6- 酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒

葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法)简介：葡萄糖(Glucose, Dextrose，Glu)又称玉米葡糖，简称葡糖，化学式C6H12O6，分子量为180.16，是自然界分布最广、最重要的一种单糖，属于多羟基醛。

用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。

上述酶学法特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。

Leagene葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法)其检测原理是在己糖激酶的催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应生成葡萄糖-6-磷酸，后者与NAPD在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下发生氧化还原反应，生成6-磷酸葡萄糖酸和NAPDH，NADPD的生成量与葡萄糖浓度成正比，分光光度计进行比色测定。

本试剂盒专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞、组织等样本中葡萄糖含量定量测定，特异性高，不受尿酸和抗坏血酸的干扰，故可以检测尿液中葡萄糖。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、生理盐水或PBS2、离心管、小试管或96孔板3、水浴锅或恒温箱4、分光光度计或酶标仪编号名称TC070320TTC070350TStorage试剂(A): 显色试剂10ml2×12.5ml -20℃避光试剂(B): 酶试剂10ml 2×12.5ml -20℃避光临用前，按显色试剂：酶试剂混匀，即HK工作液，4℃保存。

试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml1ml -20℃使用说明书1份5、全自动或半自动生化分析仪操作步骤(仅供参考)：1、样本处理：①血清、血浆、脑脊液、尿液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。

②细胞样本：a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。

b、用PBS或生理盐水清洗，离心，弃上清，留取沉淀。

M. λDNA/HindⅢ Marker　1. 兔睾丸（rabbit testis）　2. 小鼠睾丸（micetestis）　3. 大鼠睾丸（rat testis）　4. 貂睾丸（mink testis）　5. 狗睾丸（dog testis）　6. 羊睾丸（sheep testis）　7. 猪睾丸（pig testis）图1　基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图Fig. 1　Genomic DNA agarose gel electrophoresis2.2　基因组DNA的浓度与纯度基因组DNA经 3 次平均测定，A260 /A280值均在1.7~1.9之间，浓度在 100~400 ng·μL-1之间（表2）。

药物分析杂志ChineseM. 100 bp DNA Ladder　1. 阳性对照品（positive control）　2. 兔睾丸（鲜）［rabbit testis （fresh）］　3. 兔睾丸（干）［rabbit testis （dry）］　4. 小鼠睾丸（mice testis）　5. 大鼠睾丸（rat testis）　6. 貂睾丸（mink testis）7. 狗睾丸（dog testis）　8. 羊睾丸（sheep testis）　9. 猪睾丸（pig testis）10.空白对照（blank control）　退火温度（annealing temperature）：A. 58 ℃　B. 59 ℃　C. 60 ℃图2　兔睾丸 DNA PCR 特异性扩增图谱Fig. 2　PCR specific amplification map of rabbit testis DNA2.4　克隆结果及序列比对结果经过分子克隆蓝-白斑筛选，可见氨苄阴性平皿长满了细菌，氨苄阳性平皿出现蓝-白菌落（图3）。

挑取白色菌落培养后，提取质粒 DNA，在 59 ℃的退火温度下进行 PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳结果显示，克隆鉴定结果与预期目的条带位置一致，在 326 bp 出现1条特异性　兔睾丸 DNA 分子克隆蓝—白斑筛选图Fig. 3　Rabbit testis DNA molecular cloning blue-white spot screeningM. 100 bp DNA Ladder　1. 兔睾丸阳性对照品克隆（rabbit testis positive control clone）　2、3. 兔睾丸克隆（rabbit testis clone）　兔睾丸质粒 DNA PCR 扩增图谱Fig. 4　PCR amplification map of rabbit testis plasmid DNA图5　克隆目的基因序列与靶基因序列 BLAST 结果Fig. 5　Cloning of the target gene sequence and target gene sequence BLASTJournal of Pharmaceutical Analysis 药物分析杂志ChineseM、1~10. 同图 2（same as Fig. 2）图 6　引物特异性电泳结果Fig. 6　Primer-specific electrophoresis results2.5.2　稳定性　随机抽取1盒试剂盒，将其放入-20 ℃冰箱中冷冻，取出融化；如此反复冻融5、10、15、20次，在 59 ℃的退火温度下进行 PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳结果显示，兔睾丸阳性对照品和正品兔睾丸均在 326 bp 处出现1条特异性扩增条带，空白对照未出现扩增条带，结果稳定（图 7）。

