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艾滋病抗体检测酶联免疫法和胶体金法的效果对比湖南省永州市中心医院检验科摘要：目的分析艾滋病抗体检测中使用酶联免疫法和胶体金法的效果。
方法选取2019年1月-2021年12月在本实验室1922份血清标本进行艾滋病抗体的检测为研究对象，其血液标本均采用两种方法进行测定，并对比方法的检测差异。
结果采用酶联免疫法进行初次筛查，有12份阳性，1910份阴性，阳性率为0.62%。
在胶体金法实验中,有13份阳性，1909份阴性，阳性率为0.68%。
结论针对艾滋病抗体检测采用胶体金法和酶联免疫法准确性无显著差异，均可作为艾滋病抗体检测的有效手段,从而降低疾病对患者机体的危害。
艾滋病是指获得性免疫缺陷综合征，能够对患者的T淋巴细胞进行直接的攻击，导致患者机体免疫功能失效，易受到各种病毒及细菌的入侵[1]。
因此我们将HIV抗体检测结果作为艾滋病患者诊断的重要依据[2]。
临床常以酶联免疫法及胶体金法应用于艾滋病抗体的检测当中，但对于该两种检测方式的检测效果如何，仍需要进一步研究。
1资料与方法1.1一般资料选取单位2019年1月-2022年7月在实验室1922份血清标本进行艾滋病抗体的检测为研究对象，其血液标本均采用两种方式进行测定。
所有患者均采用不带抗凝的真空试管进行采血，3~4ml,并于一小时后进行离心分离血清检测。
1.2方法对所有患者均予以酶联免疫法和胶体金法进行艾滋病抗体检验：1酶联免疫法（试剂由万泰生物药业生产）：采用真空试管采集患者的血液样本，送至实验室进行检测，将样本进行离心处理后取上清液，将其在正常室温条件下静置30min，然后采用酶联免疫法检测试剂盒对样本试剂进行检测，若OD值大于界定值则代表阳性，小于界定值则为阴性；②胶体金法（试剂由艾博ABON生产）：采集样本的方法同酶联免疫法相同，采用胶体金法诊断试剂盒对患者进行检测，若检测带为红色，则检测结果为阳性，若无红色，则为阴性。
1.3评价标准实验的评价标准严格参照我国《艾滋病检验技术规范》及其相关标准进行审核和判定。
ELISA 法对比胶体金法检测血液中 HIV 抗体的结果分析摘要：目的分析ELISA法对比胶体金法检测血液中HIV抗体的结果。
方法选取2018年9月～2020年1月在我院进行血液HIV抗体检查患者84例作为研究对象，分别采用胶体金法检测和LISA法，并通过免疫印迹法确定，分析比较两组检测方法的特异性。
结果通过ELISA法检测，本次实验84例患者中有49例呈现阳性，假阳性10例，其假阳性率为11.90%。
经过胶体金法检测，本组84例患者血清中有39例呈阳性，7例成假阳性，其假阳性率为8.33%。
两组之间存在明显的差异性，具有统计学意义（P<0.05）。
结论 ELISA法综合准确性相对较高，因此在临床血清HIV抗体检测中，两种方法都可以使用，进而促使检验结果准确率的提升。
关键词：ELISA法胶体金法 HIV抗体Analysis of HIV antibody in blood by ELISA and colloidal gold assayAbstract: Objective To analyze the detection results of HIV antibody in blood by ELISA and colloidal gold.Methods eighty-four patients who underwent blood HIV antibodytest in our hospital from September 2018 to January 2020 were selected as study subjects. Colloidal gold method and LISA method were used respectively, and the specificity of the two detection methods was analyzed and compared by western blotting.Results By ELISA, 49 of the 84 patients were positive and 10 were false positive, with a false positive rate of 11.90%.By colloidal gold method, 39 of the 84 patients in this group were positive and 7 were false positive, with a false positive rate of8.33%.There was a statistically significant difference between the two groups(P<0.05).Conclusion THE comprehensive accuracy of ELISA method is relatively high, so both methods can be used in clinical serum HIV antibody detection, thus promoting the accuracy of test results.Keywords: ELISA, colloidal gold, HIV antibody现阶段，艾滋病已逐渐成为严重威胁人类健康的公共卫生问题之一。
