RACE原理及应用
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race实验原理
race实验原理是一种常用的实验方法,用于研究物质的分布在不同介质中的速
度差异。
其原理基于物质在不同介质中传播速度不同的特性。
在race实验中,通常采用两种或多种不同介质,例如液体和气体、固体和液体等。
实验过程中,将待研究的物质同时引入不同的介质中,并观察物质在不同介质中的行为变化。
物质在不同介质中的速度差异主要由两个因素决定:介质的性质和物质与介质
之间的相互作用力。
首先,介质的性质对物质的传播速度有重要影响。
不同介质具有不同的密度、
黏度、温度等特性,这些特性会影响物质的传播速度。
例如,在液体中传播的物质通常受到介质的黏性阻力,传播速度较慢;而在气体中传播的物质受到的阻力较小,传播速度相对较快。
其次,物质与介质之间的相互作用力也会影响物质的传播速度。
不同物质与不
同介质之间的相互作用力具有差异,这会导致传播速度的不同。
例如,水分子在水中会受到水分子之间的相互作用力的影响,传播速度较慢;而在空气中,水分子之间的相互作用力较小,传播速度较快。
通过观察物质在不同介质中的行为变化,可以定量或定性地研究物质在不同介
质中的传播速度差异。
这对于理解物质的传播特性、研究物质在不同介质中的性质变化等有着重要意义。
总之,race实验原理是一种通过观察物质在不同介质中的传播速度差异来研究
物质特性的实验方法。
其原理基于介质的性质和物质与介质之间的相互作用力所导致的传播速度的差异。
通过该实验方法,可以深入了解物质在不同介质中的行为,为进一步的应用和研究提供基础。
说明Race技术的基本原理及其应用1. Race技术的背景和概述Race技术(Realtime Analysis and Characterization of Emissions)是一种用于实时分析和表征排放物的技术。
它通过采集和分析废气样品中的成分,并结合相关的数据处理和模型算法,用于评估和监测大气污染物的来源和趋势,从而为环境监测和管理部门提供决策支持和控制指导。
2. Race技术的基本原理Race技术的基本原理包括以下几个方面:2.1 排放源采样Race技术通过设计和布置采样点,采集排放源中的废气样品。
采样点的选择需要考虑排放物的类型和分布,并确保样品的代表性。
2.2 废气样品采集与处理采集到的废气样品需要进行预处理,如去除杂质和湿气。
这样可以保证后续的分析和测量结果的准确性和可靠性。
2.3 成分分析与测量Race技术通过使用高精度仪器,对废气样品中的成分进行测量和分析。
常用的测量技术包括质谱仪、红外光谱仪和气相色谱等。
这些仪器可以准确地测量废气中不同成分的含量和浓度。
2.4 数据处理和模型算法通过对采集到的废气样品数据进行分析和处理,Race技术可以对排放源的特征和趋势进行评估和建模。
这些模型和算法可以帮助环境监测和管理部门进行大气污染物的来源识别和趋势预测,从而制定相应的管控措施。
3. Race技术的应用Race技术在环境监测和管理中具有广泛的应用,主要包括以下几个方面:3.1 大气污染源识别和追踪通过对排放源的采样和分析,Race技术可以帮助环境监测和管理部门准确定位大气污染物的来源,包括工业排放、交通尾气和生活废弃物等。
这对于追踪和监测污染源,制定相应的污染治理措施非常重要。
3.2 污染物排放趋势和变化评估Race技术可以对废气样品中的污染物进行连续测量和分析,从而评估排放源的污染物排放趋势和变化情况。
这对于判断排放源的环境影响和制定长期的大气污染治理策略非常有价值。
3.3 环境影响评估和管理通过Race技术对废气样品的分析和模型算法的应用,可以对大气污染物的环境影响进行评估。
race技术篇一:Race技术介绍及应用领域Race技术是指“随机抢先的并发执行”(Randomly Accessed Critical Execution)技术,它可以在多处理器系统中实现高性能。
Race技术主要用于多线程和多进程环境下解决数据竞争问题,防止数据竞争,提高并发程序的执行效率。
Race技术的应用领域很广泛,例如网络服务器、数据库服务器等需要高并发的应用都可以使用Race技术来优化程序性能。
Race技术的主要特点是随机性和系数。
