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感受态细胞的制备（DH5α）一、准备工作所有试剂、容器均需提前预冷。
1、实验器械4℃离心机（50ml离心管），37℃恒温箱，37℃摇床，超净台（使用前需要紫外消毒15min 至少）；0.22μm的滤器2个（过滤灭菌TfB2种溶液），10ml注射器2个；冰盒；高压灭菌的1.5mlEP管1盒，与离心机配套的50ml离心管6个（高压灭菌），高压灭菌的500ml 锥形瓶2个，高压灭菌的100ml玻璃瓶2个，高压灭菌的1ml枪头和200μl枪头各一盒。
2、试剂配制（甘油特别难吸，用蓝枪头慢慢吸吧）① LB平板：单纯LB平板，加有amp或有kana的（制板时需标注好类型，时间）。
② SOB培养基（Super Optimal Broth）③ TfBⅠ：（100ml制备量）分别称取乙酸钾0.294g，MnCl2 0.99g，KCl 0.146g，CaCl20.111g，置于200ml烧杯中，加入15ml甘油和85mlDDW，摇晃，使其全部溶解。
然后在安全橱中用孔径为0.22μm的滤器过滤混合液，置于高压灭菌的100ml玻璃瓶中，4℃保存，使用前必须预冷。
（装在50ml离心管，封口4度保存）④ TfBⅡ（20ml制备量，每次现用现配，装在50ml离心管）：分别称取MOPS 0.046g，CaCl20.167g，KCl 0.015g，置于50ml烧杯中，加入3ml甘油和17mlDDW, 摇晃，使其全部溶解。
然后在安全橱中用孔径为0.22μm的滤器过滤混合液，使用前必须预冷。
配制量 1 L配制方法 1.配制250 mM KCl溶液。
（50ml离心管分装）在90 ml的去离子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。
2.配制2 M MgCl2溶液。
（50ml离心管分装）在90 ml去离子水中溶解4.06g MgCl2 6H2O后，定容至100 ml，高温高压灭菌。
5.量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。
高效感受态细菌制备试剂盒(Hanahan方法)货号：M050012描述：Hanahan法（1）是制备高效感受态细菌的标准方法。
这种化学方法制备的感受态细菌的转化效率可达到109cfu/µg DNA，通常用于构建高质量的基因文库，对于普通的克隆操作更是绰绰有余。
对于很难获得有效连接和重组子的困难克隆操作，使用Hanahan法制备的感受态细菌无疑为克隆成功提供了最大保证。
然而Hanahan法的试剂准备相当繁琐，通常用于商业化感受态细菌，通常实验人员难得尝试。
本试剂盒以Hanahan原始文献(1)和《分子克隆实验指南》(2)发表的方法为基础，提供制备新鲜或冻存的高效感受态细菌的全套试剂和简化方案。
重复性甚好，转化效率高，可满足基因文库构建和所有的克隆操作。
组成：20ml Hanahan缓冲液，0.5ml加强液。
可制备100x50µl管高效感受态细菌，进行100-200次转化。
适用：制备新鲜或冻存的高效感受态细菌。
储存：短期4ºC避光，长期-20ºC。
操作步骤1.细菌培养：1.1准备器皿和培养基。
(1)使用洁净培养器皿，用普通复印纸或报纸覆盖瓶口或管口棉线扎紧高压消毒。
(2)厌氧生长的菌体难以达到高感受态。
为保证有氧培养，最好使用250ml三角瓶加入50ml培养基摇菌。
(3)最好用SOB培养基，用SOB要优于LB。
培养基pH值在6.8-7.2，含有20mM MgSO4or20mM MgCl2,，有利于获得高效感受态。
(SOB medium: 2%bacto-trytone,0.5%bacto-yeast extract,0.5%NaCl,2.5mM KCl,20mM MgSO4,pH7.0with NaOH)1.2细菌接种。
取250ml三角瓶加入50ml含10~20mM MgSO4的SOB培养基。
1:100接种冻存的菌液于SOB培养基，注意接种比例随冻存细菌浓度和类型而变。
汉恒生物无缝克隆试剂盒使用说明(附原理)HB-infusion TM无缝克隆试剂盒使用说明（附原理说明）一、产品简介HB-infusion TM无缝克隆试剂盒是一种新型、快速并且高效的Gibson Assembly DNA定向克隆技术，可以在任意载体的任意位置一次插入多个目的基因片段。
HB-infusion TM无缝克隆试剂盒操作极其简单，仅需在载体的克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物的5’端引入与载体克隆位点两端完全一致的15~25 bp同源序列（图1，图3）。
