测定猪肉中土霉素及金霉素残留的HPLC法建立

HPLC法测定畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素的残留王鲁勤;蒋江云【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2007(019)009【摘要】目的通过确立流动相比例和回收率验证,建立一种高效液相色谱法同时测定畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留的分析方法.方法色谱柱SinoChromODS-BP C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈∶0.01mol·L-1磷酸二氢钠溶液(20∶80);流速:1.0ml·min-1;检测波长:355nm.结果土霉素、四环素在0.1～1 μg·mL-1之间线性良好,土霉素r=0.9999,四环素r=0.9974;金霉素在0.2～2 μg·mL-1之间线性良好,r=0.9985.采用标准加量法,外加混合标准溶液80～120 μL(土霉素、四环素标准加入量8～12 μg,金霉素标准加入量16～24 μg),回收率为85.0%～112.5%,RSD在4.7%以内.【总页数】2页(P60-61)【作者】王鲁勤;蒋江云【作者单位】福建省三明市药品检验所,三明,365000;福建省三明市药品检验所,三明,365000【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素残留量的方法优化探讨 [J], 夏洁贞;区敏霞2.HPLC法测定牛羊肉中土霉素、四环素、金霉素残留量 [J], 高广慧;李阳;孙晓娟;王晓黎3.SPE-HPLC法检测早胜牛肉中土霉素、四环素和金霉素的残留 [J], 叶永丽;赫欣睿;高旭东;陈士恩;马忠仁4.高效液相色谱法测定畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量 [J], 叶英5.高效液相色谱法对畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素的残留检测研究 [J], 吕振娥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

目录1 引言 (1)1.1 抗生素残留的危害 (1)1.1.1 引发过敏反应 (2)1.1.2 导致病源菌产生耐药性 (2)1.1.3 破坏微生态环境，造成正常菌群失调，导致二次感染.. 21.1.4 损害听力 (3)1.1.5 损害肾脏 (3)1.2 链霉素的应用 (3)1.3 链霉素的化学结构与理化性质 (4)1.3.1 链霉素的化学结构 (4)1.3.2 链霉素的理化性质 (4)1.3.3 链霉素的作用机理 (5)1.4 兽药残留分析技术研究进展 (5)1.5 兽药残留检测方法的国内外现状 (5)1.6 研究的目的和意义 (7)2 材料与方法 (7)2.1 材料 (7)2.1.1 仪器与试剂 (7)2.1.2 药品与试剂 (7)2.1.3 实验菌种 (8)2.2 方法 (8)2.2.1 溶液配制: (8)2.2.2 培养基的制备 (8)2.2.3 菌液的制备 (9)2.2.4 平板的制备 (9)2.2.5 标准曲线的制备 (9)2.2.6 回收率测定 (10)2.2.7 计算 (11)3 结果 (11)3.1 标准曲线的制备 (11)3.2 回收率的测定 (13)4 讨论与分析 (14)4.1 标准曲线 (14)4.2 回收率试验 (15)4.3 菌悬液 (14)4.4 去除蛋白质方法的选择 (15)4.4.1 加热 (15)4.4.2 紫外线照射 (16)4.4.3 调节pH值 (16)4.4.4 乙睛或乙醇 (16)4.4.5 氯仿 (16)5 小结 (16)6 待讨论问题 (17)参考文献 (18)致谢 (20)鸡肉组织中的链霉素残留的微生物学检测方法的研究1 引言20世纪70年代以来，抗生索、抗菌素、生长促进剂等兽药和药物添加剂等在畜牧业生产中的长期大量使用，造成了兽药成分在动物体内不同程度地残留，这些残留的药物通过动物性食品进入人体和生态系统，进而影响了人类和环境的健康，因此动物性食品中的药物残留量直接影响着动物性食品的安全卫生问题，已经成为当前供认的农业和环境问题[17]。