第一节免疫胶体金的制备一、胶体金的特性和制备（一）胶体金的结构胶体金（colloidalgold）也称金溶胶（goldsol），是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。
胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。
胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核，较小的胶体金颗粒基本是圆球形的，较大的胶体金颗粒（一般指大于30nm以上的）多呈椭圆形。
在电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态。
（二）胶体金的特性1．胶体性质胶体金颗粒大小多在1～100nm，微小金颗粒稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体金溶液。
胶体金因而具有胶体的多种特性，特别是对电解质的敏感性。
电解质能破坏胶体金颗粒的外周永水化层，从而打破胶体的稳定状态，使分散的单一金颗粒凝聚成大颗粒，而从液体中沉淀下来。
某些蛋白质等大分子物质有保护胶体金、加强其稳定性的作用。
2．呈色性微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。
最小的胶体金（2～5nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（10～20nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（30～80nm）则是紫红色的。
根据这一特点，用肉眼观察胶体金的颜色可粗略估计金颗粒的大小。
3．光吸收性胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰，这个光吸收峰的波长（λmax）在510～550nm范围内，随胶体金颗粒大小而变化，大颗粒胶体金的λmax偏向长波长，反之，小颗粒胶体金的λmax则偏于短波长，表19-1所列为部分胶体金的λmax。
（三）胶体金的制备1．制备方法胶体金的制备多采用还原法。
氯金酸（HauC14）是主要还原材料，常用还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。
根据还原剂类型以及还原作用的强弱，可以制备0.8nm～150nm不等的胶体金。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
新冠乳胶法和胶体金法区别新冠肺炎疫情的爆发，让人类的生命安全问题再次受到关注，各方面的科学研究也备受关注。
其中，疫情检测技术是疫情防控的重要环节之一，乳胶法和胶体金法则成为新冠病毒检测中比较常用的两种检测技术。
那么它们之间有什么区别呢？今天我们就一起来探究一下。
首先，让我们了解一下乳胶法和胶体金法。
乳胶法是一种颗粒凝聚试验方法，基于免疫反应原理，用于检测抗体或抗原的存在。
在新冠病毒检测中，通过悬浮在含有乳胶微球的缓冲液中的胶体乳浊液，将抗体加入到样品中，如果样品中存在病原体，则可以将乳胶颗粒凝聚在一起形成凝胶，从而产生特殊的凝胶反应。
胶体金法（Gold immunoassay）则是一种快速免疫层析试验（Immunochromatography assay，ICA）技术，主要用于检测该物质是否存在于体内，便于对疾病进行诊断。
该技术是利用金纳米颗粒对生物学分子的检测，通过特定的抗原和抗体结合反应，金纳米颗粒变色的方式，可检测出样品中虽微量的蛋白质、抗体等物质。
接下来，我们来看一下它们之间的区别。
1. 检测的原理不同乳胶法是基于颗粒凝聚反应原理，需要在试验过程中形成凝胶来判定检测结果。
而胶体金法则是利用金纳米颗粒的特征，通过特定的抗原和抗体结合反应，产生可见变色反应来判断检测结果。
2. 检测时间不同乳胶法和胶体金法在检测时间上也有所不同。
一般而言，乳胶法检测时间较长，需要进行凝胶反应，需要至少15到20分钟，而胶体金法则的检测时间通常在5到10分钟左右。
3. 适用范围乳胶法需要有充足的样品高质量的抗体来源，否则测出的结果可信度不高。
而胶体金法则适用范围更广，可以用于简单、快速地检测某些物质。
4. 检测精度不同虽然两种检测方式都可以用于新冠病毒的检测，但是从精度上来说，胶体金法更精确。
