下载文档原格式
纤维素含量的计算：纤维素=ADF（%）－经72%硫酸处理后的残渣（%）酸性洗涤木质素（ADL）含量的计算：ADL（%）=残渣（%）－灰分（硅酸盐,%）酸性洗涤木质素和酸不溶灰分（AIA）测定的优化：把酸性洗涤纤维置于50ml烧杯中，加入5ml 72%硫酸，20℃水解3h，然后加水45ml，室温过夜，次日用已称恒重的3号砂芯漏斗过滤，水洗残渣至pH6.5，于60℃烘干，称重。
把剩余残渣在马福炉中550℃经2.5h灰化，测得灰分重量。
洗涤优化：经过实际试验，发现中性洗涤纤维测定和酸性洗涤纤维测定中用丙酮冲洗这步效果不大，测量精度要求不高时，可省略。
方法一：化学滴定法（我们测定出来的结果较文献报道偏低）（一）纤维素含量的测定1.0.1N2.K（2）（3）（4）（5）（6）（7）定，用去（8）（9）1. 0.5%淀粉，2.（1）（2）5min （3）（4）（5）（6）（7）（8）（9）移液管吸取10mL滤液，加入10mL碱性铜试剂，盖好在沸水中煮15min（10）冷却，加入5mL草酸-硫酸混合液，加入0.5mL 0.5%淀粉，用0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去b mL（11）取10mL碱性铜试剂，加5mL草酸-硫酸混合液，再加10mL滤液，加入0.5mL 0.5%的淀粉，0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去a mL（12）生物质中半纤维素的含量计算公式x% = 0.9×100 [ 248－（a－b）]（a－b）/10000×10×n（三）木质素含量的测定1. 所需溶液1%醋酸，丙酮，73%硫酸，10%氯化钡溶液，0.5N重铬酸钾溶液，浓硫酸，0.1 N硫酸亚铁铵溶液，试亚铁灵指示剂。
2. 实验步骤（1）标定新配的0.1N硫酸亚铁铵溶液, 滴定度为K（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.1g，数值为n（3）装入离心管，加入10mL 1％醋酸，摇动5min混匀（4）离心，用5mL 1％醋酸洗沉淀（5）加丙酮3-4mL，在摇荡的情况下浸泡3min，洗三次（6）用玻璃棒将沉淀沿管壁分散开，将离心管放热水中使沉淀充分干燥（7）在干燥沉淀中加入73％硫酸3mL，用玻璃棒搅匀，挤压成均匀的浆液（8）室温下放置一夜（9）加入10mL蒸馏水，搅匀，置沸水中5min（10）冷却，加入0.5mL 10%氯化钡溶液，搅匀，离心，倒出清液，分别用10mL蒸馏水冲洗沉淀两次，每次要混匀原理：生物质（浒苔、锯末和玉米秸秆）在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。
实验六、（Van Soest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法【学习目标】了解饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定意义，掌握饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）检测的原理、实验方法，并注意对测定结果的分析和讨论。
一、目的传统的粗纤维测定方法存在着明显的缺点，即所测得的结果包括部分半纤维素和纤维素，以及大部分木质素在内的一组复合物，又因为有部分半纤维素和少量纤维素、木质素溶解于酸碱溶液中，被计算到无氮浸出物中去了。
因此，传统方法测得的饲料中粗纤维和无氮浸出物的含量均不能反映出饲料本身被家畜利用的真实情况。
而范氏洗涤纤维分析法则能弥补这些不足，可以准确地获得植物性饲料中所含的半纤维素、纤维素、木质素以及酸不溶灰分的含量，这在纤维素的分析测定中是一项非常重要的改革。
二、原理植物性饲料如一般饲料、牧草的粗纤维经中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）分解，则大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白质，统称为中性洗涤剂溶解物（NDS），而不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），这部分主要是细胞壁部分，如半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐和极少量的蛋白质。
酸性洗涤剂可将中性洗涤纤维（NDF）中各组分进一步分解。
植物性饲料可溶于酸性洗涤剂部分称为酸性洗涤剂溶解物（ADS），主要有中性洗涤剂溶解物（NDS）和半纤维素，剩余的残渣称为酸性洗涤纤维（ADF），其中含有纤维素、木质素和硅酸盐。
此外，由中性洗涤纤维（NDF）与酸性洗涤纤维（ADF）值之差即可得到饲料中半纤维素的含量。
酸性洗涤纤维经72.0%的硫酸消化，则纤维素被溶解，其残渣为木质素和硅酸盐，所以，从酸性洗涤纤维（ADF）值中减去72.0%硫酸消化后残渣部分即为饲料中纤维素的含量。
将经72.0%硫酸消化后的残渣灰化，灰分则为饲料中硅酸盐的含量。
而在灰化中逸出的部分即为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
滤袋法测定酸性洗涤纤维(ADF)A. 试剂(a) 酸性洗涤剂溶液：称取20 g十六烷三甲基溴化胺（CTAB），溶于1000 mL已标定过的 0.50 mol/L硫酸溶液中，加热搅拌使其溶解。
(b) 0.50 mol/L硫酸溶液：取49 g (约27 mL)浓硫酸，慢慢加入已装有500 mL水的烧杯中，冷却后注入1000 mL容量瓶中，加水至刻度，标定。
(c) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。
B. 安全注意(a) 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。
将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。
(b) CTAB对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。
C.设备(a) 消化装置- ANKOM 220纤维分析仪。
(b) 滤袋- ANKOM F57滤袋。
(c) 封口机(d) 干燥器(e) 分析天平-精确至0.1mg(f) 电热干燥箱(g) 耐溶剂记号笔D. 步骤(a) 滤袋和样品的准备1)用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m 1)。
2) 直接准确称取0.5g (± 0.05 g制备好的样品 (m ) 于滤袋中。
样品需要粉碎过1mm筛。
3)在距离滤袋上边缘大约5 mm用封口机封口。
然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。
