、pH5缓冲液、pH6.8缓冲液、pH8缓冲液、
四、操作步骤
(一)制备唾液淀粉酶
每人用自来水漱口3次,然后取20ml蒸馏水你含于口中,半分钟后吐入烧杯内,4层纱布过滤。
以此酶液作如下实验
(二)温度对酶活性的影响
1.取3支试管,编号后按下表操作:
2. 各管加入0.5%淀粉溶液后,放入各自温度的水浴,待管内温度一致时,3支试管同时迅速加入酶液,摇匀及时放回水浴中。
3. 在比色盘中,各孔中置碘液2滴,每隔1分钟从2号管中取反应液1滴与比色盘中
的碘液混合,观察颜色变化。
4.待第二管反应液遇碘不发生颜色变化(即只有碘液的颜色)时,从水浴中取出各管,向管中加入1-2滴碘液,摇匀后,观察各管颜色,说明温度对酶活性的影响。
三、pH对酶活性的影响
1.取3支试管,编号后按下表操作:
2.将以上3支试管摇匀,放入37℃水浴中保温。
每隔1分钟从2号管中取1滴反应液与碘液混合观察,待遇碘不发生颜色变化时,向各管中加入碘液1-2滴,充分混匀,观察并记录各管颜色,解释pH对酶活性的影响。
四、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
1.取3支试管,编号后按下表操作:
2.将以上3支试管摇匀,放入37℃水浴中,每隔1-2分钟在比色盘上用碘液检查2号管,待碘液不变色时,再向各管内加入碘液1-2滴,观察、记录结果,并解释原因。
五、思考与作业
1.唾液淀粉酶的最适温度、最适pH分别是多少?
2.唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂分别是什么?。