因为乳胶法的颗粒凝聚反应受其他因素的影响较大，有时候会出现错误的结果，而使用胶体金法检测结果则会更为准确可靠。
总结起来，乳胶法和胶体金法都是新冠病毒检测中常见的两种方法，但它们的检测原理、时间、适用范围和精度等方面都存在一定的差异。
对比分析胶体金试纸法与化学发光免疫法测定人绒毛膜促性腺激素的结果袁云燕;詹鹏飞;肖俊锐【摘要】目的：对胶体金试纸法与化学发光免疫法测定人绒毛膜促性腺激素(HCG)的结果进行研究分析。
方法选取2013年1月~2014年1月本院收治的孕妇140例作为研究对象，将孕妇分为胶体金试纸法组与化学发光免疫法组，每组70例孕妇，采用不同的方法测定人绒毛膜促性腺激素，对研究结果进行对比分析。
结果化学发光免疫学组阳性率(94.29%)明显好于胶体金试纸法组(68.57%)，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论测定人绒毛膜促性腺激素(HCG)采用胶体金试纸法测试方便，易操作，但是化学发光免疫学检测法更能准确检测，且灵敏度高，值得在检测中推广应用。
%Objective To study and analyze the HCG test results by colloidal gold test strip and chemiluminescence immunoassay.Methods 140 cases of pregnant women from January 2013 to January 2014 in our hospital were chosen as study objects, and they were divided into the group of colloidal gold test strip and the group of chemiluminescence immunoassay, each group with 70 cases. The HCG were tested in different ways, and the results were compared and analyzed.Results The positive rate of the chemical group(94.29%) was better than the test papergroup(68.57%), differences between two groups were statistically significant(P<0.05). Conclusion It’s more convenient and easier to test HCG by colloidal gold test strip, but chemiluminescence immunoassay is more accurate with high sensitivity, which is worthy of popularization and application in detection.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2014(000)009【总页数】2页(P18-18,19)【关键词】胶体金试纸法;化学发光免疫法;人绒毛膜促性腺激素【作者】袁云燕;詹鹏飞;肖俊锐【作者单位】515000 广东省汕头市中医医院;515000 广东省汕头市中医医院;515000 广东省汕头市中医医院【正文语种】中文人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种糖蛋白, 由胎盘的滋养层细胞分泌, 只要妊娠后绒毛生成, 即可在血液循环中检测的人绒毛膜促性腺激素(HCG)［1］。
对比分析胶体金试纸法与化学发光免疫法测定血HCG的结果摘要】目的：对比分析胶体金试纸法与化学发光免疫法测定血HCG的结果。
方法：对我院收治的200例孕妇按照人绒毛膜促性腺激素（HCG）测定方法的不同分为观察组和对照组各100例，观察组采用化学发光免疫法，对照组采用胶体金试纸法。
对比两种方法测定HCG的结果。
结果：观察组阳性率94.00%，阴性率6.00%；对照组阳性率69.00%，阴性率31.00%，观察组阳性率显著高于对照组（P<0.05）。
结论：化学发光免疫法较胶体金试纸法具有更高的灵敏度和精密度。
【关键词】人绒毛膜促性腺激素；胶体金试纸法；化学发光免疫法【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）10-0256-01人绒毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，早期妊娠检查、妊娠相关疾病等可通过HCG的检测进行鉴别和诊断[1]。
化学发光免疫法和胶体金试纸法是目前临床上常用的两种检测方法。