4)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。
5) 一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。
无论放置滤袋数量多少，9层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。
层与层之间错开120度。
然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。
6) 样品含有大豆产品或脂肪超过5% - 将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。
摇动容器10次，浸泡10 min。
然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。
最后将滤袋取出，放在网筛上凉干。
例外：烘烤大豆–由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。
将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。
原理：采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理:植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
溶剂配制：中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）；1N硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml 蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；操作步骤：准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100 ml 酸性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。
将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。
趁热用已知重量的玻璃坩埚抽滤，并用沸水反复冲洗玻璃坩埚及残渣至滤液呈中性为止。
饲粮中中性洗涤纤维的研究进展近年来，尽管动物营养学家已把研究的重点放在了纤维性物质上，但长期以来对饲粮纤维（Fiber）的认识并不统一，对饲粮纤维的认识很不全面，对其定义至今还有争议。
在比较常用的粗纤维（CF）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）或非淀粉多糖（NSP）等指标中，许多人认为NDF是目前表示纤维最好的指标，因为NDF涵盖了被认为是组成纤维的大多数物质。
本文拟从饲粮中中性洗涤纤维的定义出发，就其构成成分以及由不同分析方法得到的纤维组分的化学组成及其在动物营养中的作用进行讨论。
1 中性洗涤纤维的定义和成分从营养学的观点来看，饲粮中中性洗涤纤维的成分包括以下几种（见表1）。
NDF是对植物细胞壁或纤维成分的一种测量指标，根据Van Soest（1967）提出的洗涤纤维分析方法，所测得的NDF主要包括纤维素、半纤维素和木质素等成分，即由不溶性的非淀粉多糖和木质素所组成，能够较准确地反映纤维的实际含量[1]。
在细胞壁的构成中，与NSP和木质素相连的蛋白质（细胞壁镶嵌蛋白或细胞壁蛋白）是细胞壁的重要构成成分。
这种蛋白质主要是一种高度不溶的糖蛋白——伸展蛋白，单胃动物对其消化率低，因此，这类蛋白质也被认为是饲粮纤维的构成成分（Annison, 1993）[2]。
2 中性洗涤纤维的分析方法在建立NDF分析方法时，Van Soest认为，应将饲料划分为可消化和不完全消化的两部分。
用新的纤维分析方法进行分析时可消化的部分应是可溶的；而不完全消化（不可溶）的部分则被称为“纤维”（Van Soest和Moore，1965）[1]。
其基本方法是：在含有3%十二烷基硫酸钠（SDS）和19% EDTA（pH=7的磷酸缓冲液）的中性洗涤剂中煮沸样品，所得到的残渣减去灰分即为NDF。
在测定高淀粉含量样品的NDF时，应加入α-淀粉酶处理（Schaller，1977）[3]。
测定NDF的目的是分析饲料原料中细胞壁成分，但未能回收所有的水溶性纤维物质，包括细胞壁中的果胶物质，只包含了细胞壁中的纤维素、绝大多数半纤维素和木质素及与细胞壁相嵌的蛋白质和矿物质等。
反刍动物常用饲料的体外消化率曹香林;陈建军;郑琛【摘要】为有效利用当地饲料资源,提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能,选用西北地区常见的棉籽蛋白、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕、菜粕和苜蓿等7种反刍动物常用饲料原料,采用应用滤袋的两级离体消化法对干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）的体外消化率进行测定。
结果表明,甜菜粕的干物质体外消化率（IVDMD）、有机物体外消化率（IVOMD）和粗蛋白质体外消化率（IVCPD）显著高于其他样品（P〈0.05）,玉米啤酒糟的IVDMD、IVOMD、IVCPD、中性洗涤纤维体外消化率（IVNDFD）和酸性洗涤纤维体外消化率（IVADFD）都处于较低水平。
【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】3页(P150-152)【关键词】反刍动物;两级离体消化;饲料;体外消化率;滤袋【作者】曹香林;陈建军;郑琛【作者单位】^p【正文语种】中文【中图分类】S816.7评定反刍动物饲料消化率最早采用表观消化率法，但后来根据反刍动物代谢的特点发现，该法存在着严重缺陷。
随着反刍动物营养研究的深入，反刍动物饲料评定方法也不断进步和完善，如瘤胃降解与非降解蛋白质体系的提出和发展等。
目前，评定反刍动物饲料消化率的方法主要有3种，即活体法、尼龙袋法和体外法，并从常用的消化代谢试验、尼龙袋试验等又衍生出了人工瘤胃试验、产气量法、移动尼龙袋法［1］。
体外试验以其操作简便、不需要动物、测定时间短、成本低、易于标准化等特点受到青睐。
目前应用较多的体外方法有活体外产气法［2］、两级离体消化法［3］及活体外消化率测定法［4］等。
西北地区常见的反刍动物饲料原料包括棉籽蛋白、棉粕、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕和菜粕等，饲料资源丰富。
为有效利用当地饲料资源，提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能，笔者于2009年3月利用两极离体消化法并结合滤袋技术，对这些原料的消化率进行测定，以期为反刍动物的饲料配制提供参考。
