酶催化合成多肽的研究

多肽合成的研究

多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。到现在，人们已发现和分离出一百多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。多肽的合成不仅具有很重要的理论意义，而且具有重要的应用价值。通过多肽合成可以验证新的多肽结构；设计新的多肽，用于研究结构与功能的关系；为多肽生物合成反应机制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽药物等。

1963年，R.B.Merrifield创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖.

今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建立的Boc法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又发展了Fmoc固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展，并仍在不断得到改造和完善.

从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点。其基本原理是：先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应，接长肽链。重复（缩合→洗涤→去保护→中和及洗涤→下一轮缩合）操作，达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。其中α-氨基用BOC（叔丁氧羰基）保护的称为BOC固相合成法，α-氨基用FMOC（9-芴甲氧羰基）保护的称为FMOC固相合成法。 南开大学化学学院教授孙怀林领导的课题组日前研究成功新的多肽合成方法，他们不用氨基酸而合成了多肽，打破了国际上沉睡一百多年的繁琐陈旧的多肽合成研究。

第３０卷第３期　２００７年６月　合成纤维工业　ＣＨＩＮＡ　ＳＹＮＴＨＥＴＩＣ　ＦＩＢＥＲ　ＩＮＤＵＳＴＲＹ　Ｖ０１．３０　Ｎｏ．３　Ｊｕｎ．２００７　

草酸亚锡催化合成ＰＴＴ的研究　

贾树勇　，　张丹　，　胡静　曾毅　王公应ｈ　

（１．中国科学院成都有机化学研究所，成都６１００４１；２．中国科学院研究生院，北京１０００３９）　

摘要：采用对苯二甲酸（ＰＴＡ）和１，３－丙二醇（１，３－ＰＤＯ）为原料，以自制的草酸亚锡为催化剂经酯化、缩　聚，制得聚对苯二甲酸丙二醇酯（Ｐ１Ｔ）。探讨了反应条件对合成反应的影响。结果表明：草酸亚锡的催化活　性优于丁基锡酸和辛酸亚锡。１，３－ＰＤＯ／ＰＴＡ的摩尔比为１．５／１、草酸亚锡用量为５×１０　ｍｏｌ／ｍｏｌ（相对　ｆｒｒＡ），酯化反应温度２６０＂Ｃ，反应时间２　ｈ；缩聚反应温度２６０＂Ｃ，反应时间２　ｈ，可制得Ｐ１Ｔ，其特性粘数为　

０．８９５０ｄＬ／ｇ，端羧基含量为１５　ｍｏｌ／ｔ。　关键词：聚对苯二甲酸丙二醇酯草酸亚锡１，３－丙二醇酯化法合成　

中图分类号：ＴＱ３２３．４１　文献识别码：Ａ　文章编号：１００１—００４１（２００７）０３—０００３—０４　

聚对苯二甲酸丙二醇酯（ｍ）是２０世纪９０　

年代中期开发成功的一种极具发展前途的新型热　

塑性聚酯。由于其独特的结构而具有优异的性　

能¨　Ｊ，兼具尼龙的柔软性、腈纶的蓬松性和涤纶　

的抗污性。　已成为当前国际上最热门的高分　

子新材料之一，不仅应用于合成纤维领域，也向工　

程塑料等领域迅速发展　．４　Ｊ。　

合成　的方法有酯化法和酯交换法　。　

酯化法以对苯二甲酸（ＰＴＡ）和１，３一丙二醇（１，３一　

ＰＤＯ）为原料，而酯交换法以对苯二甲酸二甲酯　

（ＤＭＴ）和１，３－ＰＤＯ为原料。随着ＰＴＡ生产技术　

的进步和人们环保意识的增强，酯化法已成为制　

备　聚酯的主流。　

用于酯化法制备　聚酯的催化剂有钛、锡　

和锑的化合物　Ｊ。其中，锡（１Ｖ）化合物如丁基锡　

发布日期 20071127

栏目 化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价

标题 合成多肽药物有关物质研究的几点考虑

作者 审评五部

部门

正文内容 审评五部

有关物质研究是合成多肽药物药学研究的一项重要内容，由于合成多肽本身结构、合成工艺以及稳定性方面的特殊性，这类药物的有关物质研究较为复杂、存在一定的难度。国家食品药品监督管理局颁布的《合成多肽药物药学研究技术指导原则》已经就该类产品的有关物质研究提出了原则性的要求，本文主要是根据审评中遇到的一些共性问题就合成多肽药物有关物质研究需重点关注的几个问题做进一步的说明。