胶体金试纸法优点是价格便宜，操作简单、快速，但特异性不高，化学发光免疫法的优点是灵敏度高，但操作相对复杂[2]。
本研究对胶体金试纸法和化学发光免疫法测定HCG的结果进行了分析，报道如下。
1.资料与方法1.1 一般资料选取2015年1月～2015年12月我院收治的200例孕妇按照HCG测定方法的不同分为观察组和对照组各100例，观察组采用化学发光免疫法，对照组采用胶体金试纸法。
其中观察组年龄23～38岁，平均年龄（28.46±1.8）岁；对照组年龄24～37岁，平均年龄（29.38±2.1）岁。
所有孕妇血脂体检合格并签署知情同意书，排除肝肾功能不全的孕妇。
两组孕妇一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 检测方法标本采集：空腹抽取3～4mL，分离血清备用。
于4h内测定。
观察组：采用全自动发光分析仪（德国拜耳 ADVIA Centaur XP），线性范围0～1000IU/L，固相载体：磁性颗粒（PMP），化学发光标志物：吖啶酯，抗原抗体反应后加入酸和碱，立即发光。
1.胶体金的制备胶体金的制备方法很多，其中应用较为广泛的是还原法，而分散法和其他凝聚法都不合乎要求。
还原法的基本原理是在氯化金溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子。
在医学研究中最常用的还原剂有白磷、乙醇、过氧化氢、抗坏血酸、硼氢化钠、柠檬酸钠及U酸等。
现将常用的几种方法介绍如下：①白磷还原法可合成粒径为3nm左右的金颗粒；②白磷还原法经改良后，可合成粒径为5~12nm大小的金颗粒；③抗坏血酸还原法可合成粒径为6~13nm大小的金颗粒；④柠檬酸三钠还原法可合成粒径为5nm、15nm、30nm、60nm大小的金颗粒；⑤乙醇一超声波还原法可合成粒径为6~10nm大小的金颗粒；⑥硼氢化钠还原法可合成粒径为3~17nm大小的金颗粒；⑦单宁酸一柠檬酸三钠还原法可合成粒径为3~17nm大小的金颗粒。
主要用单宁酸一柠檬酸三钠还原法、柠檬酸三钠还原法及硼氢化钠还原法，主要根据合成颗粒大小来选择。
2.玻璃器皿的清洁还原法是重结晶过程，颗粒的大小取决于结晶核形成的速度及结晶核生长的速度。
因此，用于制备胶体金的玻璃器皿应绝对清洁。
因为玻璃表面性状对还原过程的启动有重要作用，少量的污染会影响胶体金的生成，造成颗粒大小不一或液体浑浊。
处理方法是将玻璃器皿清洁晾干后，放人清洁液内浸泡24h，取出后依次用自来水和蒸馏水洗净，凉干，硅化，也可不经硅化。
第一次生成胶体金稳定玻璃器皿表面，然后弃去，再用蒸馏水洗后即可再用。
最好是所有的玻璃器皿专用化，以减少污染。
玻璃器皿表面应无明显的划痕，否则也会影响胶体颗粒的均一度。
3.试剂的配制要求①配制试剂均用双蒸馏水或三蒸馏水，或用去离子水。
②氯化金水溶液的配制氯金酸（AuCl3·HCI）每支为1g装，用时用蒸馏水一次全部稀释成1％水溶液，呈现黄色的透明状，应无任何沉淀，未用完部分可保存在4℃冰箱内，长期使用。
③SPA纯品、特异性抗体或第二抗体必须经亲和层析，琼脂免疫双扩散效价为1 : 64以上才可选用，其他蛋白及受体也需高度纯化。
酶联免疫法以及胶体金法应用于艾滋病抗体检测的结果比较分析【摘要】这篇文章主要比较了酶联免疫法和胶体金法在艾滋病抗体检测中的应用结果。
引言部分介绍了研究的背景和目的。
正文部分分别讨论了两种方法在艾滋病抗体检测中的应用情况，以及它们各自的优缺点。
接着对实验结果进行了分析，探讨了两种方法的适用性和未来发展方向。
结论部分总结了两种方法的适用性比较和对未来研究的展望。
通过本研究，可以更好地了解和比较不同方法在艾滋病抗体检测中的效果，为相关领域的研究提供参考。
【关键词】酶联免疫法、胶体金法、艾滋病、抗体检测、比较分析、优缺点、实验结果、适用性、未来发展方向、结论总结。
1. 引言1.1 背景介绍艾滋病的检测方法不断发展，其中酶联免疫法和胶体金法是目前常用的检测方法之一。
酶联免疫法是一种高灵敏度、高特异性的检测方法，广泛应用于疾病诊断和病原体检测领域。
胶体金法则是一种简便快速、易于操作的检测方法，被广泛用于诊断实验室和临床应用中。
本研究将对这两种方法在艾滋病抗体检测中的应用进行比较分析，以探讨两种方法在实践中的优缺点，为艾滋病的早期预防和诊断提供更有效的技术支持。
1.2 研究目的本研究的目的是比较酶联免疫法和胶体金法在艾滋病抗体检测中的效果和优缺点，从而为艾滋病抗体检测方法的选择提供参考依据。
通过实验结果和分析，探讨两种方法在灵敏度、特异性、成本、操作复杂度等方面的差异，从而更好地评估它们在艾滋病筛查和诊断中的应用价值。
通过对两种方法的比较分析，可以为医疗机构和研究人员提供更多的选择，促进艾滋病防控工作的进展和提高检测效率。
进一步探讨两种方法的适用性，指出未来在艾滋病抗体检测领域的发展方向，为提高艾滋病检测的准确性和快速性提供理论和实践支持。