在Race技术的实现中,线程会随机选择一个实例进行执行,并且每个可执行线程执行的时间是不同的。
这种随机性能够在多线程环境下充分利用CPU资源,减少线程之间的竞争,从而提高了并发程序的运行效率。
在实际应用中,Race技术的效果取决于程序的性质和环境。
如果程序的竞争因素比较少,Race技术的优化效果会比较小。
但是对于大型的并发程序来说,Race技术可以在运行速度和负载均衡方面提供很好的支持。
需要注意的是,Race技术并不是一种万能的解决方案。
如果开发人员没有充分理解Race技术的实现方法和机制,可能会增加系统的稳定性、可靠性和安全性问题。
在实际开发中,为了保证程序的正确性和可靠性,需要尽可能避免过度使用Race技术,同时合理利用Race技术来提高程序的运行效率和性能。
篇二:Race技术的优势和劣势Race技术具有以下几个方面的优势:1. 提高处理器利用率。
Race技术能够充分利用多核处理器和多线程,从而提高系统的处理器利用率,提高程序效率。
2. 优化负载均衡。
Race技术可以自动平衡系统中不同线程的负载,使得各个线程的执行时间相对平衡,从而避免线程的空闲或饱和状态,最大限度地提高程序效率。
3. 增强系统干扰能力。
Race技术能够在系统中增强对外界的干扰能力,防止外界威胁对系统的影响,提高系统的安全性和可靠性。
但是Race技术也具有一些比较明显的劣势:1. 程序稳定性可能会受到影响。
瞬转过表达测序全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:瞬转过表达测序(Rapid amplification of cDNA ends, RACE)是一种用于确定基因的末端序列以及寻找基因的转录起始位点的技术。
利用RACE技术,研究人员可以快速准确地获得目标基因的全长序列信息。
本文将介绍瞬转过表达测序的原理、步骤和应用。
一、原理瞬转过表达测序是一种基于PCR扩增的技朮,用于扩增未知序列的末端。
它利用了mRNA转录的3'多聚腺苷酸尾巴和5'端的未知序列,通过扩增这两个端点,从而获得目标基因的全部序列信息。
RACE技术的原理如下:将mRNA转录为cDNA,其中含有未知的末端序列。
然后,通过加入多聚C或多聚G的引物,可以选择性地扩增3'末端或5'末端的序列。
通过PCR扩增和测序,可以获得目标基因的全部序列信息。
二、步骤瞬转过表达测序的步骤如下:1. cDNA合成:将mRNA转录为cDNA,即合成第一链。
通常采用逆转录酶和随机引物对mRNA进行逆转录。
2. RACE反应:根据目标基因的末端序列信息,设计特异性引物。
如果要扩增3'末端,可以加入多聚C引物;如果要扩增5'末端,可以加入多聚G引物。
3. PCR扩增:将cDNA与特异性引物进行PCR扩增,得到预期大小的产物。
4. 凝胶电泳:将PCR产物进行凝胶电泳分析,确认扩增的目的片段。
5. 测序:对扩增的片段进行测序,获得完整的基因序列信息。
三、应用瞬转过表达测序技术在生物学研究中有着广泛的应用,包括:1. 确定基因的未知序列:RACE技术可以帮助研究人员获得目标基因的未知序列信息,为进一步的研究奠定基础。
2. 寻找基因的转录起始位点:通过RACE技术,可以确定基因的5'端序列,从而找到转录起始位点。
3. 进化研究:瞬转过表达测序技术可以用于研究物种之间的基因序列差异,从而揭示生物进化的规律。
4. 新基因的发现:通过RACE技术,可以发现新的基因,为生物学研究提供新的研究对象。
RACE 的简介目前,全长基因的获得是生物工程及分子生物学研究的一个重点。
尽管已经有多种方法可以获得基因的全长序列,但在很多生物研究中,由于所研究的目的基因丰度较低,从而使得由低丰度mRNA 通过转录获得全长cDNA 很困难。
近年来发展成熟的cDNA 末端快速扩增(RACE)技术为从低丰度转录快速获得全长cDNA 提供了一个便捷的途径。
cDNA 末端快速扩增 (rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术是一种基于 mRNA 反转录和 PCR 技术建立起来的、以部分的已知区域序列为起点,扩增基因转录本的未知区域,从而获得mRNA(cDNA)完整序列的方法。
简单的说就是一种从低丰度转录本中快速增长cDNA5’和cDNA3’末端,进而获得获得全长cDNA 简单而有效的方法,该方法具有快捷、方便、高效等优点,可同时获得多个转录本。
