除草剂生物测定方法

乙草胺的测定
乙草胺是一种除草剂，其含量的测定可以通过以下方法进行：
1.高效液相色谱法（HPLC）：将样品通过色谱柱分离，然后通过紫外
检测器检测乙草胺的吸收峰来确定其含量。

2.气相色谱法（GC）：将样品通过色谱柱分离，然后通过质谱检测器
检测乙草胺的分子量来确定其含量。

3.环境流动分析法（EFA）：将水样通过样品处理和动态微萃取，然
后通过液相色谱分析来确定乙草胺的含量。

4.激光诱导荧光分析法（LIF）：在样品中添加荧光探针，然后通过
激光激发荧光，测量荧光强度来确定乙草胺的含量。

这些方法的选择取决于样品类型、检测灵敏度和准确性的要求等因素。

农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。

二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。

因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。

饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。

棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。

食性杂，可长年饲养。

但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。

对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。

若连续大量饲养，须用人工饲养。

三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。

3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度 1.0——1.5cm，冷却后备用。

四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。

2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。

. .农药生物测定绪论一、农药生物测定的含义•广义的生物测定为：来自物理、化学、生理或心理的刺激，对生物整体〔living organism〕和活体组织〔tissue〕产生效力大小的度量〔如：机械刺激、电刺激、各种射线的照射等〕。

•即：生物测定是研究作用物、靶标生物和反响强度三者关系的一项专门技术。

•狭义的生物测定为：以生物的整体或离体的组织、细胞，对某些化合物的反响，作为评价这些化合物生物活性的量度，运用特定的实验设计，以生物统计为工具，测定供试对象在一定条件下效应，即为生物测定。

农药生物测定：运用特定的试验设计，利用生物整体或离体的组织、细胞对农药〔或某些化合物〕的反响并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。

二、农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~1920至1923年间•事件：法国学者埃利希〔R. C. Ehrlich〕研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法–特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比拟来估计其相对药效。

–缺点：由于生物个体从受药到中毒死亡需要一个过程，因而以生物中毒死亡为反响标准测出的致死剂量总比实际反响所需剂量大。

第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代•事件：–1937年欧文〔J.O.Irvin〕首先提出了系统的生物测定方法报告；–1947年芬尼〔D.J.Finney〕出版了系统的生物测定统计方法；–1950年芬尼及古德温〔L.G.Goodwin〕出版"生物测定标准化"一书；–1957年布斯维纳〔J.R.Busvine〕出版"杀虫剂生物测定评述"；–1959年X宗炳在其"昆虫毒理学"一书中，以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述；–1963年X泽薄等出版"杀虫剂及杀菌剂的生物测定"；•特点：研究出以生物群体为反响根底的生物测定方法，提高了测定的准确度。

农药生物测定田间试验一个新药物的发现, 必须两个系统的同时运转一个系统是化学系统, 一个系统是生物学系统农药生物测定与田间药效试验西南大学植保学院丁伟教授一、农药室内生物测定1．生物测定（bioassay ）是由biological 和assay 组合而成，通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项测定技术。

但是，从更广的范围来理解生物测定，则可概括为：“对生物的任何刺激所产生的效应的测定, 包括来自物理、化学、生物、生理及心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。

”总之，生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。

2．生物测定的一般模式3．农药生物测定（pesticidebioassay ）指在一定条件下利用靶标生物测定其对某些化合物的反应的量度，进而鉴别某种化合物生物活性的基本技术与方法。

靶标生物：通常指有害生物，包括昆虫、螨类、病菌、杂草、鼠类等。

包括这些生物的整体或离体的组织、细胞等。

待测化合物：可以是已经成为农药的化合物，包括杀虫（杀螨）剂、除草剂、杀菌剂、杀鼠剂、杀线虫剂乃至卫生杀虫剂等；也可以是待筛选的化合物（已知物和未知物）。

生物反应：指靶标生物对杀虫、杀菌、除草等作用的反应，可以延伸为凡是干扰破坏有机体正常生长、发育、行为、代谢等效应的反应，如植物生长调节、昆虫生长调节、信息传递物质等。