土霉素、金霉素和四环素的检测方法1、分析目标化合物:土霉素,金霉素,四环素2、仪器设备:带荧光检测器的高效液相色谱仪,3、试剂:除下列试剂外,使用附录2所列试剂,咪唑:特级咪唑缓冲溶液:将68.08g咪唑、0.37g EDTA 和10.72g乙酸镁溶解在800mL水中,用乙酸调节pH7.2后,加水至1,000mL,含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液:第1液:将21.0g柠檬酸溶解在水中至1,000mL,第2液:将71.6g磷酸氢二钠溶解在水中至1,000mL,在1.86g乙二胺四乙酸中加入307mL第1液和193mL第2液混合的溶液溶解,苯乙烯二乙烯苯共聚物小柱 (265mg):在内径8～9mm 聚乙烯管中填充265mg柱色谱用苯乙烯二乙烯苯共聚物或具有同等分离特性的物质,4、标准品:盐酸土霉素:本品1.000mg 含有土霉素0.850mg以上效价,分解点为190℃～194℃,盐酸金霉素:本品1.000mg含有盐酸金霉素0.900mg以上效价,分解点为210℃以上, 盐酸四环素:本品1.000mg 含有盐酸四环素0.900mg以上效力,分解点为214℃以上,5、试验溶液的制备:A．提取方法:①肌肉、肝脏和肾脏肌肉:尽可能除去脂肪层,搅碎混合均匀后,称取其5.00g,肝脏和肾脏:搅碎混合均匀后,称取其5.00g,加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,搅拌1分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,水层移入100mL分液漏斗中,离心分离管的残留物中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,合并水层于上述分液漏斗中,加入20mL正己烷, 用振荡器激烈振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,②脂肪脂肪:尽可能除去肌肉层,搅碎混合均匀后,称取其20.0g,加入200mL正己烷,搅拌1分钟后,加入40mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,再搅拌1分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,正己烷层中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,分取水层,合并于先分取的水层中,③奶称取5.00g样品,加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液和20mL正己烷,用振荡器激烈振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,④蛋除去蛋壳,充分均匀后,称取其5.00g,加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,均匀后,加入100mL正己烷,搅拌1分钟后,以每分钟3000 转离心分离10分钟,水层移入100mL 分液漏斗中,离心管的残留物中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,合并水层于分液漏斗中,加入20mL正己烷, 用振荡器振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,⑤鱼贝类有壳贝类:除去壳,搅碎混合均匀后,称取其5.00g,其它的鱼贝类:搅碎混合均匀后,称取其5.00g,加入30mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,搅拌1分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,水层移入100mL分液漏斗中,离心管的残留物中加入20mL含有乙二胺四乙酸的柠檬酸缓冲溶液,用振荡器激烈振荡1分钟后,按上述同样条件离心分离,合并水层于分液漏斗中,加入20mL正己烷, 用振荡器激烈振荡5分钟后,以每分钟3000转离心分离10分钟,分取水层,B．净化方法:在苯乙烯二乙烯苯共聚物小柱（265mg）中,顺次注入 10mL甲醇、10mL水和5mL饱和EDTA 溶液,弃去流出液,柱中注入a提取方法所得的溶液后,注入10mL水,弃去流出液,注入10mL 甲醇,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去甲醇,残留物中加入1.0mL 1.36％磷酸二氢钾溶液溶解,此为试验溶液,6、操作方法:A．定性试验按下列操作条件进行试验,试验结果必须与标准品的一致,操作条件:柱填充剂:十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒度5μm),柱:内径4.0～6.0mm,长150mm不锈钢管,柱温: 40℃检测器:激发波长380nm,发射波长520nm,流动相:土霉素和四环素试验时,用咪唑缓冲溶液:甲醇(17:3)的混合溶液,调整流速使土霉素约5分钟流出,金霉素试验时,用咪唑缓冲溶液:甲醇(3:1)的混合溶液,调整流速使金霉素约7分钟流出,B．定量试验根据与A定性试验相同操作条件所得的试验结果,峰高法或峰面积法定量,7、定量限:A．肌肉,肝脏,肾脏,奶,蛋和鱼贝类土霉素:0.02mg/kg金霉素:0.03mg/kg四环素:0.02mg/kgB．脂肪土霉素:0.005 mg/kg8、注意事项:(1)试验溶液的制备:①离心分离温度保持在室温,②抽滤后滤液混浊时,滤液再次进行离心分离,③在苯乙烯/二乙烯苯共聚物柱色谱中,注入试验溶液后,30mL水分数次加入效果较好地洗浄柱中残留的乙二胺四乙酸,(2)标准溶液的配制:①称取相当于10.0mg土霉素的标准品,溶解在甲醇中至10mL,作为土霉素的标准原液（土霉素1,000mg（效价）／L,1,000mg／L）,本标准原液保存在-20℃,1年内稳定,②称取相当于10.0mg金霉素的标准品,溶解在甲醇中至10mL,作为金霉素的标准原液（金霉素1,076mg（效价）／L,1,000mg／L）,本标准原液保存在-20℃,1年内稳定,③称取相当于10.0mg四环素的标准品,溶解在甲醇中至10mL,作为四环素的标准原液（四环素1,082mg（效力）／L,1,000mg／L）,本标准原液保存在-20℃,1年内稳定,④用1.36%磷酸二氢钾溶液将土霉素,金霉素和四环素各标准原液递减稀释,作为制作标准曲线用的标准溶液,(3)其它:①同时进行很多样品试验的筛选试验法提高判断効率时,用「土霉素,金霉素和四环素的筛选法（参照117 页）」判断为陽性的,不妨用本检测方法实施试验,②使用本检测方法检出土霉素,金霉素和四环素时,最好用带质量检测器的高效液相色谱仪确证.。

畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法1主题内容与适用范围本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。

本标准适用于各种畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。

最低检出浓度为:0.15，0.20，0.65mg/kg。

2原理样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分别，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。

标准加法定量。

3试剂3.1乙腈(分析纯)。

3.20.01mol/L磷酸二氢钠溶液:称取1.56g(±0.01g)磷酸二氢钠(NaH2PH4·2H2O)溶于蒸馏水中，定容到100mL，经微孔滤膜(0.45μm)过滤，备用。

3.3土霉素(OTC)标准溶液:称取土每素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素1mg。

3.4四环素(TC)标准溶液:称取四环素0.0100g(±0.001g)，用0.01mol/l盐酸溶液溶解并定容10.00mL，此溶液每毫升含四环素1mg。

3.5金霉素(CTC)标准溶液:称取金霉素0.0100g(±0.0001g)，溶于蒸馏水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。

以上标准品均按1000单位/mg折算。

3.3～3.5溶液应于4℃以下保存，可使用1周。

3.6混合标准溶液:取3.3、3.4标准溶液各1.00mL，取3.5标准溶液2.00mL，置于10mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。

此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配。

3.75%高氯酸溶液。

4仪器4.1高效液相色谱仪(HPLC):具紫外检测器。

5色谱条件5.1柱:ODS-C18(45μm)6.2mm×15cm。

5.2检测波长:355nm。

5.3灵敏度:0.002AUFS。

5.4柱温:室温。

5.5流速:1.0mL/min。

5.6进样量:10μL。

几种常见抗生素的相关性质和检测方法本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March四环素四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素及半合成抗生素，具有菲烷的基本骨架。

