固定和谱带检测
固定:7%乙酸或12.5%三氯乙酸 谱带检测
染色法 荧光探针法 特殊试剂染色法
根据支持介质形状不同,可分为: •薄层电泳 •板电泳 •柱电泳
• 据用途不同,可分为: •分析电泳 •制备电泳 •定量电泳 •免疫电泳
第一节 电泳的基本原理
▪ 电泳是在电场作用下产生的物质运动。
在一定的电场强度下,带电颗粒(分子)在电 场中的迁移方式主要依据分子大小和形状、分 子所带电荷或分子的生物学与化学特性。
核黄素经光照后再被痕量氧氧产生自由基, 引发聚合反应。
丙烯酰胺聚合时常用的催化系统
引发剂
过硫酸铵 (AP)
加速剂 N,N,N′,N′-四甲基乙二胺 (TEMED)
3-二甲胺丙腈
3-二甲胺丙腈亚硫酸盐
应用范围 AP
酸性系统
核黄素
TEMED
碱性系统 (光聚合)
化学聚合与光聚合的比较
加样需注意
制备样品时,离子浓度不宜太高 蔗糖浓度小于20% 样品液中的沉淀和混浊需除去 阴离子系统用溴酚蓝作指示剂,负极在上;
阳离子系统用甲基绿或次甲基绿作指示剂, 正级在上。
一般操作
步骤:
摆好玻璃管 制备分离胶 预电泳:除去AP、未聚合丙烯酰胺、杂质 制备浓缩胶 加样 电泳:先低电流,样品进胶后,调至所需电流 取胶 固定和谱带检测 迁移率测定 谱带保存
微量TEMED的加入,可使过硫酸铵形成自由基,这些 自由基的产生可引发丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的聚合、 交联反应,形成有一定平均孔径的聚丙烯酰胺凝胶。
化学催化——酸性系统
引发剂:过硫酸铵(AP) 过氧化氢
加速剂:硫酸亚铁-抗坏血酸(Vc)
光聚合催化系统
引发剂:核黄素 加速剂:TEMED可以加速聚合