因此近年来RACE 技术已逐渐取代了经典的cDNA 文库筛选技术,成为克隆全长 cDNA 序列的常用手段。
第二 RACE 的原理RACE 是采用PCR 技术由已知的部分cDNA 顺序来扩增出完整cDNA5’和3’ 末端,是一种简便而有效的方法,又被称为锚定PCR (anchoredPCR)和单边 PCR(one2side PCR)。
3’RACE 的原理一)加入 oligo(dT)17 和反转录酶对 mRNA 进行反转录得到(-)cDNA;二)以 oligo(dT)l7 和一个 35bp 的接头(dT17-adaptor)为引物,其中在引物的接头中有一在基因组 DNA 中罕见的限制酶的酶切位点。
这样就在未知cDNA 末端接上了一段特殊的接头序列。
再用一个基因特异性引物(3 amp)与少量第一链(-)cDNA 退火并延伸,产生互补的第二链(+)cDNA。
三)利用 3amp 和接头引物进行 PCR 循环即可扩增得到 cDNA 双链。
扩增的特异性取决于 3amp 的碱基只与目的 cDNA 分子互补.而用接头引物来取代 dT17 一 adaptor 则可阻止长(dT)碱基引起的错配。
RACE(rapid-amplificationofcDNAends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。
cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。
完整的cDNA序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。
末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。
编辑本段优点与筛库法相比较,有许多方面的优点1)此方法是通过PCR技术实现的,无须建立cDNA文库,可以在很短的时间内获得有利用价值的信息。
2)节约了实验所花费的经费和时间。
3)只要引物设计正确,在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长。
实验室现有的RACE试剂盒的简介RACE是一种从一个相同的cDNA模板进行5‘和3‘末端快速克隆的方法。
此方法会产生较少的错误条带。
此过程中使用的酶混合物非常适合长链PCR。
用此方法的要求是必须知道至少23-28个核苷酸序列信息,以此来设计5’末端和3‘末端RACE反应的基因特异性引物(GSPs)。
编辑本段引物的设计基因特异性引物(GSPs)应该是:23-28nt50-70%GCTm值≥65度,Tm值≥70度可以获得好的结果需要实验者根据已有的基因序列设计5‘和3‘RACE 反应的基因特异性引物(GSP1和GSP2).由于两个引物的存在,PCR的产物是特异性的。
编辑本段反应中涉及到的一些事项cDNA的合成起始于polyA+RNA。
如果使用其它的基因组DNA或总RNA,背景会很高。
RACEPCR的效率还取决于总的mRNA中目的mRNA的量和不同的引物有不同的退火和延伸温度。
进行5‘和3’RACEPCR的时候应该使用热启动。
4中给出了所有引物的相互关系。
重叠引物的设计会对全长的产生有帮助。
另外,重叠的引物可以为PCR 反应提供一个对照。
并不是绝对的要利用设计的引物产生重叠片段。
物GSP中的GC含量要在50-70%之间。
这样可以使用降落PCR。
避免使用自身互补性的引物序列,否则会产生回折和形成分子内氢键。
race实验原理摘要:一、实验背景及目的二、实验原理简介1.种族内竞争与合作2.种族间竞争与合作3.实验设计及方法三、实验结果与分析1.实验数据概述2.种族内竞争与合作对实验结果的影响3.种族间竞争与合作对实验结果的影响四、实验启示与应用1.人类社会中的竞争与合作现象2.企业竞争与合作案例分析3.对现实生活的启示正文:一、实验背景及目的在人类社会中,竞争与合作无处不在。
为了更好地理解这一现象,科学家们设计了race实验。
该实验旨在探讨种族内和种族间竞争与合作对实验结果的影响。
通过这个实验,我们可以了解到竞争与合作在人类社会中的重要作用。
二、实验原理简介1.种族内竞争与合作:在种族内,个体之间既存在竞争关系,也存在合作关系。