将上述线性化的克隆载体和带有同源序列的PCR片段按合适比例混合，并加入HB-infusion TM Master mix，通过反应体系中DNA外切酶、DNA聚合酶以及连接酶的在50℃反应20 min即可快速完成定向克隆，阳性率几近100%。
图1. HB-infusion TM快速克隆试剂盒原理示意图。
1. 线性化目的载体（左上）；2. PCR获取目的片段。
设计的引物５’需要和线性化载体末端有15~25 bp的重叠（图中蓝色和黄色片段，细节可参考图3）；3. 按照一定比例把二者混合在HB-infusion TM的2⨯预混液内，50︒C反应20 min后直接转化E.coli即可。
二、HB-infusionTM试剂盒的优点1. 相比于传统的同源重组的无缝克隆方法进行，HB-infusion TM试剂盒更高效，操作更简单，只需要一次反应即可完成定向克隆；2. 对酶切位点无要求，可以把目的片段插入到任意载体的任意位点；注：1. 为了降低载体自连背景，提高阳性率，建议采用双酶切载体质粒。
酶切最好能切出一个较大片段，这样回收的目的条带可以和没有切开的质粒明显分开。
2. 质粒单酶切容易造成载体切割不完全和自连，导致假阳性的产生。
因此，必须单酶切的时候建议延长酶切时间并脱磷处理（酶切2h-过夜，CIP处理20 min），同时做好空载的对照。
3. 请务必跑胶回收线性化的载体，否则非线性化质粒会带来极高的背景。
Code No.：D406Competent Cell Preparation Kit（200次量）目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。
在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难（超低温）；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。
TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
●制品内容（200次量）Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存：4℃保存。
●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。
关于感受态细胞及转化克隆/建库/表达专用超级高效感受态细胞国外的同学说一般他们克隆都是直接购买感受态细胞转化，实验效率很高的。
我总是以为如果是一般的克隆实验，自己做感受态好像够用了－－如果是建库，购买现成的感受态细胞就是非常必要的首选，因为转化效率确实比实际手工制备的高2－3个数量级以上，特别是建库，能实实在在地提高实验的效率。
实际上，除了建库以外，Stratagene为更好的表达蛋白、以及转化效率较低的巨无霸质粒，而特别优化了一些感受态细胞，做表达的人其实可以参考一下，有点用处的。
生物通在这里借用Merck公司提供的资料供大家参考。
Stratagene的XL10-Gold®几乎算得上是高效转化的代名词了，研究者一旦要克隆大质粒、连接DNA和建库，克隆甲基化DNA，进行蓝白斑筛选等，首选的就是XL10-Gold®和其衍生菌。
XL10-Gold®用途包括：--克隆大DNA：包括表达质粒，基因组DNA克隆--构建质粒文库：减少DNA大小偏倚性，使全长cDNA克隆、双杂交质粒等各种大小的质粒转化效率更接近，提高文库代表性（比DH10B高25倍）。
Hte 基因型Hte（高效转化）基因型是Stratagene开发的特异性提高大质粒、连接DNA的宿主菌基因型，并使细胞生长加快（当天获得菌落），已经成功应用于25kb超螺旋DNA和8kb 连接DNA的克隆。
XL10-Gold®，BL21-Gold，BL21-CodonPlus®，SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列细胞都带有这个新的性状。
超级感受态细胞Stratagene提供多种>5 x109转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时最值得推荐的。
电转化感受态细胞Stratagene的电转化感受态细胞特别耐受电击处理，方便好用，在DNA材料极珍贵、量少时，或构建有代表性文库时，建议采用电转化感受态细胞。
(pEC-T) 克隆及鉴定试剂盒地址：上海市浦东张江高科技园区蔡伦路720号2号楼电话：************传真：************-13主页： email ：****************保存温度：-20o C SinoBio 目录号：T003产品组成：质量控制：Control Insert克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。
