金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌1 简述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。

本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。

本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。

金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。

本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。

2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。

3 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。

3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。

3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。

3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。

3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。

待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。

临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。

3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。

4 培养基4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。

4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。

4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。

4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。

4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。

5 对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。

金黄色葡萄球菌一、生物学性状1、形态与染色革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。

无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。

在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。

2、培养特性需氧或兼性厌氧。

营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。

属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。

致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。

3、生化反应多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。

致病性菌株能分解甘露醇，产酸。

触酶阳性，可与链球菌相区分。

4、抗原（1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。

在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。

（2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。

（3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。

金黄色葡萄球菌中可提出A群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。

5、抵抗力葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。

在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。

对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。

该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。

耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合成的量有关。

二、致病性葡萄球菌中金黄色葡萄球菌毒力最强，通过与宿主体内的增殖、扩散和产生有害的胞外物质（酶和毒素）引起宿主疾病。

1、致病物质（1）葡萄球菌的毒力因子包括：①酶：酶和其他酶（纤维蛋白溶媒、耐药核酸酶、透明质酸酶、酯酶等）；②毒素：细胞溶素（α、β、γ、δ）、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等；③细菌的一些表面结构蛋白，如黏附素、荚膜、细胞肽聚糖和SPA等。

金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）一、生物学特性典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 ^m左右，显微镜下排列成葡萄串状。

金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37。

C，最适生长pH7.4。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15% NaCI肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸，水解尿素, 还原硝酸盐，液化明胶。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

二•流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。

因而，食品受其污染的机会很多。

近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。

金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占4 5% ,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。

此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。

上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83% ,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。

一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。

肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。

金黄色葡萄球菌
生物学特性：
1.球菌，直径0.8-1.0μm左右，显微镜下排列成葡萄串状
2.无芽胞、鞭毛，无荚膜
3.革兰氏染色阳性
4.化能异养菌，呼吸代谢和发酵代谢
5.高度的耐盐性（10-15%NaCl肉汤中生长）
培养特性：
1.营养要求不高
2.需氧或兼性厌氧，在好氧环境下生长最好
3.最适生长温度37°C，干燥环境下可存活数周
4.最适生长pH 7.4
5.菌落光滑、低凸、闪光、奶油状、并且有完整的边缘。

6.血平板菌落周围形成透明的溶血环
生化特性：
（1）可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

（2）金黄色葡萄球菌在厌氧条件下分解甘露醇产酸（非致病性菌则无此现象）
（3）许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。

（4）具有较强的抵抗力，磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素等高度敏感
贴膏剂预处理
1.取规定量供试品
2.去掉贴膏剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上
3.用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起
4.将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀释剂中
5.用力振荡至少30 分钟，制成供试液
生化试验：
血浆凝固酶为阳性（应呈凝固状）阳性对照管液呈凝固状
阴性对照管血浆流动自如。

凝固为阳性反应，不凝固为阴性反应。

1.血浆凝固酶试验：原理:金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝集颗粒；游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。

大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，而非致病株一般不产生。

因此，血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。

葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合凝固酶（用玻片法测试），另一种是游离凝固酶（用试管法检测）。

方法：（1）玻片法：在1张洁净玻片中央加1滴9g／L氯化钠(生理盐水)溶液，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10～20s内无自凝现象发生，则加入兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。

（如出现颗粒状凝集现象即为阳性。

如不立即发生凝集，可稍待一，二分钟，并轻轻摇动玻片，加速反应，若无凝集时则为阴性。

）（2）试管法：用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释，取0．5ml于试管再加0.5ml 待测菌浓菌悬液（需做阳性对照及阴性对照。

），混匀后置37℃水浴中，每30min 观察1次结果。

若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管（即浓菌液管）不凝固，为阳性；若阴性，继续观察到24小时，不凝固者为阴性。

