鹅细小病毒的分子生物学研究进展_蒋运博

鹅细小病毒感染雏鹅研究禽类MHC对细胞之间的相互作用实行免疫调节，其结构与疾病防控研究密切相关1。

MHC是编码与免疫应答直接相关的一类细胞膜糖蛋白基因群，存有高度多态性，能适合和抵抗绝大多数病原微生物2。

病原体驱动的选择是有利于MHC杂合子，表明MHC基因型和与宿主的抗病性或免疫应答水平密切相关。

MHCⅠ类等位基因与诸多疾病相关，并且复杂性和多态性使个体间的免疫应答有所不同3。

当前主要研究鸡和鸭的MHC，而鹅的MHC研究较少，鹅的MHCⅠ存有高度多态性4，MHCIIβ片段来自不同的MHCIIB基因座5，MHC基因间存有着复杂的功能及协同互作，为此本试验分析GPV感染雏鹅的MHC多态性变异，以期为进一步研究鹅的易感性及抗病机理奠定基础。

1.1试验动物随机选择生长一致、健康的3日龄雏鹅，由青岛农业大学莱阳五龙鹅实验基地提供。

1.2.1雏鹅处理将种毒GPVYZ经口腔接种6日龄的雏鹅，每只接种0.2mL，感染组雏鹅（YZ）。

同时对照组雏鹅（CK）接种等量的生理盐水，连续观察发病症状，分别采集肝脏。

1.2.2制备细胞悬液参照文献6的方法，收集鹅肝脏细胞膜。

1.2.3膜蛋白的提取参照文献7的方法，用TritonX-100抽提膜蛋白，丙酮沉淀，PEG6000浓缩，冷冻真空干燥粗膜蛋白。

1.2.4MHC的分离纯化PBS溶解粗蛋白样品，上样于经同样缓冲液平衡的SephadexG-200柱脱盐，梯度（0～0.6mol/LNaCl，PBS0.02mol/L）洗脱，收集合并活性蛋白部分，再上样于预先用pH值6.3100mmol/LPBS平衡的BioGelP-100凝胶柱纯化，用PBS（pH值6.3，100mmol）洗脱，收集纯化的MHC，冷冻真空干燥。

1.2.5蛋白质含量检测总蛋白含量，参照文献8，以BSA为标准，紫外法检测，总蛋白含量（mg/mL）=1.55×A280-0.76×A260，系数F1=1.115，系数F2=0.76；MHC的含量，参照鹅MHCⅠ/Ⅱ酶联免疫分析试剂盒（上海沪鼎生物科技公司LOT10-45-618）实行测定，λ=450nm。

鹅细小病毒的研究进展朱沿秋，兽医1班，学号：S2*******（动物医学院，四川农业大学）摘要：小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种急性、亚急性烈性传染病, 是目前危害养鹅业的重要传染病之一。

近年来关于鹅细小病毒的研究有了许多新的发展和新的观点, 本文从鹅细小病毒的病原、致病机理、检测方法及防治等方面的研究进行阐述，以期为鹅细小病毒及小鹅瘟的防控提供参考。

关键词：小鹅瘟；鹅细小病毒；分子生物学；致病机理小鹅瘟（Gosling Plague，GP）是由鹅细小病毒（goose parvovirus，GPV）所引起的雏鹅的一种急性或亚急性的败血性传染病，是目前危害水禽业健康发展的最严重的传染病之一。

1956 年，小鹅瘟病毒首次由中国学者方定一在江苏扬州市发现并分离，是一类无囊膜的DNA 病毒[1]。

1974 年，国际禽病学会( WPSA) 将其命名为Derzsys 氏病[2]。

近年来，1月龄以上鹅群发病的病例有所增加。

病鹅、带病鹅群及隐性感染的成鹅是该病的主要传染源。

小鹅瘟在我国各地均有流行，病鹅以精神委顿、食欲废绝、严重下痢和渗出性肠炎为主要特征[3-4]，有时出现神经症状，可经消化道和呼吸道传染，并可经卵垂直传播。

该病在许多国家出现报道，给全球养鹅业造成了严重危害[5-9]。

1 病原鹅细小病毒是细小病毒科（Parvoviridate）、细小病毒属（ParvovirusGenus）的成员、无囊膜的单链DNA病毒，病毒粒径约20nm，是目前已知的动物病毒中较小、较简单的病毒之一[10]，不能凝集禽类、哺乳动物和人类的红细胞。

其对外环境的抵抗力较强，56℃能耐受3小时，pH=3时仍稳定，对一些消毒药有较强抵抗力[11]。

抗原分析表明，国内外所有GPV 分离株属于同一个血清型[12]。

GPV 可在鹅胚、鸭胚及其细胞上适应和培养。

GPV 实验室感染雏鹅或雏番鸭后，病毒在体内呈广泛分布，尤其在肝、脾、哈德斯腺、胸腺和法氏囊中病毒含量较高[13,14]。

２株鹅细小病毒的主要结构蛋白ＶＰ２基因的克隆和序列分析摘要将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚，收集接毒后24～72h死亡的鸭胚尿囊液。