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明分光光度法货号：BC0930规格：50管/48样产品内容：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；试剂四：液体×1支，-20℃保存；产品说明：葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周；2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。

3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

葡萄糖（GLU）测定试剂盒（己糖激酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中葡萄糖的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×25ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×60ml，试剂2：2×12ml；试剂1：3×40ml，试剂2：3×8ml；试剂1：4×60ml，试剂2：4×12ml；试剂1：2×400ml，试剂2：1×160ml；试剂1：2×40ml，试剂2：2×8ml。

校准品（选配）：1×1ml；1×3ml。

1.2 试剂盒主要组成成分2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：浅黄色澄清液体。

校准品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.3。

2.4 分析灵敏度测定浓度为5.55mmol/L样本时，吸光度变化值（ΔA）应在（0.2，0.4）范围内。

2.5 线性范围在（0.5，38.9）mmol/L线性范围内，线性相关系数r不小于0.996。

在[5，38.9）mmol/L范围内的线性相对偏差不大于±10%；测定结果（0.5，5）mmol/L时线性绝对偏差不大于±0.5mmol/L。

2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于6%。

2.8 准确度当参考物质浓度在（0，4.16）mmol/L时，实测值与标示值偏差不应超过±0.833mmol/L；当参考物质浓度在[4.16，38.9）mmol/L时，实测值与标示值偏差应在±20%范围内。

2.9校准品溯源性依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至中国计量科学研究院生产的有证参考物质（GBW10062）。

SIGMA 葡萄糖HK 检测试剂盒说明书（Glucose (HK) Assay Kit; Product Code GAHK -20）一、产品介绍食品、生化和制药业普遍将酶作为分析工具。

酶法具有特异性高、重现性好、敏感性高以及反应快速的特点，是用于分析的理想工具。

由于酶具有高的特异性和敏感性，所以不需样品制备即可进行定量分析。

本试剂盒以酶法定量测定食品和其他材料中的葡萄糖。

原理：葡萄糖+ATP Hexokinase→ 6-磷酸葡萄糖+ADPG6P+NAD G6PDH → 6-磷酸葡萄糖酸+NADH葡萄糖在己糖激酶催化反应中被A TP 磷酸化，然后G6P 在NAD 存在下被6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化，氧化为6-磷酸葡萄糖酸；反应中，等分子量的NAD 被还原为NADH 。

随后的340nm 吸光度的增加与葡萄糖含量成正比。

二、试剂组成1、葡萄糖检测试剂用20ml 水溶解小瓶内粉剂；加水后立即盖紧瓶塞，反转混匀数次，不可震动。

加水20ml 溶解后，每瓶溶液含有1.5 mM NAD ，1.0 mM ATP ，1.0 U/ml G6PDH ；并含有防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾。

小瓶粉剂保存于2-8℃。

如果粉剂受潮结块、加水不能充分溶解、或水溶液浑浊，则应将试剂弃用。

试剂水溶液比较稳定，18-26℃保存7天、2-8度保存4周不会有微生物生长。

以水作为空白参照，新配置的溶液340nm 吸光度如果大于0.350，则溶液不适合使用。

2、葡萄糖标准溶液D -葡萄糖，1.0mg/ml 溶于0.1%苯甲酸；该标准液为即用型，符合美国国家标准技术研究所标准；2-8℃可至少保存半年。

期间如果溶液浑浊，则应弃用。

三、需自备的实验仪器1、可测定340nm 吸光度的分光光度计2、测量杯3、10μl -1ml 量程的移液器四、注意事项和免责声明本试剂仅供科研使用，不能用于药品、家庭以及其他用途。

涉及危害和使用安全性问题，参照材料安全数据表。

小鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号：E0716m10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

11. 覆膜：5张12. 使用说明书：1份自备物品1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2. 微量加液器及吸头，EP管3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。

实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。

空白孔加样品稀释液50μl，余孔分别加标准品或待测样品50μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 立即在每个孔中加入检测溶液A工作液50μl（在使用前半小时内配制），轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3. 弃去液体，甩干，洗板3次。

每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶文章标题：深度解析6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的功能和作用目录1. 了解6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶2. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶的功能和作用3. 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的功能和作用4. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的联系与区别5. 个人观点和总结一、了解6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶在生物化学中，6-磷酸葡萄糖脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-phosphogluconate dehydrogenase）是两种常见的酶，它们在细胞代谢中扮演着重要的角色。

