乳及乳制品中抗生素残留微生物检测法研究进展及其控制措施
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牛奶中的抗生素残留检测方法研究进展3.1微生物检测法微生物检测法是应用较广泛的方法,其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留,如纸片法(PD)、TTC法、拭子法(STOP)等。
采用传统的微生物检测方法,缺点是:(1)时间长;(2)显色状态判断通过肉眼辨别,易产生误差,对微红色者无法做出准确判断;(3)操作复杂。
优点是费用低,一般实验室都能操作。
其中,纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。
3.1.1纸片法纸片法,即PD法(Paper Disc)。
常用的纸片法有枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片检测法。
这两种方法主要用来检测牛奶中的β-内酰胺类抗生素,其操作过程基本相同,而选用的菌种不同。
枯草杆菌纸片法检测的结果易出现假阳性,为了确定阳性物质是否为青霉素(或β-内酰胺类),对加热后的乳样用青霉素酶处理,以灭活乳样中的青霉素。
然后再行检测,检测限可达0.01 IU/mL。
而嗜热脂肪杆菌纸片检测法不仅用于检测奶样中β-内酰胺类抗生素,并能暗示是否还存在其它抑菌物质,检测限可达0.008 IU/mL以下。
一般在4h 内即可获得结果。
因此,在实践中嗜热脂肪杆菌纸片法比枯草杆菌纸片法应用更为广泛。
此外,神保胜彦(1991)对纸片法作了进一步研究和改进。
改进后的纸片法不仅能够确定抗生素的种类,而且提高了检出率和准确性,氯霉素最低检出量0.01mg/kg,土霉素0.05mg/kg,链霉素1mg/kg,红霉素0.05mg/kg,青霉素0.0025mg/kg。
3.1.2 TTC法TTC法,即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride),是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409—85)。
该法简便、快速,无需特殊设备,3~4h可见报告,很适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部门采用。
牛奶中抗生素残留检测技术的研究进展陈家越【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2012(040)010【摘要】在奶牛饲养过程中,用于预防和治疗作用的抗生素药物在治疗疾病和提高牛奶产量方面做出了相当大的贡献,随着抗生素的广泛使用,其残留所带来的一系列问题也接踵而至。
研究表明,动物性食品中残留抗生素是诱发儿童肥胖的一个重要因素,同时抗生素的后效应也引起了人们的高度重视。
因此,关于抗生素检测的研究越来越引起人们的关注。
本文对抗生素残留检测技术进行了综述,并对抗生素检测技术今后的发展方向作了展望。
%In dairy farming,antibiotics made a considerable contribution in the prevention and treatment of diseases and improving milk production.With the wide spread use of antibiotics,residual brought a series of questions followed.Studies showed that antibiotic residues in animal foods was an important factor to induce obesity in children,at the same time,the after-effects of antibiotics also attracted great attention.Therefore,on the detection of antibiotic research drew increasing attention.Antibiotic residue detection techniques were reviewed,and antibiotics detection technology in the future direction of development was also discussed.【总页数】3页(P8-10)【作者】陈家越【作者单位】福建船政交通职业学院安全技术与环境工程系,福建福州350007【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.牛奶中抗生素残留检测技术 [J], 侯亚莉;朱奎;丁双阳2.牛奶抗生素残留快速检测技术进展及应用现状 [J], 叶兴乾;刘东红;陈健初3.牛奶中抗生素残留检测技术进展 [J], 沈永聪;李守军;杨林4.牛奶中抗生素残留检测技术进展 [J], 沈永聪;李守军;杨林;5.荧光免疫分析法在牛奶抗生素残留检测中的研究进展 [J], 阿说阿沙;邹文佳;付婧洁;杨腾昆;余林霖;杨柳;江海洋因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
