脐带 华通胶间充质干细胞 间充质干细胞 流式细胞分析 端粒酶活性 髓核细胞 共培养 分化 椎间盘退变论文

不同消化方式对脐带华通胶间充质干细胞提取的影响张宁坤;陈宇;高连如;王丽华;庄恒成;李俊凤;刘丽娟;王志国;杨晔【期刊名称】《临床军医杂志》【年(卷),期】2011(39)2【摘要】目的探讨使用不同酶浓度、消化不同时间及不同浓度胎牛血清的培养基稀释对消化脐带华通胶后提取培养间充质干细胞的影响。

方法无菌条件下取出正常剖腹产胎儿脐带,剔除动脉、静脉及外膜,取其之间的胶状物,剪成1 mm3及更小的块状,分别加入0.1%和0.2%的Ⅱ型胶原酶,分为A、B两组,37℃水浴消化。

每一组消化时间分别为4、81、2、16、202、4、28、323、6、40 h共10个消化时间点,每一个消化时间点又分为两组,分别为A1、A2组和B1、B2组。

消化后的黏稠细胞悬液用完全DMEM稀释,并加入特级胎牛血清至浓度为10%(A1、B1)和20%(A2、B2),充分混匀。

悬液移至75 cm2培养瓶,15 ml/瓶,37℃、5%CO2、饱和湿度培养,3 d换液。

通过细胞计数观察原代细胞贴壁生长的最早时间和80%细胞铺满瓶底的时间和生长活力。

结果 0.2%的Ⅱ型胶原酶消化脐带华通胶在消化时间为20h,且稀释血清浓度为20%时,获得的细胞悬液在培养36 h即有细胞贴壁,培养6 d细胞贴壁达到80%,其余各组细胞生长情况各不相等,均弱于此组。

其中消化时间在8 h以内和32 h以上时不论使用多少的酶浓度和稀释时使用多少的血清浓度,细胞均不生长。

结论在使用胶原酶消化脐带华通胶提取间充质干细胞的过程中,使用0.2%Ⅱ型胶原酶、消化16～24 h、稀释培养时加入至20%的血清对干细胞的提取效果最佳。

【总页数】4页(P342-345)【关键词】胶原酶;脐带华通胶;间充质干细胞;提取【作者】张宁坤;陈宇;高连如;王丽华;庄恒成;李俊凤;刘丽娟;王志国;杨晔【作者单位】解放军海军总医院心血管内科;解放军南京军区杭州疗养院海勤疗区特诊科【正文语种】中文【中图分类】R446【相关文献】1.高压氧对人脐带华通胶间充质干细胞移植心肌梗死大鼠血清一氧化氮及超氧化物歧化酶水平的影响 [J], 张红;罗学胜;陈穗2.脐带华通胶间充质干细胞对急性再生障碍性贫血T淋巴细胞亚群的影响 [J], 沈建良;黄友章;宫立众;岑坚;赵德峰;刘毅;尹文杰;郑培浩;刘晓鹏3.BK通道抑制剂对人脐带华通胶来源的间充质干细胞的增殖、凋亡及细胞因子的影响 [J], 宋阿会;佟琰;刘英莉4.Elabela促进脐带华通胶间充质干细胞向心肌样细胞分化 [J], 秦欣宇; 张燕; 张宁坤; 高连如; 程涛; 王泽; 童珊珊; 陈宇5.人脐带动脉旁、静脉旁与华通氏胶间充质干细胞的血管生成能力比较及移植安全性评价 [J], 杨嫣君; 余飞; 丁利军; 盛小强; 孙海翔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

骨髓间充质干细胞体外诱导和端粒酶活性的研究王海莲;鞠秀丽;李栋;侯怀水;时庆;孙念政;沈柏均【期刊名称】《临床血液学杂志》【年(卷),期】2007(20)6【摘要】目的:建立骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、纯化的方法,探讨其体外诱导条件和端粒酶活性。

方法:取正常成人骨髓用含10%小牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增。

流式细胞仪行细胞表面抗原检测,细胞化学染色鉴定其生物学特性,在特定培养条件下检测其向成骨和脂肪细胞分化的能力,采用TRAP(Telomerase repeat amplification protocol assay)-银染法测定其端粒酶的活性。