Control Insert经克隆后，经测序确认“T” 突出的存在。
产品描述：SinoBio Easy Clone T-vector是一种PCR产物高效TA克隆的专用T载体。
它由pBluescript II KS载体改造而成：保留了pBluescript II KS载体全部的酶切位点；PCR产物插入位点处于多克隆酶切位点的中间，其两侧都有众多的酶切位点可供选择。
由于本载体以pBluescript II KS载体为基础构建而成，所以它具有同pBluescript II KS载体相同的功能：PCR产物插入后可以利用a -互补性进行蓝白斑筛选，挑选阳性克隆。
可以用M13通用引物和T7，T3启动子引物对PCR产物进行测序。
含有T7 及T3 RNA聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。
15分钟快速连接：l 随酶提供独特配方的2×快速及10×普通T4 DNA Ligation Buffer; l 使用2X 快速buffer在室温(25°C)下，仅需15分钟即可完成连接反应;自带超快PCR 鉴定2×Fast Taq Master Mix 及DNA Marke ：2×Fast Taq Master Mix (Quick Load型)已含有PCR反应所需的快速型PCR聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、上样染料以及反应缓冲液预先，使用时只需再加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应。
其扩增速度为普通Taq酶的数倍，因此可大幅度缩短PCR鉴定过程所需要的时间， 试剂盒自带预混1×Loading Buffer的DL2,000 Plus DNA Marker，能满足绝大部分PCR产物电泳的需要。
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60049.1 v.A GENMED酵母化学感受态细胞制备试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED酵母化学感受态细胞制备试剂是一种旨在通过有机化学处理，高效快速制备酵母化学感受态细胞，便于冻存和后续即刻进行转化的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种实验用酵母菌株（S. cerevisiae、C. albicans、S. pombe、Pichia pastoris）化学感受态细胞的制备，其产物可即刻转化各种线性或环装酵母穿梭质粒（例如YIp, YRp, YCp, YEp和YAC等）或双质粒共转化，以及冻存后再用。
应用于定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）、酵母双杂交系统等。
产品即到即用，性能稳定，操作简便，转化效率平均高达105－6转化细胞/微克DNA。
技术背景酵母菌是一种低等单细胞真核生物，具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单明了等原核生物的特点。
作为模式生物，它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力，在分子遗传学方面认识最早，最先作为外源基因表达的细胞宿主。
它是一种哺乳动物基因调节的理想研究工具。
其中转化技术将构建目标基因的分析模型。
产品内容GENMED培养液（Reagent A）毫升GENMED清理液（Reagent B）毫升GENMED感化液（Reagent C）毫升产品说明书 1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备GENMED酵母化学感受态细胞直接转化试剂盒（GMS60051.1）：用于质粒DNA的后续转化15毫升锥形离心管：用于酵母细胞收集的容器1.5毫升离心管或冻存管：用于感受态细胞储存的容器台式离心机：用于酵母细胞沉淀摇床培养箱：用于酵母细胞培养实验步骤1．准备好1个15毫升锥形离心管2．加入 毫升GENMED培养液（Reagent A）3．挑取琼脂平板上的1个酵母菌落到培养液里4．放进30℃摇床培养箱里孵育20小时，速度为220RPM5．移取100微升过夜生长的酵母菌液到新的15毫升锥形离心管6．加入 毫升GENMED培养液（Reagent A）7．放进30℃摇床培养箱里孵育20小时，速度为220RPM，或直至细胞处于指数生长中期（OD600＝1，即1 X 107细胞/毫升）8．