浅析系列肝素药物质量分析及控制研究

药物分析杂志ChinJPharmAnal2010,30(4)

SEC/MALLS法测定肝素钠及其类似物的绝对分子质量及分布

宋玉娟.,韩春霞,,范慧红.

(1.中国药品生物制品检定所,北京l侧>)50;2.河南省药品检验所,郑州45以叉)3)

摘要目的:测定肝素钠及其类似物的己凡/女值及绝对分子质量,以便对该类药品进行更好的质控"方法:高效凝胶渗透色谱

和激光光散射联用(SEC一MALLS)法,采用仆KG3以X2SWxL色谱柱(300mmx7.8mm,ro卜m),流动相为2.84%硫酸钠溶液

(含0.2%叠氮化钠),流速为0.5mL#而n一.,检测器为18角激光光散射器(MAL比)和示差折光检测器(DNDC)联用"结果:

测得5个样品的己几/女值,12个厂家共32批肝素及类似物的绝对分子质量及其分布情况"结论:该方法可用于该类产品的分子质量测定,并能初步判定样品是否含有其类似物"

关键词:肝素;肝素类似物;SEC一MALL;dn/dC值;绝对分子质量中图分类号:Rgl7文献标识码:A文章编号:0254~179352010)04一067一03

Determinationofabsolutemolecularweightanddistributionof

heParinandit,5similaritiesbySEC一MALLSmethod

soNeYu一juan.,HANehu一xia,,FANHui一hong

(1.NationalInstituteforrheControlOfPharmaceutiealandBiologiealProduets,Beijingl0(犯50,China

2#HenanInstituteforFoodandDrugControl,zhen邵hou450(X)3,China)

Abstraetobjeetive:TOdeterminethedn/devalueandabsolutemoleeularweightofheParinandit,5similarities,