第17期 收稿日期:2020-06-13作者简介:马 娅(1987—),女,甘肃定西人,兰州石化职业技术学院讲师,硕士研究生,主要研究方向为化学与生物传感器。
牛奶中抗生素残留检测的研究现状马 娅,马丽娜,史俊杰,焦林宏,王红玉(兰州石化职业技术学院,甘肃兰州 730060)摘要:牛奶在人们饮食中占有重要地位,但是种种原因使得抗生素残留于牛奶中,严重影响奶品品质及人体安全,乳品中抗生素残留的检测和管理尤为重要。
本文主要介绍牛奶中抗生素残留的三种检测方法:微生物检测法、理化检测法和免疫法。
而我国在生产管理上常用的筛查检测方法有TTC法和SNAP法,两种方法各有优劣,而基于TTC法的试纸检测法是一种正在研发的有潜力的筛查分析方法。
关键词:牛乳;抗生素;残留;检测方法中图分类号:O657 文献标识码:A 文章编号:1008-021X(2020)17-0083-02 牛奶因其营养成分齐全、营养价值高、易消化吸收等特点,被誉为“食品之王”,逐渐成为人们生活中不可或缺的一种食品。
然而,奶牛饲养中为预防疾病常在饲料中添加抗生素,服用大剂量抗生素药物,获得的奶品中添加抗生素防止其腐坏[1],这些因素均会导致抗生素在牛奶中残留,长期饮用含抗生素残留的牛奶不仅危害人类的健康,同时由于抗生素对发酵乳中发酵菌种的繁殖产生抑制作用使其发酵异常从而影响奶制品的品质[2]。
世界卫生组织(WHO)在1979年就已经将抗生素列为污染物,之后各个国家都开始关注牛奶中抗生素残留检测,提出了不应检出抗生素的要求。
2001年中华人民共和国农业行业标准也规定了无公害食品-生鲜牛乳中不能检出抗生素。
我国农业部在2001年10月发布实施了《无公害食品生鲜牛乳行业标准》,明确规定“新鲜牛乳中抗生素不得检出”。
2002年发布的《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定,奶中最高允许残留量(单位ng/L)标准是:新霉素为500;庆大霉素为200;林可霉素为150;四环素、土霉素、磺胺类等均为100[3]。
乳制品中抗生素残留现状及其检测方法探究摘要:抗生素检测是我国当前乳制品行业所面临的一大难题,提高乳制品检测技术是促进乳制品行业发展的关键。
本文简要叙述了乳制品中存在抗生素残留的具体危害与现状,并描述了几种检测抗生素残留的方法。
关键词:抗生素乳制品检测方法前言:乳制品属是我国人均需求量最大的一种营养品,同时,乳制品行业也是发展最快的工业之一,我国乳制品行业的发展也带动了畜牧业的发展,乳畜行业应用最广泛的的抗生素为四环素类、氨基糖苷类、β-内酰胺类等,抗生素的应用使我国的乳制品中均有其残留物,为广大消费者留下了较大的健康隐患。
因此,对残留在乳制品中的抗生素检测极为重要,本文就此问题进行讨论。
1.乳制品中的抗生素残留状况现今我国的乳制品现状并不乐观,06年对几处乳制品零售点进行残留抽样检测,检测结果有60%以上的样品显示为阳性。
而另一项对我国几大城市的乳制品检测,抗生素检测残留超标现象严重。
2.残留的抗生素来源与危害抗生素的残留可以追溯到乳制品的生产及流通过程。
乳制品的原材料来自于动物,因此,抗生素主要应用于动物的疫病防治工作。
在奶牛患病期间药物使用不当或是停药期不符合规定均会造成乳制品中残留抗生素。
再者,奶牛长期食用含有抗生素饲料等也会造成抗生素的残留。
其次,为了抑制乳制品中的微生物,使乳制品易于保存,经常会认为的在牛奶中添加抗生素,这是抗生素检测残留超标的主要原因。
在发酵乳制产品时将会受到残留在原料乳中的抗生素的影响,增加了乳制品较大的生产困难,同时,黄油、干酪、发酵乳的起酵均会受到抗生素残留的干扰,并影响其后期形成风味。
虽然少量的抗生素不会对人体造成影响,但是长期食用将会造成人体健康隐患。
长期食用具有残留抗生素的乳制品会产生以下几点危害:第一,抗生素残留中含有较低的毒性,长期服用就可能引发人体疾病如肾毒病与耳毒病;第二,造成人体过敏;第三,有可能增加乳制品中的病原菌的耐药性;第四,造成体内肠胃系统微生物菌群的失衡;第五,影响我国畜牧产品的出口。
南京林业大学乳品中抗生素残留检测方法研究进展Review on the Methods for Determination of Antibiotic Residues in Milk Products侯雯食品科学与工程森林资源与环境学院指导老师:石瑞2011/12/22乳品中抗生素残留检测方法研究进展侯雯南京林业大学森林资源与环境学院江苏南京 210037摘要随着我国奶牛饲养业的日益发展,多种抗生素被越来越多地被应用于饲料添加剂和预防奶牛疾病中,不可避免地产生了乳品抗生素的残留。