结果:分离培养获得的贴壁细胞,碱性磷酸酶染色阳性。

流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44、CD115、CD166表达阳性。

经向成骨和脂肪细胞诱导3周后,可得到成骨和脂肪细胞,经茜素红染色、油红O染色得到证实。

TRAP-银染法证实MSCs表达一定的端粒酶活性。

结论:体外分离培养的MSCs可以向成骨、脂肪诱导分化,表达一定的端粒酶活性,具有干细胞的生物学特性。

【总页数】4页(P363-366)【关键词】骨髓;干细胞;诱导分化;端粒酶活性【作者】王海莲;鞠秀丽;李栋;侯怀水;时庆;孙念政;沈柏均【作者单位】山东大学齐鲁医院儿科;山东大学齐鲁医院低温医学研究室【正文语种】中文【中图分类】R311.2【相关文献】1.端粒酶活性在骨髓间充质干细胞体外分化过程中的表达观察 [J], 何朝荣;刘先军;严世荣;张群林;王晓勋2.恒河猴骨髓间充质干细胞的体外培养及其端粒酶活性 [J], 王启伟;王万山;路艳蒙;朴英杰3.依达拉奉联合表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化中端粒酶活性的变化 [J], 胡资兵;曾荣;魏劲松;郑鸿;林颢;孙欣;吴少科4.骨髓间充质干细胞体外分化过程中端粒酶活性表达及意义 [J], 何朝荣;刘先军;严世荣;张群林;刘雪琴;王晓勋5.体外培养骨髓间充质干细胞的形态观察及其端粒酶活性 [J], 王启伟;王万山;路艳蒙;朴英杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人脐带华通胶间充质干细胞的生物学特性及研究新进展何蓓;杨晓清【摘要】Human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell (hWJ-MSC) is a kind of adult stem cell which has self-renewal ability, multiline age differentiation potential. As isolated from discarded tissue (umbilical cord) after birth, they are considered wide resource, easy to be acquired and not restricted by ethics. Compared to other source of adult stem cells such as bone marrow mesenchymal stem cells, hWJ-MSC has lower immunogenicity, higher proliferation, more primitive stem cell performance, which make hWJ-MSC become a new cell resource. hWJ-MSC has great therapeutic potential in cell transplantation, gene therapy for various diseases. In this review, we will discuss the biological characteristics, proliferation and differentiation potential, and immunological characteristics of hWJ-MSC, and mainly focus on the latest progress of their application on various diseases.%人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton′s jelly-derived mesenchymal stem cell,hWJ-MSC)是一类具有自我更新、多向分化潜能的成体干细胞.由于其取自分娩过程中的废弃物——脐带,因此来源广泛、取材方便、不受任何伦理学限制,同时相对其他来源的成体干细胞例如骨髓间充质干细胞,hWJ-MSC免疫原性更弱、增殖能力更强、干细胞性能更加原始,使其成为一种新型的细胞来源,广泛应用于各种疾病模型的细胞移植以及基因治疗.综述新近研究的hWJ-MSC的生物学性状、增殖分化潜能、免疫性能以及其在各类疾病中的应用进展.【期刊名称】《国际妇产科学杂志》【年(卷),期】2016(043)001【总页数】5页(P94-98)【关键词】干细胞;间质干细胞;脐带;治疗;人脐带华通胶间充质干细胞【作者】何蓓;杨晓清【作者单位】226001 江苏省南通大学附属医院妇产科;226001 江苏省南通大学附属医院妇产科【正文语种】中文△审校者人脐带内、脐血管周围含有丰富的基质即华通胶，胶内含有大量间充质干细胞——人脐带华通胶间充质干细胞（human umbilical cord Wharton′s jellyderived mesenchymal stem cells，hWJ-MSC），该干细胞能够稳定表达间充质干细胞特有的分子标记物。

233CARCINO GENESIS ，TERATO GENESIS &MUTA GENESIS脐带来源的华通氏胶间充质干细胞的分离、特性及应用前景丁赛，张红霞，朱海英*(海军军医大学基础医学院细胞生物学教研室，上海200433)收稿日期：2021-11-21；修订日期：2022-05-13基金项目：国家自然科学基金(32171387)作者信息：丁赛，E-mail ：。