了解这两种酶的功能、作用以及联系与区别，有助于我们更深入地理解细胞代谢的机制和调控。

二、6-磷酸葡萄糖脱氢酶的功能和作用6-磷酸葡萄糖脱氢酶是细胞内的一种重要酶，其主要功能是将6-磷酸葡萄糖氧化成糖醛酮酸，同时还能生成NADPH。

NADPH在细胞中具有重要的生物学功能，如细胞抗氧化、脂质合成、胆固醇合成等。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶在细胞内能够调节细胞氧化还原平衡，维持代谢的正常进行。

三、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的功能和作用6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶是己糖磷酸截断过程中的一种关键酶。

它的作用是催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成核酮酸和NADPH，从而产生细胞内氧化还原的平衡。

它还参与细胞内核酮酸的生成和能量代谢。

四、6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的联系与区别两者都与细胞内的氧化还原反应和能量代谢有关，都能生成NADPH，但是在代谢途径和催化反应中存在差异。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶位于己糖磷酸截断途径，与糖醛酮酸的生成和NADPH的产生息息相关；而6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶则位于己糖酸途径，参与核酮酸的生成和氧化还原反应。

五、个人观点和总结通过深度解析6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的功能和作用，我对细胞代谢的理解更加深入。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)简介：葡糖-6-磷酸脱氢酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase ，G-6-PD 或G6PD)是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶(EC1.1.1.49)。

Leagene 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时NAPD 被还原成NADPH ，其反应公式如下：G-6-P+NAPD +→6-PGA +L-NADPH 。

在上述偶联反应中，NADPH 生成速率与样本中酶活性呈正比，通过分光光度计或自动分析仪检测吸光度上升速率(ΔA /min)，上升速率(ΔA /min)与G-6-PD 活性呈正比，比色杯光径1.0cm ，直接计算酶的活性单位。

100T 该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、生理盐水2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、预备溶血液：取新奇抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4℃预冷的生理盐水洗涤，每次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30%的红细胞悬液，4℃保存备用。

临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液。

4℃保存10h ，编号名称TE0085 100TStorage试剂(A): 样本稀释液100ml -20℃ 避光试剂(B): G6PD assay buffer 100ml 4℃ 试剂(C): NADP 18mg -20℃ 试剂(D): G-6-P 1支-20℃ 试剂(E): G-6-P 稀释液10mlRT 使用说明书1份-20℃保存48h。

6-磷酸葡萄糖 6-磷酸葡萄糖脱氢酶
磷酸葡萄糖是一种重要的代谢产物，在生命活动中扮演着重要的角色。

它是一种可以在细胞内进行多种代谢途径的化合物，进入糖分解途径后，被酵解成乳酸，丙酮酸和乙酸等代谢产物，然后转化为ATP能量分子，提供细胞所需的能量。

但是，磷酸葡萄糖在细胞内的代谢过程中需要多种酶的协同作用，其中最重要的一种是6-磷酸葡萄糖脱氢酶。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶是一种酶类，它是从果糖-6-磷酸途径中提取的糖酵解酶，通过将6-磷酸葡萄糖转化为6-磷酰葡糖酸来协助细胞的代谢过程。

这个酶在细胞内的催化作用非常重要，因为它参与多种代谢途径，其作用包括对酵母菌、动物和植物细胞中的磷酸葡萄糖代谢调控，因此在医学、生物学和生物技术等领域中都有着广泛的应用前景。

在人体内，6-磷酸葡萄糖脱氢酶主要存在于肝脏和心肌细胞组织中。

肝脏是人体内代谢最活跃的器官之一，负责糖类、脂类及蛋白质的代谢，6-磷酸葡萄糖脱氢酶的表达水平与糖尿病、肥胖症等疾病密切相关。

同时，6-磷酸葡萄糖脱氢酶在光合作用和细胞呼吸等方面也具有重要作用，它参与细胞能量代谢及胆固醇、核酸和脂肪酸的合成等生命活动。

目前有许多关于6-磷酸葡萄糖脱氢酶的研究，包括如何调节它的活性、结构和功能等方面。

在生物技术领域中，6-磷酸葡萄糖脱氢酶也被广泛地应用在代谢工程、疫苗制造等领域，成为功能强大的生物分子工具之一。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号: UPLC-MS-4360规格: 50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：1、试剂二：用时每支加650 μL双蒸水充分溶解备用。