乳品中残留的抗生素不但危害人体的健康,造成人体免疫力的降低,同时也会影响牛奶的品质,经济蒙受损失,对正常贸易产生负面影响。
文章从牛乳中抗生素残留的现状、来源、产生的危害、目前所用的检测方法以及近期检测方法的研究进展等方面进行综述,并对控制抗生素残留提出了相关的建议。
本文为加强我国对乳制品中抗生素的检测监督,解决目前乳品工业发展中面临的一些问题提供了参考。
关键词:乳品; 抗生素残留;微生物法;高效液相色谱法;免疫法Review on the Methods for Determination of Antibiotic Residues in Milk ProductsHouwen Forest Resources and Environment, Nanjing Forest University, Nanjing Jiangsu Province,210037ABSTRACT:With an increasing development of the milk industry in our country, multi-antibiotics have been applied widely to the feed additives and the preventing and treating diseases of dairy cattle ,which inevitably produces residues in milk. The antibiotic residues in milk not only do damage to people’s health, causing hypoimmunity ,but also have negative effects on the quality[在此处键入文档的摘要。
129原料乳及乳制品中的抗生素残留是影响乳制品安全的关键因素,而通过微生物检测法可以有效检测出原料乳及乳制品中的抗生素残留,本文重点论述了我国原料乳及乳制品中抗生素残留的现状以及微生物检测方法。
一、我国原料乳及乳制品中抗生素残留现状在我国,原料乳及乳制品的安全问题主要是因为其中存在一定量的抗生素(用于治疗牛乳腺炎症)。
从食品保鲜的角度来说,抗生素能够有效抑制鲜奶中微生物的生长繁殖过程,从而延长鲜奶的保质期,但是不正确、不恰当用药却会导致乳制品中存在抗生素残留,从而造成食品安全隐患。
考虑到乳制品加工过程中会有大量微生物参与其中,所以抗生素残留较高必然会对微生物繁殖过程产生一定影响。
再者,如果长期食用抗生素残留超标的乳制品,人体健康也会深受影响,主要表现是抗生素残留超标,增加病原菌耐药性,同时严重破坏人体肠道中的微生物菌落平衡,导致人体出现不同程度的过敏反应。
因此,对原料乳及乳制品进行抗生素残留检测是必不可少的。
值得注意的是,我国原料乳及乳制品中抗生素残留的现状并不容乐观。
例如,一份针对北京、天津、石家庄5个零售点共77个牛奶样品的β-内酰胺酶残留检测结果显示,63.6%的样品检测呈阳性;一项针对西宁、南宁、广州、杭州、泉州、北京等城市乳制品质量的检测调查结果显示,在近800份乳品采样中,抗生素残留超标位居不合格项目之首。
二、原料乳及乳制品中抗生素残留的微生物检测方法抗生素检测技术的种类较多,根据技术原理主要包括免疫法、微生物检测法以及理化分析法。
其中,微生物检测方法能够实现对原料乳及乳制品中抗生素残留、微生物代谢及其生理机能的有效分析,同时了解抗生素残留对于浅析原料乳及乳制品中抗生素残留现状及微生物检测方法微生物代谢生理机能的抑制作用。
在检测过程中,如果原料乳及乳制品样品中存在对抗生素敏感的微生物,则表示待检测样品中没有抗生素残留;反之,微生物的生长则会受到严重抑制,在培养基上逐渐形成明显的抑菌圈。
乳及乳制品中抗生素检测方法研究进展作者:刘硕王胜洁贾丽娜来源:《农产品加工·下》2018年第04期摘要:近年来,不断出现的食品安全问题引发人们广泛关注,尤其是乳制品,其安全问题涉及到每一个人,而牛奶安全问题中比较严重的一个就是抗生素残留问题。
通过综述抗生素残留现状、来源和危害,以及比较流行的抗生素检测技术和新的检测方法,对牛奶中抗生素检测方法的发展进行展望。
关键词:乳制品;抗生素残留;检测方法中图分类号:S646.12 ; ; 文献标志码:A ; ; doi:10.16693/ki.1671-9646(X).2018.04.050Research Progress in the Detection of Antibiotics in Milk and Dairy ProductsLIU Shuo,WANG Shengjie,*JIA Li'na(College of Science and Technology,Hebei Agricultural University,Cangzhou,Hebei 061100,China)Abstract:In recent years,the continuous emergence of food safety issues have aroused widespread concern,especially