放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g9．小心抽掉上清液10．加入 毫升GENMED清理液（Reagent B），混匀细胞颗粒群11．放进台式离心机离心5分钟，速度为3500g12．小心抽掉上清液13．加入 毫升GENMED感化液（Reagent C），混匀细胞颗粒群14．即刻分装（每管50微升）到冻存管15．即刻进行后续操作或缓慢降温，放进－70℃冰箱里保存备用16．（选择步骤）选取1管感受态细胞，置于室温下17．（选择步骤）加入5微升（1微克DNA或5微克酶切线性DNA产物）18．（选择步骤）加入 微升GENMED转化液（Reagent D）（注意：参见注意事项13）19．（选择步骤）涡旋震荡5秒20．（选择步骤）放进30℃℃培养箱里孵育60分钟，期间每隔15分钟涡旋震荡5秒21．（选择步骤）移取100微升在琼脂平板上铺板22．（选择步骤）放进30℃培养箱里孵育3天，观察菌落生长注意事项1．本产品为10次（10毫升菌液）操作2．操作时须戴手套3．操作时，须无菌操作，避免污染母液4．确保酵母细胞达到指数生长中期和细胞浓度，可以获得优质感受态细胞5．制备好的酵母感受态细胞保存在－70ºC冰箱里6月活性不变；严禁反复冻融6．本产品适用于各种酵母菌株的转化，注意选择适当的培养基；建议使用本公司系列酵母培养基 7．如果使用C.albicans作为感受态细胞转化，建议使用新鲜制备的细胞转化，确保高转化效率8．建议使用高质纯化的DNA用于转化，确保转化效率9．建议使用小于1微克环形DNA质粒或5微克线性DNA质粒，进行转化，可以获得高转化效率10．可以直接转化酶切DNA产物11．本产品可用于同步转化两种不同的质粒，例如构建酵母双杂交系统，但转化效率会相应降低；建议使用GENMED酵母双杂交系统细胞转化试剂盒－GMS6005212．本产品转化效率可达104－106细胞/微克DNA13．用户可以使用自己的方法进行转化，或使用本公司配套产品进行转化：GENMED酵母化学感受态细胞直接转化试剂盒－GMS60051.114．本公司提供系列酵母实验技术产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定转化效率高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
超级酵母转化试剂盒II型使用说明书储存条件：4℃保存，有效期1年，YPD Plus开封后-20℃保存。
产品说明：Coolaber的超级酵母转化试剂盒II型可以完成酵母感受态制备，酵母感受态储存，酵母转化实验。
最突出的优点是能储存酵母感受态细胞，可长达一年。
后续酵母转化操作简单而快速，转化效率与常规的酵母转化试剂盒（SK2400）基本相同。
如需进一步提高酵母转化效率，可选用Coolaber的YPD Plus（Cat：YT0004），转化后复苏酵母菌，转化效率可以增加50-100%。
（一）酵母感受态细胞的制备：1.活化菌种。
-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基上划线，在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线，在30 ℃培养2-4天。
待酵母单菌落长至2 mm长时，接种。
3.首先把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30-50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。
收集细胞，1,000 g，离心5 min, 去上清。
注意：可用4℃一周内的的酵母菌培养产物3mL接种50mL YPDA培养基过夜培养后，离心收集细胞，用于下游实验。
此步可以节约菌种活化，小摇所需的时间。
5.用10 mL的Y1溶液悬浮、洗涤沉淀，1,000 g，离心5 min，去上清。
6.沉淀中加入0.5-1 mL的Y2溶液悬浮，既获得酵母感受态细胞。
按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管（可直接用于转化）。
7. 将感受态缓慢冷冻后置于-80℃冰箱保存。
建议将感受态细胞放入程序降温盒，或者几层纸包好放入泡沫盒中，再放于-80℃冰箱过夜，后将感受态取出置于-80℃保存。
保存一年基本不影响其转化效率。
使用时，-80℃冰箱取出，室温融化后直接用于转化，操作流程见（二）酵母转化。
注意：缓慢冻存感受态，是保证冻存后的感受态细胞转化效率的关键步骤。