四环素类抗生素在赶早状态下比较稳定，但遇日光可变色。

在酸及碱性条件下都不够稳定，易发生水解。

四环素类药物主要有以下化学性质：1.酸性条件下不稳定：C-6羟基和C-5α上的氢正好处于反式构型易发生消除反应，生成无活性橙黄色脱水物。

在pH2～6条件下C-4位二甲氨基很易发生可逆反应的差向异构化。

医学|教育网搜集整理土霉素由于存在C-5羟基与C-4二甲氨基之间形成氢键，4位的差向异构化比四环素难。

而金霉素由于C-7氯原子的空间排斥作用，使4位异构化反应比四环素更容易发生。

2.碱性条件下不稳定：在碱性条件下生成具有内酯结构的异构体。

3.和金属离子的反应：在近中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物。

四环素化学结构本品为黄色结晶形粉末,无臭,空气中稳定,微溶于水,易溶于稀硫酸及氢氧化钠,略溶于乙醇,不溶于氯仿及乙醚,pH2以下溶液不稳定,碱性溶液中很快破坏。

土霉素子式C22H24N2O9,分子量。

又称地霉素、氧四环素。

是一种广谱抗菌素,黄色结晶性粉末,无嗅微苦。

有二个分子结晶水。

熔点181～182℃ (分解)。

微溶于水,溶于乙醇、丙酮和乙二醇,不溶于氯仿和乙醚。

在空气中稳定,遇强光颜色变深。

在碱性溶液中容易破坏失效。

化学结构金霉素子式C22H23ClN2O8，分子量。

又称氯四环素，是一种广谱抗菌素，金黄色结晶。

无臭味苦。

熔点168～169℃。

一般医药上用其盐酸盐。

熔点210℃（分解）。

微溶于水和乙醇，不溶于乙醚、丙酮和氯仿。

见光颜色变深。

在空气中和弱酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中易分解。

化学结构强力霉素强力霉素是抗生素类药，四环素类药物，可以治疗衣原体支原体感染。

出口肉及肉制品中新霉素残留量检验方法1.适用范围本方法适用于出口猪肉中新霉素残留量的检验。

2.原理概要用磷酸盐缓冲液-乙腈提取试样中的新霉素，提取液经加热、冷却和过滤以除去蛋白质和脂肪。

在阳离子交换柱上与邻苯二甲醛进行衍生化，用四硼酸钾缓冲液-甲醇洗脱，洗脱液用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。

3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂乙腈；甲醇：紫外光谱纯；三乙胺；磷酸(85%)；氯化钠；磷酸盐缓冲液：将33.46g磷酸氢二钾和1.046g磷酸二氢钾溶解在水中，并定容至1L；混合提取液：磷酸盐缓冲液-乙腈(1＋1)；硼酸钾缓冲液：将2.5g硼酸溶于80mL水中，用50%(m/V)氢氧化钾溶液调pH至10.5，用水定容至100mL；邻苯二甲醛试剂：将100mg邻苯二甲醛溶于1mL甲醇中，加入200μL 2-巯基乙醇和10mL硼酸钾缓冲液，用棕色瓶(有盖)贮存于冰箱中，一周内有效；碱性缓冲液：将76g四硼酸钾溶于400mL水中，用50%(m/V)氢氧化钾溶液调pH至11.0，用水定容至500mL；洗脱剂：碱性缓冲液-甲醇(1＋4)；阳离子交换树脂：D152；硫酸新霉素标准品：生化试剂，已知纯度，700 IU/mg以上(硫酸新霉素1mg ＝1000 IU)；硫酸新霉素标准溶液：称取适量的硫酸新霉素标准品(精确至0.1mg)，用水配成浓度为0.100mg/mL的标准储备溶液，根据需要再用水配成适当浓度的标准工作溶液；新霉素衍生物标准溶液：将适量的标准工作溶液注入到阳离子交换柱中，按5.2步骤进行衍生化反应，制成新霉素衍生物标准溶液。

3.2.仪器液相色谱仪：配有荧光检测器；高速捣碎机；振荡器；离心机；过滤漏斗：滤孔为80～120μm、40～80μm；阳离子交换柱：120mm×5mm(内径)玻璃柱。

用碱性缓冲液将阳离子交换树脂制成悬浮液，平衡2h，装入玻璃柱中，高度约为6cm，用5mL洗脱剂淋洗，流速为0.8mL/min，然后用水洗至流出液呈中性，备用。

肉与肉制品中氯霉素含量的测定培训要点概述及解释说明1. 引言1.1 概述本篇文章旨在介绍肉与肉制品中氯霉素含量的测定培训要点。

长期以来，氯霉素作为一种广泛应用于兽药领域的抗生素，其在畜禽养殖中的使用已成为引人关注的问题。

随着人们对食品安全和兽药残留问题日益重视，对肉与肉制品中氯霉素含量进行准确测定和控制显得尤为重要。

本文主要内容包括氯霉素的背景知识、来源和危害性，以及氯霉素含量的测定方法和步骤说明。

同时，我们还将综述目前存在的氯霉素检测技术和方法，包括生物传感器法、高效液相色谱法和免疫学方法（ELISA）。

最后，在临床实践中提出了一些指导原则和注意事项。

1.2 文章结构本文按以下顺序组织：首先是引言部分，概述文章内容并明确目的；接着是肉与肉制品中氯霉素含量测定培训要点一节，包括氯霉素的背景知识、来源和危害性，以及测定方法和步骤说明；然后是现有的氯霉素检测技术和方法综述，包括生物传感器法、高效液相色谱法和免疫学方法（ELISA）；最后是临床实践指导原则和注意事项总结。