作者简介:刘晋仙ꎬ女ꎬ研究方向:药品检验ꎬＥ－ｍａｉｌ:１１９４６８２８０６＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:李玮涛ꎬ男ꎬ博士ꎬ主管药师ꎬ研究方向:天然产物提取和质量研究ꎬＴｅｌ:０５４６－７７９１１１８ꎬＥ－ｍａｉｌ:１８３９１０２３２＠ｑｑ.ｃｏｍ不同种属来源肝素组成与结构分析方法研究进展刘晋仙１ꎬ李玮涛１ꎬ２ꎬ柳晓芳２ꎬ王秀萍２ꎬ张中志２(１.东营市食品药品检验研究院ꎬ山东东营２５７０９１ꎻ２.东营天东制药有限公司ꎬ山东东营２５７０００)摘要:肝素是临床上广泛应用的一种抗凝药物ꎬ除抗凝活性外ꎬ肝素同时具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗疟疾等功能ꎮ目前«欧洲药典»、«美国药典»和«中国药典»明确要求肝素及低分子肝素仅限来源自猪肠黏膜ꎬ不得混有其他来源肝素ꎮ本文简要总结了近年来不同种属来源肝素组成与结构分析方法的研究进展ꎮ关键词:肝素ꎻ种属来源ꎻ鉴别ꎻ研究进展中图分类号:Ｒ９７３＋.２　文献标志码:Ａ　文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)０９－０７１９－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.０９.０１４ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｐａｒｉｎｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓＬＩＵＪｉｎｘｉａｎ１ꎬＬＩＷｅｉｔａｏ１ꎬ２ꎬＬＩＵＸｉａｏｆａｎｇ２ꎬＷＡＮＧＸｉｕｐｉｎｇ２ꎬＺＨＡＮＧＺｈｏｎｇｚｈｉ２(１.ＤｏｎｇｙｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＤｏｎｇｙｉｎｇ２５７０９１ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＤｏｎｇｙｉｎｇＴｉａｎｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ.ꎬＬｔｄ.ꎬＤｏｎｇｙｉｎｇ２５７０００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｈｅｐａｒｉｎｉｓａｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｃｌｉｎｉｃａｌａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ.Ｂｅｓｉｄｅｓｉｔｓａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙꎬｈｅｐａｒｉｎｅｘｈｉｂｉｔｓｍａｎｙｏｔｈｅｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓꎬｓｕｃｈａｓａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬａｎｔｉ－ｖｉｒｕｓꎬａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒａｎｄａｎｔｉ－ｍａｌａｒｉａ.Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙꎬｏｎｌｙｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｈｅｐａｒｉｎ/ＬＭＷＨｉｓａｕｔｈｏｒｉｚｅｄｔｏｂｅｕｓｅｄｉｎＥＵ、ＵＳＡａｎｄＣｈｉｎａ.ＨｅｐａｒｉｎｆｒｏｍｏｔｈｅｒｓｐｅｃｉｅｓｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓＦａｋｅＤｒｕｇ.Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒꎬｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｐａｒｉｎｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｉｓｂｒｉｅｆｌｙｓｕｍｍａ￣ｒｉｚｅｄ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＨｅｐａｒｉｎꎻＳｐｅｃｉｅｓｏｒｉｇｉｎꎻＩｄｅｎｔｉｆｙꎻＰｒｏｇｒｅｓｓ 肝素(Ｈｅｐａｒｉｎ)是一种带有高密度负电荷的糖胺聚糖类化合物ꎬ产自动物结缔组织型肥大细胞ꎮ肝素蛋白聚糖是由一条独特的核心蛋白(丝甘蛋白)和与其共价连接的多条肝素多糖链组成ꎮ最终ꎬ肝素链在水解作用下断裂形成分子量不同的较小肝素多糖(相对分子质量５０００~２５０００)多分散混合物ꎬ储存在肥大细胞的胞质分泌颗粒中[１]ꎮ临床上主要用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞(尤其与某些手术有关的栓塞)、防止血液透析等体外循环中血栓形成等ꎮ除抗凝活性外ꎬ肝素同时具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗疟疾等功能ꎮ肝素分子结构极其复杂ꎬ是由不同分子量的线性多糖糖链组成的多分散性混合物ꎮ其活性成分肝素是由α－Ｄ－氨基葡萄糖(Ｎ－硫酸化ꎬＯ－硫酸化或Ｎ－乙酰化)和Ｏ－硫酸化糖醛酸(α－Ｌ－艾杜糖醛酸或β－Ｄ－葡萄糖醛酸)组成的二糖重复单位以１－４糖苷键连接形成的线性多糖ꎮ迄今为止ꎬ人们仍未能对肝素的结构进行完全解析ꎬ更遑论人工合成ꎮ肝素可以从猪、牛、羊等动物的小肠黏膜和牛肺等组织中提取ꎬ但是不同来源的肝素化学结构和生物活性存在明显的差异[２]ꎬ其不良反应程度也不同ꎮ例如ꎬ相较于猪源肝素ꎬ牛源肝素引起血小板减少不良反应(ｈｅｐａｒｉｎｉｎｄｕｃｅｄｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａꎬＨＩＴ)的概率升高了１倍[３]ꎮ２０世纪９０年代源自欧洲的由朊病毒引起的牛海绵状脑病(疯牛病)以及同样由朊病毒引起的羊痒病加剧了世界各国及其药品监管机构对牛、羊来源肝素的担忧ꎮ目前ꎬ在肝素产品的主要市场ꎬ如欧、美、中等ꎬ其药典明确要求肝素及低分子肝素仅限来源自猪肠黏膜ꎬ不得混有其他来源肝素ꎮ中国是世界上第一大肝素供应国ꎬ占比超过５０％ꎮ近年ꎬ特别是新冠肺炎疫情发生以来ꎬ由于肝素类产品作为抗凝药物在新冠肺炎重症患者的对症治疗中起􀅰９１７􀅰药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０２３Ｖｏｌ.４２ꎬＮｏ.９

第1篇

一、实验背景

肝素是一种具有抗凝血、抗炎、抗血栓等生理活性的生物大分子，广泛应用于心血管疾病、抗凝血治疗等领域。肝素主要由肝脏合成，但人工合成肝素在质量、活性等方面与天然肝素存在一定差距。因此，从动物肝脏中提取肝素成为研究热点。本实验旨在通过实验方法从动物肝脏中提取肝素，并对提取过程进行分析。

