参芪补虚合剂制备工艺的研究

参芪补虚合剂制备工艺的研究

李世根;樊向华

【摘 要】目的 确定参芪补虚合剂的制备工艺路线,优选其制备工艺条件.方法 以挥发油提取率为指标,通过单因素试验优选挥发油的提取工艺;以千膏率、黄芪甲苷及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量为评价指标,通过正交试验优选最佳的水提工艺,并考察其浓缩工艺和成型工艺.结果 最佳制备工艺为当归等药材加8倍量水提油6h,收集挥发油,加0.53％聚山梨酯80增溶;其余药材加8倍量水提取2次,第一次1.5h,第二次1h,浓缩,加入0.05％羟苯乙酯防腐,加2.8％蔗糖及上述挥发油配制即得.结论

优选的工艺条件可行稳定,制备方法简单,可为该制剂的生产提供参考.

【期刊名称】《现代医院》

【年(卷),期】2018(018)006

【总页数】5页(P919-923)

【关键词】参芪补虚合剂;挥发油;制备工艺;浓缩工艺;成型工艺

【作 者】李世根;樊向华

【作者单位】武警广东省总队医院番禺分院 广东广州511430;广东一方制药有限公司 广东佛山 528244

【正文语种】中 文

【中图分类】R943.1

参芪补虚合剂是由党参、黄芪、泽兰、炙甘草、当归等药材组成，具有益气养血补虚、化瘀生新的功效，用于治疗妇女产后气血亏虚，夹有淤血阻滞所致头晕，神疲乏力，小腹隐痛等症。原方汤剂内服具有良好的临床疗效，但汤剂存在服用量大、味苦、携带不便、不宜大量制备等缺点。拟将本方改进制成合剂，具有使用方便、疗效佳、口感好、制备方法简单等优点，同时保持了汤剂原有的疗效。通过对文献资料的查阅研究，确定本方中与功效主治相关的成分主要为挥发油和水提液，结合临床应用现状、中药制剂技术及生产设备条件，本实验对挥发油提取工艺、水提工艺、浓缩工艺、成型工艺等进行了研究，最终确定参芪补虚合剂的最佳制备工艺，为该制剂的生产、临床使用提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪；Alltech 3300蒸发光散射检测器；DZTW型电子调温电热套(邦西仪器科技有限公司)；KW-1000DC HH系列数显恒温水浴锅(金坛市科析仪器有限公司)；Heidolph旋转蒸发仪；Mettler-Toledo XS205DU型电子分析天平；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂与试药

党参、黄芪、当归等药材均购自广东康圣药业有限公司，经鉴定，均符合《中国药典》2015年版一部相关项下要求，黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品(批号分别为110781-200713、111920-201102)均购自中国药品生物制品检定所，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取

经预试，当归等含油药材所得挥发油比重<1.0，故参照《中国药典》2015年版四部2204项下挥发油测定法甲法提取挥发油。以挥发油提取率为考察指标，采用单因素试验法考察浸泡时间、加水倍数和提取时间对挥发油提取工艺的影响。 2.1.1 浸泡时间考察 按处方比例，称取当归等含油药材3份，每份383 g，加入8倍量水，分别浸泡0、1、2 h，蒸馏提取8 h，测定挥发油提取量并计算其提取率，结果见表1。结果表明：浸泡时间对挥发油的提取无明显影响，故提取挥发油时无需浸泡。

表1 浸泡时间对挥发油提取的影响

2.1.2 加水倍数考察 按处方比例，称取当归等含油药材4份，每份383 g，分别加入6、8、10、12倍量水，蒸馏提取8 h，测定挥发油提取量并计算其提取率，结果见表2。结果表明：当加水倍数达8倍量后，挥发油提取量随着加水倍数的增加变化不明显，因此加水倍数确定为8倍。

表2 加水倍数对挥发油提取的影响

2.1.3 提取时间考察 按处方比例，称取当归等含油药材3份，每份383 g，分别加入8倍量水，提取挥发油，记录不同时间挥发油的累积提取量，结果见表3。结果表明：当提取时间达6 h时，挥发油已基本提取完全，因此提取时间确定为6 h。

表3 提取时间对挥发油提取的影响

2.1.4 挥发油提取工艺验证试验 按处方比例，称取当归等含油药材3份，每份383

g，分别加入8倍量水，蒸馏提取6 h，测定挥发油提取量并计算其提取率，结果见表4。结果表明：挥发油的平均提取率为0.137%，与单因素试验的结果相近，表明优选的工艺稳定可行。

表4 挥发油提取工艺验证结果

2.2 干膏率的测定

精密吸取各样品浓缩液50 mL，置干燥的蒸发皿中，照浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部中药浸出物测定法)测定，称定干膏重量，并计算干膏率。计算公式：干膏率(%)=(W1×250)/(50×W2)×100% 。 注：W1为50 mL浓缩液中干膏重量，W2为药材重量。

2.3 指标成分的含量测定

2.3.1 色谱条件 黄芪甲苷：AichromBond-SB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5

μm)；流动相乙腈-水(32 ∶68)；柱温35 ℃；流速1.0 mL·min-1；ELSD蒸发光散射检测器检测，氮气流速1.5 L·min-1，漂移管温度40 ℃。毛蕊异黄酮葡萄糖苷：Waters Xbridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相乙腈-0.2%甲酸(11 ∶89)；柱温25 ℃；流速1 mL·min-1；检测波长260 nm。色谱图见图1。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品适量，加甲醇分别制成浓度为52.192