竞争关系主要体现在资源争夺上,而合作关系则体现在共同解决问题、分享利益等方面。
2.种族间竞争与合作:不同种族之间的个体同样存在竞争与合作关系。
种族间竞争可能导致资源分配不均,合作则有助于实现共赢。
3.实验设计及方法:实验采用随机分组的方法,将参与者分为不同种族。
在每个种族内,参与者需要完成一系列竞争与合作任务。
任务包括个人利益最大化、团队利益最大化以及混合利益最大化等。
通过观察实验过程中各种现象,研究者分析竞争与合作对实验结果的影响。
三、实验结果与分析1.实验数据概述:实验结果显示,在种族内,竞争与合作并存。
在种族间,竞争与合作现象更加明显。
同时,合作对实验结果具有积极意义,能够提高整体收益。
2.种族内竞争与合作对实验结果的影响:在种族内,竞争与合作的平衡有助于实现个体和团队的利益最大化。
适当的竞争可以激发个体的潜能,提高整体竞争力;合作则有助于资源共享、风险共担,提高团队凝聚力。
3.种族间竞争与合作对实验结果的影响:在种族间,竞争与合作共同影响资源分配。
合理的合作可以使各种族实现共赢,降低资源争夺导致的冲突。
同时,适度竞争有助于激发各种族的潜力,提高整体竞争力。
四、实验启示与应用1.人类社会中的竞争与合作现象:race实验反映了人类社会中的竞争与合作现象。
race实验原理摘要:一、实验背景1.实验目的2.实验意义二、实验原理1.实验基本流程2.实验核心方法3.实验关键参数三、实验应用1.实验领域2.实验实例3.实验成果四、实验展望1.实验局限性2.实验改进方向3.实验未来前景正文:一、实验背景随着科技的快速发展,人工智能、大数据等领域的研究日益深入。
在这些领域中,有一种名为“race”的实验,它旨在通过模拟人类认知过程,探究人类思维的奥秘。
本文将为您详细介绍race 实验的原理。
二、实验原理1.实验基本流程race 实验是一种基于认知神经科学、计算机科学等多个学科的实验方法。
实验过程中,参与者需要完成一系列与认知能力相关的任务,如记忆、决策等。
通过记录参与者在实验中的脑电波、眼动等生理信号,研究者可以分析人类认知过程的神经机制。
2.实验核心方法实验核心方法为脑电波信号的分析。
脑电波信号可以反映大脑神经活动的实时状态,通过分析这些信号,研究者可以了解参与者在进行不同认知任务时的神经活动特点。
此外,眼动信号的分析也是实验的重要部分,它可以反映参与者的注意力和视觉搜索策略。
3.实验关键参数实验关键参数包括实验任务的设计、实验环境的设置以及实验数据的分析方法。
任务设计需要充分考虑人类认知过程的特点,以保证实验的有效性;实验环境的设置要尽量模拟现实场景,以减少外部因素对实验结果的影响;数据分析方法需要结合实验目的,选择合适的统计和建模技术。
三、实验应用1.实验领域race 实验广泛应用于心理学、神经科学、人工智能等领域,为研究人类认知过程提供了有力的工具。
2.实验实例以心理学为例,研究者可以通过race 实验探究人类记忆、决策等认知过程的神经机制。
在神经科学领域,实验可以帮助研究者了解大脑不同区域的功能和相互联系。
在人工智能领域,实验可以为机器学习、自然语言处理等领域的研究提供启示。
3.实验成果通过race 实验,研究者们取得了一系列重要成果,如揭示了人类认知过程的神经机制、提出了新的学习算法等。
race扩增原理Race扩增原理Race扩增是一种常用的基因扩增技术,广泛应用于分子生物学、遗传学和生物医学研究领域。
它是通过DNA聚合酶在模板DNA上的连续合成过程,使得DNA片段在特定的温度条件下反复复制,从而实现DNA的扩增。
Race扩增是基于聚合酶链反应(PCR)技术的改进,PCR是一种通过酶催化链式反应来扩增特定DNA片段的方法。
而Race扩增则是针对某个已知DNA片段的末端序列未知的情况下,通过一系列特定的引物设计和PCR反应来扩增该DNA片段的未知序列,从而获得该DNA片段的完整序列。
Race扩增的基本原理是利用已知序列的引物和一系列特定的引物设计来扩增目标DNA片段的未知序列。
其步骤如下:1. 通过已知序列设计外向引物(3'末端向外)和反向引物(5'末端向外),并合成引物。
2. 利用外向引物进行PCR扩增,得到目标DNA片段的一个部分序列。
3. 通过已得到的部分序列设计内向引物(在已知序列的3'末端内部),并合成引物。
4. 利用内向引物进行PCR扩增,得到目标DNA片段的另一个部分序列。