文章最后给出结论部分，总结肉与肉制品中氯霉素含量测定培训要点，并展望未来发展方向。

1.3 目的本文的主要目的是为了提供有关肉与肉制品中氯霉素含量测定培训要点的详细信息。

通过阐述背景知识、来源和危害性，读者能够更加全面地了解氯霉素在畜禽养殖中的使用情况及其潜在风险。

此外，本文还介绍了几种常用的氯霉素含量测定方法，并针对临床实践提出了一些建议和注意事项。

通过阅读本文，读者将能够掌握肉与肉制品中氯霉素含量测定的基本知识，具备开展相应培训工作的能力。

同时，本文还旨在强调氯霉素检测的重要性和必要性，以促进食品安全领域的发展，并为相关研究提供参考和指导。

2. 肉与肉制品中氯霉素含量测定培训要点2.1 氯霉素的背景知识氯霉素是一种广谱抗菌药物，常用于家禽和畜牧业中，用于预防和治疗动物疾病。

然而，长期使用氯霉素可能导致人类健康问题，包括贫血、骨髓抑制以及过敏反应等。

猪鲜肉中细菌学指标和重金属、兽药残留分析魏玉明;钱振波;齐明;魏炳成【摘要】本实验测定了绿洲灌区规模养猪场中三元(杜长大)和四元(皮杜长大)杂交商品猪鲜肉中的细菌菌落总数、大肠杆菌群、沙门氏菌微生物指标,挥发性盐基氮含量,汞、铅、砷、镉、铬等重金属残留以及金霉素、土霉素、磺胺类药物、伊维菌素、喹乙醇、盐酸克伦特罗和莱克多巴胺等兽药残留理化指标.结果显示,在被检的120份新鲜肉样中,所有肉样均检出细菌菌落、大肠杆菌、挥发性盐基氮及汞、铅、无机砷、镉和铬等重金属,未检出沙门氏菌与金霉素、土霉素、磺胺类药物、伊维菌素、喹乙醇、盐酸克伦特罗和莱克多巴胺等兽药残留.在检出的指标中,细菌菌落总数平均值为8.4×104 cfu/g,大肠杆菌群为4.5×103 mpn/100g,挥发性盐基氮为6.01mg/100g,总汞为0.007 mg/kg,铅为0.018 mg/kg,无机砷为0.006mg/kg,镉为0.026 mg/kg,铬为0.031 mg/kg,各项指标合格率均达100％.表明张掖市市售新鲜猪肉安全良好,可放心食用.【期刊名称】《畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2015(034)006【总页数】4页(P13-16)【关键词】猪新鲜肉;微生物指标;重金属;兽药残留【作者】魏玉明;钱振波;齐明;魏炳成【作者单位】甘肃张掖生态科学研究院,甘肃张掖734000;张掖市畜牧兽医研究所;张掖市畜牧兽医研究所;张掖市畜牧兽医研究所;张掖市畜牧兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S828猪肉是人们食物的重要组成部分。

现阶段，我国养猪生产在肉品安全方面还存在诸多问题，主要表现在为防控疾病，提高生产效率，大量使用兽药及其添加剂，甚至使用一些违禁药物和激素，造成兽药残留超标，引起消费者发生疾病；为促进生长发育，在饲料中添加高剂量矿物质添加剂，造成重金属不仅在肉品中残留，给食用者直接带来危害，而且大部分随粪便排出，造成污染环境；在屠宰、加工、上市和销售等环节不严格按照规程操作，造成肉品微生物污染，引起食物中毒性疾病等。

作业指导书O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法编号：XZJY077-00-2019版本：第一版第0次修改编制：审核：批准：实施日期：2019.01.01一、编制目的为规范可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的检验方法，编制本指导书。