生物反应用死亡率、抑制率、反应率等指标来表示。

量度：指反应的强度或者大小的指标。

要运用特定的实验设计，以生物统计为工具，借助于数学的方法，来给生物反应以量化表达。

生物活性：指药物或某一个化合物对生物体产生的效应。

如果有，则这个药物或化合物有生物活性，如果不产生效应，则这个药物或化合物就没有生物活性。

4．农药生物测定的知识体系（1）供试对象的准备（包括靶标生物的饲养技术和待测化合物的选择）；也包括组织培养、细胞培养、药剂配制、剂量计算等内容（2）生物测定的操作技术与方法（包括室内生测、小区实验和田间药效实验三个方面）；（3）影响农药生物测定的因素分析；（药剂、生物体、环境、操作方法）（4）农药生物测定结果的评价与表达。

315第十章 除草剂残留量测定11.1 苯氧羧酸类除草剂11.1.1 概述苯氧羧酸类除草剂是在α-C 上带有取代基的羧酸除草剂。

其化学结构通式如下：取代基主要有苯氧基、芳氧基、杂环氧基苯氧基等，脂肪酸主要有乙酸、丙酸、丁酸等。

苯氧羧酸类除草剂杀草谱较广，主要用于防治一年生、多年生阔叶杂草及莎草科杂草，多在出苗后进行叶面喷雾，进行出苗前土壤处理时也可防治禾本科杂草及多年生杂草种子繁殖的幼芽期杂草，可广泛地应用于水稻、玉米、小麦、大麦、甘蔗、苜蓿等农田及饲料牧草场、草坪、公路、铁路、机场、仓库及水域。

苯氧羧酸类除草剂的主要品种有2,4-D 、2甲4氯、吡氟禾草灵、禾草灵、喹禾灵、噻唑禾草灵等。

苯氧羧酸类除草剂，由于在分子内具有相当大的亲脂性成分，在水中的溶解度极低。

该类化合物在水溶液可因光照而分解，在土壤中主要通过微生物发生降解。

苯氧羧酸类除草剂在植物体、土壤、水体等介质中残留测定方法因不同品种的结构特性而异，目前主要以气相色谱法、高效液相色谱法为主。

本节以喹禾灵为例，介绍其残留分析方法。

11.1.2 喹禾灵在棉籽、植株及土壤中的残留分析1.方法原理样品用丙酮(植株用50%石油醚/丙酮)溶液提取，液-液分配，酯化反应，中性氧化铝层析柱净化，气相色谱法(ECD)测定。

2.样品处理⑴.提取棉籽、土壤样品：称取30g 样品于具塞三角瓶中，加100mL 丙酮，振荡1h ，过滤，残渣用2×20mL 石油醚/丙酮(1∶1，V/V)洗涤，合并滤液于分液漏斗中，用2×40mL 石油醚提取，合并石油醚相并浓缩至2~3mL ，待柱层析净化，用于测定喹禾灵母体。

植株样品：称取15g 样品于三角瓶中，加入120mL 石油醚/丙酮(1∶1，V/V)，振荡1h ，过滤，残渣用2×20mL 石油醚/丙酮(1∶1，V/V)洗，合并的滤液于分液漏斗中，用2×40mL 石油醚提取，合并的石油醚相浓缩至2～3mL，待柱层析净化，用于测定喹禾灵母体，弃去水相。

《农药生物测定》复习重点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~ 1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。

第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代1937年欧文首先提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼出版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温出版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（）出版《杀虫剂生物测定评述》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述;1963年张泽溥等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥出版《生物测定统计》专着。

特点：研究出以生物群体为反应基础的生物测定方法，提高了测定精度。

第三时期：20世纪70年代至今1. 研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已取得进展。

2. 杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变为寄主植物上的活体试验为主。

3. 20世纪80年代以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法受到了广泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。