二、实验目的

1. 掌握肝素提取的基本原理和方法；

2. 优化肝素提取工艺，提高肝素纯度和活性；

3. 分析肝素提取过程中的影响因素。

三、实验方法

1. 原料：新鲜动物肝脏；

2. 仪器：超声波清洗机、离心机、超滤装置、高效液相色谱仪等；

3. 方法：

（1）预处理：将新鲜动物肝脏进行清洗、破碎、匀浆；

（2）提取：采用超声波辅助提取法，将匀浆液与一定浓度的硫酸铵溶液混合，搅拌、离心分离；

（3）纯化：采用超滤装置对提取液进行浓缩，然后用高效液相色谱仪对浓缩液进行检测，确定肝素含量；

（4）纯化：将肝素浓缩液与一定浓度的盐酸溶液混合，静置、离心分离，得到肝素沉淀；

（5）干燥：将肝素沉淀进行干燥，得到肝素粉末。

四、实验结果与分析

1. 肝素提取率：通过实验，肝素提取率为（±X%）；

2. 肝素纯度：通过高效液相色谱仪检测，肝素纯度为（±Y%）； 3. 肝素活性：通过抗凝血活性实验，肝素活性为（±Z%）；

4. 影响因素分析：

（1）超声波功率：在实验过程中，超声波功率对肝素提取率、纯度和活性均有显著影响。当超声波功率为（±A%）时，肝素提取率、纯度和活性均达到最佳；

（2）硫酸铵浓度：硫酸铵浓度对肝素提取率、纯度和活性也有显著影响。当硫酸铵浓度为（±B%）时，肝素提取率、纯度和活性均达到最佳；

（3）pH值：pH值对肝素提取率、纯度和活性也有一定影响。当pH值为（±C%）时，肝素提取率、纯度和活性均达到最佳。

五、结论

1. 本实验采用超声波辅助提取法从动物肝脏中提取肝素，具有操作简便、提取率高等优点；

药物质量评价与控制研究

药物质量评价与控制是药学领域的重要研究领域，旨在保证药物的质量和有效性，并确保消费者的用药安全。本文将从科学评价药物质量的方法、药物质量控制的重要性以及现代技术在药物质量评价与控制研究中的应用等方面进行探讨。

一、药物质量评价的方法

药物质量评价是通过一系列的检验、分析和测试手段来确定药物的质量。常用的药物质量评价方法包括理化性质检验、药效学评价、安全性评价以及相关的实验室测试等。

1. 理化性质检验

药物的理化性质检验主要是通过测定药物的外观、溶解度、物化性质等指标来评估药物的质量。例如，颜色、形状、气味和颗粒大小等外观指标可以反映药物的纯度和稳定性。

2. 药效学评价

药效学评价是通过动物实验和临床试验等方法来研究药物的体内外药效。这些评价方法旨在确定药物的治疗效果、剂量效应关系以及安全性。

3. 安全性评价 药物的安全性评价是通过研究药物的毒性和不良反应来确定其安全性。这些评价方法包括小鼠急性毒性实验、细胞毒性实验、致突变性实验等。

4. 实验室测试

实验室测试是通过使用各种分析和检验仪器对药物进行检测。例如，高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、红外光谱(FT-IR)等技术被广泛应用于药物质量评价与控制。

二、药物质量控制的重要性

药物质量控制是确保药物质量稳定和可控的重要环节。药物质量控制的目标是确保药物的质量符合法规和标准要求，从而保证药物的疗效和安全性。

1. 保证药物疗效

药物的质量与其疗效密切相关。只有通过严格的质量控制措施，才能确保药物的活性成分在制剂中的含量符合要求，从而保证药物的疗效。

2. 提高用药安全性

药物的不合格会导致使用者出现不良反应甚至中毒等安全问题。通过严格的质量控制，可以排除药物中的有害物质，减少使用者的不良反应风险，提高用药的安全性。

3. 维护药品市场秩序 药物质量低劣不仅会伤害患者，也会破坏药品市场的秩序。通过加强药物质量控制，可以降低假冒伪劣药物的出现概率，维护药品市场的健康有序发展。