二、适用范围本指导书适用于可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。

三、编制依据GB/T 20764-2006《可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法》四、实验原理用0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine（pH-4.0±0.05）缓冲液提取可食动物肌肉中四环素族抗生素残留，提取液离心后，上清液用Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羧酸型离子交换柱净化，液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。

五、试剂和材料除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的一级水。

5.1 试剂5.1.1 甲醇：高效液相色谱纯。

5.1.2 乙腈：高效液相色谱纯。

5.1.3 乙酸乙酯：色谱纯。

5.1.4 乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H2O）。

5.1.5 草酸。

5.1.6 柠檬酸（C5H8O7˙2H2O）。

5.1.7 碳酸氢二钠（Na2HPO4˙12H2O）。

5.2 试剂配制5.2.1 柠檬酸溶液：0.1mol/L。

称取21.01g柠檬酸，用水溶解，定容至1000ml。

5.2.2 碳酸氢二钠溶液：0.2mol/L。

称取28.41g碳酸氢二钠，用水溶解，定容至1000ml。

5.2.3 Mcllvaine缓冲液：将1000ml 0.1mol/L柠檬酸溶液与625ml 0.2mol/L碳酸氢二钠溶液混合，必要时用氢氧化钠或盐酸调节pH=4.0±0.05。

Determination of β-Agonists Residues in Pork by Spe-Ultra High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometrySHI Zhongyi *,LI Xin ,P AN Mingdi ,LI Yajing ,ZHANG Lei(Chaoyang Inspection and Testing Center,Chaoyang 122000,China)Abstract :Objective:To establish a rapid analysis method for simultaneous determination of β-receptor agonists in pork.Methods:Using self-made detection kits for extraction and purification,high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS)was employed with 0.1%formic acid water +0.1%formic acid/acetonitrile as the mobile phase,followed by gradient elution.Results:At the spiked levels of 0.5,1,and 5μg/kg,the recoveries ranged from 70.8%to 92.0%,and the relative deviations were between 8.9%and 15.2%.The correlation coefficients were all greater than 0.999.Conclusion:This method is simple and rapid,and can be applied for the simultaneous determination of β-receptor agonist residues in pork.Keywords :UPLC-MS/MS;β-agonist;pork固相萃取-液质联用法快速测定猪肉中β-受体激动剂残留师忠义*，李鑫，潘明迪，李雅静，张磊（朝阳市检验检测中心，辽宁朝阳122000）【摘要】目的目的：：建立同时测定猪肉中β-受体激动剂的快速分析方法。

应对中华人民共和国国务院令第609号《饲料和饲料添加剂管理条例》液相色谱仪检测举例用LC-5500液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素1.1.1仪器LC5500高效液相色谱仪；溶剂过滤器；回旋振荡器；离心机。

1.1仪器条件检测器：紫外可见检测器；检测波长：355nm；色谱柱：C18柱 4.6mm*250mm；流动相：乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）=25＋75；流速：1mL/min；柱温：室温；进样量：20μL。

根据GB/T5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定（高效液相色谱法）的要求，色谱柱应为ODS-C18（5μm）6.2mm*150mm，流动相乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）＝35＋65，由于我们试验所用色谱柱为4.6mm*250mm，所以经过试验得出最好用乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）＝25＋75的流动相，这样既可以在较短的时间内完成一次检测，又可以得到很好的分离，如图1所示。