2、试剂三：用时每支加650 μL双蒸水充分溶解备用。

3、工作液配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三以15：0.2：0.2 比例混合。

产品说明：G6PDH（EC 1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP+还原为NADPH，供生物合成及维持细胞内的还原状态用。

因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。

G6PDH 催化NADP+还原生成NADPH，在340nm 下测定NADPH 增加速率。

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%超声3s，间隔10s，重复30 次）。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2、试剂一置37℃水浴预热30min。

葡萄糖测定试剂盒（己糖激酶法）
适用范围：本产品适用于定量测定人血清中葡萄糖的含量。

1.1 产品规格
1.2 主要组成成分
2.1 外观
2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损；
2.1.2试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；
2.1.3试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

2.2 净含量
试剂的净含量不低于标示值。

2.3 空白吸光度
测定待检试剂在主波长340nm、副波长405nm、37℃条件下： A≤0.6。

2.4 线性范围
[2，30]mmol/L，相关系数r≥0.990；
[2，5.0]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.5mmol/L；
(5，30]mmol/L范围内，相对偏差不超过±10%。

2.5 分析灵敏度
测定浓度为5.55mmol/L校准血清，吸光度变化不小于0.001。

2.6 精密度
2.6.1批内重复性
CV≤5%。

2.6.2 批间差
相对偏差R≤10%。

2.7 准确度
测定参考物质GBW(E)090545，相对偏差不超过±10%。

2.8 稳定性
未开封试剂2℃～8℃储存，可稳定12个月。

取到效期后2个月内产品进行检测，检测结果应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1和2.7的规定。

中国卫生标准管理CHSM 373葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate Dehydrogenase，G6PD）缺乏常见于我国长江流域及其以南各省[1]，福建省也属于高发区域，其是红细胞磷酸戊糖代谢途径中的一个关键酶，其催化反应生成的还原型辅酶Ⅱ（NADPH）是谷胱甘肽还原酶的辅酶，宫颈癌诊断中的意义[J]. 中国实验诊断学，2017，21（10）：1708-1710.[10] Dasari S，Wudayagiri R，Valluru L. Cervical cancer：Biomarkersfor diagnosis and treatment[J]. Clin Chim Acta，2015，445：7-11.[11] Zhi W，Ferris D，Sharma A，etal. Twelve serum proteinsprogressively increase with disease stage in squamous cell cervical cancer patients[J]. Gynecol Cancer，2014，24（6）：1085-1092.[12] 李群，刘淑玉，刘红丽，等. 血清鳞状细胞癌抗原水平变化在诊断子宫颈鳞癌复发中的临床意义[J]. 中华妇产科杂志，2015，50（2）：131-136.[13] 王静，郑群，余素飞，等. Logistic 回归联合分类树CHAID 法建立SCC 在宫颈癌中的辅助诊断模型[J]. 中华检验医学杂志，2015，38（11）：761-764.[14] Xu F ，L i Y ，F an L，et al. Pr eoperat ive SCC-A g andthrombocytosis as predictive markers for pelvic lymphatic metastasis of squamous cervical cancer in early FIGO stage[J]. Cancer，2018，9（9）：1660-1666.[15] 罗业琳，雷嘉，黄卓华. 联合检测血清 SCC、CEA、CA125、CA199在宫颈癌诊断中的价值[J]. 临床合理用药杂志，2016，9（13）：137-138.[16] 梁指荣，杨洁飞，苏锡康. 多种肿瘤标记物检测在宫颈癌诊治中的意义[J]. 国际检验医学杂志，2016，37（1）：21-23.作者单位：厦门市妇幼保健院医学检验科，福建 厦门 361003张炎胜 陈婷婷 甘月滨 张福辉【摘要】目的 评价葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）试剂盒是否可应用于临床检测。

6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)、苹果酸酶(ME)两种酶酶活测定方法(1)6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定6-磷酸-葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活力测定方法根据文献略有改动6979。

测定反应体系(5ml)为：0.1mI浓度为1M的Tris-HCl缓冲液、0.1ml 浓度为25mM的底物G-6-P溶液、0.1ml浓度为2mM的NADP+、0.1ml 浓度为0. 2 M的氯化镁溶液及2.5ml ddH20，混合均匀后，在340 nm 下测定吸光度值A0，作为空白值。

再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与25℃条件下保温，每30S于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。

