教学案例库——兽药残留检测
教学案例一磺胺类药物代谢产物残留的检测技术教学案例名称
猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测
教学案例描述
该案例主要讲解水产品中磺胺类药物代谢产物残留的检测方法，适用于进行该项目检测的食品企业，以及进行兽药残留检测项目教学的高职学校。
主要内容
1）猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测意义
2）猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测方法
3）高效液相色谱的使用
4）检测报告的出具
教学目标
1、知识目标
1）熟悉磺胺类药物代谢产物的检测方法
2）熟悉高效液相色谱的原理
3）磺胺类药物代谢产物检测报告构成
4）内标法及外标法定量
2、能力目标
1）正确进行溶液的配制和稀释
2）熟练进行样品的制备
3）熟练使用高效液相
4）标准曲线的绘制
5）独立完成磺胺类药物代谢产物的检测工作
6）正确书写检测报告
适用对象
高职学生
知识准备
（一）磺胺类药物代谢产物的危害
磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药,主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。但使用不合理很容易造成组织中的残留和蓄积，许多国家和组织规定了其最高残留限量(MRL)为0.1μg/g,甚至不得检出。
在摄食残留有磺胺类药物的肉品是一个长期低剂量吸收磺胺类药物的过程，而细菌对磺胺药较易产生抗药性，当剂量、疗程不足时更易发生。其中以葡萄球菌最易产生，其次为痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌和链球菌，同时各种磺胺药间有交叉抗药性。人体内蓄积到一定程度时，有严重的毒副作用，会破坏人的正常免疫机能和造血系统。损害人体泌尿系统，容易在肾小管内析出结晶，损伤肾小管引起结晶尿、血尿、蛋白尿，重者可发生尿少、尿闭甚至尿毒症。多数磺胺类药抗菌谱广，易抑制肠道正常寄生细菌的生长，造成某些维生素的缺乏。此外，磺胺药还可抑制骨髓的造血功能，引起溶血性贫血和再生障碍性贫血等严重反应，还影响中枢神经系统，引起头晕、头痛、全身乏力等，并可引起恶心、呕吐等消化道症状，磺胺药也是较多引起药物过敏的药，严重者引起甚至可引起剥脱性皮炎。
教学实施过程
一、情境创设
某肉制品加工企业检验部门对当天生产的一批产品进行磺胺类药物代谢产物的检测，要求检测方法依据国家标准进行。 【问题导入】为什么要检测磺胺类药物代谢产物残留？ 引出：1、水产品中磺胺类药物代谢产物残留的危害？ 2、磺胺类药物代谢产物残留的检测方法？ 【学生讨论】学生分组学习并讨论，得出问题答案。
二、职责要求
科长：负责检验流程的监督及检测报告的审批；
组长：人员分工，各组工作的监督（摄像、照相），检测报告初审； 准备组：负责检验材料、试剂、设备等的准备工作； 操作组：负责仪器设备的检测操作
数据组：负责样品信息的记录、检测结果的记录、报告单出具
【学生活动】发放学习资料单 “农业部958号公告-12-2007 水产品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱法”，分组学习及讨论。 【结果展示】让学生绘制工作内容流程图，进行展示。
色谱条件选择色谱柱选择
检测器选择
ODSC18 4.6mm×250mm
紫外检测器
流动相准备流动相配制甲醇：水：乙腈=40:50:10（体积分数）过滤
超声脱气
脱气
封口备用
0.45μm滤膜过滤
样品准备试样制备
称取试样
提取
加入试剂
离心
移入4ml氯仿乙腈溶液，加入C18粉、中性氧化铝粉各100mg
将试样制成糜状
称取试样6±0.05g
加入14ml氯仿乙腈，加入
1ml，10%硫酸钠
5000r/min，离心5min
脱水氮吹或浓缩至近干
加入1ml流动相，用注射器过滤装入样品瓶备用
分析方法编辑
设定色谱参数
设定数据文件
检测波长：270nm；压力：
17.5MPa；流速0.7mL/min
最小峰面积、峰宽、峰检测灵
敏度等
开机
打开总电源
打开仪器各模块电源开关
进入色谱工作站
设置仪器配置
仪器自
进样器、柱温箱、高压输液泵、
紫外检测器、计算机进样操
吸取标准溶液0、2、4、6、8、10
μL注入色谱柱，吸取样品10μL
注入色谱柱
分析色谱图
进样分析
更换流动相
排除液路中的空气
平衡色谱柱
若流动相性质与流路中原流动相差
异较大时,需中间流动相进行过渡
包括流动相脱气，进样口脱气
通过10-20倍柱体积的流动相
达到平衡
根据标准溶液色谱图做标准曲
线，根据标准曲线求试样中样品
含量
图1 实验操作总流程图
三、实践操作
【学生】各组按照任务分工，开始实践操作。 准备组：需填写工作准备单
数据组：需填写检测记录单、检测报告单
检 测 样 品
名 称 单 位
领 取 数 量
使用情况
猪肝
检 测 设 备
名 称 型 号
领 取 数 量
使用情况
高效液相色谱仪，配置紫外检测器或二极管阵列检测器 旋转蒸发仪
关机
关闭检测器和工作站
关泵
关闭液相色谱仪各电源
填写实验记录本 选用适当溶剂洗清色谱系
溶剂需过滤脱气；一般用水或低浓度甲醇水冲洗30min ，再用甲醇冲洗
冲洗接受，逐渐降低流速至0，关泵。
书写检测报告 评价与反馈
实验室整理与卫生清洁
总结评价整理