2. 正文2.1 酶联免疫法在艾滋病抗体检测中的应用酶联免疫法（ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，被广泛应用于艾滋病抗体检测中。
该方法利用酶标记的抗体与待检测血清中的HIV抗体结合，再通过底物的酶作用产生显色反应来检测是否存在抗体。
四种化学还原法制备胶体金的比较研究作者：杨玉新叶阳周有祥王小红来源：《湖北农业科学》2011年第03期摘要：以柠檬酸三钠、鞣酸、抗坏血酸、硼氢化钠为还原剂，采用４种不同化学还原法制备出单分散性好的胶体金样品；比较研究了４种方法制备的胶体金的光学性质、贮存稳定性及其对蛋白质的标记能力。
结果表明，不同方法制备得到的胶体金样品其外观色泽均呈现红色略带紫色或葡萄酒红色，可见光谱图最大吸收峰波长为５１０～５２５ｎｍ，胶体金粒径在５～２０ｎｍ之间。
不同贮存条件对胶体金稳定性有影响，其中以４℃条件下贮存的胶体金最稳定；不同方法制备得到的胶体金对蛋白质的最佳标记量有影响。
关键词：胶体金；化学还原法；光学性质；贮存稳定性；蛋白质标记能力中图分类号：Ｏ６５；Ｏ６４８．１６；ＴＧ１４６．３＋１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）03－0476-03ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＳｔｕｄｙｏｎＦｏｕｒＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｄｕｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＰｒｅｐａｒｉｎｇＣｏｌｌｏｉｄａｌＧｏｌｄＹＡＮＧＹｕ－ｘｉｎ１，ＹＥＹａｎｇ１，ＺＨＯＵＹｏｕ－xｉａｎｇ２，ＷＡＮＧＸｉａｏ－ｈｏｎｇ１（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＱｕａｌｉｔｙＳｔａｎｄａｒｄｓａｎｄＴｅｓｔｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，ＨｕｂｅｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ４３００６４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｆｏｕｒｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓwith ｃｉｔｒａｔｅｓｏｄｉｕｍ，ｔａｎｎｉｃａｃｉｄ，ａｓｃｏｒｂｉｃａｃｉｄａｎｄｓｏｄｉｕｍｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅａｓｒｅｄｕｃｔａｎｔｓ． The oｐｔｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｓｔｏｒａｇｅｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｐｒｅｐａｒｅｄｂｙ the ｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｌｏｒｏｆ all the ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｗａｓｒｅｄｗｉｔｈａｌｉｔｔｌｅｐｕｒｐｌｅｏｒｒｅｄｗｉｎｅｃｏｌｏｒ．Ｔｈｅｍａｘｉｍｕｍａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ５１０～５２５ｎｍ．Ｐａｒｔｉｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｗａｓ５～２０ｎｍ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｗａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｏｒａｇｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｒｅｍａｉｎｅｄｏｐｔｉｍａｌｓｔａｂｉｌｉｔｙａｔ４℃．Ｌａｂｅｌｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｍｏｕｎｔｏｆｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄｗａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｅｐａｒｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ；ｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ；ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ； protein labeling ability膠体金（Ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ）也称金溶胶（Ｇｏｌｄｓｏｌ），是由氯金酸被还原成原金后形成的金颗粒悬液，颜色呈橘红色到紫红色。