根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物，对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增，将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。

结果表明：PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp，PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%～96.7%，与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右，与匈牙利株的同源性仅为80.7%，而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%～80.7%。

XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%，与番鸭细小病毒的同源性为76.8%～80.0%，与其他毒株的同源性为91.6%～98.3%。

关键词鹅细小病毒；VP2基因；克隆；序列分析鹅细小病毒（Goose Parvovirus，GPV）是感染禽类的主要自主性细小病毒，传播迅速，以4～20日龄雏鹅的消化道，尤其以小肠部位的纤维素性、栓塞性病变为主要特征[1，2]。

由于该病病程短促、传染性强、传播快、死亡率高，造成了严重的经济损失[3，4]。

1956年，我国学者方定一在扬州地区发现本病，并进行了首次报道[5]。

自1965年开始，匈牙利、法国、德国、苏联等欧洲一些国家相继报到了该病。

GPV除能致雏鹅发病外，还能引起雏番鸭发病。

自20世纪90年代起，亚洲一些番鸭养殖业发达的国家，如泰国、日本等亦在番鸭群中发现了小鹅瘟[6]。

1995年Brown[7]等人克隆了GPV基因组的部分序列，后由Zadorid 等[8]研究发表了GPV全基因组序列，并与番鸭细小病毒（MDPV）进行了比较分析，发现2种病毒的基因同源性为81.9%。

GPV属于细小病毒科细小病毒属，基因组为单链、线性DNA，大小约为5kb。

含有正投DNA的病毒粒子和含有负股DNA链的病毒粒子数目相等。

村乡科技XIANGCUN KEJI 90XIANGCUN KEJI 2018年4月（上）鹅细小病毒基因组结构研究进展曹楠1，2杨舒展3黄冠雄1，2郭思璇1，2曾依翎1，2李冰心1，2田允波1，2许丹宁1，2（1.仲恺农业工程学院动物科技学院，广东广州510225；2.广东省水禽健康养殖重点实验室，广东广州510225；3.广东出入境检验检疫局技术中心，广东广州510623）［摘要］鹅细小病毒（Goose Parvovirus Virus ，GPV ）是小鹅瘟疫病的病原体，基因全长组约5kb ，编码左右2个开放阅读框（Open Reading Frame ，ORF ），分别为LORF （Left ORF ）和RORF （Right ORF ）。

LORF 编码非结构蛋白（Nonstructural Protein ，NS ）NS1和NS2，RORF 编码3种结构蛋白（Structural Protein ）VP1、VP2和VP3。

本文从病原学、基因和蛋白分子结构方面对GPV 基因组结构特征的研究进展进行综述，并对GPV基因工程疫苗的开发进行展望，为我国防控GPV 提供参考。

［关键词］鹅细小病毒病毒；非结构蛋白；结构蛋白；末端回文序列［中图分类号］S855.3［文献标识码］Ａ［文章编号］1674-7909（2018）10-90-4鹅细小病毒（Goose Parvovirus Virus ，GPV ）可侵染3～20日龄雏鹅和雏番鸭小鹅，造成出血性、纤维素性和渗出性肠炎，是雏鹅和雏番鸭的一种严重传染病［1］。

扬州大学的方定一教授于1956年首次发现了GPV 并对其做了详细的研究［2］。

此后，日本［3］、英国［4］、匈牙利［5］、瑞典［6］、法国［7］和美国［8］等许多国家陆续报道了该病。

与此同时，该病在我国福建［9］、江苏［10］、四川［11］、山东［12］等主要的水禽养殖地区广泛流行，给水禽养殖行业造成了严重的经济损失。

感染鹅细小病毒雏鹅病理学研究的开题报告
题目：感染鹅细小病毒雏鹅病理学研究
摘要：鹅细小病毒是一种引起雏鹅高死亡率的病原体，其感染会导致雏鹅的呼吸道、消化道、中枢神经系统等器官受到损害，严重影响其生长和发育。

本研究旨在探
讨鹅细小病毒感染雏鹅的病理学变化及其发生机制，为该病的防治提供理论依据和实
验基础。

研究内容：本研究计划选取一定数量的健康雏鹅和感染鹅细小病毒的雏鹅，观察并比较它们的病理学变化。

具体研究内容如下：
1.采集标本：收集健康雏鹅和感染鹅细小病毒的雏鹅的组织标本，包括肝脏、脾脏、肺、肠、脑等。

2.病理学检查：对收集到的组织标本进行病理学检查，观察各器官在感染后是否有炎症、水肿、坏死等病理变化。

同时，应对比健康雏鹅和感染雏鹅的病理学变化，
分析感染鹅细小病毒对雏鹅各器官的影响。

3.分子检测：通过PCR法检测感染鹅细小病毒的雏鹅组织标本中是否存在该病毒。

4.病理学变化机制研究：结合病理学检查和分子检测结果，分析鹅细小病毒感染雏鹅的病理学变化机制，探讨该病毒对雏鹅器官的损害机理。

预期结果：通过本研究，预计可以得到以下结果：
1.明确鹅细小病毒对感染雏鹅各器官的具体损害情况；
2.探讨鹅细小病毒感染雏鹅的病理学变化机制，为该病的防治提供理论依据和实验基础；
3.为鹅细小病毒的防治提供理论依据和实验基础。