如适用于细菌性病害筛选的块根法；适用于大麦白粉病筛选的芽鞘表皮法等。

第四时期：20世纪70年代至今发展趋势：1.随着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提高，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的筛选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的筛选等等。

2.由于电子计算机软、硬件的迅速发展，农药生物测定中的统计分析，早已普遍程序化和微机化，使生物测定结果的分析计算更加简便、快捷，也更加准确、可靠。

农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。

农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。

农药室内生物测定技术与方法张宗俭(沈阳化工研究院农药生物测定中，沈阳110021)一、农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、螨类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。

简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术。

农药生物测定主要包括杀虫剂(杀螨剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。

它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。

一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。

农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。

纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面：1．刨制农药生物活性筛选研究：随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其农药生物评价技术报告会市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。

利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律(sAR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。

生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”．对新农药开发研究起着举足轻重的作用。

名词解释：1，生物测定：生物测定是通过生物活体产生的反应来评价一种物质或一种过程的本质、组成或效力的一种方法。

农药生物测定：度量农药对生物体群体、个体和活体组织、细胞产生效应大小的生物测定技术。

杀虫剂生物测定：度量杀虫剂对螨类及昆虫产生效应大小的生物测定方法引诱剂生物测定：通过诱聚昆虫数量的变化来反映引诱剂效力的生物测定方法杀菌剂生物测定：是将一种杀菌活性化合物作用于靶标生物或施药于植物或非靶标生物产生各种效应的测定技术除草剂生物测定：度量除草剂对杂草生物效应大小和对作物安全性的生物测定方法植物生长调节剂生物测定：利用某些敏感植物某些性状作为指标，对生理活性物质进行定性测量或定量测定的生物测定技术。

2，LD50：（致死中量）能使供试昆虫50%死亡的所用试剂剂量LC50：（致死中浓度）能使供试昆虫50%个体死亡所用的药剂浓度LT50：（致死中时）能使供试昆虫50%个体死亡所用的时间KT50：（击倒中时）能使供试昆虫50%个体中毒击倒所用的时间3，ED50：（有效中量）能使供试病原菌半数表现出某种药效所用的剂量EC50：（有效中浓度）能使供试菌体半数表现出某种药效所用的药剂浓度4，IC50：（抑制中浓度）能使某种杂草供试群体的生长发育和生理生化指标减少或抑制50%所需要的药剂浓度。

5，生物源农药：指直接利用生物活体或生物代谢过程中产生的具有生物活性的物质或从生物体提取的物质作为防治病虫草害的直接农药。

植物源农药：指利用植物杀菌、杀虫、杀草的某部位或提取的有效成分制成的农药。

6，触杀毒力测定：使杀虫剂经体壁进入虫体，到达作用部位而产生中毒致死反应，由此来衡量杀虫剂触杀毒力的生物测定。

胃毒毒力测定：通过试虫吞食带药食料，引起消化道中毒致死反应，由此来。

內吸毒力测定：使药剂经根茎叶或种子吸收传导后，通过供试昆虫吸食含毒汁液而引起中毒反应，由此来、、、、、、熏蒸毒力测定：使药剂从气门进入虫体，到达作用部位而引起昆虫中毒致死反应，由此来。

农药生物测定实验指导（研究生）实验一培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养一、实验目的：1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用；2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。

二、实验原理：培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。

按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。

培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。

灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。

灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。

热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。

干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1小时或150℃处理2小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。

湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1公斤/cm2左右（相当于121℃），维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。

湿热灭菌比干热灭菌效率高。

病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。

本实验是练习在固体培养基上接种。

固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。

接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。

三．主要仪器及试材：1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA培养基[注：以上器皿须经灭菌。

]2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。

四．实验方法与步骤：（一）、培养基的制作：1、培养基的组成（PDA）：去皮马铃薯块200克葡萄糖（或蔗糖）10-20克琼脂17-20克水1000ml2、步骤：（1）、在大烧杯中加入1000ml的水，作上标记；（2）、称取去皮马铃薯200克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30分钟左右，将薯块捞出，留下汁液；（3）、称取17-20克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解。