两种胶体金制备方法的比较研究宋宏新，符海英，薛海燕，张玥，邹联柱（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西西安710021）摘要：通过控制还原剂的加入量（20mL 0.01%四氯金酸溶液中1%柠檬酸钠和抗坏血酸添加量分别为300μL 与400μL ），利用柠檬酸钠和抗坏血酸还原两种方法制备得到了平均粒径为20nm 的胶体金颗粒，并对其进行了抗体标记比较研究.结果显示：抗坏血酸还原法制备得到的胶体金标记的蛋白量为15.18μg/mL （蛋白质量/胶体金体积，下同），高于柠檬酸钠还原法的5.07μg/mL ，间接ELISA 法测得其效价（1∶800）也比柠檬酸钠还原法制备的颗粒标记物高（1∶400），这表明抗坏血酸还原法更适合于标记用胶体金颗粒的制备.关键词：柠檬酸钠还原法；抗坏血酸还原法；胶体金标记；抗体中图分类号：TS201.2文献标志码：BDOI ：0引言胶体金是以金核为中心，通过静电作用形成的多相不均匀体系，粒径范围属于胶体，是法拉第于1857年发现的[1]. 胶体金的大规模应用要得益于其抗体标记技术的出现，1971年Faulk 等[2]将抗沙门氏菌抗血清与胶体金连接，开创了免疫胶体金技术的先河，推动了胶体金应用领域的不断扩展，现今，胶体金技术已广泛应用到了细胞组织定位[3]、免疫诊断[4-5]、食品安全检测[6]和环境质量检测[7]等多个领域中. 随着胶体金应用范围的不断扩展，其制备方法也成为了人们研究的热点，主要有化学还原法、相转移法和反胶团法等[8]，其中化学还原法由于制备工艺简单、易于操作，仍然为研究工作者们所青睐，使用不同种类还原剂制备胶体金已有研究报道，但大部分都是以制得的胶体金的粒径、均匀度等来对胶体金进行评价[9]，对于对后续标记步骤的影响的研究较少. 本试验对抗坏血酸法和柠檬酸钠法制备的相同粒径的胶体金进行了抗体标记，并对标记效果进行了检测，得到了使用不同还原剂对标记效果存在影响的结论，为免疫标记用胶体金制备方法的选择提供了重要的参考依据.1材料与方法1.1试剂与仪器1.1.1主要试剂四氯金酸、BSA ：美国Sigma 公司；HRP 酶标记羊抗兔IgG ：北京博奥森生物技术有限公司；抗大肠杆菌O 157∶H 7 IgG 样品：实验室自制（抗体蛋白含量0.43 mg/mL ，纯度为电泳单点纯）；考马斯亮蓝G-250试剂：美国Amresco 公司；其他均为国产分析纯试剂. 1.1.2主要仪器高速冷冻离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司；SP756型紫外-可见扫描分光光度计：上海光谱仪器有限公司；移液器：德国Eppendorf 公司；酶标仪：Thermo Electron Corporation. 1.2方法1.2.1柠檬酸钠还原法还原剂添加量的确定取3个经超纯水冲洗过的洁净烧杯，加入0.01%（W /V ）四氯金酸20 mL ，加热至沸腾，分别加入1%柠檬酸钠300 μL 、400 μL 和500 μL ，搅拌条件下继续加热反应10 min ，撤去热源，继续搅拌使之冷却，并补加超纯水至20 mL ，4 ℃避光保存待检. 1.2.2抗坏血酸还原法还原剂添加量的确定同上在4个烧杯中加入四氯金酸溶液，分别加入1%抗坏血酸溶液250 μL 、300 μL 、350 μL 和收稿日期：2011-09-09作者简介：宋宏新（1959-），男，陕西咸阳人，教授，主要从事食品营养安全及分子免疫检测方面的科研与教学工作.文章编号：1673-2383（2012）01-0053-04网络出版网址：网络出版时间：河南工业大学学报（自然科学版）Journal of Henan University of Technology （Natural Science Edition ）第33卷第1期2012年2月Vol.33，No.1Feb.2012CNKI:41-1378/N.20120208.0844.0132012-02-08 08:44网络出版地址：/kcms/detail/41.1378.N.20120208.0844.013.html河南工业大学学报（自然科学版）第33卷400 μL ，加热搅拌条件下反应5 min ，撤去热源，继续搅拌使之冷却后补超纯水至20 mL ，4 ℃避光保存待检. 1.2.3胶体金颗粒质量评价及粒径的确定通过目测可以得到胶体金的外观特征，而经400~800 nm 下的分光光度扫描可以得到胶体金的最大吸收峰波长，由最大吸收峰波长与粒径存在的线性关系Y =0.427 1X +514.56（Y 为最大吸收峰波长，X 为平均粒径）[10]，可得到平均粒径，由相对峰宽（峰宽/峰高）大小可以知道胶体金颗粒的均匀度. 