*通信作者，朱海英，E-mail ：【摘要】间充质干细胞(MSCs)的来源非常广泛。

虽然各种组织来源的MSCs 生物学特性不尽相同，但在标准培养条件下该类细胞均可以贴壁生长；细胞群体中有95%以上的细胞表达典型的间充质标记分子，如CD73、CD90和CD105，但缺乏造血标记分子CD14、CD19、CD34、CD45和CD79a 的表达；特别是均具有分化为成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞的能力。

这些性质是国际细胞治疗协会给出的定义该类细胞的最低标准。

脐带间充质干细胞是指来源于新生儿脐带组织中的多能干细胞。

目前来看，从脐带不同解剖学部位(区室)获得的MSCs 的生物学性质也存在差异，其中从脐带华通氏胶中分离获得的华通氏胶间充质干细胞，在增殖能力、分化潜能、免疫调节能力等方面均明显优于其他区室来源的间充质干细胞，是用于组织器官损伤修复及免疫调节的一种理想的“种子”细胞，被认为具有更好的临床应用前景。

本文围绕近年来华通氏胶间充质干细胞的分离建系、增殖特性、分化潜能以及临床应用方面的研究进展进行了综述，其中重点介绍了化学诱导分化方案的建立和优化，认为与通过遗传改变诱导重编程方法相比，化学诱导分化方法具有更好的临床应用潜力。

【关键词】脐带；华通氏胶；间充质干细胞；分化潜能；分离；增殖特性中图分类号：R329.2+8文献标志码：A文章编号：1004-616X(2022)03-0233-04doi ：10.3969/j.issn.1004-616x.2022.03.011间充质干细胞最早在骨髓中被发现和鉴定，随后在人体胚胎及成体的多种组织中被陆续鉴定出来，这些组织主要包括成体骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带和脐带血等。

间充质干细胞流式标记国际标准大家好，今天我们来聊聊一个有点儿高大上的话题——间充质干细胞（MSC）流式标记的国际标准。

别担心，我会把这个话题讲得轻松点，让大家听得懂，笑得出来。

毕竟，说到这些医学术语，咱们也得学会用“接地气”的方式来解读，不然一堆专业术语不就是让人头大吗？好啦，话不多说，我们直接开始吧！1. 什么是间充质干细胞？首先，间充质干细胞是什么鬼？简单来说，这是一种超级牛的细胞，能够在咱们身体里变成各种不同的细胞，比如骨细胞、脂肪细胞这些。

就像是细胞界的“全能选手”，它们能干很多事儿，真是了不起。

不过，要想知道这些细胞的状态，得有点儿手段，比如流式细胞术这种神器。

1.1 流式细胞术：细胞的“快递员”流式细胞术，就是用来研究细胞的一种方法。

想象一下，这就像是给细胞穿上了特殊的衣服，然后用一种特别的“扫描仪”来检查它们。

这种技术可以告诉我们每个细胞长啥样、有什么特点，就像是给细胞做体检一样。

通过这玩意儿，我们能更好地了解间充质干细胞的状态。

1.2 为啥要国际标准？既然咱们已经知道流式细胞术的“神奇”，那为啥还要有国际标准呢？想象一下，如果没有标准，大家的细胞检测结果就像是各自家里的“私房菜”，没有一致的口味，根本没法比较对比。