dairy products,its safety issues involve everyone,and milk safety is more serious one problem is antibiotic residues. This article reviewed the current status,sources and hazards of antibiotic residues,as well as the more popular antibiotic detection techniques and new detection methods,and prospected the development of antibiotic detection methods in milk.Key words:dairy products;antibiotic residues;detection methods牛奶营养丰富,可提高人体免疫力、增强体质,是对人类最有益、最健康的食品之一。
乳及乳制品中抗生素残留微生物检测法研究进展及其控制措施舒黛廉1,王珏2(11郑州牧业工程高等专科学校,郑州450011;21郑州大学医学院一附院,郑州450052)摘要:作者介绍了乳及乳制品中抗生素残留常用的微生物检测法的原理和操作步骤,如氯化三苯基四氮唑法、牛乳发酵活性试验法、纸片法、管碟法、试剂盒法,并介绍了控制乳及乳制品中抗生素残留的一些措施,为乳中抗生素残留的检测和控制提供参考。
关键词:乳;抗生素残留;微生物检测法中图分类号:S87911 文献标识码:B 文章编号:167127236(2008)0120074203 抗生素是使用最广泛的治疗奶牛乳腺炎和其它疾病的药物,奶牛用药后,抗生素将不可避免的移行到最初几天的乳汁中,这一现象称之为抗生素残留。
人长期食用含有抗生素残留的牛奶或乳制品,也就相当于长期低剂量的吸收抗生素,其危害性主要有:①使人体产生耐药菌株,给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响;②抗生素过敏体质的人会出现过敏反应(李明远,2001),危及健康;③破坏人体内正常菌群的平衡状态,使菌群失调,甚至造成“二重感染”,使重症患者病情难以控制。
据报道,由于长期使用抗生素,使动物体内致病菌产生了不同程度的抗药性,现在人们已经发现了不少能同时抵御多种抗生素(如青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺类药物、四环素等)的耐药菌株(周学辉等,2004)。
国外也曾有报道因牛奶中青霉素残留引起的皮炎、皮疹等过敏反应。
因此,动物食品中抗生素残留越来越成为国际社会关注的公共卫生问题。
目前,乳中抗生素残留的检测方法大致分为3类:生物测定法(微生物测定法、受体测定法)、免疫法(放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法)、理化分析法(波谱法、色谱及联用技术)(邓斌等,2003)。
下面介绍几种常用的微生物检测方法。
1 乳及乳制品中抗生素残留的微生物学检测方法111 微生物学检测法的原理及应用特点 微生物检测法(MIT)是根据抗生素对微生物的生理机能及代谢的抑制作用来定性或定量确定样品中抗生素残收稿日期:2007207202作者简介:舒黛廉(1963-),女,河南人,副教授,硕士,研究方向:畜禽疾病病原诊断与防制。
牛奶中抗生素残留现状及检测方法的研究进展【摘要】本文论述了牛奶中抗生素残留的原因和危害性,综述了抗生素残留检测的三类方法,包括理化检验法、微生物检测法和免疫分析法,为进一步开展牛奶抗生素残留检测提供参考。
【关键词】牛奶;抗生素残留;检测方法0 前言长期以来,抗生素被广泛地用于人和动物疾病的防治,在奶牛饲养业中作为医治乳房炎等疾病的药物,是一种高效的兽药,但抗生素残留在牛奶中会造成对人体健康的危害。
随着生活水平的提高,牛奶中抗生素残留问题日益受到消费者的重视,已成为乳业管理和技术的难题之一。
本文综述了牛奶中抗生素的残留现状和危害,并介绍了三大类检测方法。
1 牛奶中抗生素的来源牛奶中抗生素的残留主要以下几个方面原因:(1)对泌乳期奶牛用药不当引起牛乳中抗生素残留;(2)把抗生素作为奶牛饲料添加剂使用;(3)因挤奶工具和贮奶设备造成的患病奶牛与健康奶牛之间的交叉污染;(4)部分不法奶农为防止细菌的大量繁殖和牛奶的酸败而人为添加抗生素。
2 牛奶中残留的抗生素的种类及其危害抗生素在奶牛疾病预防和治疗中发挥了巨大的作用,但牛奶中残留的抗生素对人体存在潜在的危害,表现在:(1)引起过敏反应,由于许多抗生素药物如青霉素、四环素、磺胺类药物均有一定抗原性,可引起人们的过敏反应;(2)诱导人体内产生耐药性菌株,造成人体内的菌群失调,使人的免疫力降低,严重时可危及病人生命;(3)影响奶制品品质,降低产量和质量,给生产者造成经济损失;(4)一些化学性质稳定的抗生素被排泄到环境中将会造成环境污染,破坏生态平衡;(5)抗生素本身存在一定的副作用(见表1)。