关键词：鹅细小病毒；雏鹅；病理学；感染；发生机制。

鹅细小病毒YBLJ株VP3基因的真核表达张颖;鲁承;赵文婧;陈海迪;高旭【摘要】为了研究鹅细小病毒(GPV)YBLJ株VP3基因的生物学特性,根据已克隆的GPV YBH株VP3基因序列(GenBank:JN836326),设计并合成一对特异性引物,经PCR扩增、克隆、转化、酶切与亚克隆,构建真核表达载体pcDNA-VP3,将鉴定正确的质粒转染至Vero细胞,经RT-PCR检测VP3基因转录水平,通过间接免疫荧光试验(IFA)观察VP3基因表达水平.结果显示,克隆的VP3基因全长约1 605 bp;构建了真核表达载体pcDNA-VP3,经RT-PCR对转染细胞总RNA扩增得到特异性目的片段,IFA检测显示VP3基因在Vero细胞中获得了稳定表达.本研究为GPV核酸疫苗的研制奠定了基础.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)012【总页数】3页(P23-25)【关键词】鹅细小病毒;VP3基因;真核表达【作者】张颖;鲁承;赵文婧;陈海迪;高旭【作者单位】延边大学农学院动物医学系,吉林延吉133000【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2鹅细小病毒病是由鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）引起的主要侵害4日龄～20日龄雏鹅的一种病毒性传染病，该病病程短，传染性强，病死率高，给养鹅业造成了严重的危害［1-3］。

该病毒由我国学者方定一于1956年在江苏扬州首次发现。

研究发现VP3基因是GPV核衣壳的主要成分，约占总蛋白含量的80%，具有较高的保守性，能够诱导机体产生中和抗体，是GPV的主要保护性抗原［4-5］。

本研究拟以本课题组前期分离的延边株（YBLJ）鹅细小病毒为毒株，克隆VP3基因和构建真核表达载体，并研究GPV的VP3基因在Vero细胞中表达情况，为进一步研制GPV的VP3基因核酸疫苗奠定基础。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病毒、菌种 GPV（YBLJ株）为本实验室从延边某养鹅场发生鹅细小病毒病的病死鹅脾脏中分离得到。

鹅细小病毒基因组结构研究进展作者：曹楠杨舒展黄冠雄郭思璇曾依翎李冰心田允波许丹宁来源：《乡村科技》2018年第10期[摘要] 鹅细小病毒（Goose Parvovirus Virus，GPV）是小鹅瘟疫病的病原体，基因全长组约5 kb，编码左右2个开放阅读框（Open Reading Frame，ORF），分别为LORF（Left ORF）和RORF（Right ORF）。

LORF编码非结构蛋白（Nonstructural Protein，NS）NS1和NS2，RORF编码3种结构蛋白（Structural Protein）VP1、VP2和VP3。

本文从病原学、基因和蛋白分子结构方面对GPV基因组结构特征的研究进展进行综述，并对GPV基因工程疫苗的开发进行展望，为我国防控GPV提供参考。

[关键词] 鹅细小病毒病毒；非结构蛋白；结构蛋白；末端回文序列[中图分类号] S855.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909（2018）10-90-4鹅细小病毒（Goose Parvovirus Virus，GPV）可侵染3～20日龄雏鹅和雏番鸭小鹅，造成出血性、纤维素性和渗出性肠炎，是雏鹅和雏番鸭的一种严重传染病[1]。

扬州大学的方定一教授于1956年首次发现了GPV并对其做了详细的研究[2]。

此后，日本[3]、英国[4]、匈牙利[5]、瑞典[6]、法国[7]和美国[8]等许多国家陆续报道了该病。

与此同时，该病在我国福建[9]、江苏[10]、四川[11]、山东[12]等主要的水禽养殖地区广泛流行，给水禽养殖行业造成了严重的经济损失。

国内外很多学者都对其展开了研究，经过几十年的不断探索，GPV的分子结构及相应的生物学特点逐渐被研究透彻。

1 鹅细小病毒病原学GPV属于细小病毒科细小病毒属，病毒粒子呈圆形或六角形，外直径为20～25 nm，内直径约为15 nm，外壳厚约5 nm，可以形成二十面体对称的空间结构[13]。