高效感受态细胞制备试剂盒产品编号：SK9305/SK9306包装规格：40支/200支试剂盒组成组分 SK9305，40支 SK9306，200支BT Buffer F 10 ml 5 × 10 mlBT Buffer E 4 ml 5 × 4 ml2个 10个BT Media(1 Capsules for 50 mL)操作手册1份1份保存方法及注意事项BT Media以胶囊的形式提供，请于室温密封干燥保存。
BT Buffer F和BT Buffer E可于常温运输，收到后请于4°C保存，长期保存请置-20°C。
产品介绍生工BT高效感受态制备试剂盒采用了一种简单而可靠的方法制备感受态细胞，由该试剂盒制备的感受态细胞在进行转化时无需经过热激步骤，对于Ampicillin抗性质粒而言，甚至连活化步骤都可以省略，感受态细胞和DNA混合后即可直接涂布，极大地简化了转化过程，提高了实验效率。
用该试剂盒制备的大肠杆菌DH5α细胞使用pUC19质粒DNA转化，转化率可以达到107~109 cfu/µg DNA，对其他常用的工程菌株和质粒也同样适用。
产品特色1. 感受态制备流程快速简单。
2. 转化过程无需热激。
3. 转化效率高达107~109 cfu/µg DNA。
4. 使用感受态专用培养基，最大化感受态效率。
5. 适合大量制备。
高效感受态细胞制备流程自备材料：目标菌种、LB培养基及平板、离心机、50 ml离心管、冰等。
BT Media培养基准备：将一只胶囊投入50 mL蒸馏水中，高压灭菌即可。
准备工作：将BT Buffer F和BT Buffer E放冰上预冷，预冷低温离心机至4°C。
1. 用超低温冰箱中保存的菌种在LB平板上进行划线培养，置37°C培养箱中静置培养12~16 h待菌落生长至直径1~2 mm大小。
2. 挑取一个生长正常的菌落，接种至10~15 mL液体LB培养基中，于37°C摇床充分振荡（≥ 250 rpm）培养12~16 h。
3. 取上述活化好的菌液0.5 mL接种至准备好的50 mL BT Media中，于37°C摇床充分振荡培养至菌液OD600 = 0.4~0.6。
✓ 50mL培养物请使用容量大于250 mL的锥形瓶，同时摇床转速超过250 rpm以保证充气充分。
✓使用较低的温度（18·26°C）培养细菌将使感受态效率进一步提高一个数量级，室温状态下菌液培养至OD600 = 0.4~0.6需要10~36 h。
4. 将菌液转移至50 mL聚丙烯塑料离心管中，冰上放置10 min。
5. 3,500-5,000 rpm离心5 min收集菌体沉淀。
6. 倒掉上清，每50 mL培养物菌体沉淀用5 mL冰上预冷的BT Buffer F轻柔充分重悬菌体，冰上放置10~15 min。
7. 于4°C，3,500-5,000 rpm 离心2~5 min收集菌体沉淀。
8. 每50 mL培养物菌体沉淀用2 mL冰上预冷的BT Buffer E轻柔充分重悬菌体，按每管100 μl分装至冰上预冷的1.5 mL离心管中。
9. 菌体直接用于转化或用液氮速冻后于超低温冰箱中保存。
✓制备好的感受态可于冰上保存48 h，-70°C保存有效期为6个月。
标准转化步骤该试剂盒制备的感受态亦可以使用普通的转化步骤，参见Page 5。
快速转化步骤（不经过热激的转化步骤）自备材料：LB培养基、LB平板、合适抗生素、待转化质粒或连接产物等。
准备工作：将含合适抗生素的LB平板预热至37°C。
1. 将从超低温冰箱中取出的感受态细胞置冰上融化。
2. 每管感受态加入100 pg~10 ng待转化DNA，用枪头轻柔混匀，于冰上静置10 min。
3. 加入1 mL预热至37°C不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。
于37°C摇床缓慢振荡培养45~60 min。
✓对于使用Ampicillin筛选而言，该步骤可以省略，可以直接将感受态和DNA的混合溶液涂布至含有抗生素的平板上。
4. 取适量菌液涂布至含有与目标质粒抗性相应的抗生素的LB平板中，37°C培养箱中倒置培养过夜。
快速感受态细胞制备试剂盒产品编号：SK9306/SK9307包装规格：40支/200支试剂盒组成组分 SK9307，40支 SK9308，200支BT Buffer T (2 ×) 4 ml 5 × 4 mlSterilized ddH2O 4 ml 5 × 4 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项BT Buffer T采用2倍浓缩液的形式提供，试剂盒于常温运输和储存（4°C存放会导致试剂沉淀析出），有效期为一年。
产品介绍快速感受态制备试剂盒采用经济快速的方法高效制备大肠杆菌感受态细胞，在传统方法的基础上简化了操作步骤，提高了感受态细菌的转化效率。