这就像是你做的糖醋里脊和别人做的糖醋里脊可能完全不同，大家都不知道哪个更好。

国际标准的出现就是为了统一口径，确保大家的“糖醋里脊”都是一样的，好让大家可以比一比，挑一挑。

2. 国际标准的核心要点好了，知道了国际标准的必要性，接下来我们得看看这些标准的“干货”。

这些标准就像是一本使用手册，教你怎么用流式细胞术去“审查”间充质干细胞。

具体来说，标准里有几个核心要点，不妨来瞧瞧。

2.1 标记的一致性首先，标准要求所有的间充质干细胞都得有统一的“标记”。

这就像是给每个细胞贴上统一的标签，确保大家在同一个“游戏规则”下工作。

这样一来，不同实验室之间的结果才不会像八点档电视剧一样，各种情节都不一样。

人脐带间充质干细胞体外分离、纯化及鉴定王娟;陆琰;何冬梅;张洹【期刊名称】《暨南大学学报（自然科学与医学版）》【年(卷),期】2009(030)004【摘要】目的:从人脐带中分离、培养并鉴定间充质干细胞(MSCs).方法:用胶原酶消化法分离脐带间充质干细胞,差速贴壁法进行纯化;MTT法检测细胞增殖活性,并绘制生长曲线;流式细胞仪检测其表面标志和细胞周期;地塞米松、抗坏血酸、磷酸甘油诱导其向成骨细胞分化,并用碱性磷酸酶染色鉴定;地塞米松、胰岛素、吲哚美辛诱导其向脂肪细胞分化,用油红O染色鉴定;将脐带MSCs注射到BALB/c裸鼠肾被膜下,观察有无致瘤性.结果:从人脐带中分离出的同充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞表达CD29、CD44,低表达CD106,不表达CD14、CD31、CD34、CD45和HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能;将脐带MSCs移植到BALB/c裸鼠肾被膜下,未观察到致瘤性.结论:从脐带中成功分离培养的细胞,具有间充质干细胞生物学特性.【总页数】6页(P367-372)【作者】王娟;陆琰;何冬梅;张洹【作者单位】暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632;暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632;暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632;暨南大学医学院血液病研究所,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】Q813【相关文献】1.人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定 [J], 王玲玲;马峰;张玉成;杜珍武;张桂珍2.睾丸Leydig干细胞分离、纯化及鉴定的体外研究 [J], 肖斌;王晓云;周广东;周英晋;毕宏达;朱吉;张敬德;邢新3.大鼠雪旺细胞体外分离培养纯化及鉴定 [J], 张春燕;张自强;刘玉梅;邓雯;王玉琴4.猴头菌素分离纯化、结构鉴定及体外活性研究 [J], 何晋浙;樊鹏;孙培龙5.胎猪胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定 [J], 李云龙;郭欣;杨晓波;黄跃南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

科普：脐带血干细胞研究现状，脐带血干细胞有必要储存吗？1968年，德国科学家Frieden Stein和他的同事在骨髓中发现了间充质干细胞（MSCs），后来的研究者陆续发现间充质干细胞广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为包括神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞在内的多组织系统的细胞，还在造血、免疫炎症反应、血管新生等人体重要功能中起重要调节作用。

间充质干细胞研究热度不断攀升，论文累计超过55000篇。

1995年，间充质干细胞首个临床试验完成，15名患者输注了培养的间充质干细胞测试了治疗的安全性。

近年来，间充质干细胞的研究热度不断攀升，根据统计，1990年至2019年6月，Pubmed上检索到的与间充质干细胞相关的文献累计超过55000篇。

从治疗的疾病种类来看，间充质干细胞的临床研究涉及上百种疾病。

将这些疾病按照器官系统分类，可以发现神经系统、心血管和骨科疾病是三类主要的研究领域，占比都在15%以上，总和超过一半。

此外，糖尿病、肝脏、肺脏、胃肠道、皮肤和移植物抗宿主病（GVHD）的比例都在5%左右，是间充质干细胞重要的临床研究方向。

在神经系统疾病方面，脊髓损伤、多发性硬化、中风、肌萎缩侧索硬化症、老年痴呆症是研究较多的疾病；在骨科疾病方面，骨关节炎、股骨头坏死和椎间盘退化是主要的疾病类型；心血管系统疾病方面，研究最多的是心肌梗死。

另外，关于肝硬化、克罗恩病、间质性肺病、系统性红斑狼疮的临床研究也较多。

在生殖系统疾病方面，也有间充质干细胞治疗勃起功能障碍和卵巢早衰的临床研究。

脐带组织来源的间充质干细胞应用研究皇冠上的“明珠”脐带间充质干细胞是存在于脐带华通氏胶和血管周围组织中的一种间充质干细胞，因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合用于临床研究和应用，是间充质干细胞的理想来源。

脐带间充质干细胞促进蜕膜血管内皮生长因子表达改善自然流产小鼠妊娠结局赵鑫鑫;杨晓清;张玉泉【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2022(26)30【摘要】背景:早期自然流产与母胎界面血管形成障碍或异常有关,人脐带华通氏胶间充质干细胞具有向损伤部位迁移及促血管生成的作用,目前人脐带华通氏胶间充质干细胞作用于早期自然流产蜕膜基质细胞的研究尚未有报道。

目的:探讨人脐带华通氏胶间充质干细胞对早期自然流产蜕膜基质细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子表达的影响,以及对早期自然流产小鼠妊娠结局的影响。

