细菌数量的测定ppt课件

2.2 平板涂布法
先制作平板；
取样品（无菌水）0பைடு நூலகம்1ml放入平板 上，涂抹棒均匀涂抹平板表面，直至 无残存样品（无菌水）；
翻转放置。
平板涂布
2. 3注意事项
保证无菌操作要求，同时注意不得影响样品中的微生物（培养基不得 太烫，取样时不要离火焰太近）；
制作平板时培养基不得沾附底面之外的侧面甚至盖上，未凝固前不得 翻转；
混匀器
四、接种培养
1.培养数量
不稀释样：样品、无菌水（无菌对照），共2 个培养，每个培养需培养3个平板（重复）；
需稀释样：最大稀释样及前两个稀释样、无 菌水，共4个培养，每个培养需培养3个平板 （重复）；
预先在培养皿底面标记清楚培养稀释度、操 作人、时间等信息。
培养皿标记
2. 接种平板
2.1 混合平板法
三、样品的稀释
主要针对样品中含较多微生物的水样（水源水、污水）；
自来水、饮用水一般不需稀释，可直接取样培养。
1. 分装无菌水 取数支无菌试管，标记10－1、10－2、……,每试管分装9ml无菌水 或无菌生理盐水。 （也可分装好后再灭菌）
稀释所需的数量级根据样品中微生物量的估计而定，一般轻度 污染水稀释到10－3，重度污染水可稀释到10－5、10－6。
对于不利于细菌生长的污染物，常需检测对应专门微生物及污染 物含量的直接检测。
二、稀释平板培养计数法
细菌的个体微小，直接观察、计数困难； 单个细菌经过培养可长成肉眼可见的菌落； 要设法避免多个细菌长成1个菌落，常需对 样品进行稀释处理。
稀释平板培养菌落
1.测定的程序：
样品稀释 接种平板 培养 菌落计数 报告
不同稀释度不得使用同一移液管，防止交叉影响及污染；

三、仪器和材料
无菌培养皿、无菌试管、无菌水，无菌吸管、
接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、
水样、培养箱、微波炉。
四、实验内容和操作方法
（一）采集水样：取校园内河水，用无菌取水器， 在距岸边5m处，取距水面10~15cm的深层水样。 如果不能在2h内检测的，需放入冰箱中保存。 （二）细菌总数的测定： 1）水样稀释：按无菌操作法，将水样作10倍系列 稀释。 2）选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度 的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平 皿上菌落总数介于30和300之间。 3）吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别 注入两个培养皿，每皿1mL。
(二) 稀释度的选择 l、首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，当 只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可 用它作为平均值乘其稀释倍数。 2、若有两个稀释度的平均菌落数都在30～300之 间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2， 应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小 的菌落数。 3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则 应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告 之。
4）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培 养基（用于河水样）立即旋摇培养皿，充分混匀。 方法是握住平皿，先往ห้องสมุดไป่ตู้个方向画圆，再朝相反 方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿 使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿基于 水平位置放置至固化。 5）接种河水样的培养皿，倒置于37℃培养箱中培 养24h。
一、实验目的和要求
1、学会细菌菌落总数的测定。 2、了解水质与细菌菌落数之间的相关 性。
二、实验原理
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用 适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。 然而，在实际工作中不易做到，所以通常用 一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生 性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程 度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度 成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污 染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说 明水体被污染得越严重。

• 本区包括云南、贵州和广西三个省区； • 位于我国西南边陲，北部与四川、西藏相连，东部与广东
相连，南部及西南部与老挝、越南和缅甸唇齿相依；
• 多民族省区；云南有25个少数民族、贵州有17个、广西有 11个，民族文化绚丽多姿“三里不同风，五里不同谷，大
节三六九，小节天天有” 。
二、西南区的旅游环境特征
岩溶旅游资源/民俗文化旅游资源得天独厚； 地形复杂多样，地文景观丰富多彩； 热带、亚热带季风气候孕育了繁茂的森林景
观；
二、西南区的旅游环境特征
现代文明与传统文化交相辉映的城市风光； 南北兼容、中西合璧的文化； 旅游配套服务完善，旅游资源以自然与人造景观最富特色。
三、岩溶旅游资源
岩溶旅游资源的概念
旅游需求市场较大； 旅游资源分布不平均，云南多民族、广西具有滨海资
源、贵州多瀑布；
三、岩溶旅游资源
• 岩溶旅游资源的价值
– 美学观赏价值 – 科学考察价值 – 生态环境价值 – 文化传承价值
四、民俗文化文化旅游资源
– 民俗文化文化概念：是指民间民众的风俗生活 文化的统称。也泛指一个主题、民族、地区中 集居的民众所创造、共享、传承的风俗生活习 惯。它具有普遍性和传承性和变异性。
1mL
9mL稀释液 1：100
1mL
9mL稀释液 1：1000
1mL
每个稀释度
做两个平皿
1mL
1mL
1mL
1mL
倾注平皿
将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿 约15ml，并转动平皿，混合均匀。
6、培养及计数
培养条件：倒置于36±1℃温箱内培养48±2h
计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放 置于0－4℃，但不得超过24h。

2.包装 （1）移液管包装
将干燥的移液管的吸端用细铁丝塞入少许棉花构成1～ 1.5cm长的棉塞，以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹 入管内。棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉 花滑入管内。将塞好棉花的移液管的尖端，放在4～5cm宽的 长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包 住移液管的尖端（实验图2-1），用左手将移液管压紧，在 桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头 折叠打结。包好的多个移液管可再用一张大的报纸包好。
皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗
花将、塞牛 好皮棉纸花（的培或移养报液纸管皿）的、尖由电端一烤，箱放底。在4一～5盖cm宽组的成一套，用牛皮纸或报纸将每套培养皿 如（果3）将（培培养皿养皿皿底的放包金朝装属里筒内，皿盖朝外，）包好。如果将培养皿放金属筒内 （3）进培养行皿干的包热装 灭菌，则不必用纸包。
（2）棉塞的制作
（2）试管和三角瓶等的包装
用棉塞或泡沫塑料塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住
然后在棉塞与管口和瓶口的外面用两层报纸与细线（或用铝
箔）包扎好，放在铁丝或铜丝篓内待灭菌。
晾干或放入烘箱中烘干、备用。 培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿可用干热
（3）培养皿的包装 度调至160 oC后维持2小时，把恒温箱的调节旋扭调
实验四 细菌总数的测定 ————器皿的包扎
一、目的
1．熟悉玻璃器皿的包扎方法。 2．掌握干热灭菌法灭菌技术。
二、仪器和材料
试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉 花、牛皮纸（或报纸）、电烤箱。
三、方法与步骤
1.洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养
皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗 刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡， 再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然 晾干或放入烘箱中烘干、备用。