（一）合成多肽药物有关物质的特点和研究的难点。

合成多肽的有关物质主要为源于合成过程带来的工艺杂质和由于多肽不稳定而产生的降解产物、聚合物等。

工艺杂质 尽管目前合成多肽的纯化工艺已经有了很大进步，但工艺杂质仍是合成多肽有关物质的重要来源，这主要是由于合成多肽的一些工艺杂质（如缺失肽、断裂肽、氧化肽、二硫键交换的产物等）与药物本身的性质可能非常近似，从而给纯化造成了一定的难度。而且，不同的多肽合成方法也在很大程度上决定了终产品中杂质的性质，例如液相合成和固相合成所引入的工艺杂质就会明显不同，固相合成中Boc合成法与Fmoc合成法所产生的杂质也会有所差异，甚至不同的保护/脱保护策略都会带来不同的工艺杂质。因此，在进行合成多肽的有关物质研究时，研究者必须结合自身的工艺特点对可能由此引入的杂质有充分认识，从而才能够建立有针对性的有关物质研究方法。同时，这也意味着，对于仿制产品而言不能盲目照搬国家标准、已上市产品的有关物质检查方法，必须充分考虑到产品本身的工艺特点。

降解产物及聚合物 多肽的化学稳定性和物理稳定性一般较差，因此降解产物、聚合物等是合成多肽有关物质研究的主要对象之一。影响合成多肽稳定性的因素包括脱酰胺、氧化、水解、二硫键错配、消旋、β-消除、聚集等，研究显示合成多肽中最常见的降解产物是脱酰胺产物、氧化产物、水解产物。在组成多肽的各种氨基酸中，天冬酰胺、谷胺酰胺易于发生脱酰胺反应（尤其是在pH值升高和高温条件下）；甲硫氨酸、半胱氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸最易氧化，对光照也较为敏感；天冬氨酸参与形成的肽链较易断裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly肽键。由于一个多肽分子中通常会含有多种不稳定性的氨基酸残基或肽键，因此合成多肽可能的降解机制和降解产物较为复杂。而多肽的聚集主要是由于疏水作用引发的，尽管目前还很难准确预测哪些多肽易发生聚集，但至少对于一些中长肽而言需对可能存在聚合物进行研究。

现代食品科技　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．９　

磷脂酶Ｄ催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺研究　

杨伟东　

（宝鸡文理学院，陕西宝鸡７２１０１　３）　

摘要：本文研究了磷脂酶Ｄ催化合成磷脂酰丝氨酸的工艺，实验结果表明有机相和水相比例、磷脂酰胆碱（ＰＣ）浓度、反应温　

度、水相ｐＨ以及反应时间都对磷脂酰丝氨酸的制备有一定的影响。通过正交实验优化利用磷脂酶Ｄ催化合成磷脂酰丝氨酸的最佳工　

艺为：有机相和水相的比例为４／４、ＰＣ浓度为７５　ｍｇ／ｍＬ、反应温度为４０℃、水相ｐＨ值为４．０、反应时间为１２　ｈ，在此工艺条件下　

磷脂酰丝氨酸得率为：６８．９％。　

关键词：磷脂酶Ｄ；磷脂酰丝氨酸；制备　

文章篇号：１６７３．９０７８（２０１０）９．９９４—９９６　

Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ　Ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　Ｐｈｏｓｐｈｏｆｉｐａｓｅｓ　Ｄ　

ＹＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｄｏｎｇ　

（Ｂａｏｊｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄＡｒｔｓ，Ｂａｏｊｉ　７２１０１３，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄ３，ｌｓｅｒｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅｓ　Ｄ　ａｓ　ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　

ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｔｈｅ　ｐＨ　ｏｆｗａｔｅｒ　ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｍｔｔｔｒｅ　ｏｆｒｅａｃｆｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆｏｒｇａｎｉｃ　ｐｈａｓｅ　ｃ０　ｗａｔｅｒ　

ｐｈａｓｅ　ｈａｄ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔ－ｗａｔｅｒ　ｒａｔｉｏ，ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄ｝ｒｌｃｈｏｌｉｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，