图1混合标样色谱图高效液相色谱法检测饲料中的氨基酸1.1仪器及试剂1.1.1试剂及试剂的配制1.1.1.1乙腈（色谱纯）；1.1.1.2水（超纯水）；1.1.1.3醋酸钠（分析纯）；1.1.1.4冰乙酸（分析纯）；1.1.1.5叠氮化钠（分析纯）；1.1.1.6N，N-二甲基甲酰胺（分析纯）；1.1.1.7碳酸氢钠（优级纯）；1.1.1.8磷酸二氢钾（优级纯）；1.1.1.9氢氧化钠（优级纯）；1.1.1.10色氨酸标样（中国标准物质中心）；1.1.1.1117种氨基酸混合标样（中国标准物质中心，混合标样中17种氨基酸的浓度见表一）；表一十七种氨基酸标样中各氨基酸浓度中文名称简称分子量浓度（μmol/mL）浓度（mg/100mL）天冬氨酸Asp133.1226.62谷氨酸Glu147.1229.42丝氨酸Ser105.1221.02精氨酸Arg174.2234.84甘氨酸Gly75.1215.01苏氨酸Thr119.1223.82脯氨酸Pro115.1446.05丙氨酸Ala89.1217.82缬氨酸Val117.1223.44蛋氨酸Met149.2229.84半胱氨酸Cys121.2224.24异亮氨酸Ile131.2226.24亮氨酸Leu131.2226.24苯丙氨酸Phe165.2233.04组氨酸His155.2231.04赖氨酸Lys146.2229.24酪氨酸Tyr181.2236.241.1.1.12饲料参比（中国标准物质中心，饲料参比的百分含量见表二）；表二饲料参比的百分含量序号中文名称简称百分含量（%）1天冬氨酸Asp 1.562谷氨酸Glu 3.243丝氨酸Ser0.944精氨酸Arg 1.255甘氨酸Gly 1.286苏氨酸Thr0.747脯氨酸Pro 1.408丙氨酸Ala 1.189缬氨酸Val0.9210蛋氨酸Met0.5411半胱氨酸Cys0.3412异亮氨酸Ile0.7613亮氨酸Leu 1.6814苯丙氨酸Phe 1.0015组氨酸His0.5016赖氨酸Lys 1.0817酪氨酸Tyr0.65合计19.061.1.1.13色氨酸标样配制：称取适量色氨酸标准品，用氢氧化钠溶液溶解配制成浓度为2μmol/mL溶液，即20.42mg/100mL；1.1.1.146mol/L盐酸配制：用浓盐酸和水1：1配置即可；1.1.1.155mol/L氢氧化钠的配制：称取200g氢氧化钠配成1L水溶液；1.1.1.160.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.4g氢氧化钠配成100mL水溶液；1.1.1.17衍生缓冲液：4%碳酸氢钠水溶液；1.1.1.18衍生试剂：适量衍生试剂用乙腈定容为100mL；1.1.1.19平衡缓冲液：0.68%磷酸二氢钾水溶液。

各项标准中对抗生素的检测要求
注：
（1）抗生素定义：
是细菌、霉菌或其他微生物的代谢产物或人工合成的类似物，通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种细菌感染或抑制致病微生物感染的药物。

（2）乱用抗生素对人体的危害：
1.诱发细菌耐药，目前，几乎没有一种抗生素不存在耐药现象。

2.损害人体器官，如影响肝、肾脏功能、胃肠道反应及引起再生障碍性贫血等。

3.导致二重感染，在正常情况下，人体的口腔、呼吸道、肠道都有细菌寄生，寄殖菌群在互相拮抗下维持着平衡状态。

如果长期使用抗生素，敏感菌会被杀灭，而不敏感菌乘机繁殖，未被抑制的细菌，真菌及外来菌也可乘虚而入，诱发又一次感染。

（3）抗生素的种类：。

简单流动相测定土霉素的含量【摘要】：建立土霉素含量的HPLC 的快速测定方法。

采用purospherSTAR C18色谱柱（250mm×4.6 mm,5 m）;流动相为0.1%磷酸:甲醇(40:60); 检测波长:254nm; 进样量20 l,流量:0.8ml/min;温度35℃。

土霉素在5.845～116.9 g·ml-1浓度范围内线性关系良好（r=0.99998）; 平均回收率为98.6％，RSD为0.7％。

此测定方法简便快速，灵敏度高，准确度好，可用于土霉素及土霉素片的含量测定。

【关键词】：土霉素；含量测定；高效液相色谱法土霉素为四环素类抗生素,广谱抑菌剂,许多立克次体属、支原体属、衣原体属、螺旋体对本品敏感.其化学名称为:6-甲基-4-(二甲氨基)-3,5,6,10,12,12a-六羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。