1.2.4抗体的胶体金标记抗体标记前，先采用Mey 氏稳定化试验[11]确定最佳蛋白标记量和最佳标记pH ，然后在该条件下进行胶体金标记，取两种不同方法制备的胶体金各5 mL ，用0.1 moL/L HCl 和K 2CO 3调pH 至最佳，加入最佳蛋白标记量的抗体样液，混匀让其反应10 min ，低速离心（1 000 r/min ，30 min ），弃沉淀，上清高速离心（10 000 r/min ，4 ℃，60 min ），沉淀用PBS 洗涤3次，最后一次用1/3原体积的PBS 溶解，并加入1%BSA ，4 ℃避光保存备用. 1.2.5胶体金标记效果的比较采用考马斯亮蓝法测定高速离心后上清液的蛋白含量，并通过加入的蛋白总量确定蛋白的实际标记量，采用间接ELISA 方法，测得金标后抗体的效价，具体过程如下：将两种金标抗体用稀释液按1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600稀释成不同浓度，以阴性血清作为对照，按照文献[8]方法进行测定，得到450 nm 下的OD 值（OD 450），以与阴性血清OD 值之比大于等于2.1（P/N ≥2.1）判定为阳性，阳性的最大稀释度即为金标抗体的效价，效价反映了抗体活性的大小.2结果与讨论2.1柠檬酸钠添加量的确定1%柠檬酸钠添加量分别为300 μL 、400 μL 和500 μL 时，制备得到的胶体金外观效果良好，透明，无悬浮物出现. 经400~800 nm 扫描，得到扫描图谱如图1所示.由图1可知，3种柠檬酸钠添加量的扫描曲线相对峰宽接近，均匀度状态接近，400 μL 添加量制得的颗粒相对均匀，而300 μL 添加量制得的胶体金颗粒最大吸收峰波长为523 nm ，由1.2.3中的线性关系，得到其平均粒径为20 nm ，因此，选择300 μL 为1%柠檬酸钠添加量. 2.2抗坏血酸添加量的确定4种抗坏血酸添加量制备得到的胶体金溶液呈红色，透明，无漂浮物，符合外观要求. 经400~800 nm 分光光度扫描得到曲线如图2所示.由图2可知，当1%抗坏血酸添加量为350 μL 时，相对峰宽较小，均匀度较好，但其最大吸收峰波长为530 nm ，粒径较大，而添加量为400 μL 时，最大吸收峰波长为524 nm ，平均粒径为20 nm ，因此，选择400 μL 为1%抗坏血酸加入量. 2.3抗体的胶体金标记及其标记效果的测定2.3.1标记最佳条件的选择通过Mey 氏稳定性试验，得到两种胶体金颗粒与抗大肠杆菌O 157∶H 7 IgG 进行标记时的最佳pH 值均为8.0，而最佳蛋白标记量不同，柠檬酸钠还原法制备的胶体金颗粒的最佳蛋白标记量为26 μL/mL （抗体样液体积/胶体金体积，下同），抗坏血酸还原法制得的颗粒为65 μL/mL. 2.3.2实际蛋白标记量的确定对两种胶体金溶液各5 mL 进行了IgG 抗体的标记，根据蛋白添加量以及蛋白浓度，得到柠檬酸钠法与抗坏血酸法制备的胶体金加入的蛋白总量分别为55.90 μg 和139.75 μg ，由考马斯亮蓝法测得离心上清液中的蛋白量分别为30.54 μg 和63.85 μg ，因此，实际的蛋白标记量为5.07 μg/mL 和15.18 μg/mL ，图2不同抗坏血酸添加量胶体金扫描图谱图1不同柠檬酸钠添加量胶体金扫描图谱54第1期稀释度柠檬酸钠法抗坏血酸法OD 450P/N OD 450P/N 1∶501∶1001∶2000.9710.6350.427 6.994.573.07 1.2330.8340.6018.876.004.32抗坏血酸法制备得到的胶体金颗粒的实际蛋白标记量较大，能连接上更多的IgG 抗体. 2.3.3两种胶体金标记抗体活性的测定经间接ELISA 检测，获得了两类不同稀释度抗体的效价结果，如表1所示. 粒所能标记的蛋白量较大，标记后抗体的活性较高，比柠檬酸钠还原法得到的颗粒更适合于后续的免疫标记. 参考文献：白丽荣，毛占伟，王慧，等.氨苄青霉素标记的胶体金颗粒的制备及活性研究［J ］.生物加工过程，2008，6（2）：66-69.Faulk W P ，Taylor G M.An immunocolloid method for the electron microscope ［J ］.Imm 蛳unochemistry ，1971，8（11）：1081-1083.丁明孝，梁凤霞，焦仁杰，等.胶体金标记技术-DNA 、RNA 、蛋白质和糖的定性与定位研究［J ］.电子显微学报，1994，13（5）：377.Piras L ，Reho S.Colloidal gold based electro 蛳chemical immunoassays for the diagnosis of a 蛳cute myocardial infarction ［J ］.Sensors and Ac 蛳tuators B ，2005，111-112：450-454.Jiang Z L ，Sun S J ，Liang A H ，et al.A new spectral assay for nanoparticle label ，2006，571：200-胶体金免疫层析J ］.