该试剂盒已被成功地用于从多种大肠杆菌菌株细胞制备感受态细胞，其中包括常用的克隆株（JM109，DH5α，TOP10等）和表达菌株（BL21家族）用于基因克隆、质粒扩增或重组蛋白的表达。
该试剂盒可采用两种方法制备感受态细胞：标准制备法和快速制备法。
这两种方法制备感受态细胞比传统CaCl2法和Hanahan法更加简单快捷，不需要0~4°C孵育和传统的热击处理。
采用快速方法制备的感受态细胞pUC 18质粒转化大肠杆菌JM109的转化效率为>1.0×105 cfu/µg；使用标准方法的转化效率为>1.0×106 cfu/µg。
产品特色1. 感受态制备过程只需一步悬浮。
2. 适合大/小量快速制备。
3. 制备好的感受态可直接冻存于-70°C。
4. 转化过程无需热激步骤。
5. 标准转化效率为106~108/µg DNA。
标准感受态细胞制备流程自备材料：目标菌种、LB培养基及平板、离心机、离心管、冰等。
准备工作：将2 × BT Buffer T和无菌蒸馏水等体积混合后置冰上预冷，每ml菌液需要100 μl稀释好的BT Buffer T。
1. 在平板上挑取单克隆或冻存的甘油菌，接种至2-5 ml合适的培养基中，37°C培养过夜。
2. 将过夜培养的菌液按1:100稀释比例加入到预热的新鲜LB培养基中，250 rpm 37°C 培养至细菌生长至早对数期（OD600=0.3~0.4）时，时间通常为1.5~3 h。
3. 将上述培养好的菌液于3,500~5,000 rpm，4°C离心5~10 min，收集细胞。
4. 按照每mL培养菌液加入100 µl Buffer的比例加入前边准备好的冰上预冷的1 × BT buffer T，用吸头充分悬浮细胞，冰上放置10 min。
可直接用于转化或分装后用液氮冻存，-70°C保存备用。
快速感受态细胞制备流程自备材料：目标菌种、LB培养基、离心机、离心管、冰等。
准备工作：将2 × BT Buffer T置冰上预冷。
1. 在平板上挑取单克隆或冻存的甘油菌，接种至2-5 ml合适的培养基中，37°C培养过夜。
2. 将过夜培养的菌液按1:100稀释比例加入到预热的新鲜LB培养基中，250 rpm 37°C 培养至细菌生长至早对数期（OD600=0.3~0.4）时，时间通常为1.5~3 h。
3. 取100 µl菌液置冰上预冷10 min，取等体积冰上预冷的2 × BT Buffer T混合，冰上放置10~30 min。
可直接用于转化或-70°C冻存。
标准转化流程参考Page 5。
快速转化流程（不经过热激的转化步骤）参考Page 8。
非感受态细胞转化试剂盒产品编号：SK9309包装规格：20次试剂盒组成组分 SK9309，20次BT Buffer K 1 ml操作手册1份保存方法及注意事项低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍非感受态转化试剂盒是生工最新推出的快速转化试剂盒，独特的溶液配方使得不处于感受态的大肠杆菌细胞可以被转化，为用户省却了繁琐的感受态制备与保存步骤，加快了实验进程，让您不再由于一时没有制备好的感受态细胞而烦恼。
采用本试剂盒方法进行转化不需要单独制备感受态细胞，对菌液的生长状态要求较低，新鲜培养的细菌或短时间保存于4°C的细菌平板上的菌落均可使用。
对菌种和质粒无特别要求，基因工程常用菌株如DH5a，Tg1，BL21等均可进行转化。
转化效率可达105 cfu/µg DNA，尽管对于构建文库等对感受态要求较高的应用难以胜任，对付质粒和连接产物的转化等应用而言已经足够。
产品特色1. 无需制备感受态即可直接转化。
2. 适合小量快速制备。
3. 试剂盒可以在-20°C保存较长的时间。
4. 转化效率可达105/µg DNA，满足众多快速应用。
极速转化流程自备材料：目标菌种、LB或SOC培养基、离心机、离心管、冰等。
准备工作：将BT Buffer K取出置冰上融化。
1. 在过夜培养的平板上挑取1-5个单克隆或取50~100 µl冻存的甘油菌，接种至1 mL合适的液体培养基中，于37°C培养1~3h。
2. 于5,000 rpm离心2-5 min，小心丢弃上清。
3. 短暂离心将管壁液体甩至管底，用移液器将残余的液体培养基吸尽。
✓小心操作，不要搅动或丢掉菌体沉淀；✓该步不能省略，残留的培养基严重影响转化效率。
4. 加入50 µl冰上预冷的BT Buffer K，将菌体沉淀轻轻吹打混匀。
5. 加入1-5 µl质粒DNA或连接产物，轻轻混匀。
6. 将上述离心管置冰上放置5~10 min。
7. 加入1 mL预热至37°C的无抗生素的LB或SOC培养基，混匀后于37°C温浴培养45~60 min。
8. 取适量菌液涂布至含与质粒抗性相应的平板培养基中，置37°C培养箱中倒置培养过夜待转化子长出。