μg·mL-1的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液和0.503 3 mg·mL-1的黄芪甲苷对照品溶液，摇匀即得。

2.3.3 线性关系考察 分别精密吸取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液1、2、3、5、6、7 μL和黄芪甲苷对照品溶液2、4、6、12、16、20 μL，按照上述色谱条件进样，测得峰面积。毛蕊异黄酮葡萄糖苷以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，得标准曲线的回归方程为Y=3.242 7X-49.723，相关系数r=0.999 4，表明毛蕊异黄酮葡萄糖苷在52.192～365.34 ng之间线性关系良好。黄芪甲苷以进样量的对数值(X)为横坐标，峰面积对数值(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=1.624 7X+4.755 3，r=0.999 5，表明黄芪甲苷进样量在1.006 6～10.06 6

μg范围内自然对数值与峰面积自然对数值呈良好的线性关系。

2.3.4 供试品溶液的制备 精密移取各提取浓缩液1 mL，置5 mL容量瓶中，加甲醇超声处理(功率300 W，频率40 kHz)15 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液过微孔滤膜，即得毛蕊异黄酮葡萄糖苷供试品溶液。精密移取各提取浓缩液25 mL，照2015版《中国药典》一部黄芪项下供试品的制备方法制备最终转移至2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得黄芪甲苷供试品溶液。

注：A，毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品；B，毛蕊异黄酮葡萄糖苷阴性样品；C，毛蕊异黄酮葡萄糖苷供试品；D，黄芪甲苷对照品；E，黄芪甲苷阴性样品；F，黄芪甲苷供试品

图1 参芪补虚合剂高效液相色谱图

2.3.5 阴性样品溶液的制备 按处方比例，称取除黄芪药材外的各味药材，分别加8倍水，煎煮2次，每次2 h，常压浓缩至约250 mL，按2.3.4项下方法制备阴性对照溶液。

2.4 水提工艺优选

选择加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以黄芪甲苷含量、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量和干膏率的综合评分值为指标，加权系数分别为0.3、0.3、0.4。按处方比例称取党参、黄芪、白术等药材9份，每份484 g，按L9(34)正交表进行提取，滤过，滤液合并，常压浓缩并定容至250 mL。试验安排及结果见表5，方差分析见表6。由直观分析可知，各因素对水提工艺的影响顺序为提取次数(C)>加水量(A)>提取时间(B)，因素C(提取次数)对试验结果有显著的影响，因素A(加水量)有一定影响，因素B(提取时间)对试验结果无明显影响。综合考虑，确定最佳的工艺条件为：药材加8倍量水提取两次，第一次提取1.5 h，第二次提取1 h。

2.5 验证试验

按处方比例称取党参、黄芪、白术等药材，每份484 g。当归等提油药材加8倍量水，加热回流提取6 h，收集挥发油，药液保留，药渣与党参等其他药材按最佳工艺条件进行提取，滤过，滤液与提油的药液合并，浓缩并定容至250 mL。计算干膏率、黄芪甲苷含量、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量及综合评分值。结果见表7。结果表明验证试验的平均综合评分值为90.54，与正交试验综合评分值最大值相差不大，表明优选的工艺参数稳定可行。 表5 参芪补虚合剂水提工艺正交试验结果组别A加水量/倍B提取时间/hC提取次数/次D空白干膏率/%毛蕊异黄酮葡萄糖苷/mg黄芪甲苷/mg综合评分值1611116.1814.072.0149.862622228.0418.241.6766.573633330.8419.762.7679.374812321.8122.554.2682.425823128.2120.913.6

83.496831221.4517.363.6371.4871013233.5218.232.1276.2781021328.1715.181.8664.4891032127.2

25.634.2592.39K1K2K3R195.79237.38233.1441.59208.551214.539243.21934.668185.811241.38239.12155.569225.741214.311226.26 11.949————————————————

表6 方差分析表

表7 最佳提取工艺验证结果

2.6 浓缩工艺考察

准确量取按提取验证工艺条件制备的提取液4份(黄芪甲苷含量为1.72 μg·g-1，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为6.51 μg·g-1)，每份10 kg，2份置旋转蒸发仪中减压浓缩(浓缩条件为：-0.085 Mpa; 55～75 ℃)至相对密度为1.10，另外2份常压浓缩至相对密度为1.10，测定浓缩液的重量及黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，并计算浓缩过程黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的保留率。结果见表8。结果表明提取液采用常压浓缩或减压浓缩，其黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的总含量和保留率差别不大，因此生产中可根据实际情况选用常压浓缩或减压浓缩。

表8 浓缩工艺研究结果试验号浓缩液量/g相对密度(30℃)毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量/μg·g-1毛蕊异黄酮葡萄糖苷保留率/%平均值黄芪甲苷含量/μg·g-1黄芪甲苷保留率/%平均值常压-15441.093113.3694.73常压-25511.085112.9895.63减压-15401.097113.8894.46减压-25451.092114.0295.4595.1894.9628.4790.0429.0292.9728.9991.0228.5290.3