表1 常见抗生素的种类及副作用3 牛奶中抗生素残留标准随着消费者和国家主管部门对牛奶中抗生素残留危害的认识,2001-2002年农业部公布了《无公害食品生鲜牛乳》(NY/T 5045-2001),规定了“抗生素不得检出”,2002 年12月又发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》,其中对牛乳中的兽药残留限量作了明确规定,2008年10月6日,国务院第二十八次常务会议通过《乳品质量安全监督管理条例》,将抗生素残留检测项目列为强制性检测项目。
牛奶抗生素残留检测方法研究进展摘要近年来,不断出现的食品安全问题引起了人们的重视,凸显了食品安全方面存在的一些漏洞。
牛奶作为一种营养丰富、价格低廉的食品,其安全问题几乎牵涉到每一个人,而抗生素残留问题是牛奶安全问题中比较严重的一个。
如何快速准确地检测牛奶中是否存在抗生素残留很重要。
主要综述了检测牛奶中抗生素残留的不同方法及各自的特点。
关键词牛奶;抗生素残留;检测方法近年来,出现的一系列牛奶安全问题,严重打击了消费者对奶制品的信心。
牛奶中抗生素残留则是奶制品安全问题中较为突出的一个,已成为公众关注的焦点[1]。
世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)的食品法、欧盟(EU)和美国食品与药品管理局(FDO)等对牛奶中抗生素残留量都有明确严格的规定,严禁抗生素残留量超标的牛奶上市[2]。
在奶牛饲养中,如果不遵守规定的休药期、不合理用药、使用违禁药物等会导致牛奶中抗生素残留超标[3]。
乳中抗生素残留主要存在2个方面的潜在危害:一是干扰人体正常菌群,引起细菌耐药性,导致部分人产生过敏反应;二是原料乳中的抗生素残留势必会对乳制品加工生产产生干扰,造成原料乳的浪费,致使企业效益蒙受损失[4]。
目前监测牛奶中抗生素残留的方法主要有4大类[5]:即微生物检测法、酶联免疫法、理化检测法和免疫传感器法。
每种方法依据的原理不同,适用范围、操作要求、灵敏度也不尽相同。
本文综述了4类主要的检测方法,分析了它们的优点及局限性。
1 检测方法1.1 微生物检测法微生物检测法是较为广泛应用的最经典方法,测定原理是根据抗生素对微生物生理机能、代谢的抑制作用来定性确定样品中抗微生物药物残留[6]。
其优点是操作简单、可靠、费用低、无需高级实验设备,一般实验室及养殖场都能使用。
因为牵涉到微生物的培养,所以检测时间相对较长,不能实现定量检测,不能满足某些抗生素最低限的检测。
微生物检测法主要包括纸片法、TTC 法、管蝶法、试剂盒法等[7]。
乳与乳制品中抗生素残留危害及治理对策摘要介绍了乳与乳制品中抗生素残留的危害,分析了其来源,并提出了治理对策,以期为乳制品安全工作提供参考。
关键词乳与乳制品;抗生素残留;危害;对策乳与乳制品已经成为食品行业中最大行业,我国整个乳制品市场将达到200亿美元的规模。
然而三聚氰胺、OMP等事件的发生对整个乳制品行业产生巨大的打击,消费者对于乳与乳制品等消费安全问题仍心有余悸,而国外乳品企业趁机抢占我国市场[1]。
虽然经过这2年的重新发展,国内乳制品企业正在迅速恢复,然而也应该吸取经验教训,重视乳品企业中另一潜在威胁因素——抗生素。
在乳制品行业中,由于抗生素残留,用于制作酸奶制品的原料大都采用国外进口奶粉,而且在前2年,一些企业推出“无抗奶”等产品,这一不科学、不符合实际的情况存在也是针对有些企业的乳制品中抗生素含量严重超标的现实提出的[2]。
因此,企业、国家相关部门应加大对乳与乳制品中抗生素残留的监管和相关政策的宣传。
1乳与乳制品中抗生素残留的危害1.1影响乳制品加工原料乳中抗生素残留物超标将严重干扰发酵乳制品的生产,还可严重影响干酪、黄油、发酵乳的起酵和后期风味的形成,从而对乳品企业造成巨大经济损失。
1.2引发人体超敏反应目前,在乳与乳制品中,主要的抗生素残留包括青霉素类、四环素类、氨基糖苷类、福诺酮类药物等。
经常食用低剂量青霉素、四环素及某些氨基苷类抗生素等残留的食品,能使易感的人群出现超敏反应。
严重者可引起休克,短时间内出现血压下降、皮疹、喉头水肿、呼吸困难等严重症状。
青霉素类是最容易引起超敏反应的一类抗生素;此外,四环素、链霉素等抗生素有时也能引起超敏反应。
青霉素具有半抗原特性,进入机体后,轻者表现为接触性皮炎和皮肤反应,严重者可表现为致死性过敏休克;四环素的变应原性反应比青霉素低,但四环素可引起过敏和荨麻疹。
1.3导致耐药性菌株的形成经常食用低剂量抗生素残留的食品可使细菌形成耐药性。
动物在经常反复摄入某一种抗生素后,体内将有一部分敏感菌株逐渐形成耐药菌株,这些耐药菌株可通过动物性食品进入人体。
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乳制品中抗生素残留现状及其检测方法探究
开发出越来越准确、快速,误差越来越小的检测方法,方便地检出乳和乳制品中抗生素残留,净化消费环璄,就能为居民的身心健康提供保障,这是一篇乳制品中抗生素残留现状,接下来让我们一起看看吧!