方法:①分离培养早期自然流产和人工流产蜕膜组织,实时荧光定量PCR和Western blot检测蜕膜组织中血管内皮生长因子的表达;②第3代人脐带华通氏胶间充质干细胞和原代自然流产蜕膜基质细胞共培养72 h,EdU、Annexin V-FITC分别检测蜕膜基质细胞增殖和凋亡情况,实时荧光定量PCR和Western blot检测蜕膜基质细胞中血管内皮生长因子的表达;③复制CBA/J×DBA/2自然流产小鼠模型,孕1,3,5 d尾静脉移植人脐带华通氏胶间充质干细胞悬液0.1 mL(细胞浓度为1×1010 L-1),孕14 d计算胚胎吸收率,ELISA检测外周血中血管内皮生长因子水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测蜕膜组织中血管内皮生长因子的表达。

结果与结论:①与正常蜕膜组织相比,早期自然流产患者蜕膜中血管内皮生长因子表达显著降低;②人脐带华通氏胶间充质干细胞促进早期自然流产蜕膜基质细胞中血管内皮生长因子的表达,促进细胞增殖、抑制细胞凋亡;③人脐带华通氏胶间充质干细胞促进自然流产小鼠蜕膜组织中血管内皮生长因子表达,进而减少胚胎吸收率;④结果表明,合适剂量的人脐带华通氏胶间充质干细胞可以促进蜕膜中血管内皮生长因子表达,改善早期自然流产妊娠结局。

【总页数】7页(P4793-4799)【作者】赵鑫鑫;杨晓清;张玉泉【作者单位】南通大学附属医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R453.9;R394.2【相关文献】1.促进小鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的血管内皮生长因子2.促进小鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的血管内皮生长因子3.脐带间充质干细胞对急性卵巢缺血再灌注损伤小鼠卵巢组织内血管内皮生长因子及肿瘤坏死因子-α的影响4.脂肪间充质干细胞对小鼠创面组织超氧化物歧化酶及血管内皮生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人脐带华通胶间充质干细胞的体外分离培养及鉴定目的：建立并优化人脐带间充质干细胞分离纯化方法，并对其表面标志与多向分化潜能进行鉴定。

方法：收集健康足月产胎儿脐带组织，采用组织块贴壁法进行原代培养，流式细胞仪对其表面标志进行检测，通过向成骨成脂分化对其多向分化潜能进行鉴定，RT-PCR对其干细胞特性基因Oct4、Nanog、Sox2、Nestin 进行检测。

结果：采用组织块贴壁法可在2周左右获得大量间充质干细胞，培养的细胞经流式细胞仪检测，高表达CD29、CD44、CD105、CD106，低表达CD34、CD45；经成骨成脂诱导2周后可分化为成骨细胞和成脂细胞，RT-PCR检测发现原代细胞表达Oct4、Nanog、Sox2、Nestin基因。

结论：人脐带间充质干细胞可在体外扩增培养，具有多向分化潜能，可作为组织工程种子细胞来源。

标签：人脐带间充质干细胞；原代培养；分离鉴定虽然胚胎干细胞具有全能性，可分化为各个胚层的细胞，但其来源还存在伦理和法律上的争议，且致瘤性目前还无法控制。

与胚胎干细胞相比，间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）则因具有多向分化潜能、易培养、扩增能力强、来源广等优势而被大量用于实验和临床研究。

在各种成人干细胞中，目前研究较多的是骨髓MSC，因其可以作为自体移植的干细胞来源。

但骨髓的获取属于侵入性检查，来源有限，且骨髓MSC的量、增殖效率、分化潜能有着明显的个体差异，会随着年龄的增加而显著减少，因此寻找新的干细胞来源成为当务之急。

研究發现，可以从多种组织如骨髓、脂肪组织、脐带血、胎盘等中分离得到MSC。

相比骨髓，脐带属于医用废弃物，具有较低的免疫原性，容易获得，相对纯净，不会给供者带来痛苦，致瘤性、病毒和细菌污染的可能性均较骨髓MSC 低。

此外，与骨髓MSC相比，人脐带MSC（human umbilical cord MSC，hUCMSC）具有更强的增殖能力，其独特的多潜能特性能在体外保留更长时间，因此成为干细胞研究的重要来源。