5. 通过已得到的两个部分序列设计新的外向引物和反向引物,继续PCR扩增,直到得到目标DNA片段的完整序列。
Race扩增的关键在于引物设计。
对于未知序列的DNA片段,可以通过已知序列的末端部分设计引物,从而扩增未知序列。
由于PCR 反应的高度特异性,只有与引物序列完全匹配的DNA片段才能被扩增,因此引物的设计必须准确。
Race扩增还可以结合其他技术来增加扩增效率和准确性。
例如,可以利用聚合酶链反应实验中的链延伸反应(anchored PCR)来进行Race扩增,通过在反向引物的3'末端添加一个特定的序列,从而增加PCR的特异性和扩增效率。
此外,还可以利用引物的嵌合反应(nested PCR)来进行Race扩增,通过两对引物的连续扩增,进一步提高PCR的特异性和扩增效率。
RACE的简介
目前,全长基因的获得是生物工程及分子生物学研究的一个重点。
尽管已经有多种方法可以获得基因的全长序列,但在很多生物研究中,由于所研究的目的基因丰度较低,从而使得由低丰度mRNA通过转录获得全长cDNA很困难。
近年来发展成熟的cDNA末端快速扩增(RACE)技术为从低丰度转录快速获得全长cDNA提供了一个便捷的途径。
cDNA 末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术是一种基于mRNA反转录和PCR技术建立起来的、以部分的已知区域序列为起点,扩增基因转录本的未知区域,从而获得mRNA(cDNA)完整序列的方法。
简单的说就是一种从低丰度转录本中快速增长cDNA5’和cDNA3’末端,进而获得获得全长cDNA简单而有效的方法,该方法具有快捷、方便、高效等优点,可同时获得多个转录本。
因此近年来RACE技术已逐渐取代了经典的cDNA文库筛选技术,成为克隆全长cDNA序列的常用手段。
第二RACE的原理
RACE 是采用PCR 技术由已知的部分cDNA 顺序来扩增出完整cDNA5’和3’末端,是一种简便而有效的方法, 又被称为锚定PCR (anchoredPCR)和单边PCR(one2side PCR)。
3’RACE的原理
一)加入oligo(dT)17和反转录酶对mRNA进行反转录得到(-)cDNA;
二)以oligo(dT)l7和一个35bp的接头(dT17-adaptor)为引物,其中在引物的接头中有一在基因组DNA中罕见的限制酶的酶切位点。
这样就在未知cDNA末端接上了一段特殊的接头序列。
再用一个基因特异性引物(3 amp)与少量第一链(-)cDNA退火并延伸,产生互补的第二链(+)cDNA。
三)利用3amp和接头引物进行PCR循环即可扩增得到cDNA双链。
扩增的特异性取决于3amp的碱基只与目的cDNA分子互补.而用接头引物来取代dT17一adaptor则可阻止长(dT)碱基引起的错配。
5’RACE的原理
5’RACE与3’ RACE略有不同。
首先,引物多设计了一个用于逆转录的基因特异引物GSP-RT;其次,在酶促反应中增加了逆转录和加尾步骤,即先用
GSP-RT逆转录mRNA获得第一链(-)cDNA后,用脱氧核糖核酸末端转移酶和dATP在cDNA5’ 端加poly(A)尾,再用锚定引物合成第二链(+)cDNA,接下来与3’ RACE过程相同。
用接头引物和位于延伸引物上游的基因特异性引物(5amp)进行PCR扩增。
全长cDNA的获得
通过RACE方法获得的双链cDNA可用限制性内切酶酶切和southem 印迹分析并克隆。
通常的克隆方法是同时使用一个切点位于接头序列上的限制性内切酶和一个切点位于扩增区域内的内切酶。
由于大多数非特异性扩增的cDNA 产物不能被后一个限制性内切酶酶切,因而也就不会被克隆.从而增加了克隆的选择效率。
还可以用在基因特异性引物的5’端掺人一个限制性内切酶的酶切位点的方法来克隆。
最后,从两个有相互重叠序列的3’和5’RACE产物中获得
全长cDNA。
或者通过分析RACE产物的3’和5’端序列,合成相应引物来扩增mRNA的反转录产物,从而获得全长cDNA。
第三RACE的应用
RACE技术主要是应用于对全长cDNA序列的获得,但对该技术进行一定的修改后,也可在其它方面显示出极高的应用价值。
首先,RACE技术可用于cDNA文库的构建及筛选。