现在含量测定采用微生物法,此方法检验时间长, 准确度差。

不能满足批量生产需要。

而本文采用HPLC 法测定土霉素的含量,结果准确,重现性好,检验周期短,一个批号的产品含量只需要3-4小时即可完成,而生物检定法最少需要16-20小时。

1.仪器与试药高效液相色谱仪（Waters2695）（配Waters2695分离单元；Waters2487双波长紫外检测器；Empower 色谱工作站系统）。

电子天平（Sartorius BT25S）。

土霉素片样品(江苏天士力帝益药业有限公司，批号：20070701、20070702、20070703);土霉素对照品(中国药品生物制品检定所,含量:92.4%,批号:0487-200001);甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司,批号：200707196),磷酸为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司,批号:200603156)。

2.色谱条件与系统实用性试验色谱柱purospherSTAR-C18,5 m,250mm×4.6 mm(德国默克);流动相:0.1%磷酸:甲醇(40:60); 检测波长:254nm; 进样量20l ,流量: 0.8ml/min;温度35℃。

高效液相色谱-质谱/质谱法测定猪肉中11种磺胺类药物残留发布时间：2022-08-01T08:38:02.400Z 来源：《科学与技术》2022年第6期作者：许计元刘淑梅李梦平[导读] 利用高效液相色谱-质谱/质谱仪建立猪肉中11种磺胺类药物残留的检测方法。

许计元,刘淑梅,李梦平安徽创佳安全环境科技有限公司利用高效液相色谱-质谱/质谱仪建立猪肉中11种磺胺类药物残留的检测方法。

本方法用乙腈作为提取溶剂，正己烷去除油脂，液相初始流动相定容，0.1%甲酸水与纯乙腈作为流动相，使用的色谱柱为安捷伦InfinityLab Poroshell 120 EC C18(3.0mm×150mm,2.7μm)，多重反应监测（MRM）模式下采集数据，基质配标法定量。

11种磺胺类药物在1ug/kg-10ug/kg范围内线性良好，在4ug/kg加标水平下，回收率在86.9%-103.6之间，相对标准偏差在1.35%-3.28%之间。

本方法前处理简单，回收率、精密度与准确度均可以满足使用要求。

关键词：液相色谱；质谱；猪肉；磺胺Determination of 11 sulfonamides residues in pork by high performance liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometryXu Ji-Yuan,Liu Shu-Mei,Li Meng-Ping（Anhui Chuangjia Safety environment Technology Co., LTD）A method for the determination of 11 sulfonamides residues in pork was established by high performance liquid chromatography-mass spectrometry. The chromatographic column was agilent InfinityLab Poroshell 120 EC C18(3.0mm×150mm,2.7μm), using acetonitrile as the extraction solvent, n-hexane for oil removal, and 0.1% formic acid water as the mobile phase. Data were collected in multiple response monitoring (MRM) mode and quantified by matrix coordination method. The linearity of 11 sulfonamides was good in the range of 1ug/kg-10ug/kg. At the spiked level of4ug/kg, the recoveries were 86.9%-103.6, and the relative standard deviations (RSDS) were 1.35%-3.28%. The method is simple in pretreatment, and the recovery, precision and accuracy can meet the application requirements.Key words: liquid chromatography; Mass spectrometry; Pork; Conditions磺胺类药物（SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构药物的总称，为人工合成的抗菌药，该类药物具有抗菌谱广、抗菌效果明显、性质稳定、价格便宜等优点, 目前大量用于防治畜禽细菌性感染疾病。

各项标准中对抗生素的检测要求
注：
（1）抗生素定义：
是细菌、霉菌或其他微生物的代谢产物或人工合成的类似物，通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种细菌感染或抑制致病微生物感染的药物。

（2）乱用抗生素对人体的危害：
1.诱发细菌耐药，目前，几乎没有一种抗生素不存在耐药现象。

2.损害人体器官，如影响肝、肾脏功能、胃肠道反应及引起再生障碍性贫血等。

3.导致二重感染，在正常情况下，人体的口腔、呼吸道、肠道都有细菌寄生，寄殖菌群在互相拮抗下维持着平衡状态。

如果长期使用抗生素，敏感菌会被杀灭，而不敏感菌乘机繁殖，未被抑制的细菌，真菌及外来菌也可乘虚而入，诱发又一次感染。

（3）抗生素的种类：。