以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。

根据公式计算酶活力。

酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟G6PDH催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。

式中：△A/min为340 nm处每分钟吸光度的变化值；V为酶促反应体积(mL)；为NADH的摩尔消光系数(6.22×103L／mol·cm-1)；b 为比色皿光程(cm)。

(2)苹果酸酶(ME)活力测定测定反应体系(3ml)为：0.5 mI浓度为0.4 M的Tris-HCl缓冲液、0.1 ml 浓度为30 mM的底物苹果酸溶液、0.2ml浓度为3.4 mM的NADP+、0.1ml浓度为0.12 M的氯化镁溶液及2 ml ddH20，混合均匀后，在340 nm下测定吸光度值A0，作为空白值。

再加入0.1 ml粗酶液，摇匀后，与250C条件下保温，每30s于340 nm下测定吸光度值A，连续测定4 min。

以A对时间作图，取反应最初线性部分计算△A值。

根据公式2-1计算酶活力。

酶活力单位(U)定义为：25℃条件下，每分钟ME催化生成1μmol NADH的酶量为一个单位。

Neo-G6PD定量测定试剂盒实验步骤及注意事项1. 试剂的准备G6PD底物试剂(复溶后+2～+8℃稳定一月)：在每个冻干的G6PD底物试剂小瓶中加入11ml G6PD复溶缓冲液（配制后的溶液为1个96微孔板用量），轻轻混匀。

2. 将所需数量的空白反应条（白色不透明板）置室温平衡( 23-28℃，30分钟)。

注意事项及建议：本实验受温度影响，在一定范围内随温度的提高，反应加快。

平衡温度可保证实验反应的均一性3. 用打孔器轧下校准品、质控品和待测样品的滤纸干血片（每片直径3.0 mm左右），按顺序放入微孔反应条小孔中，然后各孔加入100 μl 复溶G6PD底物试剂，盖上封片，室温慢速振动孵育30分钟。

注意事项及建议：（a）用自动打孔器轧下滤纸干血片取样时，应尽量向中间靠拢，避免取边缘血片而造成检测时CV值增大（血片中心到边缘的1/2以内区域是检测的最佳部位）。

每个校准品滤纸干血片打孔最好不要多于4个；（b）尽量避免手接触血片，以免造成血片污染4. 每孔加铜试剂200 μl，并加贴封条，室温无振动孵育。

注意事项及建议：加铜试剂时，吸头应悬空，避免因吸头碰到小孔边缘或其中试剂而造成铜试剂污染5. 15～20分钟内，在激发波长355nm，发射波长460nm时测定荧光值。

注意事项及建议：（a）血片漂浮对G6PD测定将造成影响，测定荧光值前请用小镊子或者大头针将漂浮血片挑出后再检测，以免造成假阳性结果；（b）质控品在受控范围内，反之，则该次实验无效，应重复实验；（b）务必在15～20分钟内检测完毕，否则曲线会漂移。

其他：（1）不同批号的试剂盒不要混用。

（2）本试剂盒各组分只能一次性使用，不能重复使用（3）为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜。

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP。

2）抗体：在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体(多抗)和单克隆抗体(单抗)。

3）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。

主要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。

4 人E选择素(ESelectin/CD62E)检测试剂盒包被：将免疫活性物质(抗原或抗体)结合于固相载体上的过程称为包被。

常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。

常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。

牛葡萄糖6磷酸脱氢酶（G6PD）elisa试剂盒样本实验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

（1）血清室温血液自然凝固1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（2）血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

（3）尿液：用无菌管收集。

离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照此实行。

（4）细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（20003000转/分）。

仔细收集上清。

（5）培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.27.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

葡萄糖试剂盒（己糖激酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中葡萄糖的含量。

2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清或血浆中葡萄糖的含量。

3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是己糖激酶法(HK)。

5. 原理葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP ）和镁离子存在下被已糖激酶（HK ）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P ）和二磷酸腺苷（ADP ）。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH ）使G-6-P 氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH ）。

在340/380nm 的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。

+++−−−→−+--+--−→−+HNADH ADP P G ADPP G ATP PDH G HK磷酸葡萄糖葡萄糖-66666. 仪器日立7600自动生化分析仪 7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分：R1：Good ’s 缓冲液、G-6-PDH 、ATP ； R2：Good ’s 缓冲液、HK 、NAD +； 校准品：葡萄糖7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。

开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定7天。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。