摘要:综述了乳制品中抗生素残留现状和危害,以及各种抗生素残留的检测方法,为加强我国乳制品中的抗生素监测,解决目前乳品工业发展中面临的难题提供参考。
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关键词:乳制品;抗生素残留;检测方法
乳及乳制品是老少皆宜的营养品,在我国,乳制品及乳制品工业发展迅速,同时畜牧业也发展迅猛,-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类等抗生素在乳畜饲养业中广泛应用,造成乳及乳制品中抗生素残留,给消费者健康带来了潜在威胁,因而提高抗生素残留的检测技术显得尤其重要,尽快开发或引进先进的抗生素检测技术以解决我国当前乳和乳制品行业面临的难题已成为当务之急。
1。
乳和乳制品中残留抗生素的检测方法探讨发布时间:2021-03-30T06:24:09.368Z 来源:《科技新时代》2021年1期作者:李文龙[导读] 在当前的形势下,乳制品安全问题是一个前所未见的值得关注的问题,其中抗生素残留问题同乳制品的质量以及人民群众的健康存在着紧密的关联性。
在本文中,笔者主要分析如何探测乳制品中的抗生素和加强对乳制品中的抗生素的监测,目的是为了推动我国乳制品行业持续性向好向稳发展。
大庆乳品厂有限责任公司黑龙江省大庆市 163316摘要:在当前的形势下,乳制品安全问题是一个前所未见的值得关注的问题,其中抗生素残留问题同乳制品的质量以及人民群众的健康存在着紧密的关联性。
在本文中,笔者主要分析如何探测乳制品中的抗生素和加强对乳制品中的抗生素的监测,目的是为了推动我国乳制品行业持续性向好向稳发展。
关键词:乳制品;残留抗生素;检测随着我国畜牧业以一种飞快的速度发展,乳牛患乳腺炎等疾病的风险正在持续性的增大。
作为预防和治疗疾病的整体制剂,乳牛的抗生素被广泛添加到奶牛的饮食中,也可以通过体内注射的方式。
因为抗生素对社会公众的健康存在着不可言说的威胁,牛奶和乳制品中的抗生素残留越来越成为社会公众所关注的热点议题。
因此,迫切需要尽快开发或引进先进的抗生素检测技术,并解决我国乳品工业目前面临的问题已经十分紧迫。
1、抗生素残留的危害和来源如果我们使用高温或超高温巴氏消毒法存在着乳和乳制品中抗生素被破坏的可能性,未被完全消灭的抗生素借助牛奶和乳制品渠道进入了我们的身体,细菌中的抗生素残留量低,很难被完全杀死,还有可能将我们身体内的部分有益细菌给杀死,为了培养人与动物之间每一种滑动病原体抗性基因的抗原基因抗原能力,开发出新的抗生素落后于细菌持续增长的耐药性,开发新的药物在当前的形势下是一项重大挑战。
对于经常使用含有抗生素的牛奶的人,这相当于长时间吸收低剂量的抗生素,从而导致病原体对多种抗生素的抵抗力。
乳及乳制品中抗生素残留微生物检测法研究进展及其控制措施舒黛廉1,王珏2(11郑州牧业工程高等专科学校,郑州450011;21郑州大学医学院一附院,郑州450052)摘要:作者介绍了乳及乳制品中抗生素残留常用的微生物检测法的原理和操作步骤,如氯化三苯基四氮唑法、牛乳发酵活性试验法、纸片法、管碟法、试剂盒法,并介绍了控制乳及乳制品中抗生素残留的一些措施,为乳中抗生素残留的检测和控制提供参考。
关键词:乳;抗生素残留;微生物检测法中图分类号:S87911 文献标识码:B 文章编号:167127236(2008)0120074203 抗生素是使用最广泛的治疗奶牛乳腺炎和其它疾病的药物,奶牛用药后,抗生素将不可避免的移行到最初几天的乳汁中,这一现象称之为抗生素残留。
人长期食用含有抗生素残留的牛奶或乳制品,也就相当于长期低剂量的吸收抗生素,其危害性主要有:①使人体产生耐药菌株,给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响;②抗生素过敏体质的人会出现过敏反应(李明远,2001),危及健康;③破坏人体内正常菌群的平衡状态,使菌群失调,甚至造成“二重感染”,使重症患者病情难以控制。
据报道,由于长期使用抗生素,使动物体内致病菌产生了不同程度的抗药性,现在人们已经发现了不少能同时抵御多种抗生素(如青霉素、氯霉素、链霉素、磺胺类药物、四环素等)的耐药菌株(周学辉等,2004)。
国外也曾有报道因牛奶中青霉素残留引起的皮炎、皮疹等过敏反应。
因此,动物食品中抗生素残留越来越成为国际社会关注的公共卫生问题。
目前,乳中抗生素残留的检测方法大致分为3类:生物测定法(微生物测定法、受体测定法)、免疫法(放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法)、理化分析法(波谱法、色谱及联用技术)(邓斌等,2003)。