（观察结果，将试管微微倾斜，血浆成冻胶样凝块者为阳性，血浆仍为液状者为阴性。

）【结果判断】（1）玻片法：5～10s内出现凝集者为阳性。

（2）试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。

4h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。

【注意事项】（1）最好使用EDTA抗凝的兔血浆，因为如果使用枸缘酸盐抗凝血浆会产生假阳性结果（2）玻片法：10秒内观察结果，如超过10 秒可出现假阳性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。

2. 耐热核酸酶试验原理：致病性葡萄球菌能产生一种耐热核酸酶，它能分解DNA，使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色玻片法：取融化好的甲苯胺蓝DNA琼脂3ml均匀浇在载玻片上，待琼脂凝固后打上6-8个孔径为2-5mm的小孔，各孔分别加一滴经沸水浴3分钟处理过的待检葡萄球菌和阳性阴性对照葡萄球菌培养物，35℃大气环境孵育3小时，观察有无粉红色圈及其大小。

金黄色葡萄球菌
1.形态与染色
形态：呈球形或椭圆形
大小：较大
染色性：革兰染色通常是G+
排列：典型的葡萄球菌排列呈葡萄串状
特殊结构:无鞭毛，无芽胞，少数有荚膜
2.培养特性
营养要求不高
菌落可出现金黄色、白色或柠檬色等色素。

致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，血琼脂平板上，菌落周围形成明显的全透明溶血环（ 溶血）。

在肉汤培养基中，呈现均匀混浊生长。

3.生化反应
能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。

触酶阳性。

(触酶实验。

触酶又称为过氧化氢酶，催化H2O2分解为H2O与O2。

)
致病菌株能分解甘露醇。

4.抗原
葡萄球菌A蛋白
荚膜多糖
多糖抗原
5.三种葡萄球菌的主要性状比较
6.抵抗力
葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强，耐盐性强。

对龙胆紫、青霉素敏感。

由于广泛应用抗生素，耐药菌株增多，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)成为医院内感染最常见的致病菌。

致病物质
酶：凝固酶、纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
毒素：细胞溶素（α、β、γ、δ)、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等
其他：粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖、SPA等
（1）凝固酶（coagulase）
使加有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的耐热酶，可作为鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。

凝固酶的作用：
保护作用：抵抗吞噬细胞的吞噬。

保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏。

使感染病灶具有局限化、脓汁粘稠和形成血栓等病理特性。

具有免疫原性。

金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。

而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。

[简介]金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。

其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。

金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。

当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。

而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。

这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。

新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。

典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。

显微图像金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。

平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。

血平板菌落周围形成透明的溶血环。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。

金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。

[流行病学]金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。

金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性，球形，直径1μm ，呈葡萄串样排列。

圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，直径2mm 左右。

致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血平板生长后，在菌落周围可见β溶血。

金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。

可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。

甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。

许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。

金黄色葡萄球菌是院内感染的常
见细菌之一。

金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。

而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 简称金葡菌)是人类最常见的致病菌之一，其侵袭力很强，能产生多种致病物质如：肠毒素、凝固酶等；可引起化脓性炎症、毒素性疾病及葡萄球菌性肠炎。

金葡菌所引起的中毒事件已成为世界性的公共卫生问题，我国每年由金葡菌引起的食物中毒事件屡有报道。

金黄色葡萄球菌测试片(FilmplateTM Staphylococcus aureus BT206) 含有选择性培养基和专一性的酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序。

本产品适用于各类生、熟食制品，饮料，糕点类，调味品，奶制品等的快速检测。

执行标准：国家标准食品微生物检验黄色葡萄球菌检验（GB 4789.10）。

金黄色葡萄球菌的检验操作方法:1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸盐缓冲液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，调节样品匀液pH至6.0～8.0。

用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，每次换一支吸管。

2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，将金黄色葡萄球菌测试片（BT206）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个稀释度接种两片。

做一片空白阴性对照。

3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。