食品工业科A sensitive im 蛳usingcolloidaldetection of in water samples ，2009，24：纳米胶体金的制2011，36四种化学还原法.湖北农业科学，A reusable ca 蛳pacitive immunosensor with a novel immobi 蛳lization procedure based on 1，6-hexanedithiol and nano-Au self-assembled layers ［J ］.Sen 蛳sors and Actuators B ，2005，111-112（2）：327-334.夏宝宣，杜美利.纳米胶体金最佳标记条件的一种简易方法研究［J ］.标记免疫分析与临床，2010，17（1）：36-38.［1］［2］［3］［4］［5］［11］表1间接ELISA 测得的两类金标抗体效价宋宏新，等：两种胶体金制备方法的比较研究55河南工业大学学报（自然科学版）第33卷The orthogonal experiments showed that the influence degree of the three factors on the adsorption effect was as follows: pH, adsorption temperature and adsorption time; and the optimum adsorption conditions were pH 2.0, adsorption temperature 40 ℃and adsorption time 4 hours. Freundlich adsorption isothermal equation could well describe the adsorption thermodynamic behavior of Pb 2+; a second kinetic model could describe the adsorption kinetic behavior; the adsorption process was fast firstly and then turned to slow adsorption after 60 minutes; and the optimum solid-to-liquid ratio was 12 g/L for the Pb 2+ solution with the mass concentration of 60 mg/L. Key words ：apple residue ；Pb 2+；biosorption ；adsorption isotherm ；dynamic adsorption curve ；solid-to-liquid ratioCOMPARISON OF TWO COLLOIDAL GOLD PREPARATION METHODSSONG Hong-xin, FU Hai-ying, XUE Hai-yan, ZHANG Yue, ZOU Lian-zhu（College of Life Science and Engineering,Shanxi University of Science and Technology,Xi'an 710021,China ）Abstract ：In this paper, colloidal gold particles with the average particle size of 20 nm were prepared by sodium citrate reduction method and ascorbic acid reduction method by controlling the addition amount of reductants, and we also compared the antibody labeling. The results showed that the amount of protein labeled by colloidal gold prepared by ascorbic acid reduction method was 15.18 μg/mL, which was higher than that of the sodium citrate reduction method (5.07 μg/mL); and the titer of the former determined by intermediate ELISA was 1∶800, which 56。