Belyavaasky等(1989)用10个骨髓瘤细胞分离的总RNA,通过TdT加同聚尾、(dT)16引物反转录,接着用(dC)13和锚定引物扩增的方法建立了一个106克隆的cDNA 文库。
同时,用该方法构建文库的优点是它们都只需要很少量的实验材料。
建喜等(2001)利用RACE技术从已经构建的cDNA 文库中成功克隆了家兔精子膜蛋白基因。
其次,应用RACE克隆已知片段的旁侧内部序列(neighboring internal sequence)。
Fritz等(1991)以及Struck等(1994)分别用该法获得了3’端和5’端的旁侧序列。
Zhang (1996)应用LA-PCR方法获得了特异基因的5’末端非编码和编码序列,省去了构建及筛选基因组文库的麻烦。
王东等(2003)利用
RT-PCR和RACE技术从玉米中获得一个长度为2469bp F2KP蛋白基因的cDNA克隆。
此外,RACE技术还可用于克隆同源基因的同源片断,为寻找同基因提供了一种方法。
除此之外,Whitcomb等设计的随机引物/锚定PCR能对克隆质粒载体上的靶序列进行定点删除,采用(N)10锚随机引物和变性的质粒DNA进行杂交,然后通过T7聚合酶来延伸,这样单链DNA就可被一随机引物和一基因特异性引物扩
增,一端可达到缺失删除,缺失的片段可达2Kb。
Balavoine应用连接介导PCR从一种扁虫中克隆得到8个分别属于Hox,msh,NK-1和NK-2的含同源盒的片段,说明RACE可用于克隆同源基因的同源片段,为寻找同源基因提供了一种手段。
RACE技术与生物信息学,例如EST库相结合,具有快速,高效克隆新基因的特点,为快速钓取基因家族候选新成员提供新思路,如果一个基因是多基因家族的一个成员,用基因特异引物(GSP)可能同时扩增几个高度同源的Cdna.李红等利用一条cDNA作为探针,通过BLASTN从GenBank中整合出了7条更长的EST,通过设计引物,利用RACE扩增,得到了7条新基因.相比单纯寻找新基因的全长,此种方法的结合充分利用了信息巨大的基因资源库,得到了更多的信息,获得新基因速度更快*效果更高,属一种颇具规模化的方法,很有应用前景。
总之,随着RACE技术的不断改进和完善,优化PCR扩增的条件以提高扩增的效率和忠实性,RACE技术必将在基因克隆以及基因家族和基因表达变化等研究中发挥极大的作用。
第四RACE的优点与局限性
RACE技术相对于其他方法克隆全长cDNA来说具有价廉、简单和快速等特点。
用RACE获得cDNA克隆只需几天的时间,而且对丰度很低的起始反应物质,照样能迅速反馈是否有目的产物生成。
因此,可根据不同的RNA制备来修订反转录条件,以满足全长cDNA的获得。
同时,通过RACE技术获得5’端调控序列和多聚腺苷化信号序列的信息,有助于选择引物以用于转录模型非常复
杂的基因中扩增cDNA的亚群。
另外,RACE技术能产生大量独立克隆,这些克隆可用来证实核苷酸序列,并使得被选择性剪接或开始用于很少使用的启动子的特殊转录物的分离成为可能。
RACE技术从理论上来说是很简单的,但是实际操作中会面临许多技术上的难题。
许多研究人员发现,利用RACE来获得全长基因并非如想像中那般成功,甚至经常会发生错误的扩增和克隆结果, 多数情况下,5’端的编码区经常会由于反转录过程的不彻底而丢掉,特别是由于有大的转录物或者存在复杂的二级结构的时候,而且连接反应通常是特异性差效率很低,这样PCR成功进行就不能保证.尤其在长片段扩增时,PCR就显得不那么有效.例如几个Kb片段的产物就需要优化改变扩增条件,而且扩增结果经常出现非特异性扩增条带,使得选择目的条带变得十分困难,而对于丰度较低,长度较长的基因RACE方法困难更大,这是困扰研究人员的一大难题。
由于RACE扩增中经常出现由于引物的不匹配而导致的非特异性扩增,有时需要进行几轮巢式扩增来达到获得特异性扩增的目的,然而多轮扩增又容易提高PCR反应的错误发生率,由于这些原因,利用RACE技术通常不易获得所希望的结果。
尽管RACE技术在应用中取得了很大的成功.但在实际操作过程仍有不少局限性。
一般来说导致失败的原因主要有二:第一,在逆转录、TdT加尾、PCR 扩增这三个连接的酶促反应过程中,任何一步的失败都会导致前功尽弃;第二,即便是上述反应平稳顺利.但结果也通常会出现一些非特异性产物或非全长的产物。
因此,要保证RACE技术的顺利进行,还需从不同方面进行改良优化。