下面介绍几种常用的微生物检测方法。
1 乳及乳制品中抗生素残留的微生物学检测方法111 微生物学检测法的原理及应用特点 微生物检测法(MIT)是根据抗生素对微生物的生理机能及代谢的抑制作用来定性或定量确定样品中抗生素残收稿日期:2007207202作者简介:舒黛廉(1963-),女,河南人,副教授,硕士,研究方向:畜禽疾病病原诊断与防制。
留的方法。
通常在被检测乳样中培养对抗生素敏感的微生物,如果样品中没有抗生素存在,在微生物的生长繁殖过程中可以观察到使培养基变混浊、不透明或微生物产酸导致指示剂颜色变化;如果有抗生素或其他抑菌物质存在则会观察到培养基上有抑菌圈形成或培养基仍旧透明,或没有颜色变化。
这类检测方法可靠性高、操作简单、费用低,而且有一定特异性,如bacill us cereus对四环素类敏感,basill us subtilis对氨基糖苷类敏感,kocuri a v ari ans对大环内酯类敏感,bacill us stearot hermop hil us对磺胺类和β2内酰胺类敏感(Gaudin,2004),但需经过若干小时的培养过程方能观察到结果。
微生物法是目前抗生素检测最常用的方法。
112 常用微生物检测方法 不同微生物检测法所用的微生物种类不同,反应的灵敏度、特异性、检测限也不同。
主要有氯化三苯基四氮唑法(t rip heye tet razolium chloride,T TC法)、牛乳发酵活性试验法、纸片法(PD)、管碟法、试剂盒检测法等。
其中, T TC法和纸片法是牛奶中抗生素残留常用的2种微生物学检测法。
112.1 氯化三苯基四氮唑法 氯化三苯基四氮唑法是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(G B5409285)。
①检测原理:当乳中加入嗜热乳酸链球菌以后,如果乳中无抗生素,嗜热乳酸链球菌就生长繁殖,在新陈代谢中进行生物氧化,其脱出的氢可以和加在乳中的氧化型T TC结合成为还原型T TC,氧化型T TC是无色的,还原型T TC是红色的,所以可使乳变为红色。
相反,如果乳中存在抗生素,嗜热乳酸链球菌就不能生长繁殖,没有氢释放,T TC不被还原,仍为无色,乳汁也无色。
②操作步骤:取乳样9ml放入试管中→置80℃水浴中加热5min→冷却至37℃以下→加入菌液1ml(菌液制备:将嗜热乳酸链球菌接种入灭菌脱脂乳,置36±1℃培养箱中保温15h,再用灭菌脱脂乳以1∶1比例稀释)→置36±1℃水浴中保温2h→加入4%T TC指示剂0.3ml→置36±1℃水浴中保温30min→观察牛乳颜色变化。
③结果判定:检样呈红色或桃红色,说明无抗生素残留,即结果为阴性;如检样不显色,可再继续保温30min 作第2次观察,如仍不显色,说明有抗生素残留,即结果为阳性。
检测各种抗生素所用的T TC法试验的灵敏度(最低检出量)分别为:青霉素0.004U/ ml,链霉素0.5U/ml,庆大霉素0.4IU/ml,卡那霉素5IU/ml。
112.2 牛乳发酵活性试验法 ①检测原理:在无抗生素残留的牛乳中加入酸牛乳或发酵剂,呈正常发酵,乳的p H迅速下降;如牛乳中有抗生素残留,则发酵剂生长繁殖受到抑制,乳的p H下降变化不大。
根据对照和样品中发酵剂的活性和p H来确定乳中是否含有抗生素。
②操作步骤:取乳样100~200ml放于烧瓶中→加热至70℃灭菌30min→迅速冷却至42℃→加入2.5%发酵剂(乳酸菌或市售优质酸牛乳),经搅拌后,测p H,通常为6.4左右→将烧瓶置42℃水浴保温培养,每隔30min测1次p H,共测3次,至90min,同时需作对照。
③结果判定:90min后p H下降至5.7或更低,则为发酵活性试验正常,可判为阴性,无抗生素残留;如3次测定p H下降缓慢或不下降,90min时p H仍在5.7以上,则为有抗生素残留,可判为阳性。
据报道,当牛乳中的抗生素残留达0.015~0.05IU/ml时,就会抑制乳酸菌发酵,因此生产实践中常采用做小样的办法判断原料乳中是否有抗生素残留。
112.3 纸片法(paper disc,即PD法) ①检测原理:常用的有嗜热脂肪芽孢杆菌纸片法和枯草芽孢杆菌纸片检测法。
即将一吸满受检乳样的滤纸圆片放入一接种有嗜热脂肪芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌的固体琼脂培养基平皿上,并放入一含有标准抗生素阳性的对照圆片,如果被检样品中没有抗生素存在,由于微生物的生长,则不会观察到在受检乳样的滤纸圆片周围培养基上有抑菌圈形成;如果有抗生素或其他抑菌物质存在,则会观察到在受检乳样的滤纸圆片周围培养基上有抑菌圈形成。
②操作步骤:将一吸满受检乳样的滤纸圆片放入一接种有嗜热脂肪芽孢杆菌的固体琼脂培养基平皿上,并放入一含有标准抗生素的阳性对照圆片,将该培养皿在64℃培养2.5h或55℃培养4h,培养结束,用毫米游标卡尺测量抑菌圈直径,一般阳性结果以>14mm为准,能检出牛乳中青霉素含量0.005 U/ml,本法可根据抑菌圈直径定量测定。
③特点:枯草芽孢杆菌纸片法检测的结果易出现假阳性,为了确定阳性物质是否为青霉素(或β2内酰胺类)引起的,对加热后的乳样用青霉素酶处理,以灭活乳样中的青霉素,然后再行检测,检测限可达0.01 IU/ml;纸片法不仅用于检测乳中β2内酰胺类抗生素,并能暗示是否存在其他抑菌物质,如磺胺类、四环素类等,检测限可达0.008U/ml以下(Arnost,1979),根据抑菌圈直径可以定量检测,一般在4h内即可获得结果。
目前嗜热脂肪芽孢杆菌纸片法应用更为普遍。
112.4 管碟法 ①检测原理:同纸片法检测原理。
②操作步骤:将含有敏感菌的琼脂倒入平皿,冷却后,上放小管(现在常用牛津杯),管中放已知抗生素标准液和未知试样液,经培养后,抗生素标准液周围琼脂不长细菌,即为抑菌圈,如试样液周围也出现抑菌圈表示含有抗生素,目前常用藤黄八迭球菌(sar2 ci nal ntea)来检测青霉素。
1958年,美国FDA将藤黄八迭球菌管碟法作为法定方法,检测青霉素的敏感度为0.01U/ml(孟昭赫,1996)。
由于该法的检测时间长达10余个小时,目前只有藤黄八迭球菌有应用。
112.5 试剂盒法 为了使这类试验更加操作易行,世界上一些国家的公司相继开发了一些检测试剂盒,如荷兰的G ist2brocades BV公司开发了Delo2 votest2P,Delovotest2SP,Delovotest Cow Test, Delovotest2MCS检测系列。
美国Charm Science股份有限公司也推出了类似的系列检测方法,如Charm A IM296检测试剂盒。
目前市场上还可见到一些用微生物法检测乳及乳制品抗生素的试剂盒如Valio T101试剂盒等。
现以常用的Delvotest2SP法为例,说明其检测原理及操作方法。
①检测原理:被检乳样中可能存在的抗生素小分子物质向培养基内扩散,而乳中干扰指示菌芽孢繁殖的其它大分子物质被阻挡在琼脂培养基的表层。
若有检出限以上浓度的抗生素存在,则指示菌芽孢的生长繁殖就会被抑制,培养基保持原有色泽(紫色),阳性;若无抗生素或抗生素含量极低,则指示菌芽孢生长繁殖时会分解培养基中的碳水化合物产酸,使指示剂变色(黄色),则检测抗生素为阴性。
②操作步骤:取试剂盒中营养药片1粒添加于含有标准数量嗜热脂肪芽孢杆菌紫色固态培养基的反应管中,用微量取样吸头吸取被检奶样0.1ml加入上述紫色固态培养基反应管中,编号,插入方型培养器中(同时设阴阳性对照),64±0.5℃定时培养3h。
观察记录结果。
当被检乳中不存在抗生素残留或抗生素残留低于检测限时,嗜热脂肪杆菌芽孢在64℃条件下即受营养药片的激活萌发生长,短时间内分解糖类产生有机酸,使固态培养基中p H下降,培养基由原来的紫色变为黄色,呈阴性结果。
当被检生牛奶中存在抗生素残留,则抑制了芽孢的生长,从而使培养基颜色保持紫色不变,抗生素检测为阳性结果。
另外,也可采用微生物免疫受体检测法,如美国Charm Science股份有限公司开发的CharmII检测法,它采用先进技术将单克隆抗体包在特定的微生物表面或内部,形成专一性很强的结合位点。
当被检样品中有某类抗生素残留时,便会结合到抗体的特异性位点上;当被检样品中无某类抗生素残留时,结合位点会被14C或3H标记的此类抗生素结合,最后加入闪烁液放入闪烁仪中计数1min,而得到某类抗生素的残留情况。
当前,试剂盒法是最为理想的微生物检测方法,但产品的价格对中等发达国家来讲相对较高,T TC 法及纸片法在我国应用较多,发酵剂活性试验法在小规模工厂经常使用。
这些微生物检测法方便、经济,不同程度的应用于原料乳及乳制品中抗生素的检测,但由于乳本身因素和外部因素对指示菌的作用,往往造成“假性”判断,尤其易导致假阳性结果,建议采用2种方法确证检测,第1种为经济的高敏感性方法;第2种为高特异性(>99%)方法以确证结果,在实际检测过程中尽量排除“假阳性”影响因素,进而对乳中抗生素残留进行安全、准确的检测与分析。